一種屎腸球菌菌粉的制備與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種屎腸球菌菌粉的制備與應(yīng)用，提供了一株篩選自豬場周邊土壤的菌株，其分類命名屬于腸球菌屬、屎腸球菌種。經(jīng)噴霧干燥制成菌粉，可作為豬飼料添加劑使用。其中屎腸球菌已于2013年10月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏代號：CGMCCNo.8296，菌株代碼BBH201305001。該菌粉的生產(chǎn)工藝簡單，成本低，可調(diào)整豬腸道菌群，提高機體的免疫細(xì)胞水平，加固腸道屏障功能，加強機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，促進(jìn)畜禽高效增重。
【專利說明】—種屎腸球菌菌粉的制備與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于飼料添加劑加工領(lǐng)域，具體涉及了一種屎腸球菌菌粉的制備與應(yīng)用?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]屎腸球菌被認(rèn)為是一種可在飼料中添加的腸道益生菌。大量研究表明，益生菌的應(yīng)用是建立和維持動物腸道菌群平衡的最有效方式。在現(xiàn)代養(yǎng)殖條件下，盡早建立和維持動物腸道的菌群平衡是提高養(yǎng)殖動物生長機能和抗病力的可行途徑。在飼料中添加益生菌等微生態(tài)飼料添加劑，一方面，益生菌進(jìn)入消化道后，大量繁殖，并與消化道有益菌形成強有力的優(yōu)勢菌群，抑制其它外來微生物在胃腸道內(nèi)的定植或增殖，從而維持腸道菌體平衡。另一方面，益生菌通過產(chǎn)生細(xì)菌素、過氧化氫、乳酸乃至有廣譜抗菌作用的物質(zhì)，能夠抑制或殺滅其它有害微生物。同時，通過提高巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的活性、促進(jìn)免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，益生菌可以提高機體的免疫細(xì)胞水平。此外，益生菌能產(chǎn)生多種營養(yǎng)物質(zhì)和消化酶，或刺激腺體對消化酶的分泌，從而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化。更為重要的是采用益生菌添加劑能夠加固腸道屏障功能，增加腸絨毛長度和隱窩深度，進(jìn)一步加強機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高生長效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種屎腸球菌菌粉的制備與應(yīng)用，該菌粉可調(diào)整豬腸道菌群，促進(jìn)畜禽高效增重，且生產(chǎn)工藝簡單，成本低。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種屎腸球菌，所述的屎腸球菌為屎腸球菌(Enterococcus faecium) BBH201305001,已于2013年10月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，其地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，菌種保藏代號=CGMCCN0.8296。
[0005]一種屎腸球菌的菌粉制備方法，其包括以下步驟:
a.將屎腸球菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基，在25~40°C有氧或兼性條件下培養(yǎng)8~16小時，成為種子液；
b.將步驟a所獲得的種子液接種在發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，采用改良的MRS液體培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基，在25~40°C厭氧條件下，采用定時或連續(xù)補料分批發(fā)酵方式培養(yǎng)8~48小時；
c.將b步驟所獲得的發(fā)酵液加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~40%的干燥保護(hù)劑和卵黃粉，添加方式為:發(fā)酵液1000ml中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%~Ο.5%的吐溫60，然后緩緩加入干燥保護(hù)劑，邊加邊攪拌，直至混勻；然后在混合勻漿中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5~15%的卵黃粉，邊加邊攪拌，直至混勻制成菌液混合物，繼續(xù)攪勻后進(jìn)行噴霧干燥制成菌粉。
[0006]所述的干燥保護(hù)劑中各組分的質(zhì)量比為:阿拉伯膠:β_糊精:鹿糖:淀粉=1~10:5~30:1~4:2~10。[0007]改良MRS液體培養(yǎng)基是在每升MRS培養(yǎng)基中加有麥芽糖5~10g，蛋白胨l(Tl5g，牛肉膏8~10g，酵母膏5~10g，葡萄糖l(T20.0g，磷酸氫二鉀I~5g，乙酸鈉I~10g，硫酸鎂0.2~lg，硫酸錳0.001~0.2g，檸檬酸三胺2~5g，吐溫80 lg，純凈水I升，調(diào)節(jié)pH值
