一種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片。同時(shí)，本發(fā)明還公開(kāi)了上述生物芯片的使用方法以及生物芯片檢測(cè)樣品的制備方法。本發(fā)明可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因位點(diǎn)，比傳統(tǒng)單一檢測(cè)K-RAS突變芯片性能優(yōu)異，更能準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)療效。愛(ài)必妥對(duì)大腸癌治療的緩解率可從36%提高至41%，疾病控制率從76%提高至82%；同時(shí)本發(fā)明使用免疫微陣列檢測(cè)具有耗時(shí)短、靈敏度高、準(zhǔn)確率高、高通量及單個(gè)成本低的優(yōu)勢(shì)。
【專利說(shuō)明】—種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片以及該生物芯片的使用方法和檢測(cè)樣品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前主要通過(guò)KRAS基因分型來(lái)輔助大腸癌靶向治療。KRAS基因分型可以顯著提高在標(biāo)準(zhǔn)一線化療基礎(chǔ)上加用愛(ài)必妥對(duì)大腸癌治療的緩解率，而且患者的總生存期也明顯得到延長(zhǎng)。但是，研究表明即使通過(guò)KRAS基因分型獲得的KRAS野生型的患者中，仍然有64%以上的患者得不到有效緩解。其缺點(diǎn)主要有:1、單一 KRAS分型對(duì)指導(dǎo)大腸癌靶向治療準(zhǔn)確性低；2、通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)普通基因型分析存在比較耗時(shí)、靈敏度低、準(zhǔn)確率有限、同時(shí)在有限樣品的情況下，檢測(cè)DNA突變位點(diǎn)數(shù)目有限、成本高的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片。
[0004]本發(fā)明的另一目的在于提供上述生物芯片的使用方法。[0005]本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供上述生物芯片檢測(cè)樣品的制備方法。
[0006]技術(shù)方案:為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明具體是這樣來(lái)實(shí)施的:一種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片，檢測(cè)的突變位點(diǎn)包括:KRASc.(34G>T ；34G>A ；34G>C ；35G>T ；35G>C ；35G>A ；38G>A ；38G>C ；38G>T ；175G>A ；181C>A ；181C>G ；181C>T ；182A>T ；182A>G ；182A>C ；183A>C ；183A>T ；436G>A) ；BRAFc.(1799T>A ；1801A>G ；1742A>G ；1397G>T ；1406G>T ；1397G>A ；1405G>A) ；NRASc.(34G>T ；34G>A；34G>C ；35G>A ；37G>C ；37G>A ；37G>T；181C>A；181C>G；182A>G ；182A>C ；182A>T ；183A>C ；183A>T) ；PIK3CAc.(3012G> ；3019G>C;3139C>T ；3140A>G ；3140A>T ；3145G>A ;3145G>C)。
[0007]其中，所述芯片同時(shí)檢測(cè)48種基因位點(diǎn)。
[0008]上述生物芯片的使用方法，包括以下步驟:
[0009](I)樣品DNA的活化；
[0010](2)探針與活化DNA的雜交；
[0011](3)位點(diǎn)特異性地延伸及連接反應(yīng)；
[0012](4) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)；
[0013](5) PCR產(chǎn)物與偶聯(lián)檢測(cè)探針的微珠反應(yīng)；
[0014](6)發(fā)光檢測(cè)。
[0015]上述生物芯片檢測(cè)樣品的制備方法，包括以下步驟:
[0016](I)取結(jié)腸癌病人的腫瘤組織；
[0017](2)提取結(jié)腸癌病人的腫瘤組織的DNA ；
[0018](3)利用權(quán)利要求1所述的生物芯片檢測(cè)DNA突變；[0019](4)利用生物統(tǒng)計(jì)軟件編制的程序進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
[0020]其中，所述生物統(tǒng)計(jì)軟件編制的程序?yàn)镾AS生物統(tǒng)計(jì)軟件編制的程序生存分析和COX回歸方法分析，kaplan-meier方法分析大腸癌患者的無(wú)進(jìn)展生存期及中位存活期。
[0021]有益效果:與傳統(tǒng)技術(shù)相比，本發(fā)明可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因位點(diǎn)，比傳統(tǒng)單一檢測(cè)K-RAS突變芯片性能優(yōu)異，更能準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)療效。愛(ài)必妥對(duì)大腸癌治療的緩解率可從36%提高至41%，疾病控制率從76%提高至82% ;同時(shí)本發(fā)明使用免疫微陣列檢測(cè)具有耗時(shí)短、靈敏度高、準(zhǔn)確率高、高通量及單個(gè)成本低的優(yōu)勢(shì)。
【具體實(shí)施方式】
[0022]實(shí)施例1:比較不同分型方法對(duì)在標(biāo)準(zhǔn)一線化療基礎(chǔ)上加用愛(ài)必妥對(duì)大腸癌治療的緩解率。與單一 KRAS分型相比較，本發(fā)明多位點(diǎn)分型可提高愛(ài)必妥對(duì)大腸癌個(gè)體化治療的緩解率。
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片，其特征在于，檢測(cè)的突變位點(diǎn)包括:KRASc.(34G>T ；34G>A ；34G>C ；35G>T ；35G>C ；35G>A ；38G>A ；38G>C ；38G>T ；175G>A ；181C>A ；181C>G ；181C>T ；182A>T ；182A>G ；182A>C ；183A>C ；183A>T ；436G>A) ；BRAFc.(1799T>A ；1801A>G ；1742A>G ；1397G>T ； 1406G>T ；1397G>A ； 1405G>A) ；NRASc.(34G>T ；34G>A ；34G>C ；35G>A ；37G>C ；37G>A ；37G>T ；181C>A ；181C>G ；182A>G ；182A>C ；182A>T ；183A>C；183A>T) ；PIK3CAc.(3012G> ；3019G>C;3139C>T；3140A>G ；3140A>T ；3145G>A ；3145G>C)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片，其特征在于，芯片同時(shí)檢測(cè)48種基因位點(diǎn)。
3.權(quán)利要求1或2所述用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片的使用方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)樣品DNA的活化； (2)探針與活化DNA的雜交； (3)位點(diǎn)特異性地延伸及連接反應(yīng)； (4)PCR擴(kuò)增反應(yīng)； (5)PCR產(chǎn)物與偶聯(lián)檢測(cè)探針的微珠反應(yīng)； (6)發(fā)光檢測(cè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述用于輔助大腸癌靶向治療的生物芯片檢測(cè)樣品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取結(jié)腸癌病人的腫瘤組織； (2)提取結(jié)腸癌病人的腫瘤組織的DNA； (3)利用權(quán)利要求1所述的生物芯片檢測(cè)DNA突變； (4)利用生物統(tǒng)計(jì)軟件編制的程序進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)樣品的制備方法，其特征在于，所述生物統(tǒng)計(jì)軟件編制的程序?yàn)镾AS生物統(tǒng)計(jì)軟件編制的程序生存分析和COX回歸方法分析，kaplan-meier方法分析大腸癌患者的無(wú)進(jìn)展生存期及中位存活期。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103695535SQ201310558245
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月12日
【發(fā)明者】吳興新 申請(qǐng)人:吳興新