一種國酒香咖啡及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種國酒香咖啡，所述的國酒香咖啡由1-99.99重量份咖啡、0.01-30重量份茅臺(tái)酒致香微生物或產(chǎn)醬香功能菌組成。本發(fā)明提供了一種國酒香咖啡的制備方法，采用本發(fā)明方法得到咖啡成既具有醇厚酒香又包含咖啡中的咖啡因等生理活性物質(zhì)的國酒香咖啡，該咖啡滿足現(xiàn)代人對健康的追求，可以在飲咖啡的同時(shí)也滿足對酒香的需要。
【專利說明】一種國酒香咖啡及其制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種國酒香咖啡及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]咖啡氣味香濃，味苦醇和，具有醒腦提神，健胃養(yǎng)顏的功效，飲后回味悠長，咖啡在我國漸受人們歡迎，特別是受到年青人的喜愛，消費(fèi)量日趨上升。酒有悠久的歷史，具有溫脾胃、通血脈、榮養(yǎng)肌膚的作用，適量飲酒可興奮精神，活躍氣氛，但飲酒過量會(huì)損壞身體，對肝臟尤其不利。將咖啡香、酒香融于一體，功效互補(bǔ)，是一種高雅享受的保健飲料。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的是利用發(fā)酵技術(shù)提供一種國酒香咖啡及其制造方法。在本發(fā)明的工藝條件下，制成既具有醇厚酒香又包含咖啡中的咖啡因等生理活性物質(zhì)的國酒香咖啡。該咖啡滿足現(xiàn)代人對健康的追求，可以在飲咖啡的同時(shí)也滿足對酒香的需要。
[0004]本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0005]一種國酒香咖啡，其特征在于由1-99.99重量份咖啡、0.01-30重量份茅臺(tái)酒致香微生物或產(chǎn)醬香功能菌組成。
[0006]所述的咖啡為咖啡豆、咖啡豆顆粒、咖啡粉、速溶咖啡粉中的一種或幾種。
[0007]所述的茅臺(tái)酒致香微生物為從茅臺(tái)酒生產(chǎn)用大曲中分離純化得到的曲霉菌、白毛霉菌、根霉菌、梨頭霉菌、假酵母、擬內(nèi)胞霉、漢遜酵母、乳酸菌、醋酸菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、嗜熱芽孢桿菌、臘狀芽孢`桿菌、短小芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌中的一種或幾種組成。
[0008]所述茅臺(tái)酒致香微生物由以下方法制備:
[0009]取1-10重量份茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的90-99重量份無菌水或無菌生理鹽水中，在10-70°C、10-200rpm搖床上振蕩1_10小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于10-70°C培養(yǎng)1-90小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，10_70°C培養(yǎng)1-90小時(shí)，得到的產(chǎn)香優(yōu)勢菌株即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0010]所篩選的茅臺(tái)酒致香微生物為芽孢桿菌、芽孢梭菌、假單孢菌、曲霉菌、青霉菌、酵母菌，菌種可為菌曲或菌液形式；
[0011]所述分離培養(yǎng)基為咖啡0-300g/L、葡萄糖l_200g/L、胰化蛋白胨l_50g/L、酵母提取物l_50g/L、氯化鈉0-50g/L、瓊脂l-50g/L，pH4_8，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0012]一種國酒香咖啡的制備方法:
[0013]步驟1:取茅臺(tái)酒致香微生物接種于準(zhǔn)備好的斜面培養(yǎng)基上，放置于10_70°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)l_90h使菌種活化，再將活化的菌種接種于添加糖源的LB液體培養(yǎng)基中，于10-70°C恒溫培養(yǎng)l_90h，將培養(yǎng)液離心棄除上清液，沉淀菌體用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即為得到的活化種子液；所述的斜面培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨、PDA培養(yǎng)基或基本培養(yǎng)基;
[0014]步驟2:將咖啡粉碎勻漿后放入20_80°C的復(fù)合蛋白酶和/或風(fēng)味蛋白酶的混合液中浸泡l_90h，與水按質(zhì)量比1: 0.1-30回流提取1-8小時(shí)后過濾，在115°C滅菌IOOmin;在上述混合液中加入占上述混合液重量0.1-10%的糖源、0.1-10%的無機(jī)鹽、0-10%的復(fù)合氨基酸和/或維生素C，即得咖啡液體培養(yǎng)基；
[0015]步驟3:將茅臺(tái)酒致香微生物的濕菌體、粉劑或凍干粉重懸后，按照1-20%的接種量接入步驟2所得的咖啡液體培養(yǎng)基中在溫度10-60°C下發(fā)酵1-20天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵1-10天，發(fā)酵結(jié)束后在55-120°C保溫0.l-50h ;將發(fā)酵好的咖啡發(fā)酵液，菌種滅活后板框?yàn)V膜過濾，再減壓濃縮或冷凍干燥濃縮成膏狀，按照O: 1-10的質(zhì)量比將膏狀物與萃取溶劑相混合，使膏狀物充分的溶解，再過濾后將濾液減壓濃縮至除去溶劑后，得到發(fā)酵咖啡浸膏；將發(fā)酵咖啡浸膏于10-200°C烘焙l_50min，冷卻后裝入密閉的橡木桶中貯存1-90天得到國酒香咖啡；所述的提取液、萃取溶劑為水或乙醇，或兩者的復(fù)合溶液。
[0016]一種國酒香咖啡的制備方法:
[0017]步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮、表皮土壤，土壤中菌絲及塊菌與宿主的外生菌根各5-10重量份，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩10-60min,從中取100-1000 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在有氧或厭氧條件下用平板劃線分離或稀釋涂平板法純化后獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α-雄烷醇的菌株；篩選培養(yǎng)基為:葡萄糖或蔗糖5_300g/L、蛋白胨l-100g/L、酵母膏0.l_20g/L、磷酸二氫鉀0.Ι-lOg/L、硫酸鎂0.01-10g/L、橡樹葉或橡樹疏松愈傷組織塊l_200g/L、瓊脂10-30g/L，pH值4_9，去掉瓊脂即為液體篩選培養(yǎng)基；
