專利名稱:微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法
技術(shù)領域:
本發(fā)明屬快速制備豬血活性肽的一種方法,屬于畜禽副產(chǎn)品深加工及綜合利用的 技術(shù)領域。
背景技術(shù):
我國豬血資源豐富,但豬血在我國浪費現(xiàn)象嚴重。目前粗加工成血粉或者血豆腐, 精深加工主要集中在生產(chǎn)血紅素、SOD和補鐵產(chǎn)品等。豬血中蛋白含量高,可生產(chǎn)加工活 性肽產(chǎn)品。活性肽不僅具有營養(yǎng)功能和生物活性,而且還具有被腸道快速吸收的特點。目 前工業(yè)生產(chǎn)的蛋白粉主要是采用酸堿法或酶解法,但是使用酸堿法會使氨基酸營養(yǎng)價值降 低,而采用酶解法,酶解過程需要十多小時甚至更長時間。微波在焙烤、干燥、燙漂、解凍方 面都有應用,在輔助酶解上的研究也越來越多。微波輔助酶解可大大縮短酶解時間,提高生 產(chǎn)效率,便于工業(yè)化生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種微波輔助酶解豬血蛋白,生產(chǎn)活性肽的方法。該方法工藝 簡單,酶解反應時間短。所述方法包括豬血抗凝,離心分離,超聲波破壁,微波輔助酶解,二 次酶解,滅酶,膜過濾,噴霧干燥。1)檢疫合格的新鮮豬血液加入0. 3% -0. 5%檸檬酸三鈉抗凝;2)豬血離心分離離心使用高速冷凍離心機,離心溫度1°C -4°C,離心轉(zhuǎn)速 2500rpm-4000rpm,離心時間15min-20min,離心后,血細胞加入同體積0. 9%生理鹽水沖洗 1-3 次;3)超聲波破胞超聲波功率為200w-400w,時間為10min-20min,間歇比采用 2 1、1 1、1 2,操作在常溫下進行;4)微波輔助酶解微波輔助第一次酶解,微波功率在500w-700w,溫度在 45°C-60°C,酶解的時間為10min-20min,底物濃度為7%-10%,用IM的NaOH調(diào)節(jié)pH至 8. 0-10. 0,再加入pH為8. 0-10. 0的磷酸鹽緩沖液,加入酶活力為2. 4AU-A/g的Alcalase 內(nèi)切酶,酶的添加量為底物的2% -7% ;5) 二次酶解在第一次酶解結(jié)束后,再加入酶活力為200000U/g食品級風味蛋白 酶進行第二次酶解,加酶量為底物的2%,酶解lmin-3min,微波功率和溫度與第一次酶解 相同,脫去苦味;6)滅酶在90°C -100°C水浴鍋內(nèi)滅酶,滅酶時間為5min-10m ;7)膜過濾采用孔徑為3000Da-10000Da的膜,對酶解液進行過濾,濾除大分子物 質(zhì);8)噴霧干燥噴霧干燥料液流量6L/h-8L/h,料液溫度75°C -85°C,進風口溫度在 1200C -1400C,出口風溫度在70°C -85°C,噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。
具體實施例方式實施例1血細胞的分離檢疫合格的新鮮豬血加入0. 33%檸檬酸三鈉抗凝,緩慢攪拌。使用高速冷凍離心 機分離血液,在4°C條件下,用3000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min,倒出上清液,加入等體積0. 9%生 理鹽水再次離心,上述清洗步驟重復兩次,得到較純凈的血細胞。2超聲波破壁用超聲波破除血細胞的細胞壁,調(diào)整功率為400w,間歇比2 1,加兩倍體積去離 子水,超聲波處理20min。破壁操作在常溫下進行。用紫外-可見分光光度計測量上述溶 液,吸光度從0. 102上升到0. 408,破壁效果顯著。3微波輔助酶解微波輔助酶解采用分步酶解的方法。超聲波破壁后的底物加入蒸餾水調(diào)成濃度 7 %的溶液,用IM的NaOH調(diào)節(jié)底物pH至9. 0,再加入pH為9. 0的磷酸鹽緩沖液,添加酶活力 為2. 4AU-A/g的Alcalase內(nèi)切酶,加酶量為底物的6%。將配好的酶解反應溶液倒入到微波 反應儀,設定微波功率為500w,控制溫度在50°C,酶解Ilmin后,酶解效率能達到29. 74%。 再加入2%酶活力為200000U/g的食品級風味蛋白酶進行二次酶解,酶解2min,脫去苦味。 在酶解反應完成后,用90°C水浴鍋恒溫IOmin滅酶。最后將酶解液用3000Da膜過濾,濾除 大分子物質(zhì)。用高效液相色譜分析濾液,80%以上是小于IOOODa的活性肽。4噴霧干燥膜過濾后的酶解液進行噴霧干燥,料液流量為6. 5L/h,料液溫度為80°C,進風口 溫度為130°C,出風口溫度為75°C,噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法,其特征在于所述方法包括下 述步驟a)超聲波破壁超聲波破裂血細胞壁功率為200w-400w,時間為10min_20min,間歇比 采用2 1、1 1、1 2,操作在常溫下進行;b)微波輔助酶解微波輔助酶解分兩步進行,兩次酶解微波功率和溫度相同,微波功 率在500w-700w,溫度在45°C -60°C,在第一次酶解結(jié)束后再進行第二次酶解;c)膜過濾采用孔徑為3000Da-10000Da的膜,對酶解液進行過濾,濾除大分子物質(zhì);d)噴霧干燥豬血活性肽的噴霧干燥,料液流量在6L/h-8L/h,料液溫度在70°C-85°C, 進風口溫度在120°C _140°C,出風口溫度在70°C _85°C,噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求Ia所述的超聲波破壁,其特征在于超聲波所破裂的血細胞是在離心 分離后,加入同體積0. 9%生理鹽水洗滌1-3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求Ib所述的第一次酶解,其特征在于底物蛋白質(zhì)濃度為7%-10%, 用IMNaOH調(diào)節(jié)底物pH至8. 0-10. 0,再添加pH8. 0-10. 0磷酸鹽緩沖液,加入酶活力為 2. 4AU-A/g的Alcalase內(nèi)切酶,酶的添加量為底物的2% -7%,酶解時間為9min_Hmin。
4.根據(jù)權(quán)利要求Ib所述的第二次酶解,其特征在于所加入的酶是活力為200000U/g食 品級風味蛋白酶,加酶量為底物的2%,酶解時間為lmin-3min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法,屬于畜禽副產(chǎn)品精深加工及綜合利用領域。方法包括豬血抗凝,離心分離,超聲波破壁,微波輔助酶解,二次酶解,滅酶,膜過濾,噴霧干燥。產(chǎn)品可作為各種食品原料或添加劑。與傳統(tǒng)方法相比,微波輔助酶解,使蛋白質(zhì)分子劇烈運動,可顯著提高酶解速率,縮短酶解時間。本方法工藝簡單,成本低,環(huán)保,適合豬血深加工的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12P21/06GK102146427SQ201010613258
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者劉靜波, 吳涵, 方珍, 李洪山, 潘風光, 秦亞楠, 趙婭婭 申請人:吉林大學