專利名稱：尖頂羊肚菌顆粒沖劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)和藥學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種尖頂羊肚菌(Morchella conica) 顆粒沖劑以及其制備方法；還涉及該產(chǎn)品在延緩衰老方面的新用途。
背景技術(shù)：
尖頂羊肚菌多糖是一種重要的抗衰老功能產(chǎn)品素材，但其多糖的生理效應(yīng)不明 確，產(chǎn)品開發(fā)也較遲緩，將多糖制成膠囊產(chǎn)品，有較高的現(xiàn)實(shí)意義和實(shí)踐價(jià)值。宋娟娜等在 顆粒成型工藝研究中加入一定的輔料發(fā)現(xiàn)顆粒的成型性、溶解性及抗?jié)裥远加兴鰪?qiáng)(宋 娟娜等，2008)，表明對(duì)多糖添加一定輔料，可提高多糖穩(wěn)定性，降低其吸濕性。尖頂羊肚菌 粗多糖通常具有較強(qiáng)的吸濕性，易吸收空氣中的水分，結(jié)塊、甚至霉變，從而影響藥品的質(zhì) 量和療效，為了降低其吸濕性而便于儲(chǔ)藏，一般加入適量的輔料與之混合。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種制作簡單、成本低且吸濕率小、穩(wěn)定性好的尖頂羊肚菌 顆粒沖劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑在延緩衰老藥物或保健 食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的上述目的通過以下方案予以實(shí)現(xiàn)—種尖頂羊肚菌顆粒沖劑，以尖頂羊肚菌胞外多糖提取物為主要原料，并添加 定的輔料，其中輔料應(yīng)具有良好的流動(dòng)性，吸濕性低、易成型，有潤濕性，有利于崩解與溶 出，不影響指標(biāo)成分的溶出，不與指標(biāo)成分相互作用，且不影響療效，以可溶性淀粉、糊精等 為輔料效果較好，該顆粒沖劑乳白色，易溶于水。通過測(cè)定配方的成型性、吸濕率、休止角和 溶解度等，確定原料的質(zhì)量配比為尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β-環(huán)糊精糊精可溶性 淀粉甜蜜素=0.5 0.5 5 0.1 4 0.1 2 0. 01 0. 08。優(yōu)選地，所述原料質(zhì)量配比為，尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β-環(huán)糊精糊 精可溶性淀粉甜蜜素=0.5 1 4 1 0.04。在外觀、融化性具有良好的效果，加 入糊精的處方所制顆粒成型性好，溶解后無沉淀產(chǎn)生，單獨(dú)用糊精制得的顆粒成型性一般， 不易完全溶解；可溶性淀粉的粘合性大，在形成顆粒有較大的作用。上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，其步驟如下(1)將尖頂羊肚菌胞外多糖提取物與β -環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按質(zhì) 量比0.5 0.5 5 0.1 4 0. 1 2 0. 01 0. 08混合攪勻；(2)用乙醇制成軟材；(3)55 60°C干燥，過篩整粒，制得尖頂羊肚菌顆粒沖劑。優(yōu)選地，步驟(1)所述尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β -環(huán)糊精糊精可溶性 淀粉甜蜜素=0.5 1:4: 1 0.04。
優(yōu)選地，步驟(2)所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%。優(yōu)選地，步驟(3)所述過篩是過14目篩；所述干燥溫度為55°C。所述尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的制備方法，包括如下步驟(1)將尖頂羊肚菌液體發(fā)酵液濃縮至原體積的1/3 1/6，得到濃縮液，濃縮溫度 為 50 70°C ；(2)濃縮液采用Sevage法去蛋白、離心，得到去蛋白后的活性提取液；(3)去蛋白后的活性提取液用1 5倍體積的95%乙醇在0 10°C透析沉降濃縮 液中的多糖12 25小時(shí)，pH值為4 8，靜置析出絮狀白色物質(zhì)，再離心分離得到白色沉 淀，冷凍干燥，制得尖頂羊肚菌胞外多糖提取物。