[0018]步驟2:將塊菌產(chǎn)香菌活化后接入液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在15-40°C，攪拌轉(zhuǎn)速為10-800rpm條件下培養(yǎng)1_30天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入纖維素酶、蛋白酶、β -葡萄糖苷酶的一種或幾種，在10-85°C條件下酶解l-150min并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；所述的塊菌產(chǎn)香菌 為塊菌子囊果組織分離的菌種、塊菌孢子、塊菌內(nèi)生菌、塊菌共生菌、塊菌伴生菌的一種或幾種；
[0019]步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入20-80 °C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡l_90h，然后與塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌重懸混合液或冠突散囊菌重懸液于20-70°C發(fā)酵l_120h，發(fā)酵后在115°C下滅菌10_20min ;在上述發(fā)酵液中加入占上述混合液0.1^-10%的糖源、0.1 %-10%的無機(jī)鹽、0.1 %-10%的復(fù)合氨基酸和/或維生素C，即得咖啡培養(yǎng)基；
[0020]步驟4:將茅臺(tái)酒致香微生物的濕菌體、粉劑或凍干粉重懸后，按照1-20%的接種量接入步驟3所得的咖啡培養(yǎng)基中在溫度10-60°C下發(fā)酵1-20天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵1-10天，發(fā)酵結(jié)束后在55-120°C保溫0.l-50h ;在3000-8000rpm離心l_20min，將上清液通過溶劑提取并濃縮獲得提取液A，濾渣通過溶劑提取并濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入乳化劑和包埋材料，均質(zhì)后噴霧干燥或冷凍干燥制得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂水溶包衣或緩釋包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；所述乳化劑為單甘酯、蔗糖酯、磷脂、淀粉酯的一種或幾種；所述包埋材料為變性淀粉、麥芽糊精、蔗糖、殼聚糖、阿拉伯膠、環(huán)糊精、卡拉膠、海藻酸鹽、明膠、大豆蛋白、乳清蛋白、水解蛋白的一種或幾種；所述的溶劑提取方式為室溫下靜置浸泡萃取、機(jī)械振蕩萃取、超聲萃取、加熱回流萃取、微波加熱萃取、蒸餾萃取、同時(shí)蒸餾萃取、索氏提取或超臨界流體萃取中的一種；溶劑為水、乙醇、丙二醇、甘油、乙醚、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、二氯甲烷、氯仿、環(huán)己烷、二氧化碳中的任意一種或幾種；所述的濃縮過程為常壓下蒸餾濃縮、氮吹濃縮或減壓濃縮中的一種；
[0021]步驟5:將步驟4所得的茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉一起造?；蚧靹蚋稍锖蟪脽嵫b入橡木桶中平衡1-90天后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
[0022]所述步驟I中對菌株進(jìn)行紫外線一氯化鋰復(fù)合誘變以利于α -雄烷醇含量的提聞。
[0023]所述的無機(jī)鹽是KH2PO4、(ΝΗ4) 2S04、MgSO4,或 NaCl。
[0024]所述的糖源為蔗糖、葡萄糖、木糖、果糖中的一種或多種的混合物。
[0025]制備實(shí)施例
[0026]實(shí)施例1
[0027]一種國酒香咖啡，由0.1g曲霉菌、IOg咖啡豆組成。
[0028]曲霉菌的制備方法:
[0029]取Ig茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的99g無菌水中，在10°C、IOrpm搖床上振蕩I小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于10°C培養(yǎng)I小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，10°C培養(yǎng)I小時(shí)，得到曲霉菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0030]所述分離培養(yǎng)基為葡萄糖lg/L、胰化蛋白胨lg/L、酵母提取物lg/L、瓊脂lg/L，pH4，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0031]國酒香咖啡的制備方法
[0032]步驟1:取曲霉菌接種于準(zhǔn)備好的牛肉膏蛋白胨上，放置于10°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Ih使菌種活化,再將活化的菌種接種于添加木糖的LB液體培養(yǎng)基中，于10°C恒溫培養(yǎng)lh，將培養(yǎng)液離心棄除上清液，沉淀菌體用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即為得到的活化種子液；
[0033]步驟2:將咖啡粉碎勻漿后放入20°C的復(fù)合蛋白酶中浸泡lh，與水按質(zhì)量比I: 0.1回流提取I小時(shí)后過濾，在115°C滅菌IOOmin ;在上述混合液中加入占上述混合液重量0.1 %蔗糖、0.1% KH2PO4,即得咖啡液體培養(yǎng)基；
[0034]步驟3:將曲霉菌濕菌體重懸后，按照1%的接種量接入步驟2所得的咖啡液體培養(yǎng)基中在溫度10°c下發(fā)酵I天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵I天，發(fā)酵結(jié)束后在55°C保溫0.1h ;將發(fā)酵好的咖啡發(fā)酵液，菌種滅活后板框?yàn)V膜過濾，再減壓濃縮成膏狀，按照I: I的質(zhì)量比將膏狀物與水相混合，使膏狀物充分的溶解，再過濾后將濾液減壓濃縮至除去溶劑后，得到發(fā)酵咖啡浸膏；將發(fā)酵咖啡浸膏于10°c烘焙lmin，冷卻后裝入密閉的橡木桶中貯存I天得到國酒香咖啡。
[0035]實(shí)施例2
[0036]一種國酒香咖啡，由0.0lg地衣芽孢桿菌、IOg咖啡粉組成。
[0037]地衣芽孢桿菌由以下方法制備:
[0038]取IOg茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的90g無菌生理鹽水中，在70°C、200rpm搖床上振蕩10小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于70°C培養(yǎng)90小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，70°C培養(yǎng)90小時(shí)，得到地衣芽孢桿菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0039]所述分離培養(yǎng)基為咖啡300g/L、葡萄糖200g/L、胰化蛋白胨50g/L、酵母提取物50g/L、氯化鈉50g/L、瓊脂50g/L，pH8，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0040]國酒香咖啡制備方法
[0041]步驟1:取地衣芽孢桿菌接種于準(zhǔn)備好的PDA培養(yǎng)基上，放置于70°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)90h使菌種活化，再將活化的菌種接種于添加蔗糖的LB液體培養(yǎng)基中，于70°C恒溫培養(yǎng)90h，將培養(yǎng)液離心棄除上清液，沉淀菌體用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即為得到的活化種子液；
[0042]步驟2:將咖啡粉碎勻漿后放入80°C的復(fù)合蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的混合液中浸泡90h，與水按質(zhì)量比1: 30回流提取8小時(shí)后過濾，在115°C滅菌IOOmin ;在上述混合液中加入占上述混合液重量10%的葡萄糖、10% NaCl、10%的復(fù)合氨基酸，即得咖啡液體培養(yǎng)基；
[0043]步驟3:將地衣芽孢桿菌粉劑重懸后，按照20%的接種量接入步驟2所得的咖啡液體培養(yǎng)基中在溫度60°C下發(fā)酵20天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵10天，發(fā)酵結(jié)束后在120°C保溫50h ;將發(fā)酵好的咖啡發(fā)酵液，菌種滅活后板框?yàn)V膜過濾，再冷凍干燥濃縮成膏狀，按照1: 10的質(zhì)量比將膏狀物與乙醇相混合，使膏狀物充分的溶解，再過濾后將濾液減壓濃縮至除去溶劑后，得到發(fā)酵咖啡浸膏；將發(fā)酵咖啡浸膏于200°C烘焙50min，冷卻后裝入密閉的橡木桶中貯存90天得到國酒香咖啡。
[0044]實(shí)施例3
[0045]一種國酒香咖啡，由Ig枯草芽孢桿菌、20g咖啡組成。
[0046]枯草芽孢桿菌的制備方法:
[0047]取5g茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的30g無菌水中，在30°C、IOOrpm搖床上振蕩4小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于30°C培養(yǎng)10小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，30°C培養(yǎng)40小時(shí)，得到的枯草芽孢桿菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0048]所述分離培養(yǎng)基為咖啡100g/L、葡萄糖20g/L、胰化蛋白胨10g/L、酵母提取物20g/L、氯化鈉10g/L、瓊脂30g/L，pH4.8，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0049]國酒香咖啡的制備方法:
[0050]步驟1:取枯草芽孢桿菌接種于準(zhǔn)備好的基本培養(yǎng)基上，放置于30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)IOh使菌種活化，再將活化的菌種接種于添加果糖的LB液體培養(yǎng)基中，于20°C恒溫培養(yǎng)10h，將培養(yǎng)液離心棄除上清液，沉淀菌體用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即為得到的活化種子液；
[0051]步驟2:將咖啡粉碎勻漿后放入30°C的風(fēng)味蛋白酶的混合液中浸泡10h，與水按質(zhì)量比1: 10回流提取3小時(shí)后過濾，在115°C滅菌IOOmin ;在上述混合液中加入占上述混合液重量3%的木糖、4%的(NH4)2S04、I %的復(fù)合氨基酸和2%維生素C，即得咖啡液體培養(yǎng)基;
[0052]步驟3:將枯草芽孢桿菌凍干粉重懸后，按照2%的接種量接入步驟2所得的咖啡液體培養(yǎng)基中在溫度30°C下發(fā)酵5天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵2天，發(fā)酵結(jié)束后在70°C保溫0.5h ;將發(fā)酵好的咖啡發(fā)酵液，菌種滅活后板框?yàn)V膜過濾，再冷凍干燥濃縮成膏狀，按照1: 3的質(zhì)量比將膏狀物與70%乙醇溶液相混合，使膏狀物充分的溶解，再過濾后將濾液減壓濃縮至除去溶劑后，得到發(fā)酵咖啡浸膏；將發(fā)酵咖啡浸膏于100°C烘焙lOmin，冷卻后裝入密閉的橡木桶中貯存10天得到國酒香咖啡。
[0053]實(shí)施例4
[0054]一種國酒香咖啡，由4g嗜熱芽孢桿菌、99g咖啡組成。
[0055]嗜熱芽孢桿菌制備方法:
[0056]取IOg茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的90g無菌生理鹽水中，在20°C、50rpm搖床上振蕩3小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于30°C培養(yǎng)30小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，20°C培養(yǎng)20小時(shí)，得到的嗜熱芽孢桿菌株即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0057]所述分離培養(yǎng)基為咖啡50g/L、葡萄糖20g/L、胰化蛋白胨15g/L、酵母提取物IOg/L、氯化鈉5g/L、瓊脂20g/L，pH5，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0058]國酒香咖啡制備方法
[0059]步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮、表皮土壤，土壤中菌絲及塊菌與宿主的外生菌根各5g，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩lOmin，從中取100 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在有氧條件下用平板劃線分離獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α-雄烷醇的菌株；篩選培養(yǎng)基為:葡萄糖5g/L、蛋白胨lg/L、酵母膏0.lg/L、磷酸二氫鉀0.lg/L、硫酸鎂0.0lg/L、橡樹葉lg/L、瓊脂10g/L，pH值4，去掉瓊脂即為液體篩選培養(yǎng)基；
