專(zhuān)利名稱(chēng)：一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用四環(huán)素藥渣的方法，尤其是涉及一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法。
背景技術(shù)：
中國(guó)是四環(huán)素類(lèi)抗生素生產(chǎn)大國(guó)，年產(chǎn)量居世界首位。然而在四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中， 會(huì)產(chǎn)生大量的廢棄藥渣，這些藥渣主要是發(fā)酵醪液進(jìn)行固液分離時(shí)形成的菌餅部分，其主要成分是微生物菌絲體、未代謝利用完的有機(jī)物、無(wú)機(jī)鹽、少量未分離完的抗生素及其降解產(chǎn)物。長(zhǎng)期以來(lái)，抗生素藥渣多采用簡(jiǎn)單晾曬或烘干后，作為動(dòng)物飼料或肥料使用，經(jīng)濟(jì)附加值較低。與此同時(shí)，藥渣中因存在未分離完的抗生素，使其直接作為飼料或肥料使用受到質(zhì)疑。酵母浸膏是以酵母為原料，利用現(xiàn)代生物技術(shù)通過(guò)酵母細(xì)胞自溶破壁和酵母自身的酶系對(duì)酵母細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行水解或以酶制劑進(jìn)行水解，再經(jīng)一系列的抽提、濃縮等工序得到的粉狀或膏狀或液體的產(chǎn)品，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含有18種以上氨基酸，其中富含谷物中含量不足的賴(lài)氨酸、功能性多肽、抗衰老活性因子、膳食纖維和甘露糖，還含有人體不可缺少的核酸、核苷酸和鈣，富含B族維生素及磷、鎂、錳、鋅、硒等多種微量元素。酵母浸膏被廣泛應(yīng)用于生物發(fā)酵、生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域，具體地說(shuō)，可廣泛用于發(fā)酵法生產(chǎn)抗生素、氨基酸、有機(jī)酸、酶制劑、生物防腐劑、生物材料、維生素、透明質(zhì)酸等的培養(yǎng)基配制以及生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。我國(guó)目前生產(chǎn)酵母浸膏的廠(chǎng)家較少，但市場(chǎng)需求量較大。由于酵母浸膏生產(chǎn)原料主要是以小麥等糧食作物為原料，價(jià)格偏高，因而造成酵母浸膏的生產(chǎn)成本還處在一個(gè)比較高的水平，難以達(dá)到實(shí)際且實(shí)惠的應(yīng)用。目前還沒(méi)有一種能利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生產(chǎn)成本低、制備工藝簡(jiǎn)單獨(dú)特、 使四環(huán)素藥渣得以高值化利用、有效避免四環(huán)素藥渣不合理使用對(duì)環(huán)境造成危害的一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法。本發(fā)明通過(guò)如下方式實(shí)現(xiàn)
一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于該方法包括如下步驟
a.酵母菌種子制備從啤酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露保存管中分別挑取一環(huán)接入酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為廣5%的接種量接種于酵母菌種子培養(yǎng)基，25 35°C下厭氧培養(yǎng)36、他，可得生產(chǎn)酵母浸膏的酵母菌種子；
b.降解菌種子制備從無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌保存管中挑取一環(huán)接入降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為廣5%接種量接種于一級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基， 25 35°C厭氧培養(yǎng)48 7 后，再轉(zhuǎn)接入二級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25 35°C厭氧培養(yǎng)48 7 后，再轉(zhuǎn)接入三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25 35°C厭氧培養(yǎng)48 7池后，可得降解藥渣中殘留四環(huán)素的降解菌種子；
C.藥渣培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得藥渣培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣 8. 5 9. 5kg，玉米面0. Γ0. 5kg，酶制劑0. 3 0. 7kg，(NH4) 2S04 0. Γθ. 3kg，適當(dāng)加水使藥渣培養(yǎng)基中水分含量為85 90% ；
d.將上述步驟a制備的酵母菌種子和上述步驟b制備的降解菌種子分別按發(fā)酵底物總質(zhì)量的1 5%接種量接入上述步驟c制備的藥渣培養(yǎng)基中，25 35°C厭氧培養(yǎng)20 25d， 然后調(diào)節(jié)PH為6. 5 7. 0，在55°C水浴中按總液重的0. 03%加入酵母抽提酶，水解20 24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，微濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為30、0%，即為酵母浸膏；
所述酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，酵母菌種子培養(yǎng)基，降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基，產(chǎn)酶培養(yǎng)基，酶制劑制備方法分別是