所述步驟(2)SerVge法去蛋白、離心在濃縮液中加入0. 2倍體積的氯仿正丁醇混 合液(氯仿、正丁醇體積比為5 1)，在恒溫磁力攪拌器上劇烈攪拌30分鐘，溫度25°C，用 Sigma臺(tái)式冷凍離心機(jī)，溫度4°C，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，回收上清液，棄去蛋白層 及有機(jī)溶液。所述步驟(3)離心條件為轉(zhuǎn)速4000-5000rpm、時(shí)間20-30min，其中優(yōu)選轉(zhuǎn)速 4000rpm、時(shí)間 20min。最佳醇提條件發(fā)酵液濃縮至原體積的1/5，濃縮溫度為60°C，用4倍體積的95% 乙醇進(jìn)行醇析，醇析時(shí)間25小時(shí)，pH值為6。所述尖頂羊肚菌液體發(fā)酵液是經(jīng)過尖頂羊肚菌(Morchella conica)液體發(fā)酵培 養(yǎng)，得到發(fā)酵物，再通過離心和真空抽濾分離菌絲體，獲得的發(fā)酵液。所述離心條件優(yōu)選轉(zhuǎn) 速 4000rpm、時(shí)間 IOmin。所述尖頂羊肚菌(Morchella conica)液體發(fā)酵培養(yǎng)是將尖頂羊肚菌(Morchella conica)接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，其液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為葡萄糖150g，硝酸 銨 6g，ΚΗ2Ρ043· 0g, MgSO4 · 7Η20 3. 0g，維生素 B10. 3g，加蒸餾水定容至 3000ml。所述發(fā)酵培養(yǎng)的步驟是(1)取100ml所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)滅菌后，在其中接 入3個(gè)直徑約為4mm的尖頂羊肚菌菌絲塊，在25 28°C，轉(zhuǎn)速130 160rpm，避光恒溫振 蕩培養(yǎng)6 8天，得到液體菌種；(2)將上述液體菌種接入3L滅菌后的所述液體發(fā)酵培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)溫度為25 28°C，轉(zhuǎn)速為130 160rpm，培養(yǎng)5 9天，得到發(fā)酵物，備用。由上述方法制備得到的尖頂羊肚菌胞外多糖提取物，經(jīng)苯酚硫酸法測(cè)定含總糖 84. 0%左右，經(jīng)DNS比色法測(cè)定含還原糖25. 7%左右，經(jīng)考馬斯亮蘭法測(cè)定含蛋白507%左 右ο上述尖頂羊肚菌顆粒沖劑可以用于延緩衰老方面，其使用劑量為1962mg/ kg · d (含150mg/kg · d尖頂羊肚菌胞外多糖提取物)。本發(fā)明對(duì)上述制備所得尖頂羊肚菌顆粒沖劑進(jìn)行小鼠延緩衰老功效測(cè)試。用該提 取物對(duì)D-半乳糖所致衰老模型小鼠進(jìn)行灌胃，觀察其對(duì)小鼠大腦超氧化物歧化酶(SOD)活 性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量的影響。結(jié)果表明654mg/kg*d的 顆粒沖劑使雄性小鼠血清中的S0D、GSH-Px含量分別提高了 60. 71% (P < 0. 01)和66. 62% (P < 0.01)，使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量降低了 32.67% (P < 0.01) ； 1962mg/ kg · d的多糖顆粒沖劑使雌性衰老小鼠血清中的SOD和GSH-Px含量增加了 99.66% (P < 0. 01)和89. 99% (P < 0. 01) ； 165mg/kg · d和55mg/kg · d的多糖膠囊可顯著增加雄性小鼠血清中的SOD、GSH-Px含量(P < 0.01)，使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量分別降 低了 27. 58% (P < 0. 01)和 34. 29% (P < 0. 01)。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明的尖頂羊肚菌胞外多糖顆粒沖劑，通過多糖提取物與各輔料按適當(dāng)比例制 得，此法制得的多糖沖劑為無糖型沖劑，它以多糖為功能成分，以可溶性淀粉為稀釋劑，以 甜蜜素為甜味劑。甜蜜素具有高甜度、低熱能、無毒性以及無副作用等特點(diǎn)，且熱量僅為蔗 糖的1/1000，甜度為蔗糖的40倍。制備過程簡單，條件易控制。此多糖顆粒的儲(chǔ)存時(shí)間明顯 延長，且易溶于水；本發(fā)明制成無糖顆粒劑與含糖沖劑相比，具有溶解性好、防潮、無異味、 高療效等特點(diǎn)，可適用于糖尿病人和肥胖患者，擴(kuò)大了使用范圍，且具有良好的延緩衰老作 用。