[0060]步驟2:將塊菌伴生菌活化后接入步驟I所得液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在400C，攪拌轉(zhuǎn)速為IOrpm條件下培養(yǎng)I天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入纖維素酶，在10°C條件下酶解Imin并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；
[0061]步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入20°C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡lh，然后與步驟2所得塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌重懸混合液，于20°C發(fā)酵lh，發(fā)酵后在115°C下滅菌lOmin，即得咖啡培養(yǎng)基；
[0062]步驟4:將嗜熱芽孢桿菌濕菌體重懸后，按照I %的接種量接入步驟3所得咖啡培養(yǎng)基中在溫度10°c下發(fā)酵I天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵I天，發(fā)酵結(jié)束后在55°C保溫0.1h ;在3000rpm離心lmin，將上清液在室溫下用水進(jìn)行靜置浸泡萃取并進(jìn)行常壓下蒸餾濃縮獲得提取液A，濾渣在室溫下用水進(jìn)行靜置浸泡萃取并減壓濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入單甘酯和阿拉伯膠，均質(zhì)后噴霧干燥得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂水溶包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；
[0063]步驟5:將步驟4所得的茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉一起造粒干燥后趁熱裝入橡木桶中平衡Id后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
[0064]實(shí)施例5
[0065]一種國酒香咖啡，由25g解淀粉芽孢桿菌、80g咖啡組成。
[0066]擬內(nèi)胞霉制備方法:
[0067]取4g茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的96g無菌生理鹽水中，在60°C、80rpm搖床上振蕩5小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于30°C培養(yǎng)80小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)55小時(shí)，得到的擬內(nèi)胞霉即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0068]所述分離培養(yǎng)基為咖啡50g/L、葡萄糖180g/L、胰化蛋白胨25g/L、酵母提取物6g/L、氯化鈉18g/L、瓊脂45g/L，pH7，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0069]國酒香咖啡制備方法
[0070]步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮、表皮土壤，土壤中菌絲及塊菌與宿主的外生菌根各10g，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩60min，從中取1000 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在厭氧條件下用稀釋涂平板法純化后獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α -雄烷醇的菌株；對菌株進(jìn)行紫外線一氯化鋰復(fù)合誘變以利于α -雄烷醇含量的提高；篩選培養(yǎng)基為:蔗糖300g/L、蛋白胨100g/L、酵母膏20g/L、磷酸二氫鉀10g/L、硫酸鎂10g/L、橡樹疏松愈傷組織塊200g/L、瓊脂30g/L，pH值9，去掉瓊脂既為液體篩選培養(yǎng)基；
[0071]步驟2:將塊菌共生菌活化后接入液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在40°C，攪拌轉(zhuǎn)速為SOOrpm條件下培養(yǎng)30天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入蛋白酶，在85°C條件下酶解150min并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；
[0072]步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入80°C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡90h，然后與塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入冠突散囊菌重懸液于70°C發(fā)酵120h，發(fā)酵后在115°C下滅菌20min ;在上述發(fā)酵液中加入占上述混合液10%的葡萄糖，即得咖啡培養(yǎng)基；
[0073]步驟4:將擬內(nèi)胞霉粉劑重懸后，按照20%的接種量接入咖啡培養(yǎng)基中在溫度60°C下發(fā)酵20天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵10天，發(fā)酵結(jié)束后在120°C保溫50h ;在SOOOrpm離心20min，將上清液通過二氧化碳進(jìn)行超臨界流體萃取并氮吹濃縮獲得提取液A，濾渣通過乙酸乙酯索氏提取并蒸餾濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入淀粉酯和大豆蛋白，均質(zhì)后冷凍干燥制得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂緩釋包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；
[0074]步驟5:將茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉混勻干燥后趁熱裝入橡木桶中平衡90天后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
[0075]實(shí)施例6
[0076]一種國酒香咖啡，由2g納豆芽孢桿菌、Ig梨頭霉菌、42g咖啡組成。
[0077]納豆芽孢桿菌制備方法:
[0078]取7g茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的93g無菌水中，在50°C、180rpm搖床上振蕩3小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于25°C培養(yǎng)48小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)72小時(shí)，得到的納豆芽孢桿菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0079]所述分離培養(yǎng)基為咖啡30g/L、葡萄糖100g/L、胰化蛋白胨25g/L、酵母提取物18g/L、瓊脂50g/L，pH5，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0080]梨頭霉菌制備方法:
[0081]取7g茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的93g無菌水中，在50°C、180rpm搖床上振蕩3小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于25°C培養(yǎng)48小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)72小時(shí)，得到的梨頭霉菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0082]所述分離培養(yǎng)基為葡萄糖10g/L、胰化蛋白胨45g/L、酵母提取物20g/L、氯化鈉10g/L、瓊脂20g/L，pH6，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0083]國酒香咖啡制備方法:
[0084]步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮、表皮土壤，土壤中菌絲及塊菌與宿主的外生菌根各Sg，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩30min，從中取500 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在有氧條件下用稀釋涂平板法純化后獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α-雄烷醇的菌株；篩選培養(yǎng)基為:葡萄糖30g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏l(xiāng)g/L、磷酸二氫鉀lg/L、硫酸鎂0.lg/L、橡樹葉100g/L、瓊脂13g/L，pH值4.9，去掉瓊脂即為液體篩選培養(yǎng)基；
[0085]步驟2:將塊菌孢子活化后接入液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在20°C，攪拌轉(zhuǎn)速為SOrpm條件下培養(yǎng)13天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入纖維素酶、β _葡萄糖苷酶，在15°C條件下酶解15min并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；
[0086]步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入30°C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡10h，然后與塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌重懸混合液于30°C發(fā)酵10h，發(fā)酵后在115°C下滅菌12min ;在上述發(fā)酵液中加入占上述混合液I %蔗糖、10% KH2PO4,即得咖啡培養(yǎng)基；
[0087]步驟4:將納豆芽孢桿菌、梨頭霉菌的濕菌體重懸后，按照5%的接種量接入步驟3所得的咖啡培養(yǎng)基中在溫度20°C下發(fā)酵10天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵3天，發(fā)酵結(jié)束后在70°C保溫5h ;在5000rpm離心5min，將上清液通過丙二醇進(jìn)行微波加熱萃取并減壓濃縮獲得提取液A，濾渣通過乙腈進(jìn)行超聲萃取并減壓濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入淀粉酯和阿拉伯膠，均質(zhì)后冷凍干燥制得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂水溶包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；
[0088]步驟5:將步驟4所得的茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉混勻干燥后趁熱裝入橡木桶中平衡10天后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
[0089]實(shí)施例7
[0090]一種國酒香咖啡，由4g擬內(nèi)胞霉、48g咖啡組成。
[0091]擬內(nèi)胞霉制備方法:
[0092]取IOg茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的90g無菌水中，在60°C、180rpm搖床上振蕩9小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于65°C培養(yǎng)85小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)36小時(shí)，得到的擬內(nèi)胞霉即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0093]所述分離培養(yǎng)基為咖啡80g/L、葡萄糖130g/L、胰化蛋白胨42g/L、酵母提取物36g/L、氯化鈉8g/L、瓊脂43g/L，pH7.3，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0094]國酒香咖啡制備方法:
[0095]步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮與宿主的外生菌根各9g，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩50min，從中取800 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在厭氧條件下用稀釋涂平板法純化后獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α -雄烷醇的菌株；篩選培養(yǎng)基為:蔗糖140g/L、蛋白胨78g/L、酵母膏2g/L、磷酸二氫鉀3g/L、硫酸鎂0.8g/L、橡樹疏松愈傷組織塊70g/L、瓊脂16g/L，pH值5.2，去掉瓊脂即為液體篩選培養(yǎng)基；
