核酸擴(kuò)增裝置和核酸分析裝置制造方法
【專利摘要】在常規(guī)方法中，在能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值的修正中使用校正完的溫度測(cè)定探頭的情況下，溫度控制模塊間殘留有最大為0.5℃的溫度差。與此相對(duì)，本發(fā)明將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的各反應(yīng)容器中容納的溫度校正試樣的熔解溫度作為測(cè)定熔解溫度進(jìn)行測(cè)定。然后，將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的測(cè)定熔解溫度與溫度校正試樣的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行比較，從而基于各差值對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正。
【專利說(shuō)明】核酸擴(kuò)增裝置和核酸分析裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及搭載有多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊的核酸擴(kuò)增裝置、和在裝置的一部分使用該核酸擴(kuò)增裝置的核酸分析裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]溫度控制模塊需要將其溫度絕對(duì)值正確地控制在目標(biāo)溫度。以往，在溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值的測(cè)定中，采用下述方法:使用校正完的溫度測(cè)定探頭，在測(cè)定溫度與目標(biāo)溫度不同的情況下，以使測(cè)定溫度與目標(biāo)溫度一致的方式進(jìn)行修正。一般而言，使用校正完的溫度測(cè)定探頭的溫度校正的極限精度為±0.25°C。
[0003]然而，存在多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊搭載于I個(gè)裝置的情況。此時(shí)如果也使用校正完的溫度測(cè)定探頭單獨(dú)修正各溫度控制模塊的溫度，則修正結(jié)束后，各溫度控制模塊的溫度控制精度為±0.25°C。因此，理論上溫度控制模塊間的溫度差最大為0.5。。。
[0004]此外，還提出了在溫度控制模塊的溫度校正中使用利用了熱變色性液晶的試驗(yàn)片的方法(參照例如專利文獻(xiàn)I。)。該方法的原理是，將熱變色性液晶混入與流體試樣接觸的試驗(yàn)片，通過(guò)檢測(cè)將試驗(yàn)片控制于試驗(yàn)溫度時(shí)液晶的變色，對(duì)試驗(yàn)片的溫度進(jìn)行校正。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0006]專利文獻(xiàn)
[0007]專利文獻(xiàn)1:日本特開平10-206411號(hào)公報(bào)
[0008]專利文獻(xiàn)2:日本特開2010-51265號(hào)公報(bào)
[0009]專利文獻(xiàn)3:日本特開平05-317030號(hào)公報(bào)
[0010]專利文獻(xiàn)4:日本特開2010-166823號(hào)公報(bào)
[0011]專利文獻(xiàn)5:日本特表2003-525621號(hào)公報(bào)
[0012]專利文獻(xiàn)6:日本特表2005-519642號(hào)公報(bào)
[0013]專利文獻(xiàn)7:日本特開2008-278896號(hào)公報(bào)
[0014]專利文獻(xiàn)8:日本特開平03-131761號(hào)公報(bào)
[0015]非專利文獻(xiàn)
[0016]非專利文獻(xiàn)1:JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY (臨床微生物學(xué)雜志)，F(xiàn)eb.2009，p.435-440

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017]發(fā)明所要解決的課題
[0018]因而，在通過(guò)溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的反應(yīng)中，需要特別精密的溫度控制。例如伴隨聚合酶鏈反應(yīng)(PCR:Polymerase Chain Reaction)、高分辨率熔解(HRM:HighResolution Melting)分析的反應(yīng)。
[0019]PCR法為下述核酸擴(kuò)增方法:通過(guò)交替重復(fù)進(jìn)行η次(I) 95°C的熱變性溫度、(2)約55°C~65°C左右的退火溫度、(3)延伸反應(yīng)溫度(以下稱為“溫度循環(huán)”。)，使作為目標(biāo)的核酸序列擴(kuò)增2n倍。
[0020]退火溫度和延伸反應(yīng)溫度根據(jù)目標(biāo)序列的不同而不同，該溫度要求的精度一般為±0.5°C以內(nèi)。不過(guò)，溫度的精確性和再現(xiàn)性越高，則DNA的擴(kuò)增效率和擴(kuò)增再現(xiàn)性越高。
[0021]該擴(kuò)增效率和擴(kuò)增再現(xiàn)性是影響實(shí)時(shí)PCR (Real time PCR)法的定量精度的重要因素。其中，實(shí)時(shí)PCR法是通過(guò)使用熒光染料來(lái)實(shí)時(shí)測(cè)定由PCR帶來(lái)的擴(kuò)增，從而由其擴(kuò)增率(循環(huán)次數(shù))對(duì)反應(yīng)液中的核酸量進(jìn)行定量的方法。
[0022]以往，在利用實(shí)時(shí)PCR法進(jìn)行的DNA的定量中，使用在用I個(gè)溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的空間內(nèi)配置有多個(gè)反應(yīng)容器(孔)方式的實(shí)時(shí)PCR裝置。在這樣的多個(gè)反應(yīng)容器(孔)用I個(gè)溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的情況下，可以將多個(gè)反應(yīng)容器(孔)間的溫度差抑制至±0.2°C以下。 [0023]近年來(lái)，提出了具有多個(gè)溫度控制模塊的實(shí)時(shí)PCR裝置。該實(shí)時(shí)PCR裝置能夠單獨(dú)對(duì)多個(gè)溫度控制模塊進(jìn)行溫度控制，可以同時(shí)實(shí)行多個(gè)溫度循環(huán)。當(dāng)然，在這種裝置中，多個(gè)反應(yīng)容器(孔)之間要求與僅使用I個(gè)溫度控制模塊時(shí)同等水平的溫度控制精度。
[0024]另一方面，HRM解析是下述分析方法:使通過(guò)實(shí)時(shí)PCR法擴(kuò)增的擴(kuò)增產(chǎn)物的溫度在約60°C至95°C的范圍內(nèi)，以0.1°C以下的分辨率進(jìn)行熒光測(cè)定，從而確定擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解溫度(擴(kuò)增的雙鏈核酸的兩條鏈結(jié)合熔解的溫度)。
[0025]已知該熔解溫度根據(jù)擴(kuò)增序列的不同而不同，理論上，即使是I個(gè)堿基的差異也會(huì)不同。通過(guò)該分析法，可以從混有多個(gè)不同序列的擴(kuò)增反應(yīng)液對(duì)各個(gè)序列的核酸進(jìn)行分離并檢測(cè)。
[0026]另外，對(duì)于對(duì)設(shè)置于多個(gè)反應(yīng)容器(孔)的樣品組的熔解溫度之差進(jìn)行比較的目的而言，反應(yīng)容器(孔)間的溫度再現(xiàn)性越高越好，該分析法要求的反應(yīng)孔間的溫度再現(xiàn)性為±0.1°C 以下。
[0027]現(xiàn)在，實(shí)時(shí)PCR裝置已開始應(yīng)用于臨床檢測(cè)。例如有使用多個(gè)溫度控制模塊來(lái)進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR的全自動(dòng)臨床檢測(cè)裝置。在該裝置中，多個(gè)溫度控制模塊間的溫度絕對(duì)值之差影響分析性能。因此，多個(gè)溫度控制模塊之間也要求與反應(yīng)容器(孔)間的溫度控制精度同等水平的溫度控制精度。
[0028]然而，使用校正完的溫度測(cè)定探頭的以往的溫度修正方法殘留有最大0.5°C的溫度差,難以滿足前述要求。
[0029]用于解決課題的方法
[0030]發(fā)明人等在深入研究該技術(shù)課題的解決時(shí)，進(jìn)行了以下的測(cè)定。首先，將通過(guò)PCR法擴(kuò)增的I種核酸片段在同一容器中合并并且充分混合，之后，如圖1A所示，將該混合液分注96個(gè)反應(yīng)容器(孔)。接著，使用反應(yīng)容器(孔)間的溫度均勻性為0.05°C以下的實(shí)時(shí)PCR裝置對(duì)核酸片段進(jìn)行HRM解析，從而測(cè)定熔解溫度。然后，發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，如圖1B所示，通過(guò)PCR擴(kuò)增的核酸片段的熔解溫度的偏差非常小，偏差控制在±0.05°C以下。
