專利名稱：一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒及其引物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，具體涉及一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增快速檢測試劑盒及其引物。
背景技術(shù)：
基孔肯雅病毒是引起基孔肯雅熱病的病原體，主要通過伊蚊叮咬傳播?；卓涎艧崾且环N人獸共患病，該疾病是以發(fā)熱、皮疹及關(guān)節(jié)疼痛為主要特征的病毒急性傳染病，主要流行于非洲和東南亞地區(qū)，雖然致死率很低，但在蚊媒密度較高的地區(qū)容易形成大規(guī)模爆發(fā)和流行。伊蚊在我國華南、西南等地廣泛分布，成為該疾病的暴發(fā)流行的潛在誘因。僅 2006年印度報(bào)告的基孔肯雅熱疑似病例超過139萬，部分地區(qū)的發(fā)病率超過45%。2008年由廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢出我國首例輸入性基孔肯雅病毒病例，這提示隨著人口流動(dòng)性增強(qiáng)，基孔肯雅病毒在中國的流行已成為可能。因此，一套快速、靈敏、特異性強(qiáng)，且操作簡便，不依賴貴重儀器設(shè)備的檢測方法，可以為該疾病的防控、流行病學(xué)調(diào)查提供必要信息。目前對基孔肯雅病毒檢測有多種方法，包括病毒分離培養(yǎng)為主的微生物學(xué)診斷方法、特異抗體的免疫學(xué)檢測技術(shù)、核酸探針、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)等基因檢測方法。 其中病原核酸檢測在快速性、安全性、準(zhǔn)確性和靈敏性等方面都有很大的提高，這些新技術(shù)不需要對微生物進(jìn)行分離提純，而直接用樣本或樣品核酸提取物對其基因及基因產(chǎn)物進(jìn)行快速檢測，并且與分子生物學(xué)技術(shù)及生物信息學(xué)手段相結(jié)合，向準(zhǔn)確、快速、靈敏和自動(dòng)化的方向發(fā)展。PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法是至今使用最廣泛的核酸擴(kuò)增方法，它作為一種簡便高效的基因擴(kuò)增技術(shù)在病原菌診斷過程中發(fā)揮著重大作用。PCR方法盡管操作起來比較簡單易行，擴(kuò)增產(chǎn)物在短時(shí)間內(nèi)能夠大量聚集。除了 PCR方法以外，還有其他核酸恒溫?cái)U(kuò)增方法，比如核酸序列擴(kuò)增法(NASBA)、自序列復(fù)制法(3SR)和鏈置換復(fù)制法(SDA)等。這三種方法的檢測水平都不少于10個(gè)拷貝，耗時(shí)1小時(shí)左右就可以將目標(biāo)核酸擴(kuò)增到相似的范圍內(nèi)。免疫學(xué)檢測技術(shù)快速簡便成本低廉，也能夠作為基孔肯雅病毒的檢測手段。根據(jù)PCR技術(shù)的原理，需要有變性、退火、延伸三個(gè)步驟，每個(gè)步驟的反應(yīng)溫度和時(shí)間均不相同且有十分精確的要求，甚至需要進(jìn)行20-40個(gè)循環(huán)來完成，因此需要依賴相對貴重的PCR溫度循環(huán)儀進(jìn)行控制，不利于現(xiàn)場診斷的要求。核酸序列擴(kuò)增法(NASBA)、自序列復(fù)制法(3SR)和鏈置換復(fù)制法(SDA)雖然屬于等溫?cái)U(kuò)增法，它們對目標(biāo)序列的擴(kuò)增特異性不強(qiáng)，使得擴(kuò)增后還需要后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作手段來對于擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測，因此具有操作繁瑣的缺點(diǎn)。免疫學(xué)檢測技術(shù)要求高質(zhì)量高穩(wěn)定性的單克隆抗體，否則準(zhǔn)確性不夠；此外，由于基孔肯雅病毒基因組較短，僅為11. 81Λ，因此表達(dá)的蛋白與其他相關(guān)病毒，例如阿尼昂尼昂病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)，因此特異性相對較低?？傊?，目前，基孔肯雅病毒的檢測技術(shù)主要有病毒分離培養(yǎng)、患者血清抗體檢測和RT-PCR基因檢測。