[0096]步驟2:將塊菌產(chǎn)香菌活化后接入液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在27°C，攪拌轉(zhuǎn)速為530rpm條件下培養(yǎng)27天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入β -葡萄糖苷酶，在64°C條件下酶解58min并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；所述的塊菌產(chǎn)香菌為塊菌子囊果組織分離的菌種、塊菌孢子的混合物；
[0097]步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入74°C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡72h，然后與塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入冠突散囊菌重懸液于48°C發(fā)酵12h，發(fā)酵后在115°C下滅菌ISmin ;在上述發(fā)酵液中加入占上述混合液10%的復(fù)合氨基酸和10%維生素C，即得咖啡
培養(yǎng)基；
[0098]步驟4:將擬內(nèi)胞霉凍干粉重懸后，按照8%的接種量接入步驟3所得的咖啡培養(yǎng)基中在溫度48°C下發(fā)酵7天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵3天，發(fā)酵結(jié)束后在98°C保溫36h ;在6500印111離心8min,將上清液通過環(huán)己燒用機(jī)械振蕩萃取并減壓濃縮獲得提取液A，濾渣通過丙酮用同時(shí)蒸餾萃取提取并氮吹濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入單甘酯和環(huán)糊精，均質(zhì)后冷凍干燥制得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂緩釋包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；
[0099]步驟5:將步驟4所得的茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉一起造粒后趁熱裝入橡木桶中平衡80天后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
[0100]實(shí)施例8
[0101]一種國酒香咖啡，由7g臘狀芽孢桿菌、30g咖啡組成。
[0102]臘狀芽孢桿菌制備方法:
[0103]取5g茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的95g無菌生理鹽水中，在55 °C、108rpm搖床上振蕩5小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于40°C培養(yǎng)65小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，35°C培養(yǎng)58小時(shí)，得到的臘狀芽孢桿菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0104]所述分離培養(yǎng)基為咖啡180g/L、葡萄糖150g/L、胰化蛋白胨35g/L、酵母提取物42g/L、氯化鈉8g/L、瓊脂36g/L，pH7.4，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0105]國酒香咖啡制備方法:
[0106]步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮、表皮土壤，土壤中菌絲及塊菌與宿主的外生菌根各6g，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩35min，從中取800 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在厭氧條件下用平板劃線分離后獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α-雄烷醇的菌株，對菌株進(jìn)行紫外線一氯化鋰復(fù)合誘變以利于α-雄烷醇含量的提高；篩選培養(yǎng)基為:蔗350g/L、蛋白胨70g/L、酵母膏0.8g/L、磷酸二氫鉀0.5g/L、硫酸鎂0.7g/L、橡樹疏松愈傷組織塊180g/L、瓊脂27g/L，pH值8.2，去掉瓊脂即為液體篩選培養(yǎng)基；
[0107]步驟2:將塊菌產(chǎn)香菌活化后接入液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在30°C，攪拌轉(zhuǎn)速為600rpm條件下培養(yǎng)10天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入纖維素酶、蛋白酶、β _葡萄糖苷酶，在65°C條件下酶解106min并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；所述的塊菌產(chǎn)香菌為塊菌孢子、塊菌內(nèi)生菌、塊菌伴生菌的混合物；
[0108]步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入70°C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡65h，然后與塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌重懸混合液于60°C發(fā)酵105h，發(fā)酵后在115°〇下滅菌201^11;在上述發(fā)酵液中加入占上述混合液8(%木糖、0.5(%果糖、3(%MgSO4,4% NaCl、7%的復(fù)合氨基酸和1%維生素C，即得咖啡培養(yǎng)基；
[0109]步驟4:將臘狀芽孢桿菌的濕菌體重懸后，按照7%的接種量接入步驟3所得的咖啡培養(yǎng)基中在溫度50°C下發(fā)酵17天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵6天，發(fā)酵結(jié)束后在94°C保溫5h ;在7800rpm離心12min，將上清液通過甘油蒸餾萃取并減壓濃縮獲得提取液A，濾渣通過二氯甲烷索氏提取并蒸餾濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入蔗糖酯、磷脂和麥芽糊精、殼聚糖、阿拉伯膠，均質(zhì)后冷凍干燥制得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂水溶包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；