1)酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基蛋白胨10g，酵母浸膏10g，葡萄糖20g，水IOOOml ；
2)酵母菌種子培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得酵母菌種子培養(yǎng)基蛋白胨10g，酵母浸膏5g，葡萄糖5g，水1000ml ；
3)降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基酵母浸膏10g，蛋白胨10g，四環(huán)素藥渣浸出液1000ml ；
4)一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣200g，酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，水 1000ml ；
5)霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料配制即可得霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基取新鮮去皮切碎土豆200g，加1000ml水煮沸20分鐘，過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖2g即可；
6)產(chǎn)酶培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料配制即可得產(chǎn)酶培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣700g， 麩皮300g，再適當(dāng)加水使產(chǎn)酶培養(yǎng)基水分含量為6(Γ65% ；
7)酶制劑制備將黑曲霉、康寧木霉、綠色木霉分別接入霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別以5%的接種量接種于產(chǎn)酶培養(yǎng)基，^ 35°C好氧培養(yǎng)601 后，可得生產(chǎn)酵母浸膏所需的酶制劑；
所述四環(huán)素藥渣浸出液是按藥渣濕重即重量與水即體積的比例為1 :1. 5配制，其具體步驟為取四環(huán)素濕藥渣lOOOg，加入1500ml水，攪拌均勻后在室溫下浸泡16 20h，然后離心，取濾液再經(jīng)抽濾棄漂浮的雜質(zhì)即可。本發(fā)明有如下效果
1)蛋白質(zhì)、氨基酸與核苷酸含量高且種類(lèi)多利用本發(fā)明提供的方法制得的酵母浸膏具有較高的蛋白質(zhì)、氨基酸和核苷酸含量，同時(shí)氨基酸種類(lèi)較多，不僅適用于生物發(fā)酵行業(yè)，而且還適用于生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。2)成本低本發(fā)明在原料的選擇上主要是以四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄藥渣為主，配以少量玉米面、(NH4)2SO4等為輔料，不僅來(lái)源豐富而且價(jià)格低廉。此外，本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了厭氧發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化，降低了生產(chǎn)酵母浸膏的成本，增加了投產(chǎn)后的產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力。3)強(qiáng)調(diào)安全性本發(fā)明生產(chǎn)酵母浸膏所使用的發(fā)酵原料均不含任何有毒有害物質(zhì)，具有安全性和補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的特點(diǎn)，對(duì)環(huán)境無(wú)直接或間接的污染作用。4)本發(fā)明針對(duì)目前大量四環(huán)素藥渣治理和再利用現(xiàn)狀，以選育優(yōu)化的啤酒酵母、 熱帶假絲酵母、EM原露等為酵母浸膏生產(chǎn)菌株，所產(chǎn)生的酵母浸膏中蛋白質(zhì)、氨基酸與核苷酸含量較高，其中氨基酸種類(lèi)較多，不僅使四環(huán)素廢棄藥渣得以資源化利用，而且還提高其經(jīng)濟(jì)附加值，變廢為寶。5)本發(fā)明酵母浸膏中水分含量30 40%，銨鹽含量3. 0 5· 0%，pH 6. 0 7· 5，真蛋白含量45 55%，氨基酸態(tài)氮含量2. (Γ3. 0%，核苷酸含量4. 0 5. OPg/g。6)采用本發(fā)明提供的方法得到的酵母浸膏，可以達(dá)到以下指標(biāo) 1.感官指標(biāo)棕黃色膏狀，有特殊的酵母香味。2.衛(wèi)生指標(biāo)每千克成品中含 總菌落，浸膏為陰性。重金屬未檢出。7)本發(fā)明產(chǎn)品的蛋白氨，氨基酸態(tài)氮及核苷酸含量相對(duì)穩(wěn)定，此外，本發(fā)明可以有效的利用四環(huán)素藥渣，減少其大量堆放對(duì)環(huán)境造成的危害。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，該方法包括如下步驟
a.酵母菌種子制備從啤酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露保存管中分別挑取一環(huán)接入酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為5%的接種量接種于酵母菌種子培養(yǎng)基，35°C下厭氧培養(yǎng)36h，可得生產(chǎn)酵母浸膏的酵母菌種子；
b.降解菌種子制備從無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌保存管中挑取一環(huán)接入降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為5%接種量接種于一級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，35°C 厭氧培養(yǎng)4 后，再轉(zhuǎn)接入二級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，35 °C厭氧培養(yǎng)4 后，再轉(zhuǎn)接入三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，35°C厭氧培養(yǎng)4 后，可得降解藥渣中殘留四環(huán)素的降解菌種子；