病毒分離屬于目前檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于該技術(shù)存在檢測周期長的問題，不利于快速檢測的要求；血清抗體檢測能夠快速診斷基孔肯雅病毒，但由于該病毒抗體易于阿尼昂尼昂病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)，因而特異性相對較低；RT-PCR技術(shù)雖然能夠很好的解決上述問題，但由于需要依賴相對貴重的儀器設(shè)備，不利于現(xiàn)場診斷和基層檢測的要求。DNA 環(huán)介導(dǎo)恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated Isothermal Amplification of DNA，簡稱LAMP)克服以往基因擴(kuò)增方法的不足，在恒溫條件下能夠特異、高效、快速地進(jìn)行核酸擴(kuò)增，具有很多的優(yōu)越性。該技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)特異性強(qiáng)，PCR反應(yīng)僅需要一對引物來識別靶DNA，達(dá)到分子檢測的目的，而LAMP技術(shù)使用2對引物，一共識別靶DNA的6個(gè)不同區(qū)域，因此特異性較高；(2)靈敏度高，由于該技術(shù)使用了一種靈敏度、擴(kuò)增效率高的 DNA聚合酶，因此大大提高了靈敏度，并且縮短了檢測時(shí)間；(3)操作簡單，是用肉眼對結(jié)果就能進(jìn)行判斷，并且在等溫條件下反應(yīng)，操作簡便不依賴貴重儀器設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒及其引物，達(dá)到檢測時(shí)間短、特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢準(zhǔn)率高的效果，使其反應(yīng)程序化，廣泛應(yīng)用于臨床、口岸的常規(guī)檢測及流行病學(xué)調(diào)查。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒，所述試劑盒包括引物、Bst DNA 聚合酶、反應(yīng)液和STOR Green I熒光染料；所述反應(yīng)液為IOmM脫氧核苷三磷酸、10 X反應(yīng)緩沖液和150mM MgS04 ；所述引物序列是如SEQ ID NO :1_4所示的序列外引物1CGCCCTCTTTAACGGACATG ；
外引物2:AATTCGGCGCTGGCTAAG ；
內(nèi)引物1TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATATACCAGCCTGCACCCATT ；
內(nèi)引物2:AGTGTGCGGTGCATTCGATGATGCAGCTGAGAATTCCCTTC ；
或如SEQID NO 5-8所示的序列
外引物3GCTGAAAACACGCAGTTGAG ；
外引物4TGGCCCCACAATGAATTTGG ；
內(nèi)引物3GCGGTATGAGCCCTGTATGCTGAAGCACATGTGGAGAAGTCC ；
內(nèi)引物4CAGCTAAGCTCCGCGTCCTTTCGCCGTTTGCATAGGC ；
或如SEQID NO :9-12所示的序列
外引物5CAGGCACCATCTGGCTTTA ；
外引物6CCCCCAAAGTCTGAGGAATG ；
內(nèi)引物5GTTCCCTACGGCGCAGTTCAGCAGCACACAGCACCATT ；
內(nèi)引物6GCCCATCTCCATCGACATACCGCGCACGACATGTCCGTTAA ；
或如SEQID NO :13-16所示的序列
外引物7CGAAGCACATGTGGAGAAGT ；
外引物8:AGACGTCACCTTTGTACACC ；
內(nèi)引物7TTGGTAAAGGACGCGGAGCTTTTGCATCAGCATACAGGGC ；
內(nèi)引物8:ACTGCCTATGCAAACGGCGAGTCCAGGCTGAAGACATTGG。
運(yùn)用上述本發(fā)明的檢測試劑盒對基孔肯雅病毒進(jìn)行檢測，方法如下
(1)對被檢樣品的預(yù)處理用常規(guī)法快速提取樣本RNA ；
