專利名稱：一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于固定化酶制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法。
背景技術(shù)：
蛋白酶是一種具有特殊催化功能的高效生物催化劑，因其具有高選擇性、催化反應(yīng)條件溫和、無污染等特點，該酶催化過程已經(jīng)在工業(yè)中獲得了較多的應(yīng)用。但由于游離酶對工業(yè)催化過程存在一定的障礙，限制了其在工業(yè)上更廣泛的應(yīng)用，主要存在以下問題:
(I)酶在脫離細胞內(nèi)的環(huán)境后，往往很難保持長期的穩(wěn)定性，容易失去活性，尤其在油相或油-水界面，更容易失去活性；(2)由于酶為水溶性，在水相中反應(yīng)時難以回收利用，造成使用成本偏高；為了解決游離蛋白酶的缺陷，人們發(fā)明了酶固定化技術(shù)，即酶的固定化是用固體材料將酶束縛或限制于一定區(qū)域內(nèi)，使之仍能進行其特有的催化反應(yīng)，并可回收及重復(fù)使用的一類技術(shù)。在本發(fā)明之前，依據(jù)酶的性質(zhì)及用途主要分為吸附法、共價結(jié)合法、包埋法和交聯(lián)法幾種。傳統(tǒng)酶固定化方法還存在著一定的缺陷性:(I)固定化蛋白酶的載體制備和固定化過程分開進行，造成固定化過程復(fù)雜，酶與載體的生物相容性較差；(2)采用吸附交聯(lián)法固定化的蛋白酶，其與載體之間的結(jié)合作用相對較弱，容易造成酶脫落，從而使得固定化酶的穩(wěn)定性差，使用壽命低；(3)采用共價結(jié)合法固定化的蛋白酶，其固定化反應(yīng)通常較劇烈，容易造成酶的失活，從而導(dǎo)致固定化酶的活力降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服上述缺陷，提供一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法。 本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其主要技術(shù)特征在于包括以下步驟:在固定化反應(yīng)器中加入聚苯胺單體和蒸餾水使得溶液濃度為0.01 0.2mol/L，用酸調(diào)節(jié)溶液pH為1.0 7.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，在-10°C 45°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在-10°C 45°C條件下恒溫的引發(fā)劑和助劑，引發(fā)劑與單體的摩爾濃度比為1: 0.3 1: 5，助劑和單體的摩爾濃度比為1:1 1: 10，同時加入游離蛋白酶，單體質(zhì)量與蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.01 1: 0.1 ;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于-10°C 45°C恒溫條件下反應(yīng)12 24h ;反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物真空干燥或冷凍干燥8 24h，得到固定化酶。用于固定化的蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、組織蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、鏈霉菌蛋白酶、氨基肽酶、膠原酶。上述的單體為苯胺及苯胺衍生物，即苯胺、鄰甲苯胺、間甲苯胺、對甲苯胺、鄰苯二胺、鄰氯苯胺、間氯苯胺、鄰甲氧基苯胺、鄰巰基苯胺中的一種。上述用于調(diào)節(jié)單體溶液pH值的酸為無機酸，即鹽酸、硫酸、硝酸、醋酸、磷酸中的一種。上述的引發(fā)劑為K2Cr2O7, (NH4)2S2O8' Ce(SO4)2' FeCl3' FeCl4' AlCl3' HAuCl4, KIO3'H2O2、MnO2 中的一種。上述的助劑為F127 (EO70PO100EO70)、丁基萘磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、二甲基二烯丙基氯化銨中的一種。上述的真空干燥溫度為10°C 45°C，真空度為O -0.1MPa0本發(fā)明的優(yōu)點和效果在于:制備載體的同時加入游離酶使得固定化過程簡單，條件溫和，時間縮短，生物相容性好，能耗降低；固定化酶的蛋白吸附量高，酶活力高；固定化的酶穩(wěn)定性好，使用壽命長。本發(fā)明方法制備固定化蛋白酶的工藝簡單，載體價廉易得，成本較低，有利于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式以下將通過具體的實施例進一步闡述本說明，但本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列的具體實施方式
。所述的蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、組織蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、鏈霉菌蛋白酶、氨基肽酶、膠原酶。所述的單體為苯胺及苯胺衍生物，即苯胺、鄰甲苯胺、間甲苯胺、對甲苯胺、鄰苯二胺、鄰氯苯胺、間氯苯胺、鄰甲氧基苯胺、鄰巰基苯胺中的一種。所述調(diào)節(jié)單體溶液pH值的酸為無機酸，包括鹽酸、硫酸、硝酸、醋酸、磷酸中的一種。所述的引發(fā)劑為K2Cr2O7, (NH4)2S2O8' Ce(SO4)2' FeCl3' FeCl4' AlCl3' HAuCl4, KIO3'H2O2、MnO2 中的一種。所述的助劑為F127即EO7ciPOiciciEO7c1、丁基萘磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、二甲基二烯丙基氯化銨中的一種。下面是具體實施例說明。實施例1:在固定化反應(yīng)器中加入苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.0lmol/L，加入硫酸調(diào)節(jié)溶液pH為3.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，在0°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在0°C條件下恒溫的引發(fā)劑K2Cr2O7、助劑EO70PO100EO70, K2Cr2O7與苯胺的摩爾濃度比為1: 0.5，EO7ciPOiciciEO7ci與苯胺的摩爾濃度比為1: 2，同時加入游離的木瓜蛋白酶，苯胺質(zhì)量與木瓜蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.05;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于(TC恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為18h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物冷凍干燥15h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 3.9倍。該過程載體制備與酶的固定化同時進行，操作簡單，耗時較短，生物相容性好，能耗較少，成本較低，有利于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。同 時，將該固定化酶重復(fù)使用多次后酶活沒有明顯降低。實施例2:
在固定化反應(yīng)器中加入鄰甲苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.05mol/L，加入鹽酸調(diào)節(jié)溶液PH為5.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，10°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在10°C條件下恒溫的引發(fā)劑(NH4)2S2O8，助劑丁基萘磺酸鈉，(NH4)2S2O8與鄰甲苯胺的摩爾濃度比為1: 1，丁基萘磺酸鈉和鄰甲苯胺的摩爾濃度比為1: 5，同時加入游離的菠蘿蛋白酶，鄰甲苯胺質(zhì)量與菠蘿蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.08 ;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于10°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為15h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在15°C、-0.05MPa條件下干燥18h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.2倍。該效果同實施例1。實施例3:在固定化反應(yīng)器中加入間甲苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.lmol/L，溶液pH為7.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，20°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在20°C條件下恒溫的引發(fā)劑Ce (SO4)2,助劑十二烷基苯磺酸鈉，Ce (SO4) 2與間甲苯胺的摩爾濃度比為1: 3，十二烷基苯磺酸鈉和間甲苯胺的摩爾濃度比為1: 8，同時加入游離的胃蛋白酶，間甲苯胺質(zhì)量與胃蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.1;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于20°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為12h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在30°C、_0.05MPa條件下干燥18h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 3.6倍。效果同實施例1。實施例4:在固定化反應(yīng)器中加入對甲苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.08mol/L，加入醋酸調(diào)節(jié)溶液PH為6.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，_5°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在_5°C條件下恒溫的引發(fā)劑FeCl3，助劑十六烷基三甲基溴化銨，F(xiàn)eCl3與對甲苯胺的摩爾濃度比為1: 0.8，十六烷基三甲基溴化銨和對甲苯胺的摩爾濃度比為I: 3，同時加入游離的胰凝乳蛋白酶，對甲苯胺質(zhì)量與胰凝乳蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.04;然后攪拌使整個體系 混合均勻，放置于_5°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為20h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物冷凍干燥8h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 3.8倍。效果同實施例1。實施例5:在固定化反應(yīng)器中加入鄰苯二胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.12mol/L，加入磷酸調(diào)節(jié)溶液PH為1.0;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，15°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在15°C條件下恒溫的引發(fā)劑FeCl4，助劑二甲基二烯丙基氯化銨，F(xiàn)eCl4與鄰苯二胺的摩爾濃度比為1: 1.5，二甲基二烯丙基氯化銨和鄰苯二胺的摩爾濃度比為1: 6，同時加入游離的胰蛋白酶，鄰苯二胺質(zhì)量與胰蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.01;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于15°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為16h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在20°C、_0.08MPa條件下干燥10h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.0倍。效果同實施例I。實施例6:在固定化反應(yīng)器中加入鄰氯苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.2mol/L，加入硝酸調(diào)節(jié)溶液PH為2.