專利名稱：益生菌銀杏花粉口服液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品飲料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種可以提高人體免疫力，具有保健功 能的益生菌銀杏花粉口服液的制備方法。
背景技術(shù)：
隨著人們健康意識的提高，保健食品越來越引起人們的關(guān)注。采用藥食同源的中 草藥以及改善胃腸平衡的微生物開發(fā)的產(chǎn)品，成為這一食品行業(yè)的發(fā)展趨勢。銀杏樹是我 國特有的珍惜植物，被稱為植物界的“活化石”。銀杏樹渾身是寶，其果、葉、苗具有重要的食 用、藥用和觀賞價值。目前，國內(nèi)外利用銀杏葉和銀杏果的提取物(如GBE761)，開發(fā)出了很 多種藥品和保健品，市場非常熱銷。但是，對于銀杏花粉的研究比較少，國內(nèi)文獻僅報道了 形態(tài)特征，生長發(fā)育，化學成分，生物活性和人工授粉等方面的研究成果。目前，還沒有關(guān)于 銀杏花粉產(chǎn)品開發(fā)的報道，市場上也未見有銀杏花粉保健食品和藥品的銷售。銀杏花粉富 含人體所必需的氨基酸，黃酮，內(nèi)酯，可溶性糖，有機酸，不飽和脂肪酸，核酸，酶，人體不可 缺少的礦物元素及維生素E，對人體有極高的營養(yǎng)保健和藥用價值。因此，研究開發(fā)銀杏花 粉技術(shù)和產(chǎn)品，具有重要意義。乳酸菌是重要的益生菌，活性乳酸菌在生長時會分泌對人體健康有益的物質(zhì)，因 此對人體有較多的好處。1、飲料有促進胃液分泌、提高食欲、加強消化的功效；益生菌能將 牛奶中的乳糖和蛋白質(zhì)分解，使人體更易消化和吸收；2、維護腸道菌群生態(tài)平衡，形成生物 屏障，抑制有害菌對腸道的入侵；3、乳酸菌能減少某些致癌物質(zhì)的產(chǎn)生，因而有防癌作用； 4、能抑制腸道內(nèi)腐敗菌的繁殖，并減弱腐敗菌在腸道內(nèi)產(chǎn)生的毒素；通過產(chǎn)生大量的短鏈 脂肪酸促進腸道蠕動及菌體大量生長改變滲透壓而防止便秘；5、有降低膽固醇的作用，特 別適宜高血脂的人飲用；6、提高人體免疫功能，乳酸菌可以產(chǎn)生一些增強免疫功能的物質(zhì)， 可以提高人體免疫，防止疾病。一般來說，無論是手術(shù)后，還是急性、慢性病愈后的病人，為 了治療疾病或防止感染都曾服用或注射了大量抗生素，使腸道菌從發(fā)生很大改變，甚至一 些有益的腸道菌也統(tǒng)統(tǒng)被抑制或殺死，造成菌群失調(diào)。飲料中含有大量的乳酸菌，每天喝 0. 25-0. 5千克，可以維持腸道正常菌群平衡，調(diào)節(jié)腸道有益菌群到正常水平。所以大病初愈 者多喝飲料，對身體恢復有著其它食物不能替代的作用。益生菌銀杏花粉保健產(chǎn)品，復合了兩種單一產(chǎn)品的保健功能，既含有抗癌、增強記 憶和提高免疫等功能的銀杏成分，又具有能調(diào)節(jié)胃腸內(nèi)平衡的益生菌群，集保健與治療于 一體，符合當前人們預防、保健、治療與康復相結(jié)合的醫(yī)學觀點，市場前景將更為廣泛。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制作工藝簡單，方便操作，無環(huán)境污染，產(chǎn)品可以提高免 疫力并具有保健功能的益生菌銀杏花粉口服液的制備方法。本發(fā)明的目的可通過以下技術(shù)措施來實現(xiàn)本發(fā)明制作工藝步驟如下
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a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 8-10重量份配比置于水中，然后 對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養(yǎng)基， 30-37°C下靜置培養(yǎng)10-14小時，得兩益生菌種子液；C.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷 氨酸鈉=7-10 3-5 0. 02-0. 05 0. 02-0. 05重量份配比混合，加入75-80倍量去離子 水溶解，經(jīng)110-120°C高溫滅菌15-30min，得發(fā)酵培養(yǎng)基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為1-3% 接入c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后塑料膜封口，30-37°C靜置厭氧培養(yǎng)40-45小時，待發(fā)酵液 培養(yǎng)基降至PH = 3. 0-3. 5，經(jīng)紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產(chǎn)品。本發(fā)明的目的還可通過以下技術(shù)措施來實現(xiàn)所述的破壁處理是采用轉(zhuǎn)速為10000-15000r/min勻漿機破壁10-20分鐘，得破壁 率超過90%的破壁銀杏花粉；也可采用超微粉碎的方法對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁 率超過95%的破壁銀杏花粉。