(2)按照以下配方配制反應(yīng)液反應(yīng)體系為25uL =I-IOmM的內(nèi)引物1和內(nèi)引物2， 0. I-IOmM的外引物1和外引物2 (其中內(nèi)引物1、內(nèi)引物2、外引物1和外引物2是四套引物中的一套)，I-IOmM 的 dNTPs，I-IOmM 的 MgS04，1-10M 的甜菜堿，l_5uL 粗提 DNA，1-8U Bst DNA聚合酶，1-8U反轉(zhuǎn)錄酶，加蒸餾水至25uL，溫和混勻。(3)進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)在60 65°C保溫0. 5至1. 5小時(shí)進(jìn)行循環(huán)鏈置換反應(yīng)。(4)分析判斷反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)果在反應(yīng)產(chǎn)物中加入熒光染料如市面銷售的熒光染料 (SYBR Green I)，混勻，靜置5min，反應(yīng)產(chǎn)物顯現(xiàn)綠色則為陽性，顯橙色則為陰性。本發(fā)明還提供一種用于基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測的引物，該引物是針對基孔肯雅病毒特異的El基因所設(shè)計(jì)的，所述引物序列是如SEQ ID NO :1-4所示的序列外引物1 CGCCCTCTTTAACGGACATG ；外引物2 AATTCGGCGCTGGCTAAG ；內(nèi)引物 1 TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATATACCAGCCTGCACCCATT ；內(nèi)引物 2 AGTGTGCGGTGCATTCGATGATGCAGCTGAGAATTCCCTTC ；或如SEQ ID NO :5_8所示的序列
外引物 3 GCTGAAAACACGCAGTTGAG ；外引物4 TGGCCCCACAATGAATTTGG ；內(nèi)引物 3 GCGGTATGAGCCCTGTATGCTGAAGCACATGTGGAGAAGTCC ；內(nèi)引物 4 CAGCTAAGCTCCGCGTCCTTTCGCCGTTTGCATAGGC ；或如SEQ ID NO 9~12所示的序列外引物5 CAGGCACCATCTGGCTTTA ；外引物6 CCCCCAAAGTCTGAGGAATG內(nèi)引物 5 GTTCCCTACGGCGCAGTTCAGCAGCACACAGCACCATT ；內(nèi)引物 6 :GCCCATCTCCATCGACATACCGCGCACGACATGTCCGTTAA ；或如SEQ ID NO 13-16所示的序列
外引物 7 CGAAGCACATGTGGAGAAGT ；外引物8 AGACGTCACCTTTGTACACC ；內(nèi)引物 7 TTGGTAAAGGACGCGGAGCTTTTGCATCAGCATACAGGGC ；內(nèi)引物 8 ACTGCCTATGCAAACGGCGAGTCCAGGCTGAAGACATTGG。本發(fā)明運(yùn)用生物信息平臺進(jìn)行大規(guī)模基因組分析，對于多態(tài)性位點(diǎn)引入簡并堿基和基因組分型處理，使引物設(shè)計(jì)更加完善，在引物設(shè)計(jì)時(shí)，根據(jù)LAMP技術(shù)的特殊性，充分考慮了引物二聚體AG、3’和5’末端AG、錯(cuò)配概率，優(yōu)化了引物間距和擴(kuò)增效率，大大提高了擴(kuò)增反應(yīng)的特異性和靈敏度。本發(fā)明的有益效果是與現(xiàn)有技術(shù)相比，①只需一恒定溫度就能擴(kuò)增反應(yīng)，不需要特殊試劑與設(shè)備；而且，在一個(gè)反應(yīng)體系之內(nèi)可以同時(shí)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄與靶基因的擴(kuò)增，方便操作；②高特異性應(yīng)用六個(gè)區(qū)段，四條引物，根據(jù)是否擴(kuò)增就能判斷靶標(biāo)物質(zhì)的存在與否， 假陽性率為0 ；③快速、高效擴(kuò)增擴(kuò)增僅需1小時(shí)即可完成，且產(chǎn)率高；④靈敏度高用對基孔肯雅病毒的最低檢測極限達(dá)到10個(gè)拷貝以內(nèi)，標(biāo)本的檢出率達(dá)高到99% ；⑤鑒定簡便通過肉眼觀察鑒定，無需電泳等其他任何分析步驟。⑥用途廣，可廣泛用于臨床、口岸的常規(guī)檢測及流行病學(xué)調(diào)查。