圖1為尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)小鼠SOD、GSH-Px和MDA生化指標(biāo)的影響圖(注Y 軸表示各組與模型組比較，SOD、GSH-Px增加的百分比以及MDA減少的百分比)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施方 式不限于此，對(duì)于未特別注明的工藝參數(shù)，可參照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的制備方法如下(1)尖頂羊肚菌GIM5. 70 (Morchella conica)(廣東省微生物菌種保藏中心購 買)，經(jīng)斜面或平板菌種培養(yǎng)、液體振蕩培養(yǎng)和液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到發(fā)酵液。具體的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件如下①斜面或平板菌種培養(yǎng)培養(yǎng)基配方為，馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨lg， (NH4) 2S042g，MgSO4 · 7H20 lg, KH2PO4Ig,瓊脂 20g，加蒸餾水定容至 1000ml, pH 調(diào)至 6. 5 ；然 后接入1個(gè)直徑約為4mm的尖頂羊肚菌菌絲塊，26°C培養(yǎng)14天，置于4°C保存?zhèn)溆?。②液體振蕩培養(yǎng)以NH4NO3作為氮源，葡萄糖或可溶性淀粉作為碳源，以及初始PH 和接種量作為考察因素最終確定合成培養(yǎng)基配方為葡萄糖50g，硝酸銨2g，KH2PO4L Og, MgSO4 ·7Η20 l.Og，維生素B 10. lg，加蒸餾水定容至lOOOmL，自然pH值；培養(yǎng)條件為取 IOOmL上述合成培養(yǎng)基裝入250mL三角瓶，在121°C滅菌30分鐘，并接入3個(gè)直徑約為4mm 的尖頂羊肚菌菌絲塊在25°C，轉(zhuǎn)速160rpm，避光恒溫振蕩培養(yǎng)7天，得到液體菌種。③液體發(fā)酵培養(yǎng)將液體培養(yǎng)基3L (葡萄糖150g，硝酸銨6g，KH2P043. 0g, MgSO4 · 7H20 3. 0g,維生素B 10. 3g，加蒸餾水定容至3000ml)轉(zhuǎn)入5L發(fā)酵罐培養(yǎng)，再接入 IOOmL上述液體菌種，培養(yǎng)溫度為25°C，轉(zhuǎn)速為130rpm，培養(yǎng)7天，即可得到菌絲體豐富，菌 球豐富、均勻，顏色微黃的發(fā)酵物，備用。(2)將發(fā)酵物通過離心和真空抽濾分離菌絲體，獲得澄清的發(fā)酵液。①離心Sigma臺(tái)式冷凍離心機(jī)，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。②真空抽濾真空抽濾，使菌絲體與發(fā)酵液分離，得發(fā)酵液，備用。(3)濃縮發(fā)酵液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將發(fā)酵液在60°C的恒溫水浴鍋中減壓濃縮至原體 積的1/5。
(4)去蛋白、離心=Sevage法去蛋白，加入0. 2倍體積的氯仿正丁醇混合液(氯仿、 正丁醇體積比為5 1)，在恒溫磁力攪拌器上劇烈攪拌30分鐘，溫度25°C ；用Sigma臺(tái)式 冷凍離心機(jī)，溫度4°C，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，回收上清液，棄去蛋白層及有機(jī)溶