本發(fā)明的方法以新鮮銀杏花粉為主要原料，經(jīng)機械破壁處理后，由鼠李糖乳桿 菌 Lactobacillus rhamnosus (菌種編號CGMCC 1.22)和嗜酸乳桿菌 Lactobacillus acidophilus (菌種編號CGMCC 1. 1854)兩種益生菌厭氧發(fā)酵而成，兩種益生菌均購自中 國普通微生物菌種保藏管理中心。本發(fā)明方法制備的乳酸菌銀杏花粉口服液為棕色液體， 味酸，采用血球計數(shù)板法測定口服液中活菌含量達109/mL。該口服液含有豐富的八種人體 必需氨基酸，以及黃酮內(nèi)酯，可用于改善消化不良、吸收不良、腹瀉、便秘等胃腸問題，并具 有提高免疫力，預防高血壓、高血脂和高血糖的功效。本發(fā)明所用的原料為銀杏花粉及具有益生特性的兩種乳酸菌，經(jīng)以上過程所生產(chǎn) 的益生菌銀杏花粉口服液口味酸甜，乳酸菌活菌數(shù)達IO9個/毫升，含有人體所必需的八種 氨基酸，黃酮含量也較高，具有很好的保健作用。本發(fā)明復合了兩種單一產(chǎn)品的保健功能，既含有抗癌、增強記憶和提高免疫等功 能的銀杏成分，又具有能調(diào)節(jié)胃腸內(nèi)平衡的益生菌群，集保健與治療于一體，符合當前人們 預防、保健、治療與康復相結(jié)合的醫(yī)學觀點和養(yǎng)生追尋目標，市場前景將更為廣泛。益生菌銀杏花粉口服液經(jīng)口急性毒性試驗將本發(fā)明乳酸菌銀杏花粉口服液原液飼喂昆明種小鼠40只，體重19_20g，雌雄各 半。將小鼠隨機分為給藥組和空白對照組，每組20只，雌雄各半。給藥組按0.4ml/10g給 小鼠灌胃相應藥液，一日兩次；空白對照組給予小鼠同等體積的蒸餾水灌胃。計算一日內(nèi)的 給藥量，進行急性毒性試驗觀察，連續(xù)觀察14天。觀察記錄動物的飲食、活動、大小便及有 無死亡等情況。觀察期結(jié)束，將小鼠脫白處死解剖，肉眼觀察不同臟器的改變情況；并取小 鼠胸腺、脾臟，電子天平稱重，計算胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)，進行統(tǒng)計分析。銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液組給藥后，小鼠全部存活，活動自如，毛發(fā)光滑，飲食正常， 呼吸道、眼及口腔等處無分泌物外，未發(fā)現(xiàn)明顯的中毒癥狀，體重均有增加。與空白對照組 比較，銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液組藥后14天雄性小鼠體重顯著增加(P < 0. 001)。藥后14天 觀察期結(jié)束，將小鼠脫日處死解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腦、腸、胃、小腸等臟器均未 見明顯異常表現(xiàn)。另外，小鼠胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)結(jié)果表明，與空白對照組比較，銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液組雄性小鼠脾臟系數(shù)明顯增加(P < 0. 01)，提示銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液具有 一定的免疫增強作用。銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液對小鼠最大給藥量達80ml/kg，小鼠在該劑量下無明顯異 常反應，表明該藥物安全范圍較大，小鼠灌胃給藥的最大給藥量為80ml/kg。實驗中發(fā)現(xiàn)銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液能明顯增加雄性小鼠胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)，揭 示銀杏花粉乳酸菌發(fā)酵液具有一定的免疫增強作用。
具體實施例方式實施例1 該方法按如下步驟進行a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 8重量份配比置于水中，然后對 銀杏花粉采用轉(zhuǎn)速為15000r/min勻漿機破壁10分鐘，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養(yǎng)基，370C 下靜置培養(yǎng)10小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷 氨酸鈉=7 5 0. 02 0.05重量份配比混合，加入75倍量去離子水溶解，經(jīng)120°C高溫 滅菌15min，得發(fā)酵培養(yǎng)基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為3%接 入c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后塑料膜封口，30°C靜置厭氧培養(yǎng)45小時，待發(fā)酵液培養(yǎng)基降 至PH = 3. 0，經(jīng)紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產(chǎn)品。