[0031]發(fā)明人等利用該發(fā)現(xiàn)，在核酸擴(kuò)增裝置中搭載:多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊、對(duì)通過(guò)各溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的反應(yīng)容器內(nèi)的試樣實(shí)時(shí)進(jìn)行熒光測(cè)定的實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部、對(duì)分注到用各溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的I個(gè)或多個(gè)反應(yīng)容器的溫度校正試樣的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行存儲(chǔ)的存儲(chǔ)部、將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的各反應(yīng)容器中容納的溫度校正試樣的熔解溫度作為測(cè)定熔解溫度進(jìn)行測(cè)定的熔解溫度測(cè)定部、以及將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的測(cè)定熔解溫度與前述標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行比較，從而基于各差值對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的溫度修正部。此外，將該構(gòu)成的核酸擴(kuò)增裝置實(shí)際安裝于核酸分析裝置。
[0032]發(fā)明效果
[0033]根據(jù)本發(fā)明，可以在多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊間以與溫度控制分辨率同等精度實(shí)現(xiàn)溫度均勻性。
[0034]上述以外的課題、構(gòu)成和效果通過(guò)以下的實(shí)施方式的說(shuō)明來(lái)明確。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1A是表示向反應(yīng)容器(孔)分注溫度校正試樣的例子的圖。
[0036]圖1B是對(duì)反應(yīng)容器(孔)間熔解溫度的測(cè)定誤差的分布進(jìn)行說(shuō)明的圖。
[0037]圖2是表示組裝有實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)的核酸擴(kuò)增裝置的功能模塊構(gòu)成的圖。
[0038]圖3是表示組裝有實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)的核酸擴(kuò)增裝置的一形態(tài)例的圖。
[0039]圖4是表示組裝有實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)的核酸擴(kuò)增裝置的一形態(tài)例的圖。
[0040]圖5是說(shuō)明對(duì)溫度校正試樣的熔解溫度信息進(jìn)行確認(rèn)的步驟的圖。
[0041 ] 圖6是對(duì)溫度修正動(dòng)作進(jìn)行說(shuō)明的圖。
[0042]圖7A是表示未實(shí)行溫度校正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖(修正前)。
[0043]圖7B是表示以熔解溫度為基準(zhǔn)對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行了修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖。
[0044]圖7C是表示使用校正完的溫度測(cè)定探頭對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行了修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖(現(xiàn)有例)。
[0045]圖8A是表示未實(shí)行溫度修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖(修正前)。
[0046]圖SB是表示以熔解溫度為基準(zhǔn)對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行了修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖。
[0047]圖9是對(duì)各溫度控制模塊中固有的溫度特性進(jìn)行說(shuō)明的圖。
[0048]圖10是對(duì)具有對(duì)修正后的溫度的精度進(jìn)行評(píng)價(jià)功能的溫度修正動(dòng)作進(jìn)行說(shuō)明的圖。
[0049]圖11是對(duì)使用多個(gè)溫度校正試樣的溫度修正動(dòng)作進(jìn)行說(shuō)明的圖。
[0050]圖12是表示組裝有實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)的自動(dòng)分析裝置的構(gòu)成例的圖。
[0051]圖13是表示組裝有實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)的自動(dòng)分析裝置的構(gòu)成例的圖。
[0052]圖14是對(duì)核酸分析裝置的處理動(dòng)作進(jìn)行說(shuō)明的圖。
[0053]圖15A是表示未實(shí)行溫度修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖(修正前)。
[0054]圖15B是表示以低溫側(cè)的熔解溫度為基準(zhǔn)對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行了修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖。
[0055]圖15C是表示以高溫側(cè)的熔解溫度為基準(zhǔn)對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行了修正的情況下的測(cè)定結(jié)果的圖。
[0056]圖16是對(duì)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)構(gòu)成進(jìn)行說(shuō)明的圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0057]以下，基于附圖，對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說(shuō)明。這里，本發(fā)明的實(shí)施方式并不限定于后述形態(tài)例，在其技術(shù)思想的范圍內(nèi)可以有各種變形。
[0058]<形態(tài)例I >
[0059](核酸擴(kuò)增裝置的功能模塊構(gòu)成)
[0060]圖2顯示形態(tài)例涉及的核酸擴(kuò)增裝置的功能模塊構(gòu)成。圖2所示的核酸擴(kuò)增裝置由多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊1、實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3、以及對(duì)它們進(jìn)行控制的控制部5構(gòu)成。在本說(shuō)明書中，將包括多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊I和實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3的結(jié)構(gòu)部分稱為實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15。
[0061]這里，溫度控制模塊I的基體由熱傳導(dǎo)性優(yōu)異的材料形成，在該基體所形成的保持機(jī)構(gòu)中容納反應(yīng)容器?；w中還配置有溫度傳感器、熱源?；w使用例如銅、鋁、各種合金。此外，溫度傳感器使用熱敏電阻、熱電偶、測(cè)溫電阻等。為了測(cè)定反應(yīng)容器內(nèi)的試樣的溫度，溫度傳感器被配置于反應(yīng)容器的保持機(jī)構(gòu)附近。
[0062]熱源使用例如珀耳帖元件。珀耳帖元件是熱電元件，被用于基體的加熱或冷卻。這里，在期望的構(gòu)成中，將散熱片配置于基體上。可是，只要可以控制溫度，熱源沒有必要搭載于溫度控制模塊I。例如也可以采用使空氣的溫度改變從而對(duì)溫度控制模塊I的溫度進(jìn)行控制的空氣恒溫箱方式。
[0063]多個(gè)溫度控制模塊I配置于由塑料等絕熱性優(yōu)異的材料構(gòu)成的臺(tái)座上。因此，可以忽略溫度從I個(gè)溫度控制模塊I向其他溫度控制模塊I的傳遞。即，可以忽略多個(gè)溫度控制模塊間溫度的相互干涉。