c.藥渣培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得藥渣培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣8.5kg, 玉米面0. ^g，酶制劑0. 7kg, (NH4)2SO4 0. 3kg，適當(dāng)加水使藥渣培養(yǎng)基中水分含量為85% ；
d.將上述步驟a制備的酵母菌種子和上述步驟b制備的降解菌種子分別按發(fā)酵底物總質(zhì)量的5%接種量接入上述步驟c制備的藥渣培養(yǎng)基中，35°C厭氧培養(yǎng)25d，然后調(diào)節(jié)pH 為6. 5，在55°C水浴中按總液重的0. 03%加入酵母抽提酶，水解20h，升溫到80°C使酶失活， 待其冷卻后，微濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為30、0%，即為酵母浸膏。經(jīng)測(cè)定酵母浸膏中水分含量37%，銨鹽含量4. 9%，pH 6. 2，真蛋白含量48. 8%，氨基酸態(tài)氮含量2. 1%，核苷酸含量4. 2Pg/g。經(jīng)微生物法未檢測(cè)到酵母浸膏中殘留四環(huán)素。實(shí)施例2:
一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，該方法包括如下步驟
a.酵母菌種子制備從啤酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露保存管中分別挑取一環(huán)接入酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為3%的接種量接種于酵母菌種子培養(yǎng)基，30°C下厭氧培養(yǎng)42h，可得生產(chǎn)酵母浸膏的酵母菌種子；
b.降解菌種子制備從無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌保存管中挑取一環(huán)接入降解菌復(fù)壯培養(yǎng)
6基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為3%接種量接種于一級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，30°C 厭氧培養(yǎng)60h后，再轉(zhuǎn)接入二級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，30°C厭氧培養(yǎng)60h后，再轉(zhuǎn)接入三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，30°C厭氧培養(yǎng)60h后，可得降解藥渣中殘留四環(huán)素的降解菌種子；
c.藥渣培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得藥渣培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣9.Okg, 玉米面0. 3kg，酶制劑0. 5kg, (NH4)2SO4 0. ^ig，適當(dāng)加水使藥渣培養(yǎng)基中水分含量為88% ；
d.將上述步驟a制備的酵母菌種子和上述步驟b制備的降解菌種子分別按發(fā)酵底物總質(zhì)量的3%接種量接入上述步驟c制備的藥渣培養(yǎng)基中，30°C厭氧培養(yǎng)22d，然后調(diào)節(jié)pH 為6. 8，在55°C水浴中按總液重的0. 03%加入酵母抽提酶，水解22h，升溫到80°C使酶失活， 待其冷卻后，微濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為30、0%，即為酵母浸膏。經(jīng)測(cè)定酵母浸膏中水分含量39%，銨鹽含量4. 8%，pH 7. 0，真蛋白含量51. 8%，氨基酸態(tài)氮含量2. 3%，核苷酸含量4. 2Pg/g。經(jīng)微生物法未檢測(cè)到酵母浸膏中殘留四環(huán)素。實(shí)施例3
一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，該方法包括如下步驟
a.酵母菌種子制備從啤酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露保存管中分別挑取一環(huán)接入酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為1%的接種量接種于酵母菌種子培養(yǎng)基，25°C下厭氧培養(yǎng)48h，可得生產(chǎn)酵母浸膏的酵母菌種子；
b.降解菌種子制備從無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌保存管中挑取一環(huán)接入降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為1%接種量接種于一級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25°C 厭氧培養(yǎng)7 后，再轉(zhuǎn)接入二級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25°C厭氧培養(yǎng)7 后，再轉(zhuǎn)接入三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25°C厭氧培養(yǎng)7 后，可得降解藥渣中殘留四環(huán)素的降解菌種子；
c.藥渣培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得藥渣培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣9.5kg, 玉米面0. 1kg，酶制劑0. 3kg，(NH4)2SO4 0. 1kg，適當(dāng)加水使藥渣培養(yǎng)基中水分含量為90% ；