液，重復(fù)多次。(5)將去蛋白后的活性提取液加入其4倍體積的95%乙醇在4°C透析沉降25h，調(diào) PH值為6，靜置過夜，析出絮狀白色物質(zhì)，以4000rpm、20分鐘離心分離得到白色沉淀，冷凍 干燥，即制得目標(biāo)產(chǎn)物尖頂羊肚菌胞外多糖提取物。尖頂羊肚菌胞外多糖提取物，經(jīng)苯酚硫酸法測(cè)定含總糖84. 0 %，經(jīng)DNS比色法測(cè) 定含還原糖25.7%，經(jīng)考馬斯亮蘭法測(cè)定含蛋白5. 07 %。實(shí)施例1一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精lg、糊精4g、可溶性淀粉2g、甜蜜素0. 04g混合攪勻，用75%乙醇制成軟材，用 14目篩粒，55°C干燥，得顆粒，再過14目篩整粒，分裝每袋5g，即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑， 該顆粒沖劑乳白色，易溶于水。實(shí)施例2一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精lg、糊精4g、可溶性淀粉lg、甜蜜素0. 04g混合攪勻，用75%乙醇制成軟材，用 14目篩粒，55°C干燥，得顆粒，再過14目篩整粒，分裝每袋5g，即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑。 該顆粒沖劑為乳白色，易溶于水，總糖含量為7. 65% (折算成多糖含量為3. 81 % )，與多糖 提取物相比，能明顯降低多糖的吸濕性。同時(shí)在溶解性和流動(dòng)性方面也具有良好的效果。實(shí)施例1、2的對(duì)照試驗(yàn)如下，對(duì)照1、2及實(shí)施例1、2的原料配方參見表1。表1原料配方 (1)顆粒沖劑的溶解性、粒度(成型性)、外觀及口感試驗(yàn)顆粒劑的質(zhì)量檢查標(biāo)準(zhǔn)(應(yīng)符合《中國藥典》2005版I部附錄IC顆粒劑頂下規(guī) 定)。顆粒粒度不能通過一號(hào)篩(10目)與能通過五號(hào)篩(80目)的總和不得超過供試量 的15%。實(shí)驗(yàn)得到的顆粒在15-28目之間的顆粒多于50%者，為成型性好；顆粒80%在 15-60目之間者，為成型性一般。溶解性標(biāo)準(zhǔn)好是指易溶于水；較好是指可溶于水；較差是 指較難溶于水。表1中四種配方配制的顆粒沖劑的試驗(yàn)結(jié)果參見表2。表2尖頂羊肚菌顆粒沖劑的外觀、成型性、溶解性及口感
由表2可見，多糖提取物、β _環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按照 0.5 1 4 1 0.04的比例混合攪勻后，在外觀、粒度(成型性)、溶解性和口感方面 都具有良好的效果，實(shí)施例2的效果最好，性質(zhì)穩(wěn)定，口感適中，服用攜帶方便。實(shí)施例1的 效果較好，能達(dá)到要求的標(biāo)準(zhǔn)。而對(duì)照1和2中分別缺少糊精和可溶性淀粉，效果均較差， 不符合標(biāo)準(zhǔn)。(2)休止角的測(cè)定休止角用固定漏斗法來測(cè)定。將3只漏斗自下而上串聯(lián)固定于水平放置的坐標(biāo)紙 上方，使最下面的漏斗的下口距坐標(biāo)紙的距離控制在0. 5 1. 5cm。小心將顆粒沖劑沿漏斗 壁倒入最上面的漏斗，直到漏斗下形成的圓錐體的尖端接觸到漏斗的出口為止。由直尺測(cè) 出高度，坐標(biāo)紙測(cè)出圓錐底部的直徑，按此法反復(fù)定測(cè)定3次，計(jì)算出休止角tana = h/r。 表1中四種配方配制的顆粒沖劑的休止角參見表3。表3顆粒沖劑的休止角
休止角 休止角越小，摩擦力越小，流動(dòng)性越好。由表3可見，實(shí)施例2的休止角 在四個(gè)處方中平均值最小，說明按照多糖、環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素= 0.5 1 4 1 0.04的比例混合攪勻后，其流動(dòng)性相對(duì)較大，對(duì)照2不加入淀粉，休止 角最大，說明可溶性淀粉會(huì)一定程度的增大休止角，反而使流動(dòng)性變差。(3)吸濕百分率的測(cè)定將燒杯烘至恒重，冷卻后準(zhǔn)確稱重，加入混勻后的顆粒，使燒杯底部勻攤厚2mm的顆粒沖劑，105°C烘約5h，使其至恒重，取出，干燥器冷卻，準(zhǔn)確稱量。將烘至恒重的藥粉瓶放 在相對(duì)濕度為78%，溫度為22°C的人工氣候箱內(nèi)，于1、2、3、5、15h定時(shí)稱量。按下式計(jì)算 吸濕百分率，每個(gè)處方平行做2份，吸濕率(％)=(吸濕后藥粉重量-吸濕前藥粉重量)/ 吸濕前藥粉重量X 100%。表1中四種配方配制的顆粒沖劑及純多糖的吸濕百分率參見表4。表4顆粒沖劑的吸濕百分率