[0064]實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3對(duì)通過(guò)各溫度控制模塊I進(jìn)行溫度管理的反應(yīng)容器內(nèi)的試樣進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光測(cè)定。當(dāng)然，試樣帶有熒光標(biāo)記。實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3由照射于反應(yīng)容器從而產(chǎn)生激發(fā)光的激發(fā)光源和對(duì)從被照射激發(fā)光的試樣產(chǎn)生的熒光進(jìn)行測(cè)定的熒光檢測(cè)器構(gòu)成。這里，激發(fā)光源可以使用例如發(fā)光二極管(LED)、半導(dǎo)體激光器、氙氣燈、鹵素?zé)舻?。此外，熒光檢測(cè)器可以使用例如光電二極管、光電倍增管、CCD等。
[0065]各溫度控制模塊I的溫度控制、實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3的測(cè)定數(shù)據(jù)的處理等由控制部5來(lái)實(shí)行。在該形態(tài)例的情況下，控制部5將各溫度控制模塊I的溫度修正時(shí)所使用的溫度校正試樣的熔解溫度存儲(chǔ)于存儲(chǔ)部11。如后所述，這里的熔解溫度(以下也稱為“標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度”。)通過(guò)各種各樣的路徑被輸入控制部5。
[0066]關(guān)于控制部5，作為各溫度控制模塊I的溫度校正時(shí)所使用的功能，具有熔解溫度測(cè)定部7和溫度修正部9。
[0067]熔解溫度測(cè)定部7對(duì)對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊I的各反應(yīng)容器中容納的溫度校正試樣的熔解溫度分別進(jìn)行測(cè)定。熔解溫度的測(cè)定作為在實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3檢測(cè)到溫度校正試樣的熔解時(shí)的溫度傳感器的測(cè)定溫度(以下也稱為“測(cè)定熔解溫度”。)而被確定。測(cè)定熔解溫度被從熔解溫度測(cè)定部7輸入溫度修正部9。
[0068]溫度修正部9將測(cè)定熔解溫度與存儲(chǔ)部11所存儲(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行比較，以其差變得沒有的方式對(duì)各溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正。針對(duì)各溫度控制模塊I而檢測(cè)到的測(cè)定熔解溫度與標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度的差有助于該溫度控制模塊I的溫度控制精度。
[0069](裝置構(gòu)成的具體例I)[0070]圖3表示使用I種溫度校正試樣對(duì)多個(gè)溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的核酸擴(kuò)增裝置的具體例。圖3所示的裝置構(gòu)成是對(duì)圖2所示的裝置構(gòu)成更詳細(xì)地進(jìn)行表示的構(gòu)成。
[0071]在本形態(tài)例的情況下，能夠單獨(dú)控制溫度的4個(gè)溫度控制模塊I沿著形成為圓板狀的旋轉(zhuǎn)盤22的外緣部進(jìn)行配置。這里的旋轉(zhuǎn)盤22對(duì)應(yīng)于形態(tài)例I的臺(tái)座。旋轉(zhuǎn)盤22由絕熱性優(yōu)異的材料構(gòu)成。因此，可以忽略多個(gè)溫度控制模塊間溫度的相互干涉。
[0072]旋轉(zhuǎn)盤22相對(duì)于未圖示的旋轉(zhuǎn)軸被固定，如箭頭所示，在順時(shí)針方向和逆時(shí)針方向均可以自由地旋轉(zhuǎn)。旋轉(zhuǎn)軸通過(guò)未圖示的步進(jìn)馬達(dá)被旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)。 [0073]溫度控制模塊I上可拆卸地容納或架設(shè)有I個(gè)或多個(gè)反應(yīng)容器21。反應(yīng)容器21由對(duì)于熒光波長(zhǎng)區(qū)域的光為透明的部件構(gòu)成，其底部被以從旋轉(zhuǎn)盤22的背面?zhèn)嚷冻龅姆绞竭M(jìn)行安裝。
[0074]實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3配置于旋轉(zhuǎn)盤22的背面?zhèn)?，將從激發(fā)光源產(chǎn)生的激發(fā)光照射在反應(yīng)容器21的底部。此外，實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3用熒光檢測(cè)器對(duì)被照射激發(fā)光的反應(yīng)容器21內(nèi)的試樣中產(chǎn)生的熒光進(jìn)行檢測(cè)，將其熒光強(qiáng)度作為熒光測(cè)定數(shù)據(jù)輸出于數(shù)據(jù)處理部23。這里，圖3的情況下，實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3為2個(gè)。因此，可以同時(shí)對(duì)2個(gè)反應(yīng)容器21進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光測(cè)定。
[0075]數(shù)據(jù)處理部23對(duì)從熒光檢測(cè)器依次輸入的熒光測(cè)定數(shù)據(jù)與用溫度傳感器測(cè)定的溫度數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，輸出于存儲(chǔ)運(yùn)算部24。
[0076]存儲(chǔ)運(yùn)算部24例如由通用型計(jì)算機(jī)構(gòu)成，實(shí)行對(duì)各溫度模塊I的熔解溫度進(jìn)行解析的解析處理和算出修正值的運(yùn)算處理。這里，存儲(chǔ)運(yùn)算部24將從熒光測(cè)定數(shù)據(jù)檢測(cè)到溫度校正試樣的熔解時(shí)刻的測(cè)定溫度作為測(cè)定熔解溫度。此外，存儲(chǔ)運(yùn)算部24基于測(cè)定熔解溫度與標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度的差值，算出溫度絕對(duì)值的修正值。這里，溫度控制模塊I的測(cè)定溫度也輸入裝置控制部25。標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度預(yù)先存儲(chǔ)于存儲(chǔ)運(yùn)算部24。
[0077]裝置控制部25以在實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)中可以進(jìn)行必要的溫度變化的方式將各溫度控制模塊I控制在目標(biāo)溫度。具體而言，控制溫度控制模塊I所搭載的熱源的發(fā)熱量。此時(shí)，裝置控制部25從溫度控制模塊I所搭載的溫度傳感器獲取測(cè)定溫度并以測(cè)定溫度與目標(biāo)溫度一致的方式進(jìn)行反饋控制。如前所述，這里的測(cè)定溫度也輸入存儲(chǔ)運(yùn)算部24。
[0078]這里，在實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)時(shí)，裝置控制部25使反應(yīng)容器21的溫度在至少50°C至95°C的范圍內(nèi)變化。圖3中的數(shù)據(jù)處理部23、存儲(chǔ)運(yùn)算部24和裝置控制部25對(duì)應(yīng)于圖2的控制部5。在圖3中，將數(shù)據(jù)處理部23、存儲(chǔ)運(yùn)算部24和裝置控制部25作為單獨(dú)獨(dú)立的裝置而表示，但也可以作為I個(gè)裝置而構(gòu)成。
[0079]在前述說(shuō)明中，對(duì)于下述情況進(jìn)行了說(shuō)明:溫度控制模塊I搭載于旋轉(zhuǎn)盤22的外緣部，旋轉(zhuǎn)盤22旋轉(zhuǎn)，從而在溫度控制模塊I通過(guò)實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3之前時(shí)，檢測(cè)出熒光。
[0080]然而，也可以將搭載有溫度控制模塊I的臺(tái)座側(cè)固定，使實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3 —側(cè)旋轉(zhuǎn)或移動(dòng)而構(gòu)成。在這種情況下，在實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3通過(guò)與溫度控制模塊I相對(duì)的位置時(shí)，實(shí)行熒光的檢測(cè)。
[0081](裝置構(gòu)成的具體例2)
[0082]圖4表示使用I種溫度校正試樣而對(duì)溫度控制模塊I的溫度進(jìn)行修正的核酸擴(kuò)增裝置的其他裝置構(gòu)成例。圖4所示的裝置構(gòu)成也是對(duì)圖2所示的裝置構(gòu)成更詳細(xì)地進(jìn)行表示的裝置構(gòu)成。
