專利名稱：一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法。
背景技術(shù)：
隨著我國(guó)與國(guó)際社會(huì)的接軌，人們的生活節(jié)奏變得越來(lái)越快，大家都處于忙碌之 中學(xué)生們幾乎每天都被繁重的學(xué)習(xí)任務(wù)壓得筋疲力盡，中青年人為了工作和生活而疲于 奔命。人們只有迅速消除疲勞，盡快恢復(fù)體能，才能完成未來(lái)艱辛的工作和繁重的學(xué)習(xí)任 務(wù)。服食具有抗疲勞作用的產(chǎn)品是實(shí)現(xiàn)上述目的的一個(gè)有效辦法。目前，國(guó)內(nèi)很多學(xué)者進(jìn)行過(guò)肽的抗疲勞效果試驗(yàn)。如《食品科技》2010年第二期 報(bào)道，廣東海洋大學(xué)吉宏武教授等將近江牡蠣肉漿調(diào)至PH7.0，酶與底物濃度比為1 1，水 解溫度53°C，酶解5. 7小時(shí)，加酶量997U/g肉，水解完成后滅酶，離心取清液，噴霧干燥，得 到白色的水解物干粉。經(jīng)昆明種雄性小白鼠的抗疲勞效果試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水解物中劑量組 (4g/Kg. d)和高劑量組(8g/Kg. d)可明顯延長(zhǎng)小白鼠的負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)時(shí)間，顯著降低小白 鼠運(yùn)動(dòng)后的血清尿素氮水平，并且有助于肝糖原儲(chǔ)備能力的提高。根據(jù)我國(guó)抗疲勞保健食 品的功能評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法，若1項(xiàng)以上(含1項(xiàng))運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和2項(xiàng)以上(含2項(xiàng))生 化指標(biāo)為陽(yáng)性，即可判斷該受試物具有抗疲勞作用。故認(rèn)為中劑量組和高劑量組的近江牡 蠣肉水解物具有抗疲勞作用[1]?！稏|北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2005年第四期報(bào)道，趙玉紅等將鰱魚副產(chǎn)物(魚頭、魚皮、魚 骨)用水清洗，于120°C高壓滅菌器中蒸煮30分鐘，高速組織搗碎機(jī)勻漿，恒溫干燥后脫脂， 取適量加適量水調(diào)成溶液，用堿性蛋白酶Alcalase水解，得到分子量在IXlO2 105ku范 圍分子的魚肽。經(jīng)小白鼠試驗(yàn)證明，該魚肽具有良好的抗疲勞作用[2]。雖然國(guó)內(nèi)學(xué)者進(jìn)行了大量抗疲勞方面的基礎(chǔ)研究，但是到目前為止，尚無(wú)關(guān)于長(zhǎng) 牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液制備方法的報(bào)道。牡蠣是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的珍貴海產(chǎn)品，是中國(guó)最重要、產(chǎn)量最大的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)貝 類。長(zhǎng)牡蠣(Ostrea gigas Thunberg)是牡蠣的主要品種，是南方沿海主要養(yǎng)殖品種之一， 近年我國(guó)人工養(yǎng)殖迅速發(fā)展，產(chǎn)量迅速增加。長(zhǎng)牡蠣肉富含蛋白質(zhì)及鮮味物質(zhì)，味道鮮美， 深受人們喜愛，除了鮮吃之外，主要加工成干品及制成蠔油銷售。大力開展長(zhǎng)牡蠣肉的深加 工有利于我國(guó)牡蠣人工養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，使長(zhǎng)牡蠣的經(jīng) 濟(jì)效益得到明顯的提高。本發(fā)明將長(zhǎng)牡蠣肉打成漿狀后，經(jīng)乙酸乙酯脫脂去腥味，脫脂去腥味的肉漿加水 攪拌均勻，加熱，先按長(zhǎng)牡蠣肉漿質(zhì)量加中性蛋白酶酶解，酶解完成后滅活中性蛋白酶；再 按肉漿質(zhì)量加木瓜蛋白酶酶解，酶解完成后滅活木瓜蛋白酶；然后按肉漿質(zhì)量加菠蘿蛋白 酶酶解，酶解完成之后滅活菠蘿蛋白酶，冷卻至室溫。離心收集水溶液，濾液真空濃縮，用無(wú)