圖1是用本發(fā)明的試劑盒檢測基孔肯雅病毒的反應(yīng)管的顏色變化結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)ー步說明，但不作為對本發(fā)明的限定。實(shí)施例1 基孔肯雅病毒等溫基因擴(kuò)增快速檢測試劑盒本發(fā)明的試劑盒由以下組分組成(1)檢測引物(2) DNA 聚合酶Bst DNA 聚合酶(3)反應(yīng)液IOmM dNTP (脫氧核苷三磷酸)，IOXThermoPol Buffer (反應(yīng)緩沖 液)，150mMMgS04 (硫酸鎂)(4)熒光染料SYBR Green I檢測引物序列是如SEQ ID NO :1_4所示的序列外引物1 CGCCCTCTTTAACGGACATG ；外引物2 AATTCGGCGCTGGCTAAG ；內(nèi)引物 1 TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATATACCAGCCTGCACCCATT ；內(nèi)引物 2 AGTGTGCGGTGCATTCGATGATGCAGCTGAGAATTCCCTTC ；或如SEQ ID NO :5_8所示的序列外引物3 GCTGAAAACACGCAGTTGAG ；外引物4 TGGCCCCACAATGAATTTGG ；內(nèi)引物 3 :GCGGTATGAGCCCTGTATGCTGAAGCACATGTGGAGAAGTCC ；內(nèi)引物 4 CAGCTAAGCTCCGCGTCCTTTCGCCGTTTGCATAGGC ；或如SEQ ID NO 9~12所示的序列外引物5 CAGGCACCATCTGGCTTTA ；外引物6 CCCCCAAAGTCTGAGGAATG ；內(nèi)引物 5 :GTTCCCTACGGCGCAGTTCAGCAGCACACAGCACCATT ；內(nèi)引物 6 :GCCCATCTCCATCGACATACCGCGCACGACATGTCCGTTAA ；或如SEQ ID NO 13-16所示的序列
外引物 7 CGAAGCACATGTGGAGAAGT ；外引物8 AGACGTCACCTTTGTACACC ；內(nèi)引物 7 TTGGTAAAGGACGCGGAGCTTTTGCATCAGCATACAGGGC ；內(nèi)引物 8 ACTGCCTATGCAAACGGCGAGTCCAGGCTGAAGACATTGG。實(shí)施例2 用本發(fā)明的試劑盒的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例檢測基孔肯雅病毒的方法按如下步驟進(jìn)行步驟ー被檢樣品的預(yù)處理按照常規(guī)方法提取樣本RNA。步驟ニ 環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)反應(yīng)本實(shí)施例選用的試劑盒含以下序列的引物，如SEQ ID NO :1_4所示的序列
外引物 1 CGCCCTCTTTAACGGACATG
外引物 2 :AATTCGGCGCTGGCTAAG內(nèi)引物 1 TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATATACCAGCCTGCACCCATT內(nèi)引物 2 :AGTGTGCGGTGCATTCGATGATGCAGCTGAGAATTCCCTTC。配制反應(yīng)液反應(yīng)體系為25uL 1. 6mM的內(nèi)引物1和內(nèi)引物2，0. 2mM的外引物1禾口外引物 2，1. 6mM 的 dNTPs，6mM 的 MgS04，IM 的甜菜堿，2uL 樣本 RNA，8U Bst DNA 聚合酶，2U 反轉(zhuǎn)錄酶，加蒸餾水至25uL。將以上組分混合后63°C保溫lh。步驟三分析判斷反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)果在反應(yīng)產(chǎn)物中加入1. 0μ 1熒光染料(STOR Green I)，混勻，靜置5min。若顏色呈綠色則說明樣本中存在基孔肯雅病毒，反之則顏色呈橘紅色。本實(shí)施例的反應(yīng)結(jié)果見圖1，圖1左側(cè)管反應(yīng)后顏色為橘紅色，表明所檢測的樣本為基孔肯雅病毒陰性；右側(cè)管反應(yīng)后顏色為綠色，表明所檢測的樣本為基孔肯雅病毒陽性。選用其他試劑盒，含如SEQ ID NO :5_8所示的引物序列，或如SEQ ID NO :9_12所示的引物序列，或如SEQ ID NO :13-16所示的引物序列，按如上所述的檢測方法對上組被檢樣品進(jìn)行檢測，都可以得到同樣的結(jié)果。以上所述的實(shí)施例，只是本發(fā)明較優(yōu)選的具體實(shí)施方式