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，30°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在30°C條件下恒溫的引發(fā)劑AlCl3、助劑十二烷基苯磺酸鈉，AlCl3與鄰氯苯胺的摩爾濃度比為1: 4，十二烷基苯磺酸鈉和鄰氯苯胺的摩爾濃度比為1: 10，同時加入游離的糜蛋白酶，鄰氯苯胺質(zhì)量與糜蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.06 ;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于30°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為24h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在10°C、-0.1MPa條件下干燥12h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.0倍。效果同實施例1。實施例7:在固定化反應(yīng)器中加入間氯苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.18mol/L，溶液pH為7.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，45°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在45°C條件下恒溫的引發(fā)劑HAuCl4、助劑丁基萘磺酸鈉，HAuCl4與間氯苯胺的摩爾濃度比為1: 5，丁基萘磺酸鈉和間氯苯胺的摩爾濃度比為1: 9，同時加入游離的羧肽酶，間氯苯胺質(zhì)量與羧肽酶質(zhì)量比為1: 0.02;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于45°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為17h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在35°C、_0.04MPa條件下干燥14h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.3倍。效果同實施例1。實施例8:在固定化反應(yīng)器中加入鄰甲氧基苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.06mol/L，加入鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH為4.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，-10°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在-10°C條件下恒溫的引發(fā)劑KIO3，助劑十二烷基苯磺酸鈉，KIO3與鄰甲氧基苯胺的摩爾濃度比為1: 1，十二烷基苯磺酸鈉和鄰甲氧基苯胺的摩爾濃度比為I: 7，同時加入游離的組織蛋白酶，鄰甲氧基苯胺質(zhì)量與組織蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.08;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于-10°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為20h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物冷凍干燥16h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 3.5倍。效果同實施例1。實施例9:在固定化反應(yīng)器中加入鄰巰基苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.16mol/L，加入硫酸調(diào)節(jié)溶液PH為3.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，35°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在35°C條件下恒溫的引發(fā)劑H2O2，助劑十六烷基三甲基溴化銨，H2O2與鄰巰基苯胺的摩爾濃度比為1: 0.3，十六烷基三甲基溴化銨和鄰巰基苯胺的摩爾濃度比為1: 4，同時加入游離的枯草桿菌蛋白酶，鄰巰基苯胺質(zhì)量與枯草桿菌蛋白酶質(zhì)量比為I: 0.05;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于35°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為15h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物冷凍干燥15h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.5倍。效果同實施例1。實施例10:在固定化反應(yīng)器中加入苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.08mol/L，加入鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH為2.0 ;充分攪拌至溶液充分 混合均勻后，40°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在40°C條件下恒溫的引發(fā)劑MnO2，助劑二甲基二烯丙基氯化銨，MnO2與苯胺的摩爾濃度比為1: 4.5，二甲基二烯丙基氯化銨和苯胺的摩爾濃度比為1: 1，同時加入游離的鏈霉菌蛋白酶，苯胺質(zhì)量與鏈霉菌蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.01 ;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于40°C恒溫條件下反應(yīng)；應(yīng)時間為12h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在40°C、-0.02MPa條件下干燥20h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 3.9倍。效果同實施例1。

實施例11:在固定化反應(yīng)器中加入鄰甲苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.03mol/L,溶液pH為