3菌水稀釋至合適，加蔗糖、檸檬酸、食鹽混合均勻制成產(chǎn)品。所述的長(zhǎng)牡蠣肉漿脫脂去腥是按肉漿的體積加入4倍量的乙酸乙酯300r/min攪 拌120min，去除其中的脂類腥味物質(zhì)以提高產(chǎn)品的品質(zhì)，4800r/min離心30min去乙酸乙酯 后，得到除腥味的長(zhǎng)牡蠣肉漿。所述的酶解是，將經(jīng)乙酸乙酯脫脂去腥的長(zhǎng)牡蠣肉漿按質(zhì)量加5倍水?dāng)嚢璩蓱腋?后加熱至55°C恒溫，按每克肉漿加3000活力單位酶的比例加入中性蛋白酶，300r/min連續(xù) 攪拌ISOmin后，迅速升溫至100°C并保持IOmin以滅活中性蛋白酶，得酶解液1。然后冷卻 至55°C，恒溫。再按前面肉漿的質(zhì)量，每克加3000活力單位酶的比例加木瓜蛋白酶入酶解 液1中，300r/min連續(xù)攪拌180min后，迅速升溫至100°C并保持IOmin滅活木瓜蛋白酶，得 酶解液2。然后冷卻至50°C，恒溫。再按前面肉漿的質(zhì)量，每克加12000活力單位酶的比 例加菠蘿蛋白酶入酶解液2中，300r/min連續(xù)攪拌^^二后，迅速升溫至保持 IOmin滅活菠蘿蛋白酶，得酶解液3。然后冷卻至室溫。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的突出實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步是1、以長(zhǎng)牡蠣肉為主要原料批量生產(chǎn)抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，周期短，產(chǎn) 量大，成本低廉，經(jīng)濟(jì)效益高，產(chǎn)品抗疲勞效果顯著，味道純正。2、采用乙酸乙酯處理長(zhǎng)牡蠣肉漿，能除去其中的脂類物質(zhì)，腥味顯著減少。3、采用三酶復(fù)合水解能顯著提高長(zhǎng)牡蠣肉蛋白質(zhì)的水解度，產(chǎn)生更多的氨基酸和 小肽，使產(chǎn)品品質(zhì)顯著提高。4、長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液用昆明種小白鼠進(jìn)行抗疲勞效果試驗(yàn)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)的 平均值及標(biāo)準(zhǔn)差用EXcel2003軟件處理，結(jié)果用Gc土 S)表示；組間比較用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用 Origan v6. 1軟件處理。經(jīng)動(dòng)物抗疲勞試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，高劑量組(9g -Kg. cf1) 的長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液能明顯延長(zhǎng)昆明種小白鼠負(fù)重游泳及低壓耐缺氧時(shí)間，血乳 酸、血清尿素氮含量明顯降低，肝糖原含量明顯增加，紅細(xì)胞(Hb)及肝臟超氧化物歧化酶 (SOD)活性明顯增加。試驗(yàn)結(jié)果如下表1 5。表1長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響
組別動(dòng)物數(shù) 劑量游泳時(shí)間(只) (g.kg-^d·1)(χ土s，min)對(duì)照組15 943.44士 1.73劑量組_15_9_52.17士 2.15** (/ <0·01)表2長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液對(duì)小鼠低壓耐缺氧的影響
動(dòng)物數(shù) MA 觀察時(shí)間 動(dòng)物死亡數(shù) 組別_(只)(g ^kg-Ld.1) (min)_(只)對(duì)照組 15 9~ 5 13 劑量組_15_9_5_8**(/ <0.01)表3長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液對(duì)小鼠血清尿素氮和血乳酸含量的影響