d.將上述步驟a制備的酵母菌種子和上述步驟b制備的降解菌種子分別按發(fā)酵底物總質(zhì)量的1%接種量接入上述步驟c制備的藥渣培養(yǎng)基中，25°C厭氧培養(yǎng)25d，然后調(diào)節(jié)pH 為7. 0，在55°C水浴中按總液重的0. 03%加入酵母抽提酶，水解Mh，升溫到80°C使酶失活， 待其冷卻后，微濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為30、0%，即為酵母浸膏。經(jīng)測(cè)定酵母浸膏中水分含量31%，銨鹽含量3. 2%，pH 6. 9，真蛋白含量51. 8%，氨基酸態(tài)氮含量2. 9%，核苷酸含量4. 7Pg/g。經(jīng)微生物法未檢測(cè)到酵母浸膏中殘留四環(huán)素。上述酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，酵母菌種子培養(yǎng)基，降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基，產(chǎn)酶培養(yǎng)基，酶制劑制備方法分別是
1)酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基蛋白胨10g，酵母浸膏10g，葡萄糖20g，水1000ml。2)酵母菌種子培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得酵母菌種子培養(yǎng)基 蛋白胨10g，酵母浸膏5g，葡萄糖5g，水IOOOml ；
3)降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基酵母浸膏10g，蛋白胨10g，四環(huán)素藥渣浸出液IOOOml ；
4)一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣200g，酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，水 1000ml ；5)霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料配制即可得霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基取新鮮去皮切碎土豆200g，加IOOOml水煮沸20分鐘，過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖2g即可；
6)產(chǎn)酶培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料配制即可得產(chǎn)酶培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣700g， 麩皮300g，再適當(dāng)加水使產(chǎn)酶培養(yǎng)基水分含量為6(Γ65% ；
7)酶制劑制備將黑曲霉、康寧木霉、綠色木霉分別接入霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別以5%的接種量接種于產(chǎn)酶培養(yǎng)基，^ 35°C好氧培養(yǎng)601 后，可得生產(chǎn)酵母浸膏所需的酶制劑；
上述四環(huán)素藥渣浸出液是按藥渣濕重(重量)與水(體積)的比例為1 :1. 5配制，其具體步驟為取四環(huán)素濕藥渣lOOOg，加入1500ml水，攪拌均勻后在室溫下浸泡16 20h，然后離心，取濾液再經(jīng)抽濾棄漂浮的雜質(zhì)即可。上述酵母抽提酶是由木瓜蛋白酶和5’ -磷酸二酯酶復(fù)配而成，其中木瓜蛋白酶活力為900000U/g，5，-磷酸二酯酶活力為120U/g。采用本發(fā)明提供的方法得到的酵母浸膏，可以達(dá)到以下指標(biāo) 1.感官指標(biāo)棕黃色膏狀，有特殊的酵母香味。2.衛(wèi)生指標(biāo)(每千克成品中含) 總菌落，浸膏為陰性。重金屬未檢出。本發(fā)明產(chǎn)品的蛋白氨，氨基酸態(tài)氮及核苷酸含量相對(duì)穩(wěn)定，此外，本發(fā)明可以有效的利用四環(huán)素藥渣，減少其大量堆放對(duì)環(huán)境造成的危害。無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌即CYiroAacier amalonaticua NUJF27^14是由申請(qǐng)人從土壤中篩選馴化而得，經(jīng)16S rDNA鑒定為無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌，在國(guó)際GenBank上的登錄號(hào)為JF27^14，目前該菌在寧夏大學(xué)微生物保藏中心保藏并存活，其編號(hào)為NUJF27^14。酵母浸膏生產(chǎn)中所用菌種是啤酒酵母Saccharomyces Cferewiiae、熱帶假絲酵母-.Candida iro/7ica/i5·、EM 原露、無(wú)黑曲霉-Aspergillus /？/沢/ 、綠色木霉Trichoderma ririt/禾口康寧木霉-.Trichoderma koningii ο
權(quán)利要求
1.一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于該方法包括如下步驟a.酵母菌種子制備從啤酒酵母、熱帶假絲酵母、EM原露保存管中分別挑取一環(huán)接入酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為廣5%的接種量接種于酵母菌種子培養(yǎng)基，25 35°C下厭氧培養(yǎng)36、他，可得生產(chǎn)酵母浸膏的酵母菌種子；b.降解菌種子制備從無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌保存管中挑取一環(huán)接入降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，按質(zhì)量比為廣5%接種量接種于一級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基， 25 35°C厭氧培養(yǎng)48 7 后，再轉(zhuǎn)接入二級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25 35°C厭氧培養(yǎng)48 7 后，再轉(zhuǎn)接入三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，25 35°C厭氧培養(yǎng)48 7池后，可得降解藥渣中殘留四環(huán)素的降解菌種子；c.