7.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，45°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在45°C條件下恒溫的引發(fā)劑FeCl3、助劑E07(lP01(l(lE07(l，F(xiàn)eCl3與鄰甲苯胺的摩爾濃度比為I: 0.5，E07(iP01(i(iE07(i和鄰甲苯胺的摩爾濃度比為1: 6，同時加入游離的氨基肽酶，鄰甲苯胺質(zhì)量與氨基肽酶質(zhì)量比為1: 0.03;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于45°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為14h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物放置于真空干燥箱中在45°C、_0.0lMPa條件下干燥17h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.2倍。效果同實施例1。實施例12:在固定化反應(yīng)器中加入鄰氯苯胺和蒸餾水使得溶液濃度為0.15mol/L，加入硝酸調(diào)節(jié)溶液PH為1.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，20°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在20°C條件下恒溫的引發(fā)劑HAuCl4、助劑十二烷基苯磺酸鈉，HAuCl4與鄰氯苯胺的摩爾濃度比為1: 3.5，十二烷基苯磺酸鈉和鄰氯苯胺的摩爾濃度比為1: 7，同時加入游離的膠原酶，鄰氯苯胺質(zhì)量與膠原酶質(zhì)量比為1: 0.06;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于20°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)時間為17h，反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物冷凍干燥24h，所得的固定化酶酶活比游離酶提高了 4.6倍。效果同實施例1。
權(quán)利要求
1.一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟:在固定化反應(yīng)器中加入聚苯胺單體和蒸餾水使得溶液濃度為0.0l 0.2mol/L，用酸調(diào)節(jié)溶液pH為1.0 7.0 ;充分攪拌至溶液充分混合均勻后，在-10°C 45°C條件下恒溫靜置；再向固定化反應(yīng)器中加入事先在-10°C 45°C條件下恒溫的引發(fā)劑和助劑，引發(fā)劑與單體的摩爾濃度比為1: 0.3 1: 5，助劑和單體的摩爾濃度比為1:1 1: 10，同時加入游離蛋白酶，單體質(zhì)量與蛋白酶質(zhì)量比為1: 0.01 1: 0.1;然后攪拌使整個體系混合均勻，放置于-10°C 45°C恒溫條件下反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后，分別用蒸餾水、無水乙醇過濾洗滌多次至濾液無色，然后將產(chǎn)物真空干燥或冷凍干燥，得到固定化酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于所述的蛋白酶包括木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、組織蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、鏈霉菌蛋白酶、氨基肽酶、膠原酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于所述的單體為苯胺及苯胺衍生物，即苯胺、鄰甲苯胺、間甲苯胺、對甲苯胺、鄰苯二胺、鄰氯苯胺、間氯苯胺、鄰甲氧基苯胺、鄰巰基苯胺中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于調(diào)節(jié)單體溶液pH值的酸為無機酸，即鹽酸、硫酸、硝酸、醋酸、磷酸中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于所述的引發(fā)劑為 K2Cr2O7, (NH4)2S2O8' Ce (SO4) 2、FeCl3' FeCl4' AlCl3' HAuCl4, K103、H2O2' MnO2中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于所述的助劑為F127、丁基萘磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、二甲基二烯丙基氯化銨中的一種。
7.根據(jù)權(quán) 利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于真空干燥溫度為10°c 45°C，真空度為O -0.1MPa0
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于單體質(zhì)量與蛋白酶在-10°C 45°C恒溫條件下反應(yīng)的時間為12 24h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法，其特征在于將產(chǎn)物真空干燥或冷凍干燥8 24h，得到固定化酶。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是在制備聚苯胺載體同時加入蛋白酶進行吸附的反應(yīng)-吸附耦聯(lián)固定化蛋白酶方法，本發(fā)明為以苯胺及苯胺衍生物為單體，加入引發(fā)劑和助劑，同時加入需固定化的游離蛋白酶，放置于恒溫條件下反應(yīng)，過濾洗滌得到以聚苯胺為載體的固定化蛋白酶。本發(fā)明克服了現(xiàn)有傳統(tǒng)酶固定化方法存在的固定化過程復(fù)雜，酶與載體的生物相容性較差，其與載體之間的結(jié)合作用相對較弱，固定化酶的穩(wěn)定性差，使用壽命低，其固定化反應(yīng)通常較劇烈，容易造成酶的失活，活力降低等缺陷。本發(fā)明具有固定化過程簡單，條件溫和，效率高，固定化酶的蛋白吸附量高，酶活力好，使用壽命長。
文檔編號C12N11/08GK103103178SQ20131005067
公開日2013年5月15日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月6日
發(fā)明者熊健, 黃亞娟, 侯麗云, 張華 申請人:揚州大學(xué)