4組別各檢測(cè)項(xiàng)目動(dòng)物數(shù)劑量 (只) (g.kf.d-1)血清尿素氮 (mmol * L"1)血乳酸 (mg · IOOmL-1)對(duì)照組 劑量組15 9 15 920·40±1.39 15.68±1.19**(><0.01)49.39 土 1.38 40.28 士 1.96** (ρ<0·01)
表4長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能I蒙養(yǎng)液對(duì)小鼠肝糖原含量的影響οΓ士 s)^nal 各檢測(cè)項(xiàng)目動(dòng)物數(shù) 組別 (只)劑量 (8 · kg"1 . d"1)肝糖原 (mmol · L"1)對(duì)照組 15 劑量組 159 9 4.3.37±0.23 09±0.28**(/ <0.01)
表5長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能I蒙養(yǎng)液對(duì)小鼠紅細(xì)胞(Hb)及肝臟SOD活性的影響組別各檢測(cè)項(xiàng)目動(dòng)物數(shù)劑量SOD 活性 OF土s)(只) (g · kg"1 ·d1)紅細(xì)胞(Hb)肝臟(濕重)對(duì)照組 劑量組14 9 14 913.02±0.83 15.77 士 0.96** (p<0.01)11.91±1.09 14.65±0.64**(/3<0.01 =參照前面介紹的目前我國(guó)抗疲勞保健食品的功能評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法[1]，若1項(xiàng) 以上(含1項(xiàng))運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和2項(xiàng)以上(含2項(xiàng))生化指標(biāo)為陽(yáng)性，即可判斷該受試物具有 抗疲勞作用。根據(jù)本長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液動(dòng)物試驗(yàn)，高劑量組的2項(xiàng)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和5 項(xiàng)生化指標(biāo)均為陽(yáng)性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可認(rèn)為高劑量組的長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液具有良好 的抗疲勞作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例11、鮮活長(zhǎng)牡蠣去雜，洗干凈，開殼取肉，浙水。取長(zhǎng)牡蠣肉于組織搗碎機(jī)中 10000 12000r/min反復(fù)處理5次，每次3min，得長(zhǎng)牡蠣肉漿，稱質(zhì)量，量體積。2、按長(zhǎng)牡蠣肉漿的體積加入4倍量乙酸乙酯，300r/min攪拌120min，4800r/min離 心30min去乙酸乙酯，得長(zhǎng)牡蠣肉漿。 3、長(zhǎng)牡蠣肉漿按質(zhì)量加入5倍水?dāng)嚢杈鶆颍?00r/min連續(xù)攪拌IOmin成渾濁液，加
熱至55 °C后，恒溫。4、在上述55°C恒溫的渾濁液中，按長(zhǎng)牡蠣肉漿的質(zhì)量，每克加入3000活力單位中 性蛋白酶，300r/min連續(xù)攪拌酶解180min。5、酶解完畢，迅速升溫至100°C，保持10分鐘滅活中性蛋白酶后，得酶解液1。冷 卻至55 °C時(shí)恒溫。6、在上述酶解液1中，按長(zhǎng)牡蠣肉漿的質(zhì)量，每克加入3000活力單位木瓜蛋白酶， 300r/min連續(xù)攪拌酶解180min。7、酶解完畢，迅速升溫至100°C，保持10分鐘滅活木瓜蛋白酶后，得酶解液2。冷 卻至50°C時(shí)恒溫。8、在上述酶解液2中，按長(zhǎng)牡蠣肉漿的質(zhì)量，每克加入12000活力單位菠蘿蛋白酶，300r/min連續(xù)攪拌酶解240min。9、酶解完畢，迅速升溫至100°C，保持10分鐘滅活菠蘿蛋白酶后，得酶解液3。冷 卻至室溫。10、酶解液3于4800r/min離心30min，去沉淀，收集濾液。