[0083]在圖3所示的裝置構(gòu)成的情況下，相對(duì)于溫度控制模塊I的數(shù)量，實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3的數(shù)量減少。因此，采用將載置溫度控制模塊I的臺(tái)座和實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3中的任一方固定并對(duì)另一方進(jìn)行旋轉(zhuǎn)控制的構(gòu)成。
[0084]然而，在溫度控制模塊I和實(shí)時(shí)突光測(cè)定部3 對(duì)應(yīng)并且具有多個(gè)溫度控制模塊I和實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部3的情況下，可以為圖4所示的裝置構(gòu)成。這里，圖4表示在溫度控制模塊I中載置有多個(gè)反應(yīng)容器21矩陣狀排列的反應(yīng)板26的例子。
[0085](反應(yīng)容器)
[0086]本形態(tài)例的情況下，如果反應(yīng)容器21、反應(yīng)板26為可以使熒光波長(zhǎng)透過(guò)、并且可以傳導(dǎo)溫度控制模塊I的熱的材質(zhì)，則為任何材質(zhì)、形狀均可。期望更優(yōu)選使用沒有混入DNase、RNase 的 PCR 管(Greiner 社、德國(guó))或 96 孔的 PCR 板。
[0087](溫度校正試樣)
[0088]本形態(tài)例中的溫度校正試樣只要含有可以進(jìn)行HRM解析的核酸片段和檢測(cè)染料即可。核酸片段可以利用DNA、RNA、PNA。更優(yōu)選使用通過(guò)PCR法對(duì)任意I種核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增的試樣。進(jìn)一步優(yōu)選使用對(duì)水溶液的絕對(duì)溫度與熔解溫度的一致進(jìn)行了確認(rèn)的核酸片段。
[0089]在如后述的形態(tài)例那樣使用2種核酸片段的情況下，也只要含有可以進(jìn)行HRM解析的2種核酸片段和檢測(cè)染料即 可。更優(yōu)選使用通過(guò)PCR對(duì)2種核酸片段分別單獨(dú)擴(kuò)增的擴(kuò)增產(chǎn)物。
[0090]這里，期望溫度校正試樣優(yōu)選容納于外壁上粘貼有條形碼的容器中。這里，期望條形碼的信息中至少包括溫度校正試樣的熔解溫度信息。在使用分注完溫度校正試樣的板型反應(yīng)容器(即，反應(yīng)板26)的情況下，可以在反應(yīng)板26本身粘貼條形碼。當(dāng)然，期望條形碼的信息中至少包括溫度校正試樣的熔解溫度信息。
[0091](溫度絕對(duì)值的修正動(dòng)作的概要)
[0092]本形態(tài)例涉及的核酸擴(kuò)增裝置通過(guò)以下所示的3道處理工序?qū)Χ鄠€(gè)溫度控制模塊間存在的溫度絕對(duì)值的偏差進(jìn)行修正。
[0093](工序I)
[0094]將含有通過(guò)PCR法等核酸擴(kuò)增方法擴(kuò)增的具有規(guī)定的熔解溫度的核酸片段的試樣作為溫度校正試樣分注到多個(gè)反應(yīng)容器。之后，將該反應(yīng)容器設(shè)置或架設(shè)于進(jìn)行溫度校正的核酸擴(kuò)增裝置內(nèi)的多個(gè)溫度控制模塊I的保持機(jī)構(gòu)中?；蛘撸陬A(yù)先設(shè)置或架設(shè)在多個(gè)溫度控制模塊I的保持機(jī)構(gòu)中的反應(yīng)容器內(nèi)分注溫度校正試樣。
[0095](工序2)
[0096]接著，每個(gè)溫度控制模塊I對(duì)溫度校正試樣的熔解溫度進(jìn)行實(shí)際測(cè)定。這里的熔解溫度的測(cè)定適用公知的方法。例如一邊使溫度控制模塊I的溫度從低溫(例如60°C)變化至高溫(例如95°C )，一邊實(shí)時(shí)對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定。此時(shí)，以與核酸擴(kuò)增裝置所要求的溫度精度同等以上的溫度分辨率使溫度變化，對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定。例如核酸擴(kuò)增裝置所要求的溫度精度為±0.1°C以下的情況下，使目標(biāo)溫度在0.1°C梯度(刻?)以下變化，對(duì)熔解溫度進(jìn)行熒光測(cè)定。
[0097](工序3)[0098]如果熔解溫度的測(cè)定結(jié)束，則控制部5以熔解溫度的測(cè)定值與存儲(chǔ)部11所存儲(chǔ)的熔解溫度一致的方式，對(duì)各溫度控制模塊I進(jìn)行管理，對(duì)溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正。這里，熔解溫度的測(cè)定中有產(chǎn)生測(cè)定誤差的可能性。因此，在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，期望將工序2和工序3重復(fù)2次以上，從而提高溫度控制模塊間的溫度均勻性。
[0099](修正動(dòng)作的詳細(xì)情況)
[0100]圖5表示預(yù)先實(shí)行了溫度修正的熔解溫度信息的確認(rèn)處理步驟。這里，存儲(chǔ)運(yùn)算部24作為實(shí)行該處理的部件而被說(shuō)明。可是，也可以使用構(gòu)成核酸擴(kuò)增裝置的其他控制部、連接于核酸擴(kuò)增裝置的外部的控制部來(lái)實(shí)行。
[0101]首先，存儲(chǔ)運(yùn)算部24通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑嘗試獲得溫度校正試樣的熔解溫度信息(步驟SI)。如果可以獲得，則從網(wǎng)絡(luò)途徑讀入熔解溫度信息，存儲(chǔ)于規(guī)定的存儲(chǔ)區(qū)域(步驟S2)。這里的網(wǎng)絡(luò)除了 LAN以外，還包括互聯(lián)網(wǎng)。
[0102]與此相對(duì)，在網(wǎng)絡(luò)上沒有相當(dāng)?shù)男畔⒌那闆r或存儲(chǔ)運(yùn)算部24未連接入網(wǎng)絡(luò)的情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24要求使用者輸入熔解溫度信息(步驟S3)。在這種情況下，使用者除了鍵盤輸入以外，還可以使用條形碼輸入等來(lái)輸入熔解溫度。存儲(chǔ)運(yùn)算部24將輸入的熔解溫度信息存儲(chǔ)于規(guī)定的存儲(chǔ) 區(qū)域(步驟S4)。
[0103]圖6顯示了包括熔解溫度信息的確認(rèn)處理(圖5)的全部溫度修正動(dòng)作。這里，在以下說(shuō)明中，存儲(chǔ)運(yùn)算部24作為實(shí)行一系列處理的部件進(jìn)行說(shuō)明，但也可以由構(gòu)成核酸擴(kuò)增裝置的其他控制部或與核酸擴(kuò)增裝置連接的外部的控制部來(lái)實(shí)行一系列處理。
[0104]如果開始核酸擴(kuò)增裝置的溫度校正，則存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)溫度校正試樣的熔解溫度信息進(jìn)行確認(rèn)(步驟S11)。這里，實(shí)行圖5所示的處理動(dòng)作。
[0105]接著，存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)所架設(shè)的溫度校正試樣的熔解溫度進(jìn)行測(cè)定(步驟S12)。具體而言，使溫度控制模塊I的溫度以規(guī)定的溫度以規(guī)定的溫度梯度從低溫(例如60°C)至高溫(例如95°C)進(jìn)行變化，對(duì)從此時(shí)的溫度校正試樣發(fā)出的熒光強(qiáng)度實(shí)時(shí)進(jìn)行測(cè)定。如果存儲(chǔ)運(yùn)算部24從熒光強(qiáng)度檢測(cè)到試樣的熔解，則將此時(shí)的測(cè)定溫度作為測(cè)定熔解溫度存儲(chǔ)于規(guī)定的存儲(chǔ)區(qū)域。
[0106]接著，存儲(chǔ)運(yùn)算部24將預(yù)先確認(rèn)了的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度與各溫度控制模塊I的測(cè)定熔解溫度進(jìn)行比較(步驟S13)。此時(shí)，存儲(chǔ)運(yùn)算部24算出預(yù)先確認(rèn)了的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度與各溫度控制模塊I的測(cè)定熔解溫度的差值。
[0107]存儲(chǔ)運(yùn)算部24使用關(guān)于各溫度控制模塊I算出的差值、以各溫度控制模塊I的測(cè)定熔解溫度成為溫度校正試樣的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度的方式，對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正(步驟S14)。
[0108]以下，關(guān)于使用可以以0.1°C以下的分辨率設(shè)定溫度的溫度控制模塊I和熔解溫度為87.3°C的溫度校正試樣的情況，對(duì)以0.1°C以下的分辨率測(cè)定熔解溫度而得到的熔解溫度曲線進(jìn)行說(shuō)明。