濕率(％) 由表4可見，隨著時(shí)間的延長，吸濕率增大。結(jié)果表明15小時(shí)期間里，實(shí)施例2 的吸濕率最低；實(shí)施例1的吸濕率在前四組顆粒沖劑中最大，15小時(shí)期間內(nèi)吸濕率達(dá)到 14. 32%。多糖提取物放置在相同外界條件下，15小時(shí)的吸濕率為20. 08%，明顯高于前四 組顆粒沖劑的吸濕率，從而說明加入輔料后能有效降低多糖的吸濕率，有利于多糖的儲(chǔ)存。實(shí)施例3一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精4g、糊精0. lg、可溶性淀粉0. 3g、甜蜜素0. 04g混合攪勻，用75%乙醇制成軟材， 用14目篩粒，55°C干燥，得顆粒，再過14目篩整粒，分裝每袋5g，即得到尖頂羊肚菌顆粒沖 劑，該顆粒沖劑乳白色，易溶于水。實(shí)施例4—種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精lg、糊精0. Sg、可溶性淀粉0. lg、甜蜜素0. 04g混合攪勻，用75%乙醇制成軟材， 用14目篩粒，55°C干燥，得顆粒，再過14目篩整粒，分裝每袋5g，即得到尖頂羊肚菌顆粒沖 劑，該顆粒沖劑乳白色，易溶于水。實(shí)施例5一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精0. 5g、糊精2g、可溶性淀粉lg、甜蜜素0. Olg混合攪勻，用75%乙醇制成軟材，用 14目篩粒，55°C干燥，得顆粒，再過14目篩整粒，分裝每袋5g，即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑， 該顆粒沖劑乳白色，易溶于水。該顆粒沖劑在成型性、溶解性、流動(dòng)性、外觀及口感方面均較 好，吸濕率與實(shí)施例3相近。實(shí)施例6一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物0.5g、 β -環(huán)糊精5g、可溶性淀粉0. 5g、甜蜜素0. 08g混合攪勻，用75 %乙醇制成軟材，用14目篩粒，55°C干燥，得顆粒，再過14目篩整粒，分裝每袋5g，即得到尖頂羊肚菌顆粒沖劑，該顆粒 沖劑乳白色，易溶于水。該顆粒沖劑在成型性、溶解性、流動(dòng)性、外觀及口感方面均較好，吸 濕率與實(shí)施例2相近。實(shí)施例7尖頂羊肚菌顆粒沖劑延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)(所用尖頂羊肚菌顆粒沖劑是由實(shí)施 例2制備的)尖頂羊肚菌顆粒沖劑延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)(高劑量)(1)昆明種小鼠，SPF級(jí)，體重20士2克，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買，合 格證號(hào)SCXK (粵)2008-0020。將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、造模組、陽性對(duì)照組、尖頂羊肚 菌多糖提取物高劑量組，每組10只，雌雄各半，自由進(jìn)食和飲水，造模組、陽性對(duì)照組、高劑 量組每天腹腔注射劑量為120mg/kg. d的D-半乳糖溶液0. 2mL，空白對(duì)照組注射等量的生理 鹽水，連續(xù)注射42天。高劑量組分別灌胃尖頂羊肚菌多糖提取物濃度為1962mg/kg · d的 顆粒沖劑(含150mg/kg · d多糖提取物)，陽性對(duì)照組灌胃濃度為800mg/kg · d的維生素 E，空白對(duì)照組和造模組分別灌胃生理鹽水，各組小鼠的灌胃量均為0. 2mL。(2)實(shí)驗(yàn)周期42天，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定小鼠腦的SOD活性，硫代 巴比妥酸法測(cè)定小鼠腦MDA含量，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)法測(cè)GSH-Px活力。尖頂羊肚菌顆粒沖劑延緩衰老作用的實(shí)驗(yàn)(低劑量)(1)昆明種小鼠，SPF級(jí)，體重20士2克，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買，合 格證號(hào)SCXK (粵)2008-0020。