藥渣培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得藥渣培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣 8. 5 9. 5kg，玉米面0. Γ0. 5kg，酶制劑0. 3 0. 7kg，(NH4)2SO4 0. Γθ. 3kg，適當(dāng)加水使藥渣培養(yǎng)基中水分含量為85 90% ；d.將上述步驟a制備的酵母菌種子和上述步驟b制備的降解菌種子分別按發(fā)酵底物總質(zhì)量的1 5%接種量接入上述步驟c制備的藥渣培養(yǎng)基中，25 35°C厭氧培養(yǎng)20 25d， 然后調(diào)節(jié)PH為6. 5 7. 0，在55°C水浴中按總液重的0. 03%加入酵母抽提酶，水解20 24h，升溫到80°C使酶失活，待其冷卻后，微濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)減壓濃縮控制其水分為30、0%，即為酵母浸膏。
2.如權(quán)利要求1所述的一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于所述酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基，酵母菌種子培養(yǎng)基，降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基，一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基，霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基，產(chǎn)酶培養(yǎng)基，酶制劑制備方法分別是1)酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得酵母菌復(fù)壯培養(yǎng)基蛋白胨10g，酵母浸膏10g，葡萄糖20g，水IOOOml ；2)酵母菌種子培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得酵母菌種子培養(yǎng)基蛋白胨10g，酵母浸膏5g，葡萄糖5g，水1000ml ；3)降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得降解菌復(fù)壯培養(yǎng)基酵母浸膏10g，蛋白胨10g，四環(huán)素藥渣浸出液1000ml ；4)一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料混合即可得一級(jí)、二級(jí)或三級(jí)降解菌種子培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣200g，酵母浸膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，水 1000ml ；5)霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料配制即可得霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基取新鮮去皮切碎土豆200g，加1000ml水煮沸20分鐘，過(guò)濾后濾液用水稀釋至1000ml，然后再加入葡萄糖2g即可；6)產(chǎn)酶培養(yǎng)基制備按下述重量比的原料配制即可得產(chǎn)酶培養(yǎng)基四環(huán)素藥渣700g， 麩皮300g，再適當(dāng)加水使產(chǎn)酶培養(yǎng)基水分含量為6(Γ65% ；7)酶制劑制備將黑曲霉、康寧木霉、綠色木霉分別接入霉菌復(fù)壯培養(yǎng)基，菌株經(jīng)活化和擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別以5%的接種量接種于產(chǎn)酶培養(yǎng)基，^ 35°C好氧培養(yǎng)601 后，可得生產(chǎn)酵母浸膏所需的酶制劑。
3.如權(quán)利要求2所述的利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于所述四環(huán)素藥渣浸出液是按藥渣濕重即重量與水即體積的比例為1 :1. 5配制，其具體步驟為取四環(huán)素濕藥渣lOOOg，加入1500ml水，攪拌均勻后在室溫下浸泡16 20h，然后離心，取濾液再經(jīng)抽濾棄漂浮的雜質(zhì)即可。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用四環(huán)素藥渣的方法，尤其是涉及一種利用四環(huán)素藥渣生產(chǎn)酵母浸膏的方法，其特征在于該方法包括如下步驟a.酵母菌種子制備、b.降解菌種子制備、c.藥渣培養(yǎng)基制備、d.取步驟a制備的酵母菌種子和步驟b制備的降解菌種子分別按發(fā)酵底物總質(zhì)量的1～5%接種量接入步驟c制備的藥渣培養(yǎng)基中，經(jīng)厭氧發(fā)酵、酶解、膜濾、濃縮等步驟，可得酵母浸膏；本發(fā)明可使四環(huán)素生產(chǎn)企業(yè)排放的大量廢棄藥渣得以再利用，延長(zhǎng)產(chǎn)業(yè)鏈，提高資源利用率，同時(shí)其產(chǎn)品可廣泛用于生物發(fā)酵、生物工程、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域，且工藝簡(jiǎn)單，成本低廉。
文檔編號(hào)C12N1/06GK102212480SQ20111008443
公開(kāi)日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2011年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月6日
發(fā)明者王敏, 馬志強(qiáng), 馬玉龍 申請(qǐng)人:寧夏大學(xué)