[0110]步驟5:將步驟4所得的茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉混勻干燥后趁熱裝入橡木桶中平衡80天后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
[0111]實(shí)施例9
[0112]一種國酒香咖啡，由IOg納豆芽孢桿菌、60g咖啡組成。
[0113]納豆芽孢桿菌制備方法:
[0114]取30g茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的970g無菌生理鹽水中，在55°C、80rpm搖床上振蕩3小 時(shí)；梯度稀釋涂布平板，50°C培養(yǎng)84小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，60°C培養(yǎng)30小時(shí)，得到的納豆芽孢桿菌即為茅臺(tái)酒致香微生物；
[0115]所述分離培養(yǎng)基為咖啡190g/L、葡萄糖70g/L、胰化蛋白胨32g/L、酵母提取物24g/L、氯化鈉4.8g/L、瓊脂36g/L，pH5.7，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
[0116]國酒香咖啡制備方法:
[0117]步驟1:取茅臺(tái)酒致香微生物接種于準(zhǔn)備好的PDA培養(yǎng)基上，放置于45°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)78h使菌種活化，再將活化的菌種接種于添加葡萄糖的LB液體培養(yǎng)基中，于40°C恒溫培養(yǎng)50h，將培養(yǎng)液離心棄除上清液，沉淀菌體用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即為得到的活化種子液；
[0118]步驟2:將咖啡粉碎勻漿后放入5(TC的復(fù)合蛋白酶中浸泡7Oh，與水按質(zhì)量比I: 18回流提取6小時(shí)后過濾，在115°C滅菌IOOmin ;在上述混合液中加入占上述混合液重量7%果糖、0.80% MgS04、5%復(fù)合氨基酸和3%維生素C，即得咖啡液體培養(yǎng)基；
[0119]步驟3:將納豆芽孢桿菌濕菌體重懸后，按照14%的接種量接入步驟2所得的咖啡液體培養(yǎng)基中在溫度45°C下發(fā)酵18天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵6天，發(fā)酵結(jié)束后在100°C保溫40h ;將發(fā)酵好的咖啡發(fā)酵液，菌種滅活后板框?yàn)V膜過濾，再冷凍干燥濃縮成膏狀，按照1: 8的質(zhì)量比將膏狀物與98%乙醇水溶液相混合，使膏狀物充分的溶解，再過濾后將濾液減壓濃縮至除去溶劑后，得到發(fā)酵咖啡浸膏；將發(fā)酵咖啡浸膏于150°C烘焙30min，冷卻后裝入密閉的橡木桶中貯存70天得到國酒香咖啡。
[0120]試驗(yàn)例
[0121]咖啡因檢測方法:[0122]1.1材料與儀器
[0123]咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品均分析純；甲醇為色譜純，水為二次去離子水；
[0124]儀器:WaterS2695高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器。
[0125]1.2色譜條件
[0126]流動(dòng)相:A甲醇，B水，梯度洗脫(見表1);進(jìn)樣量:10L;柱溫:25°C。
[0127]色譜柱:ZorbaxC18 (4.6 X 250mm);檢測波長:271nm ;流速:1.0mT,/miη ；
[0128]1.3樣品預(yù)處理
[0129]準(zhǔn)確量取各實(shí)施例樣品及雀巢普通咖啡各200g溶于1000ml水中，取5.0mL樣品，用二次去離子水稀釋定容至50mL，40°C超聲提取，經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，經(jīng)高效液相色譜測定。
[0130]1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
[0131]分別準(zhǔn)確稱取0.01OOg咖啡因于10.0mL容量瓶中，分別用甲醇定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1000g/mL，分別移取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10.0mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)混合中間液100g/mL。
[0132]表1流動(dòng)相比例
[0133]
【權(quán)利要求】
1.一種國酒香咖啡，其特征在于由1-99.99重量份咖啡、0.01-30重量份茅臺(tái)酒致香微生物或產(chǎn)醬香功能菌組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種國酒香咖啡，其特征在于所述的咖啡為咖啡豆、咖啡豆顆粒、咖啡粉、速溶咖啡粉中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種國酒香咖啡，其特征在于所述的茅臺(tái)酒致香微生物為從茅臺(tái)酒生產(chǎn)用大曲中分離純化得到的曲霉菌、白毛霉菌、根霉菌、梨頭霉菌、假酵母、擬內(nèi)胞霉、漢遜酵母、乳酸菌、醋酸菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、嗜熱芽孢桿菌、臘狀芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌中的一種或幾種組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種國酒香咖啡，其特征在于所述茅臺(tái)酒致香微生物由以下方法制備: 取1-10重量份茅臺(tái)酒高溫大曲曲粉加入裝有玻璃珠的90-99重量份無菌水或無菌生理鹽水中，在10-70°C、10-200rpm搖床上振蕩1_10小時(shí)；梯度稀釋涂布平板，于10_70°C培養(yǎng)1-90小時(shí)；從平板上挑選生長較好、性狀不同菌落分別接種于分離培養(yǎng)基斜面，作為篩選用菌株；將得到的篩選用菌株分別接種篩選培養(yǎng)基中，10_70°C培養(yǎng)1-90小時(shí)，得到的產(chǎn)香優(yōu)勢菌株即為茅臺(tái)酒致香微生物； 所篩選的茅臺(tái)酒致香微生物為芽孢桿菌、芽孢梭菌、假單孢菌、曲霉菌、青霉菌、酵母菌，菌種可為菌曲或菌液形式； 所述分離培養(yǎng)基為咖啡0-300g/L、葡萄糖l_200g/L、胰化蛋白胨l_50g/L、酵母提取物l-50g/L、氯化鈉0-50g/L、瓊脂l-50g/L，pH4_8，去掉瓊脂即為篩選培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種國酒香咖啡，其特征在于由以下方法制備: 