5.5 ~8.0。
[0008]所述的噴霧干燥工藝指標(biāo):進(jìn)口溫度控制在155_165°C之間，出口溫度控制在50-70°C之間，風(fēng)壓指數(shù)控制在25-30 Mpa之間，噴霧頭變頻為400Hz。
[0009]將噴霧干燥后的菌粉用生理鹽水按比例稀釋后計數(shù)，顯示噴霧干燥后屎腸球菌菌粉中活菌數(shù)為400-600億/g。
[0010]一種屎腸球菌的菌粉可作為飼料添加劑使用。
[0011]菌株的篩選與鑒定:
從豬場附近土壤取樣，接種到MRS固體培養(yǎng)基平板上，于37°C厭氧環(huán)境中培養(yǎng)24h，挑取平板上的單菌落接種到MRS固體培養(yǎng)基斜面上進(jìn)行2次純化培養(yǎng)得到純化菌落。該菌落在MRS培養(yǎng)基上生長良好，是兼性厭氧菌。菌落成乳白色圓形，表面較光滑，菌落直徑約
0.8~2_。革蘭氏染色陽性，鏡檢發(fā)現(xiàn)，菌體呈球形，成單或成串存在，無芽孢。菌株送交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，經(jīng)生理生化鑒定及16S rDNA序列分析鑒定，確定其屬于腸球菌屬、屎腸球菌種(Enterococcus faecal is),命名為屎腸球菌(Enterococcus faecalis) BBH201305001。
[0012]表1細(xì)胞形態(tài)及理化實驗結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種屎腸球菌，其特征在于:所述的屎腸球菌為屎腸球菌BBH201305001，已于2013年10月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏代號:CGMCC N0.8296。
2.一種如權(quán)利要求1所述的一種屎腸球菌的菌粉制備方法，其特征在于:其包括以下步驟: a.將屎腸球菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基，在25~40°C有氧或兼性條件下培養(yǎng)8~16小時，成為種子液； b.將步驟a所獲得的種子液接種在發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，采用改良的MRS液體培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基，在25~40°C厭氧條件下，采用定時或連續(xù)補料分批發(fā)酵方式培養(yǎng)8~48小時； c.將b步驟所獲得的發(fā)酵液加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%~40%的干燥保護(hù)劑和卵黃粉，添加方式為:發(fā)酵液1000ml中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%~0.5%的吐溫60，然后緩緩加入干燥保護(hù)劑，邊加邊攪拌，直至混勻；然后在混合勻漿中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5~15%的卵黃粉，邊加邊攪拌，直至混勻制成菌液混合物，繼續(xù)攪勻后進(jìn)行噴霧干燥制成菌粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種屎腸球菌的菌粉制備方法，其特征在于:所述的干燥保護(hù)劑中各組分的質(zhì)量比為:阿拉伯膠:β_糊精:蔗糖:淀粉=1-10:5^30:1-4:2~10。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種屎腸球菌的菌粉制備方法，其特征在于:改良MRS液體培養(yǎng)基是在每升MRS培養(yǎng)基中加有麥芽糖5~10g，蛋白胨l0-l5g，牛肉膏8~10g，酵母膏5~10g，葡萄糖l0-20.0g，磷酸氫二鉀I~5g，乙酸鈉1~10g，硫酸鎂0.2~lg，硫酸錳.0.001~0.2g，檸檬酸三胺2~5g，吐溫80 lg，純凈水1升，調(diào)節(jié)pH值5.5~8.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種屎腸球菌的菌粉制備方法，其特征在于:所述的噴霧干燥工藝指標(biāo):進(jìn)口溫度控制在155-165°C之間，出口溫度控制在50-70°C之間，風(fēng)壓指數(shù)控制在25-30 Mpa之間，噴霧頭變頻為400Hz。
6.一種如權(quán)利要求1所述的一種屎腸球菌的菌粉可作為飼料添加劑使用。
【文檔編號】C12N1/20GK103820363SQ201410039346
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月27日
【發(fā)明者】宋鐵英, 陳曦, 李素一, 林晨韜, 陳敘 申請人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所