將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、造模組、陽性對(duì)照組、尖頂羊肚 菌多糖提取物高劑量組，每組10只，雌雄各半，自由進(jìn)食和飲水，造模組、陽性對(duì)照組、高劑 量組每天腹腔注射劑量為120mg/kg · d的D-半乳糖溶液0. 2mL，空白對(duì)照組注射等量的生 理鹽水，連續(xù)注射42天。高劑量組分別灌胃尖頂羊肚菌多糖提取物濃度為654mg/kg-d的 顆粒沖劑(含50mg/kg · d多糖提取物)，陽性對(duì)照組灌胃濃度為800mg/kg · d的維生素E， 空白對(duì)照組和造模組分別灌胃生理鹽水，各組小鼠的灌胃量均為0. 2mL。(2)實(shí)驗(yàn)周期42天，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定小鼠腦的SOD活性，硫代 巴比妥酸法測(cè)定小鼠腦MDA含量，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)法測(cè)GSH-Px活力。上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表5和圖1所示。表5尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)小鼠SOD、GSH-Px, MDA等生化指標(biāo)的影響 與模型組比較*=P < 0. 05 ；** =P < 0. 01 ；與空白組比較，Δ =P < 0. 05 ；ΔΔ =P < 0. 01 (P是指幾組數(shù)據(jù)之間的差異性)。從表5可知，1962mg/kg · d的顆粒沖劑可增加雌、雄衰老小鼠血清的SOD、GSH-Px 的含量，雄性小鼠血清SOD,GSH-Px的含量的增加率分別為52. 24% (P < 0. 05)和29. 37% (P < 0. 01)，雌性小鼠血清SOD、GSH-Px的含量的增加率分別為99. 66% (P < 0. 01)和 89. 99% (P< 0. 01) ；654mg/kg'd的顆粒沖劑可增加雌、雄衰老小鼠S0D、GSH_Px的含量，使 雄性衰老小鼠SOD,GSH-Px的含量分別提高了 60. 71% (P < 0. 01)和66. 62% (P < 0. 01)， 使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量降低了 32. 67% (P < 0. 01)。由圖1可見，尖頂羊肚菌顆粒沖劑能增加衰老小鼠血清中的SOD和GSH-Px活力， 能起到延緩小鼠衰老的作用。試驗(yàn)組對(duì)小鼠血清中SOD的活力影響較為顯著。總體上分 析，高顆粒組的抗衰老能力強(qiáng)于低顆粒組，發(fā)現(xiàn)具有性別的差異，就血清中的抗氧化效果而 言，尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)雄性小鼠的延緩衰老作用較強(qiáng)；腦組織中MDA含量的影響而言， 則雌性優(yōu)于雄性。實(shí)施例8尖頂羊肚菌顆粒沖劑急性毒理試驗(yàn)，所用尖頂羊肚菌顆粒沖劑是由實(shí)施例2制備 的。(1)給藥途徑使用灌胃方式(2)根據(jù)多糖提取物的小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果和給藥最大濃度，最大體積的具體量及分組， 每只灌胃量為為0.4ml/只，分兩次灌胃。尖頂羊肚菌顆粒沖劑的濃度為0.5g/mL，即每只 小鼠的灌胃劑量為20g/kg · d0(3)昆明種小鼠，SPF級(jí)，體重20士2克，由中山醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購買，合格 證號(hào)SCXK (粵)2009-0011。小鼠20只，(5\早各半，以最大濃度，最大體積，一日二次灌胃， 灌胃前禁食不禁水12h，分兩次灌胃給藥，中間間隔4h，給藥組分別灌胃多糖溶液，空白對(duì)照組灌胃蒸餾水，體積皆為0. 4ml/只，觀察兩周。(4)配制藥液溶劑生理鹽水。(5)詳細(xì)記錄動(dòng)物異常反應(yīng)，寫出動(dòng)物死亡原因，病理變化。