中的一種，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)進(jìn)行的通常變化和替換都應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。序列表<120> 一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒及其引物<160>16<170>PatentIn version 3. 2<210>1<211>20<212>DNA<213> 外引物 1<400>1cgccctcttt aacggacatg20<210>1
<211>18<212>DNA<213> 外引物 2<400>2aattcggcgc tggctaag18<210>1<211>40<212>DNA<213> 內(nèi)引物 1<400>3
tgcctttctt gctggctgca tataccagcc tgcacccatt 40<210>1<211>41<212>DNA<213> 內(nèi)引物 2<400>4agtgtgcggt gcattcgatg atgcagctga gaattccctt c 41<210>1<211>20<212>DNA<213> 外引物 3<400>5gctgaaaaca cgcagttgag20<210>1<211>20<212>DNA<213> 外引物 4<400>6tggccccaca atgaatttgg20<210>1<211>42<212>DNA<213> 內(nèi)引物 3<400>7gcggtatgag ccctgtatgc tgaagcacat gtggagaagt cc 42<210>1<211>37<212>DNA<213> 內(nèi)引物 4<400>8cagctaagct ccgcgtcctt tcgccgtttg cataggc37<210>1<211>19<212>DNA<213> 外引物 5<400>9caggcaccat ctggcttta19<210>1<211>20
<212>DNA<213> 外引物 6<400>10cccccaaagt ctgaggaatg20<210>1<211>38<212>DNA<213> 內(nèi)引物 5<400>11gttccctacg gcgcagttca gcagcacaca gcaccatt38<210>1<211>41<212>DNA<213> 內(nèi)引物 6<400>12gcccatctcc atcgacatac cgcgcacgac atgtccgtta a 41<210>1<211>20<212>DNA<213> 外引物 7<400>13cgaagcacat gtggagaagtz0<210>1<211>20<212>DNA<213> 外引物 8<400>14agacgtcacc tttgtacacc20<210>1<211>40<212>DNA<213> 內(nèi)引物 7<400>15ttggtaaagg acgcggagct tttgcatcag catacagggc 40<210>1<211>40<212>DNA<213> 內(nèi)引物 8<400>16
actgcctatg caaacggcga gtccaggctg aagacattgg 40
權(quán)利要求
1.一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括引物、BstDNA 聚合酶、反應(yīng)液和STOR Green I熒光染料；所述反應(yīng)液為IOmM脫氧核苷三磷酸、10 X反應(yīng)緩沖液和150mM MgS04 ； 所述引物序列是如SEQ ID NO 1-4所示的序列 外引物 1 :CGCCCTCTTTAACGGACATG ； 外引物 2 :AATTCGGCGCTGGCTAAG ；內(nèi)引物 1 :TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATATACCAGCCTGCACCCATT ； 內(nèi)引物 2 :AGTGTGCGGTGCATTCGATGATGCAGCTGAGAATTCCCTTC ； 或如SEQ ID NO 5-8所示的序列 外引物 3 GCTGAAAACACGCAGTTGAG ； 外引物 