[0109]在本形態(tài)例的情況下，容納于各反應(yīng)容器的試樣的熔解溫度作為衰減率(熒光強(qiáng)度每單位時(shí)間的減少量)最大的熒光強(qiáng)度值(0.2)的溫度而確定。不過(guò)，熔解溫度的確定方法不限定于此方法，也可以使用例如非專利文獻(xiàn)I所示的分析方法。
[0110]圖7A表示在完全沒有實(shí)行溫度修正的情況下，對(duì)多個(gè)溫度控制模塊I測(cè)定的熔解溫度曲線的測(cè)定例。在該例子的情況下，多個(gè)溫度控制模塊間的最大溫度差為1.7°C。這里，圖7A中，以橫軸作為溫度、縱軸作為熒光強(qiáng)度，對(duì)測(cè)定值進(jìn)行作圖并顯示。圖7B、圖7C也同樣。
[0111]圖7B顯示在以熔解溫度87.3°C為基準(zhǔn)對(duì)各溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的情況下，對(duì)多個(gè)溫度控制模塊I測(cè)定的熔解溫度曲線的測(cè)定例?？芍谠摾拥那闆r下，多個(gè)溫度控制模塊間的最大溫度差被限制在0.1°C以下。
[0112]作為參考，將使用以往的使用了校正完的溫度探頭的溫度設(shè)定方法的情況下，對(duì)多個(gè)溫度控制模塊1測(cè)定的熔解溫度曲線的測(cè)定例示于圖7C。在該例子的情況下，多個(gè)溫度控制模塊間的最大溫度差為0.53°C。
[0113](總結(jié))
[0114]如上所述，本形態(tài)例涉及的核酸擴(kuò)增裝置搭載了使用溫度校正試樣對(duì)溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的功能。因此，根據(jù)本形態(tài)例涉及的核酸擴(kuò)增裝置，可以使多個(gè)溫度控制模塊間的最大溫度差均勻化為與各個(gè)溫度控制模塊I的溫度控制分辨率同等精度。例如，如圖1B所示，可以使多個(gè)溫度控制模塊間的最大溫度差均勻化為±0.05°C以下。即，可以將溫度控制模塊間的溫度差以與各溫度控制模塊中的溫度控制分辨率同等的程度進(jìn)行修正。因此，在使用多個(gè)溫度控制模塊進(jìn)行核酸擴(kuò)增的情況下，也可以忽略溫度控制模塊的不同對(duì)分析精度產(chǎn)生的影響。
[0115]<形態(tài)例2>
[0116]在前述形態(tài)例的情況下，將熒光強(qiáng)度急劇變化、變化率大的部分(熒光強(qiáng)度的衰減率最大的部分(圖7B的情況下，熒光強(qiáng)度值為0.2))確定為熔解溫度。
[0117]然而，也可以使用其他方法確定熔解溫度。例如如圖8A和圖SB所示，可以使用橫軸圖示溫度、縱軸圖示熒光強(qiáng)度的變化率的測(cè)定曲線來(lái)確定熔解溫度。具體而言，也可以將熒光強(qiáng)度的變化最大的溫度確定為熔解溫度。這種情況下，更明確地確定熔解溫度。另外，圖8A是對(duì)應(yīng)于圖7A的圖，圖8B對(duì)應(yīng)于圖7B。當(dāng)然，存儲(chǔ)運(yùn)算部24實(shí)行熔解溫度的檢測(cè)。
[0118]<形態(tài)例3>
[0119]在前述形態(tài)例中，將測(cè)定的熒光強(qiáng)度的衰減率最大的溫度或熒光強(qiáng)度的變化率最大的溫度作為“熔解溫度”來(lái)使用。
[0120]然而，關(guān)于熔解溫度的確定方法，如果可以確定熔解溫度、并且與確定溫度校正試樣的熔解溫度時(shí)所用的方法相同，則使用哪種確定方法都可以。即，不限定于從溫度校正試樣的測(cè)定曲線來(lái)確定熔解溫度的方法。
[0121]<形態(tài)例4>
[0122]在前述形態(tài)例中，對(duì)于熔解溫度使用一個(gè)溫度校正試樣的溫度修正方法進(jìn)行了說(shuō)明。熔解溫度即使為I個(gè)溫度校正試樣，只要是在可以忽略各溫度控制模塊I的溫度特性的程度上相同，則關(guān)于熔解溫度以外的溫度，也可以將溫度控制模塊I的最大溫度差均勻化至±0.05°C以下。
[0123]然而，各個(gè)溫度控制模塊I 一般具有固有的溫度特性。因此，在本形態(tài)例中，通過(guò)采用以下所示的方法，在將多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊I控制在任意的溫度的情況下，也使多個(gè)溫度控制模塊間的溫度絕對(duì)值均勻化。
[0124]具體而言，事先對(duì)各溫度控制模塊I具有的溫度特性進(jìn)行測(cè)定并存儲(chǔ)于存儲(chǔ)運(yùn)算部24，在將溫度控制在熔解溫度以外的溫度的情況下，基于該溫度特性和熔解溫度的控制誤差對(duì)各溫度控制模塊I的溫度進(jìn)行控制。這里，關(guān)于溫度特性的測(cè)定，針對(duì)核酸擴(kuò)增所使用的溫度范圍來(lái)進(jìn)行即可。例如使目標(biāo)溫度為從50°c左右至100°C左右來(lái)進(jìn)行即可。
[0125]圖9表示實(shí)際測(cè)定的溫度特性的一個(gè)例子。圖9表示使各溫度控制模塊I的目標(biāo)溫度以l°c梯度變化的情況下，溫度傳感器所測(cè)定的溫度控制模塊I的測(cè)定溫度的關(guān)系。圖9的縱軸為測(cè)定溫度，橫軸為目標(biāo)溫度。關(guān)于圖9的情況，各溫度控制模塊I固有的溫度特性可以用直線的斜率和截距來(lái)規(guī)定。
[0126]這樣，通過(guò)對(duì)各溫度控制模塊I固有的溫度特性進(jìn)行測(cè)定并存儲(chǔ)于存儲(chǔ)區(qū)域、對(duì)于熔解溫度的目標(biāo)溫度和測(cè)定溫度的誤差進(jìn)行修正，從而可以將各個(gè)溫度控制模塊I正確地控制在任意的溫度。即，關(guān)于熔解溫度以外的任意溫度，可以使多個(gè)溫度控制模塊之間溫度絕對(duì)值均勻化。
[0127]這里，溫度特性的測(cè)定可以在對(duì)熔解溫度進(jìn)行溫度校正后實(shí)行。在這種情況下，測(cè)定任意目標(biāo)溫度與測(cè)定溫度的關(guān)系。因此，通過(guò)直接使用測(cè)定的溫度特性，可以將各溫度控制模塊I控制在任意的溫度絕對(duì)值。
[0128]<形態(tài)例5>
[0129]這里，對(duì)具有評(píng)價(jià)修正后的溫度的精度的功能的溫度修正功能進(jìn)行說(shuō)明。理想情況下，如果前述溫度校正結(jié)束，則溫度控制模塊I的測(cè)定熔解溫度應(yīng)當(dāng)與標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度一致(嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，差應(yīng)當(dāng)為與溫度控制分辨率為同等水平以下)。不過(guò)，有可能由于設(shè)備的故障等，在溫度校正后還殘留有誤差的可能性。所以，提出了以下說(shuō)明的溫度修正功能。
[0130]圖10表示對(duì)應(yīng)于 該溫度修正功能的處理步驟例。首先，存儲(chǔ)運(yùn)算部24實(shí)行前述的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度的確認(rèn)處理(步驟S21)。該處理動(dòng)作與圖5所示的步驟SI~S4相同。
[0131]接著，存儲(chǔ)運(yùn)算部24實(shí)行各溫度控制模塊I的溫度修正(步驟S22)。該處理動(dòng)作與圖6所示的步驟S12~S14相同。具體而言，使溫度控制模塊I的目標(biāo)溫度從50°C左右至100°C左右變化，從而進(jìn)行熔解溫度的測(cè)定和溫度絕對(duì)值的修正。
[0132]如果步驟S22所示的溫度修正結(jié)束，則存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)各溫度控制模塊I再測(cè)定溫度校正試樣的熔解溫度。該動(dòng)作自動(dòng)實(shí)行。這里，存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)測(cè)定熔解溫度與標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度的溫度差是否在目標(biāo)精度內(nèi)(是否在判定閾值以下)進(jìn)行判定(步驟S23)。給出目標(biāo)精度的閾值可以由使用者事先設(shè)定，也可以作為初期值而分配。
[0133]在判定為在目標(biāo)精度內(nèi)的情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24顯示各溫度控制模塊I滿足的精度并結(jié)束修正動(dòng)作(步驟S24)。在顯示精度時(shí)，還顯示對(duì)于修正后的各溫度控制模塊I所測(cè)定的溫度絕對(duì)值、孔間精度。
[0134]與此相對(duì)，在步驟S23中判定為溫度差超過(guò)目標(biāo)精度的情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24將已經(jīng)實(shí)行的溫度校正次數(shù)(重復(fù)次數(shù))與閾值進(jìn)行比較(步驟S25)。這里的閾值給出熔解溫度的測(cè)定和各溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值的修正次數(shù)的上限值。閾值可以由使用者事先設(shè)定，也可以作為初期值而分配。