每次試驗(yàn)灌胃給藥后，詳細(xì)記錄小鼠行為、活動(dòng)、攝食、飲水、體重、死亡等客觀反 應(yīng)，給藥14日后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行小鼠解剖，病理檢查重要臟器(心、肝、脾、肺、腎)，觀察臟器 組織變化，如有死亡和解剖發(fā)現(xiàn)異常病變需作組織形態(tài)學(xué)檢查。20g/kg · d進(jìn)行小鼠最大耐受量實(shí)驗(yàn)，灌胃尖頂羊肚菌顆粒沖劑后，小鼠活動(dòng)、行 為未見異常，攝食量無明顯差異。從表6可見，各項(xiàng)指數(shù)無異常，各鼠14日內(nèi)無死亡及其他 異常發(fā)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)小鼠進(jìn)行檢測(cè)，小鼠心、肝、脾、肺、腎等器官經(jīng)肉眼觀察未見異常 改變。因此尖頂羊肚菌顆粒沖劑在20g/kg · d和10g/kg · d的劑量下對(duì)小鼠無毒或毒性很 低，小鼠經(jīng)口給藥的最大安全劑量在20g/kg*d以上，折算為人的口服劑量為11.08g，小鼠 的最大耐受量為人口服劑量的126倍。尖頂羊肚菌顆粒沖劑在小鼠實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮良好的抗衰 老效果，此研究說明該功能食品具有很好的開發(fā)生產(chǎn)價(jià)值。表6尖頂羊肚菌顆粒沖劑對(duì)小鼠脾指數(shù)、腦指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響
上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑，其特征在于，所述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的原料質(zhì)量配比為，尖頂羊肚菌胞外多糖提取物β 環(huán)糊精∶糊精∶可溶性淀粉∶甜蜜素＝0.5∶0.5～5∶0.1～4∶0.1～2∶0.01～0.08。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尖頂羊肚菌顆粒沖劑，其特征在于，所述尖頂羊肚菌顆粒沖 劑的原料質(zhì)量配比為，尖頂羊肚菌胞外多糖提取物環(huán)糊精糊精可溶性淀粉甜 蜜素=0. 5 1 4 1 0. 04。
3.一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟將尖頂羊肚菌胞外多糖提取物與環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按質(zhì)量比 0.5 0.5 5 0.1 4 0. 1 2 0. 01 0. 08混合攪勻；用乙醇制成軟材；55 60°C干燥，過篩整粒，制得尖頂羊肚菌顆粒沖劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述過篩是過14目篩。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述干燥溫度為55°C。
7.權(quán)利要求1或2所述的尖頂羊肚菌顆粒沖劑在延緩衰老藥物或保健食品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述尖頂羊肚菌顆粒沖劑的使用劑量為 1962mg/kg · d。
全文摘要
本發(fā)明公開一種尖頂羊肚菌顆粒沖劑及其制備方法和用途。該顆粒沖劑以尖頂羊肚菌胞外多糖提取物為主要原料，再添加適量的輔料制成。其制備方法為將尖頂羊肚菌胞外多糖提取物與β-環(huán)糊精、糊精、可溶性淀粉、甜蜜素按質(zhì)量比0.5∶0.5～5∶0.1～4∶0.1～2∶0.01～0.08混合攪勻，用75％乙醇制成軟材，用14目篩粒55℃干燥，得顆粒，過篩整粒。本發(fā)明的顆粒沖劑制備過程簡單，條件易控制，其儲(chǔ)存時(shí)間明顯延長，且易溶于水；制成顆粒沖劑與含糖沖劑相比，具有溶解性好、防潮、去其味和提高療效等特點(diǎn)，可適用于糖尿病人和肥胖患者，擴(kuò)大了使用范圍，且具有良好的延緩衰老作用。
文檔編號(hào)A23L1/30GK101926834SQ20101020251
公開日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2010年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月13日
發(fā)明者蘭瑛, 張松, 潘志福 申請(qǐng)人:華南師范大學(xué)