4 TGGCCCCACAATGAATTTGG ；內(nèi)引物 3 :GCGGTATGAGCCCTGTATGCTGAAGCACATGTGGAGAAGTCC ；內(nèi)引物 4 :CAGCTAAGCTCCGCGTCCTTTCGCCGTTTGCATAGGC ；或如SEQ ID NO 9-12所示的序列外引物 5 CAGGCACCATCTGGCTTTA ；外引物 6 CCCCCAAAGTCTGAGGAATG ；內(nèi)引物 5 :GTTCCCTACGGCGCAGTTCAGCAGCACACAGCACCATT ；內(nèi)引物 6 :GCCCATCTCCATCGACATACCGCGCACGACATGTCCGTTAA ；或如SEQ ID NO 13-16所示的序列外引物 7 CGAAGCACATGTGGAGAAGT ；外引物 8 :AGACGTCACCTTTGTACACC ；內(nèi)引物 7 :TTGGTAAAGGACGCGGAGCTTTTGCATCAGCATACAGGGC ；內(nèi)引物 8 :ACTGCCTATGCAAACGGCGAGTCCAGGCTGAAGACATTGG。
2.一種用于基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測的引物，其特征在于，所述引物序列是如SEQ IDNO :1-4所示的序列外引物 1 :CGCCCTCTTTAACGGACATG ； 外引物 2 :AATTCGGCGCTGGCTAAG ；內(nèi)引物 1 :TGCCTTTCTTGCTGGCTGCATATACCAGCCTGCACCCATT ； 內(nèi)引物 2 :AGTGTGCGGTGCATTCGATGATGCAGCTGAGAATTCCCTTC ； 或如SEQ ID NO 5-8所示的序列 外引物 3 GCTGAAAACACGCAGTTGAG ； 外引物 4 TGGCCCCACAATGAATTTGG ；內(nèi)引物 3 :GCGGTATGAGCCCTGTATGCTGAAGCACATGTGGAGAAGTCC ；內(nèi)引物 4 :CAGCTAAGCTCCGCGTCCTTTCGCCGTTTGCATAGGC ；或如SEQ ID NO 9-12所示的序列外引物 5 CAGGCACCATCTGGCTTTA ；外引物 6 CCCCCAAAGTCTGAGGAATG ；內(nèi)引物 5 :GTTCCCTACGGCGCAGTTCAGCAGCACACAGCACCATT ；內(nèi)引物 6 :GCCCATCTCCATCGACATACCGCGCACGACATGTCCGTTAA ；或如SEQ ID NO 13-16所示的序列外引物 7 CGAAGCACATGTGGAGAAGT ；外引物 8 :AGACGTCACCTTTGTACACC ；內(nèi)引物 7 :TTGGTAAAGGACGCGGAGCTTTTGCATCAGCATACAGGGC ；內(nèi)引物 8 :ACTGCCTATGCAAACGGCGAGTCCAGGCTGAAGACATTGG。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種基孔肯雅病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒及其引物，所述試劑盒包括引物、Bst DNA聚合酶、反應(yīng)液和SYBR Green I熒光染料；所述反應(yīng)液為10mM脫氧核苷三磷酸、10×反應(yīng)緩沖液和150mM MgSO4；所述引物序列是如SEQ ID NO1-4所示的序列，或如SEQID NO5-8所示的序列，或如SEQ ID NO9-12所示的序列，或如SEQ ID NO13-16所示的序列。本發(fā)明的試劑盒檢測時(shí)間短、特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢準(zhǔn)率高、反應(yīng)程序化、鑒定簡便，廣泛應(yīng)用于臨床、口岸的常規(guī)檢測及流行病學(xué)調(diào)查。
文檔編號C12N15/11GK102399903SQ20111030199
公開日2012年4月4日 申請日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月30日
發(fā)明者師永霞, 幸蘆琴, 李小波, 石磊, 鄭夔, 魯曦, 黃吉城 申請人:廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心, 廣州迪澳生物科技有限公司