[0135]在步驟S25的判定處理中，在存在得到否定結(jié)果的溫度控制模塊I的情況下(即，對(duì)該溫度控制模塊的溫度校正次數(shù)未到達(dá)規(guī)定的閾值的情況)，存儲(chǔ)運(yùn)算部24返回步驟S22。
[0136]對(duì)于各溫度控制模塊1，存儲(chǔ)運(yùn)算部24實(shí)行基于熔解溫度的測(cè)定值與本來(lái)的熔解溫度的溫度差的溫度絕對(duì)值的修正處理。在存在不在目標(biāo)精度內(nèi)的溫度控制模塊的情況下，重復(fù)實(shí)行一系列的動(dòng)作，直至達(dá)到規(guī)定的重復(fù)次數(shù)。
[0137]在僅僅以規(guī)定次數(shù)重復(fù)一系列的動(dòng)作而使溫度控制模塊的溫度控制精度不在目標(biāo)精度內(nèi)的情況下(在步驟S25得到肯定結(jié)果的情況)，存儲(chǔ)運(yùn)算部24確定該溫度控制模塊1，并表示表示溫度控制異常的警報(bào)(步驟S26)。在這種情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24也對(duì)修正后的各溫度控制模塊I所測(cè)定的溫度絕對(duì)值和孔間精度進(jìn)行顯示。
[0138]在更優(yōu)選形態(tài)例中，在修正動(dòng)作后實(shí)行的通常動(dòng)作時(shí)，對(duì)于不在目標(biāo)精度內(nèi)的溫度控制模塊，也設(shè)為一直持續(xù)顯示表示溫度控制異常的警報(bào)。這里，“通常動(dòng)作”意思是除了用于溫度校正的裝置動(dòng)作以外，核酸擴(kuò)增裝置可以實(shí)行的全部動(dòng)作。此外，在更優(yōu)選形態(tài)例中，期望對(duì)于檢測(cè)到溫度控制異常的溫度控制模塊以從通常動(dòng)作的使用對(duì)象自動(dòng)地排除在外的方式進(jìn)行控制。
[0139]<形態(tài)例6>
[0140]在前述形態(tài)例的情況下，對(duì)以使用I種溫度校正試樣為前提，搭載溫度修正功能的核酸擴(kuò)增裝置進(jìn)行了說(shuō)明。
[0141]這里，以使用2種溫度校正試樣為前提，對(duì)搭載有多個(gè)可以分別單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值的修正功能的核酸擴(kuò)增裝置進(jìn)行說(shuō)明。本形態(tài)例涉及的核酸擴(kuò)增裝置的基本構(gòu)成與在形態(tài)例I中說(shuō)明的核酸擴(kuò)增裝置相同。
[0142]這里，本形態(tài)例中的2種溫度校正試樣設(shè)為各熔解溫度距離至少5°C以上即可。更優(yōu)選作為第I種溫度校正試樣，使用熔解溫度為60°C左右(例如50°C~70°C)的核酸片段，作為第2種溫度校正試樣，使用熔解溫度為90°C左右(例如80°C~100°C )的核酸片段。各溫度校正試樣可以分別對(duì)熔解溫度進(jìn)行測(cè)定，也可以使用各溫度校正試樣的混合液，通過(guò)I次熔解溫度的測(cè)定同時(shí)對(duì)2個(gè)熔解溫度進(jìn)行測(cè)定。
[0143]圖11中顯示對(duì)應(yīng)于使用N個(gè)(N≥2)溫度校正試樣的溫度修正功能的處理步驟例。這里，考慮到多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊I具有不同的溫度特性，在圖11的情況下，對(duì)于每個(gè)溫度校正試樣最適當(dāng)?shù)男拚档拇_定和重復(fù)修正的情況進(jìn)行說(shuō)明。
[0144]首先，存儲(chǔ)運(yùn)算部24實(shí)行全部N個(gè)熔解溫度信息的確認(rèn)處理(步驟S31 )。該處理動(dòng)作除了確認(rèn)的熔解溫度的個(gè)數(shù)為N個(gè)以外，與圖5所示的步驟SI~S4相同。
[0145]接著，存儲(chǔ)運(yùn)算部24可變控制各溫度控制模塊I的目標(biāo)溫度并實(shí)際測(cè)定檢測(cè)到第i溫度校正試樣(其中，i = 1、2、…N)的熔解溫度時(shí)刻的溫度控制模塊I的溫度(步驟S32)。
[0146]接著，存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)實(shí)際測(cè)定的熔解溫度與第i溫度校正試樣的本來(lái)的熔解溫度進(jìn)行比較(步驟S33)。此外，存儲(chǔ)運(yùn)算部24顯示針對(duì)第i溫度校正試樣事先取得的本來(lái)的熔解溫度的信息(步驟S35 )。
[0147]之后，存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)各溫度控制模塊I以實(shí)際測(cè)定的熔解溫度與本來(lái)的熔解溫度一致的方式，對(duì)各溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正(步驟S34)。
[0148]接著，對(duì)于各溫度控制模塊1，存儲(chǔ)運(yùn)算部24測(cè)定第i溫度校正試樣的熔解溫度并對(duì)該測(cè)定熔解溫度與標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度的差值是否在目標(biāo)精度以內(nèi)進(jìn)行判定(步驟S36)。
[0149]在判定為在目標(biāo)精度內(nèi)的情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24顯示各溫度控制模塊滿足的精度，并過(guò)渡到對(duì)下一個(gè)溫度校正試樣的處理(步驟S37 )。具體而言，顯示針對(duì)修正后的各溫度控制模塊I測(cè)定的溫度絕對(duì)值和孔間精度。[0150]與此相對(duì)，在步驟S36中判定為溫度差超過(guò)目標(biāo)精度的情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24將已經(jīng)實(shí)行的溫度修正次數(shù)(重復(fù)次數(shù))與閾值進(jìn)行比較(步驟S38)。
[0151]在步驟S38的判定處理中存在得到否定結(jié)果的溫度控制模塊I的情況下(即，對(duì)該溫度控制模塊的溫度修正次數(shù)未到達(dá)規(guī)定的閾值的情況)，存儲(chǔ)運(yùn)算部24返回步驟S32。
[0152]之后，對(duì)于各溫度控制模塊1，存儲(chǔ)運(yùn)算部24再度實(shí)行基于熔解溫度的測(cè)定值與本來(lái)的熔解溫度的溫度差的溫度絕對(duì)值的修正處理。在溫度控制模塊間的溫度差不在目標(biāo)精度內(nèi)的情況下，重復(fù)實(shí)行一系列的動(dòng)作直至達(dá)到規(guī)定的重復(fù)次數(shù)。
[0153]在僅僅以規(guī)定次數(shù)重復(fù)一系列的動(dòng)作而使溫度控制模塊間的精度不在目標(biāo)精度內(nèi)的情況下(在步驟S38得到肯定結(jié)果的情況)，存儲(chǔ)運(yùn)算部24確定該溫度控制模塊I并顯示表示溫度控制異常的警報(bào)(步驟S39)。
[0154]在步驟S37或步驟S39后，存儲(chǔ)運(yùn)算部24對(duì)針對(duì)全部溫度校正試樣的修正動(dòng)作是否已經(jīng)結(jié)束進(jìn)行判定(步驟S40)。在得到否定結(jié)果的情況下，存儲(chǔ)運(yùn)算部24返回步驟S32，實(shí)行針對(duì)后面的第i + I溫度校正試樣的修正動(dòng)作。而且，在步驟S40得到肯定結(jié)果的情況下，結(jié)束一系列的處理。
[0155]<形態(tài)例7>
[0156](核酸分析裝置的功能模塊構(gòu)成)
[0157]這里，對(duì)實(shí)際安裝了前述各形態(tài)例涉及的核酸擴(kuò)增裝置的核酸分析裝置進(jìn)行說(shuō)明。核酸分析裝置有例如基因檢測(cè)裝置。
[0158](裝置構(gòu)成的具體例I)
[0159]圖12表示本形態(tài)例涉及的核酸分析裝置的具體例。核酸分析裝置具有前處理部、實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15和未圖示的控制部。這里的前處理部至少具有分注機(jī)構(gòu)31、反應(yīng)容器輸送機(jī)構(gòu)32、試樣架設(shè)位置33、核酸提取試劑架設(shè)位置34、核酸擴(kuò)增試劑架設(shè)位置35、耗材架設(shè)位置36、耗材廢棄孔37、反應(yīng)容器廢棄孔38。這里，分注機(jī)構(gòu)31安裝有分注試劑、試樣的分注頭(tip)。圖12所示的裝置構(gòu)成對(duì)應(yīng)于組裝有圖3所示構(gòu)成的實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15的情況。即，對(duì)應(yīng)于使用具有旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)的實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15的情況。
[0160](裝置構(gòu)成的具體例2)