步驟1:取茅臺(tái)酒致香微生物接種于準(zhǔn)備好的斜面培養(yǎng)基上，放置于10-70°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)l_90h使菌種活化，再將活化的菌種接種于添加糖源的LB液體培養(yǎng)基中，于10-70°C恒溫培養(yǎng)l_90h，將培養(yǎng)液離心棄除上清液，沉淀菌體用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即為得到的活化種子液；所述的斜面培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨、PDA培養(yǎng)基或基本培養(yǎng)基； 步驟2:將咖啡粉碎勻漿后放入20-80°C的復(fù)合蛋白酶和/或風(fēng)味蛋白酶的混合液中浸泡l_90h，與水按質(zhì)量比1: 0.1-30回流提取1-8小時(shí)后過濾，在115°C滅菌IOOmin ;在上述混合液中加入占上述混合液重量0.1-10%的糖源、0.1-10%的無機(jī)鹽、0-10%的復(fù)合氨基酸和/或維生素C，即得咖啡液體培養(yǎng)基； 步驟3:將茅臺(tái)酒致香微生物的濕菌體、粉劑或凍干粉重懸后，按照1-20%的接種量接入步驟2所得的咖啡液體培養(yǎng)基中在溫度10-60°C下發(fā)酵1-20天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵1-10天，發(fā)酵結(jié)束后在55-120°C保溫0.l-50h ;將發(fā)酵好的咖啡發(fā)酵液，菌種滅活后板框?yàn)V膜過濾，再減壓濃縮或冷凍干燥濃縮成膏狀，按照1: ι-?ο的質(zhì)量比將膏狀物與萃取溶劑相混合，使膏狀物充分的溶解，再過濾后將濾液減壓濃縮至除去溶劑后，得到發(fā)酵咖啡浸膏；將發(fā)酵咖啡浸膏于10-200°C烘焙l_50min，冷卻后裝入密閉的橡木桶中貯存1-90天得到國酒香咖啡；所述的提取液、萃取溶劑為水或乙醇，或兩者的復(fù)合溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種國酒香咖啡，其特征在于由以下方法制備: 步驟1:取新鮮塊菌子囊果的中間組織塊、皮、表皮、表皮土壤，土壤中菌絲及塊菌與宿主的外生菌根各5-10重量份，消毒后用無菌研缽磨成漿狀，加入到無菌蒸餾水中震蕩10-60min,從中取100-1000 μ L液體滴加到篩選培養(yǎng)基上均勻涂開，在有氧或厭氧條件下用平板劃線分離或稀釋涂平板法純化后獲得一批微生物菌株，然后用液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗(yàn)從中篩選出富產(chǎn)α-雄烷醇的菌株；篩選培養(yǎng)基為:葡萄糖或蔗糖5_300g/L、蛋白胨Ι-lOOg/L、酵母膏0.l_20g/L、磷酸二氫鉀0.Ι-lOg/L、硫酸鎂0.01-lOg/L、橡樹葉或橡樹疏松愈傷組織塊l_200g/L、瓊脂10-30g/L，pH值4_9，去掉瓊脂即為液體篩選培養(yǎng)基； 步驟2:將塊菌產(chǎn)香菌活化后接入液體篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，在15-40°C，攪拌轉(zhuǎn)速為IO-SOOrpm條件下培養(yǎng)1_30天；發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物勻漿，加入纖維素酶、蛋白酶、β -葡萄糖苷酶的一種或幾種，在10-85°C條件下酶解l-150min并滅酶后，得到塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液；所述的塊菌產(chǎn)香菌為塊菌子囊果組織分離的菌種、塊菌孢子、塊菌內(nèi)生菌、塊菌共生菌、塊菌伴生菌的一種或幾種； 步驟3:將咖啡粉碎勻漿后放入20-80°C的胃蛋白酶和鹽酸的混合液中浸泡l_90h，然后與塊菌產(chǎn)香菌發(fā)酵液混合后接入雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌重懸混合液或冠突散囊菌重懸液于20-70°C發(fā)酵l_120h，發(fā)酵后在115°C下滅菌10_20min ;在上述發(fā)酵液中加入占上述混合液0.1% -10%的糖源、0.1% -10%的無機(jī)鹽、0.1% -10%的復(fù)合氨基酸和/或維生素C，即得咖啡培養(yǎng)基； 步驟4:將茅臺(tái)酒致香微生物的濕菌體、粉劑或凍干粉重懸后，按照1-20%的接種量接入步驟3所得的咖啡培養(yǎng)基中在溫度10-60°C下發(fā)酵1-20天，經(jīng)微孔濾膜過濾除菌后繼續(xù)發(fā)酵1-10天，發(fā)酵結(jié)束后在55-120°C保溫0.l-50h ;在3000-8000rpm離心l_20min，將上清液通過溶劑提取并濃縮獲得提取液A，濾渣通過溶劑提取并濃縮得到提取液B ;將上述的提取液A和B混勻后得到茅臺(tái)酒致香液，分別加入乳化劑和包埋材料，均質(zhì)后噴霧干燥或冷凍干燥制得茅臺(tái)酒致香液粉末；通過流化床對茅臺(tái)酒致香液粉末噴涂水溶包衣或緩釋包衣，制成茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉；所述乳化劑為單甘酯、蔗糖酯、磷脂、淀粉酯的一種或幾種；所述包埋材料為變性淀粉、麥芽糊精、蔗糖、殼聚糖、阿拉伯膠、環(huán)糊精、卡拉膠、海藻酸鹽、明膠、大豆蛋白、乳清蛋白、水解蛋白的一種或幾種；所述的溶劑提取方式為室溫下靜置浸泡萃取、機(jī)械振蕩萃取、超聲萃取、加熱回流萃取、微波加熱萃取、蒸餾萃取、同時(shí)蒸餾萃取、索氏提取或超臨界流體`萃取中的一種；溶劑為水、乙醇、丙二醇、甘油、乙醚、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、二氯甲烷、氯仿、環(huán)己烷、二氧化碳中的任意一種或幾種；所述的濃縮過程為常壓下蒸餾濃縮、氮吹濃縮或減壓濃縮中的一種； 步驟5:將步驟4所得的茅臺(tái)酒致香液微膠囊粉和咖啡粉一起造?；蚧靹蚋稍锖蟪脽嵫b入橡木桶中平衡1-90天后包裝制得具有國酒香的咖啡產(chǎn)品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種國酒香咖啡的制作方法，其特征在于所述步驟I中對菌株進(jìn)行紫外線一氯化鋰復(fù)合誘變以利于α-雄烷醇含量的提高。
8.根據(jù)權(quán)利要求5、6、7中的任一項(xiàng)一種國酒香咖啡的制作方法，其中所述的無機(jī)鹽是KH2PO4' (ΝΗ4) 2S04、MgSO4,或 NaCl。
9.根據(jù)權(quán)利要求5、6、7中的任一項(xiàng)一種國酒香咖啡的制作方法，其中所述的糖源為蔗糖、葡萄糖、木糖、果糖中的一種或多種的混合物。
【文檔編號(hào)】A23F5/46GK103859122SQ201410128974
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月2日
【發(fā)明者】郭景龍 申請人:郭景龍