11、濾液于50 52°C真空濃縮到氨氮含量20 22g/L，得長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng) 養(yǎng)液母液。12、長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液母液用無(wú)菌水稀釋至氨氮含量17. 8g/L，得到長(zhǎng)牡 蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液稀釋液，按長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液稀釋液的質(zhì)量加入10%蔗 糖、0.2%檸檬酸、0. 食鹽，溶解，混合均勻，得長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液。13、長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液分裝、滅菌、檢測(cè)、包裝即可得到產(chǎn)品。實(shí)施例21、將于-18°C冷凍保存的長(zhǎng)牡蠣肉取出熔融，洗干凈，加水煮沸3min，放冷至室 溫，浙水。然后于組織搗碎機(jī)中10000 12000r/min反復(fù)處理5次，每次3min，得長(zhǎng)牡蠣肉 漿，稱質(zhì)量，量體積。2、其余同實(shí)施例1步驟2 13。
權(quán)利要求
一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，包括長(zhǎng)牡蠣肉的打漿及除腥、長(zhǎng)牡蠣肉漿的三酶復(fù)合水解、酶解液的濃縮及功能營(yíng)養(yǎng)液的配制，其特征在于長(zhǎng)牡蠣肉打成漿狀，加入4倍體積乙酸乙酯攪拌除腥味，離心收集長(zhǎng)牡蠣肉漿加5倍質(zhì)量水?dāng)嚢?，先后加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶酶解得酶解液，將酶解液離心取清液于50～52℃真空濃縮至氨氮含量20～22g/L，用無(wú)菌水稀釋到氨氮含量17.8g/L，加入10％蔗糖、0.2％檸檬酸、0.1％食鹽，制成產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，其特征在于 三酶復(fù)合水解是按長(zhǎng)牡蠣肉漿的質(zhì)量，每克分別加入中性蛋白酶3000活力單位、木瓜蛋白 酶3000活力單位、菠蘿蛋白酶12000活力單位。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，其特征在于 三酶復(fù)合水解的中性蛋白酶于55°C連續(xù)酶解180min，木瓜蛋白酶于55°C連續(xù)酶解180min， 菠蘿蛋白酶于50°C連續(xù)酶解240min。
全文摘要
一種長(zhǎng)牡蠣肉抗疲勞功能營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，是將長(zhǎng)牡蠣肉搗成漿狀，加入乙酸乙酯攪拌除腥，離心，去乙酸乙酯，收集長(zhǎng)牡蠣肉漿，加水?dāng)嚢杈鶆?，加熱，按長(zhǎng)牡蠣肉漿質(zhì)量加中性蛋白酶酶解，滅活中性蛋白酶后按長(zhǎng)牡蠣肉漿質(zhì)量加木瓜蛋白酶酶解，滅活木瓜蛋白酶后，再按長(zhǎng)牡蠣肉漿質(zhì)量加菠蘿蛋白酶酶解，之后滅活菠蘿蛋白酶，冷卻至室溫。離心收集水溶液真空濃縮，用無(wú)菌水稀釋至合適，加蔗糖、檸檬酸、食鹽混合均勻制成產(chǎn)品。本發(fā)明的技術(shù)先進(jìn)，工藝簡(jiǎn)單易行，特別是采用三酶復(fù)合水解能顯著提高長(zhǎng)牡蠣肉蛋白質(zhì)的水解度，產(chǎn)生更多的氨基酸和小肽，使產(chǎn)品品質(zhì)顯著提高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，具有良好的抗疲勞作用。
文檔編號(hào)A23L1/33GK101982113SQ20101050096
公開日2011年3月2日 申請(qǐng)日期2010年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月26日
發(fā)明者宋文東, 方富永, 王宏波, 苗艷麗 申請(qǐng)人:廣東海洋大學(xué)