實施例2 該方法按如下步驟進行a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 10重量份配比置于水中，然后對 銀杏花粉采用轉(zhuǎn)速為lOOOOr/min勻漿機破壁20分鐘，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養(yǎng)基，300C 下靜置培養(yǎng)14小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷 氨酸鈉=10 3 0.05 0.02重量份配比混合，加入80倍量去離子水溶解，經(jīng)110°C高 溫滅菌30min，得發(fā)酵培養(yǎng)基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為接 入c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后塑料膜封口，37°C靜置厭氧培養(yǎng)40小時，待發(fā)酵液培養(yǎng)基降 至PH = 3. 5，經(jīng)紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產(chǎn)品。實施例3 該方法按如下步驟進行a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉水=1 9重量份配比置于水中，然后對 銀杏花粉采用轉(zhuǎn)速為12000r/min勻漿機破壁15分鐘，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養(yǎng)基，350C 下靜置培養(yǎng)12小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液糖氯化鈉谷氨酸鈉=8 4 0.03 0.03重量份配比混合，加入78倍量去離子水溶解，經(jīng)115°C高溫 滅菌20min，得發(fā)酵培養(yǎng)基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1 1比例組合，再按照總接種量為2%接 入c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后塑料膜封口，33°C靜置厭氧培養(yǎng)42小時，待發(fā)酵液培養(yǎng)基降 至PH = 3. 2，經(jīng)紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產(chǎn)品。實施例4 不同的是a步驟中用超微粉碎代替勻漿機破壁，其它分別同實施例1-3。
權(quán)利要求
益生菌銀杏花粉口服液的制備方法，其特征在于a.將新鮮銀杏花粉按照新鮮銀杏花粉∶水＝1∶8 10重量份配比置于水中，然后對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁銀杏花粉水溶液；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養(yǎng)基，30 37℃下靜置培養(yǎng)10 14小時，得兩益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉水溶液，按照破壁銀杏花粉水溶液∶糖∶氯化鈉∶谷氨酸鈉＝7 10∶3 5∶0.02 0.05∶0.02 0.05重量份配比混合，加入75 80倍量去離子水溶解，經(jīng)110 120℃高溫滅菌15 30min，得發(fā)酵培養(yǎng)基；d.取b步驟中的兩種益生菌種子液按1∶1比例組合，再按照總接種量為1 3％接入c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后塑料膜封口，30 37℃靜置厭氧培養(yǎng)40 45小時，待發(fā)酵液培養(yǎng)基降至pH＝3.0 3.5，經(jīng)紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌銀杏花粉口服液的制備方法，其特征在于所述的破壁 處理是采用轉(zhuǎn)速為10000-15000r/min勻漿機破壁10-20分鐘或超微粉碎。
全文摘要
本發(fā)明提供一種益生菌銀杏花粉口服液的制備方法，a.將新鮮銀杏花粉置于水中，然后對銀杏花粉進行破壁處理，得破壁銀杏花粉；b.將鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌兩種益生菌分別接入MRS液體種子培養(yǎng)基，30-37℃下靜置培養(yǎng)，得益生菌種子液；c.取a步驟的破壁銀杏花粉，與糖、氯化鈉和谷氨酸鈉混合，加入去離子水溶解，經(jīng)高溫滅菌，得發(fā)酵培養(yǎng)基；d.將b步驟中的兩種益生菌種子液按1∶1比例組合，再按照總接種量為1-3％接入c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后塑料膜封口，靜置厭氧培養(yǎng)，待發(fā)酵液培養(yǎng)基降至pH＝3.0-3.5，經(jīng)紗布過濾后，無菌條件下灌裝，得產(chǎn)品。
文檔編號A23L1/29GK101904499SQ20101023972
公開日2010年12月8日 申請日期2010年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者劉孝永, 孫欣, 杜方嶺, 王未名, 祝清俊, 裘紀瑩, 陳蕾蕾 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品研究所