[0161]圖13表示本形態(tài)例涉及的核酸分析裝置的其他具體例。圖13所示的核酸分析裝置對(duì)應(yīng)于組裝有圖4所示構(gòu)成的實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15的情況。即，對(duì)應(yīng)于使用未使用旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)的實(shí)時(shí)突光測(cè)定機(jī)構(gòu)15的情況。
[0162](處理動(dòng)作)
[0163]圖14表示以圖12和圖13所示的核酸分析裝置實(shí)行的處理動(dòng)作步驟。這里，圖14中，對(duì)于與圖10對(duì)應(yīng)的部分標(biāo)以同樣的符號(hào)來(lái)表不。
[0164]首先，使用者將核酸分析裝置的動(dòng)作所必需的溫度校正試劑和耗材架設(shè)于規(guī)定位置。之后，使用者指示輸入多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊I的溫度校正或溫度控制模塊I的溫度確認(rèn)。
[0165]檢測(cè)先前的指示輸入的核酸分析裝置確認(rèn)溫度校正試劑的熔解溫度并存儲(chǔ)于存儲(chǔ)區(qū)域(步驟S51 )。這里的熔解溫度通過(guò)從網(wǎng)絡(luò)途徑、添加在溫度校正試劑的容器上的條形碼的輸入、從前述兩種途徑、或者由使用者手動(dòng)輸入而輸入核酸分析裝置內(nèi)。
[0166]接著，分注機(jī)構(gòu)31將架設(shè)于試劑架設(shè)位置33的溫度校正試樣按規(guī)定量分注至反應(yīng)容器(步驟S52)。這里的規(guī)定量只要是可以通過(guò)實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15進(jìn)行測(cè)定的容量，為怎樣的容量均可。不過(guò)，在實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15沒有防止反應(yīng)液蒸發(fā)的功能的情況下，優(yōu)選在該階段在溫度校正試樣的上層添加礦物油。
[0167]之后，將反應(yīng)容器關(guān)閉，通過(guò)反應(yīng)容器輸送機(jī)構(gòu)32輸送至實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)15。之后，實(shí)行前述各形態(tài)例涉及的溫度修正動(dòng)作(步驟S22~S26)。
[0168]圖15A表示在完全未實(shí)行溫度修正的情況下，針對(duì)多個(gè)溫度控制模塊I測(cè)定的熔解溫度曲線的測(cè)定例。這里，圖15A表示對(duì)2種溫度校正試樣(例如具有低溫側(cè)熔解溫度(60°C)和高溫側(cè)熔解溫度(95°C)的試樣)的混合液測(cè)定熔解溫度的情況下的熔解溫度曲線的測(cè)定例。這里，圖15A將橫軸作為溫度、縱軸作為溫度變化率而表示。如圖所示，在未進(jìn)行溫度修正的情況下，對(duì)于低溫側(cè)熔解溫度確認(rèn)到最大1.5°C的溫度差，對(duì)于高溫側(cè)熔解溫度確認(rèn)到最大1.7°C的溫度差。 [0169]另一方面，如果以熔解溫度為基準(zhǔn)進(jìn)行溫度修正，則如圖15B和圖15C所示，多個(gè)溫度控制模塊間的溫度差中均可以控制在0.1°C以下。另外，圖15B是針對(duì)低溫側(cè)熔解溫度對(duì)多個(gè)溫度控制模塊I的溫度進(jìn)行修正的情況下測(cè)定的熔解溫度曲線，圖15C是針對(duì)高溫側(cè)熔解溫度對(duì)多個(gè)溫度控制模塊I的溫度進(jìn)行修正的情況下測(cè)定的熔解溫度曲線。
[0170]在任一種情況下，都可以使各溫度控制模塊I的溫度絕對(duì)值與熔解溫度一致，與常規(guī)方法相比，也可以實(shí)現(xiàn)非常高的均勻性。此外，通過(guò)搭載目標(biāo)精度的評(píng)價(jià)功能，可以自動(dòng)地對(duì)液溫的溫度控制變得異常的溫度控制模塊I進(jìn)行判斷。如果將該判斷為溫度控制異常的溫度控制模塊I的信息存儲(chǔ)于系統(tǒng)中，則可以實(shí)現(xiàn)在通常檢測(cè)時(shí)以不使用溫度控制確認(rèn)到異常的溫度控制模塊I的方式將其從檢測(cè)區(qū)域排除在外，或不使用檢測(cè)結(jié)果的控制。
[0171]<形態(tài)例8>
[0172]在前述形態(tài)例的說(shuō)明中，對(duì)在單一的核酸擴(kuò)增裝置或核酸分析裝置內(nèi)使多個(gè)溫度控制模塊間的溫度絕對(duì)值均勻化的情況進(jìn)行了說(shuō)明。
[0173]這里，對(duì)實(shí)現(xiàn)多個(gè)核酸擴(kuò)增裝置或核酸分析裝置間的溫度絕對(duì)值的均勻化的情況下合適的系統(tǒng)構(gòu)成進(jìn)行說(shuō)明。
[0174]圖16表示本形態(tài)例涉及的系統(tǒng)構(gòu)成。當(dāng)然，在該形態(tài)例的情況下，在溫度修正中也使用溫度校正試樣。圖16所示的系統(tǒng)由網(wǎng)絡(luò)信息數(shù)據(jù)庫(kù)100、信息管理裝置101、核酸擴(kuò)增裝置102、服務(wù)信息管理裝置103構(gòu)成。
[0175]網(wǎng)絡(luò)信息數(shù)據(jù)庫(kù)100中存儲(chǔ)溫度校正試樣信息(具體而言，溫度校正試樣的熔解溫度)和各核酸擴(kuò)增裝置102的溫度校正結(jié)果信息。溫度校正試樣信息通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑從信息管理裝置101存儲(chǔ)于網(wǎng)絡(luò)信息數(shù)據(jù)庫(kù)100，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑在N個(gè)核酸擴(kuò)增裝置102讀出。另一方面，溫度校正結(jié)果信息通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑從N個(gè)核酸擴(kuò)增裝置102存儲(chǔ)于網(wǎng)絡(luò)信息數(shù)據(jù)庫(kù)100，進(jìn)一步通過(guò)信息管理裝置101讀出。
[0176]通過(guò)使用具有相同的熔解溫度的溫度校正試樣的溫度修正動(dòng)作在各核酸擴(kuò)增裝置102實(shí)行，可以使N個(gè)裝置間的溫度絕對(duì)值均勻化。此外，信息管理裝置101可以對(duì)各核酸擴(kuò)增裝置102的溫度校正結(jié)果信息進(jìn)行集約化管理。因此，在某核酸擴(kuò)增裝置102確認(rèn)到溫度控制的異常的情況下，通過(guò)將關(guān)于表現(xiàn)異常的核酸擴(kuò)增裝置102的信息提供給管理服務(wù)信息的服務(wù)信息管理裝置103，可以提供迅速的客戶支持。當(dāng)然，服務(wù)信息管理裝置103與先于服務(wù)的提供的核酸擴(kuò)增裝置102的配置位置相同或不同均可。[0177]<其他形態(tài)例>
[0178]這里，本發(fā)明不限定于上述形態(tài)例，還包括各種各樣的變形例。例如，上述形態(tài)例是為了使本發(fā)明容易理解地被說(shuō)明而詳細(xì)地進(jìn)行說(shuō)明的例子，不一定限定于具有所說(shuō)明的全部構(gòu)成的形態(tài)。此外，可以將某形態(tài)例的一部分置換成其他形態(tài)例的構(gòu)成，此外，也可以在某形態(tài)例的構(gòu)成中加入其他形態(tài)例的構(gòu)成。此外，還可以對(duì)于各形態(tài)例的構(gòu)成的一部分追加、消除或替換其他構(gòu)成。
[0179]此外，關(guān)于上述各構(gòu)成、功能、處理部、處理方法等，可以將它們的一部分或全部作為例如集成電路以外的硬件來(lái)實(shí)現(xiàn)。此外，上述各構(gòu)成、功能等也可以通過(guò)處理器解釋并實(shí)行實(shí)現(xiàn)各自的功能的程序來(lái)實(shí)現(xiàn)。即，也可以作為軟件來(lái)實(shí)現(xiàn)。實(shí)現(xiàn)各功能的程序、表格、文件等的信息可以存儲(chǔ)于內(nèi)存、硬盤、SSD (Solid State Drive)等存儲(chǔ)裝置、IC卡、SD卡、DVD等存儲(chǔ)介質(zhì)。
[0180]此外，控制線、信息線表示的是被認(rèn)為在說(shuō)明上是必需的線，并非表示制品上所必需的全部的控制線、信息線。實(shí)際上，可以認(rèn)為幾乎全部的構(gòu)成都相互連接。
[0181]符號(hào)說(shuō)明
[0182]1:溫度控制模塊；3:實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部；5:控制部；7:熔解溫度測(cè)定部；9:溫度修正部；11:存儲(chǔ)部；15:實(shí)時(shí)熒光測(cè)定機(jī)構(gòu)；21:反應(yīng)容器；22:旋轉(zhuǎn)盤；23:數(shù)據(jù)處理部；24:存儲(chǔ)運(yùn)算部；25:裝置控制部；26:反應(yīng)板；31:分注機(jī)構(gòu)；32:反應(yīng)容器輸送機(jī)構(gòu)；33:試樣架設(shè)位置；34:核酸提取試劑架設(shè)位置；35:核酸擴(kuò)增試劑架設(shè)位置；36:耗材架設(shè)位置；37:耗材廢棄孔；38…反應(yīng)容器 廢棄孔；100…網(wǎng)絡(luò)信息數(shù)據(jù)庫(kù)；101…信息管理裝置；102...核酸擴(kuò)增裝置；103…服務(wù)信息管理裝置。
【權(quán)利要求】
1.一種核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于，具有: 多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊， 對(duì)通過(guò)各溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的反應(yīng)容器內(nèi)的試樣實(shí)時(shí)進(jìn)行熒光測(cè)定的實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部， 對(duì)分注到用各溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的I個(gè)或多個(gè)反應(yīng)容器中的溫度校正試樣的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行存儲(chǔ)的存儲(chǔ)部， 將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的各反應(yīng)容器中容納的溫度校正試樣的熔解溫度作為測(cè)定熔解溫度進(jìn)行測(cè)定的熔解溫度測(cè)定部，以及 將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的測(cè)定熔解溫度與所述標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行比較，從而基于各差值對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的溫度修正部。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于，具有控制部， 所述控制部在通過(guò)所述溫度修正部進(jìn)行的各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值的修正結(jié)束后，自動(dòng)測(cè)定溫度校正試樣的熔解溫度，并對(duì)修正后的溫度控制模塊的溫度控制精度進(jìn)行畫面顯示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于，具有控制部， 所述控制部重復(fù)實(shí)行下述處理: 在通過(guò)所述溫度修正部進(jìn)行的各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值的修正結(jié)束后，對(duì)于各溫度控制模塊自動(dòng)測(cè)定溫度 校正試樣的熔解溫度的處理，和 基于測(cè)定結(jié)果對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于，所述控制部重復(fù)進(jìn)行所述修正的處理和所述測(cè)定的處理，直至全部溫度控制模塊的溫度控制精度在預(yù)先設(shè)定的溫度精度范圍內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于， 對(duì)于即使重復(fù)預(yù)先設(shè)定的次數(shù)，溫度控制精度也不在預(yù)先設(shè)定的溫度精度范圍內(nèi)的溫度控制模塊，所述控制部畫面顯示表示溫度控制異常的警報(bào)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于， 對(duì)于畫面顯示表示溫度控制異常的警報(bào)的溫度控制模塊，即使在通常動(dòng)作中所述控制部也持續(xù)進(jìn)行警報(bào)的顯示。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的核酸擴(kuò)增裝置，其特征在于， 對(duì)于畫面顯示表示溫度控制異常的警報(bào)的溫度控制模塊，所述控制部將其從通常動(dòng)作的使用對(duì)象中排除在外。
8.—種核酸分析裝置，其特征在于，具有核酸擴(kuò)增裝置、分注機(jī)構(gòu)和輸送機(jī)構(gòu)， 所述核酸擴(kuò)增裝置具有:多個(gè)能夠單獨(dú)控制溫度的溫度控制模塊、對(duì)通過(guò)各溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的反應(yīng)容器內(nèi)的試樣實(shí)時(shí)進(jìn)行熒光測(cè)定的實(shí)時(shí)熒光測(cè)定部、對(duì)分注到用各溫度控制模塊進(jìn)行溫度管理的I個(gè)或多個(gè)反應(yīng)容器的溫度校正試樣的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行存儲(chǔ)的存儲(chǔ)部、將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的各反應(yīng)容器中容納的溫度校正試樣的熔解溫度作為測(cè)定熔解溫度進(jìn)行測(cè)定的熔解溫度測(cè)定部、以及將對(duì)應(yīng)于各溫度控制模塊的測(cè)定熔解溫度與所述標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度進(jìn)行比較，從而基于各差值對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的溫度修正部，所述分注機(jī)構(gòu)將待檢測(cè)物或試樣分注到所述反應(yīng)容器， 所述輸送機(jī)構(gòu)將所述反應(yīng)容器輸送至所述核酸擴(kuò)增裝置，輸送至所述多個(gè)溫度控制模塊中的任意一個(gè)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分析裝置，其特征在于，具有控制部， 所述控制部在通過(guò)所述溫度修正部進(jìn)行的各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值的修正結(jié)束后，自動(dòng)測(cè)定溫度校正試樣的熔解溫度并對(duì)修正后的溫度控制模塊的溫度控制精度進(jìn)行畫面顯示。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分析裝置，其特征在于，具有控制部， 所述控制部重復(fù)實(shí)行下述處理: 在通過(guò)所述溫度修正部進(jìn)行的各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值的修正結(jié)束后，對(duì)于各溫度控制模塊自動(dòng)測(cè)定溫度校正試樣的熔解溫度的處理，和 基于測(cè)定結(jié)果對(duì)各溫度控制模塊的溫度絕對(duì)值進(jìn)行修正的處理。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的核酸分析裝置，其特征在于，所述控制部重復(fù)進(jìn)行所述修正的處理和所述測(cè)定的處理，直至全部溫度控制模塊的溫度控制精度在預(yù)先設(shè)定的溫度精度范圍內(nèi)。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的核酸分析裝置，其特征在于，對(duì)于即使重復(fù)預(yù)先設(shè)定的次數(shù)，溫度精度也不在預(yù)先設(shè)定的溫度精度范圍內(nèi)的溫度控制模塊，所述控制部畫面顯示表示溫度控制異常的警報(bào)。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸分析裝置，其特征在于，對(duì)于畫面顯示表示溫度控制異常的警報(bào)的溫度控制模塊，即使在通常動(dòng)作中所述控制部也持續(xù)進(jìn)行警報(bào)的顯示。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的核酸分析裝置，其特征在于，對(duì)于畫面顯示表示溫度控制異常的警報(bào)的溫度控制模塊，所述控制部將其從通常動(dòng)作的使用對(duì)象中排除在外。
15.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分析裝置，其特征在于，所述核酸分析裝置通過(guò)網(wǎng)絡(luò)途徑獲取所述溫度校正試樣的標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度，并在與其他核酸分析裝置之間共享所述標(biāo)準(zhǔn)熔解溫度。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK103635568SQ201280031142
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月24日
【發(fā)明者】前田耕史, 杉山千枝, 莊司義之, 石澤雅人, 佐野稔 申請(qǐng)人:株式會(huì)社日立高新技術(shù)