一種卵形鯧鲹過氧化物還原酶基因的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種卵形鯧鲹過氧化物還原酶基因Prx1的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還公開了含有上述卵形鯧鲹過氧化物還原酶基因的表達(dá)載體和利用該載體轉(zhuǎn)化的重組微生物，還公開了利用上述微生物制備重組卵形鯧鲹過氧化物還原酶基因的方法。本發(fā)明采用基因工程技術(shù)，生產(chǎn)重組卵形鯧鲹過氧化物還原酶蛋白。
【專利說明】一種卵形鯧鯪過氧化物還原酶基因

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及的是一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 及含有該基因的表達(dá)載體和重組菌株，以及通過重組菌株得到的重組蛋白。

【背景技術(shù)】
[0002] 過氧化物還原酶（Peroxiredoxins，Prxs)是生物體內(nèi)一類重要的抗氧化酶類，通 過催化H 2O2和脂質(zhì)氫過氧化物還原，避免細(xì)胞受到進(jìn)一步損傷。所有Prx在N末端都含有 一個(gè)保守的Cys殘基，隸屬于過氧化物酶家族，與其他過氧化物酶相比，最大特點(diǎn)是絕大部 分Prx在體內(nèi)以Trx為唯一氫供體。1988年，Kim釀酒酵母里發(fā)現(xiàn)Prx。此后，人們相繼在 原生生物、植物、動(dòng)物、寄生蟲中，乃至古細(xì)菌和真細(xì)菌體內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了這種酶。根據(jù)所含Cys 殘基數(shù)目不同，可把過氧化物還原酶分為2類：（1)1-Cys Prx。該型在52位有一個(gè)高度保 守的Cys殘基，如在人體中的Prx6 ; (2)典型2-Cys型。52位和172位上分別有一個(gè)保守 的Cys殘基，同時(shí)C-端有一個(gè)保守的Cys，如Prxl-4 ; (3)非典型2-Cys型。C-端含額外兩 個(gè)較低保守性的Cys殘基，N-端帶正電荷氨基酸殘基分散于疏水性氨基酸序列中，如Prx5。 因此，過氧化物還原酶開發(fā)和應(yīng)用研宄已成為國內(nèi)過飼料科學(xué)和藥理學(xué)研宄熱點(diǎn)，在動(dòng)植 物轉(zhuǎn)基因工程及藥物開發(fā)領(lǐng)域有著廣闊的前景。
[0003] 卵形娼鰺（Trachinotus ovatus)隸屬脊索動(dòng)物門（Chordata)，硬骨魚綱 (Osteichthyes)，隹盧形目（Perciformes)，隹盧亞目（Percoidei)，錄科（Carangidae)，為名貴 食用魚類，在我國南方海域已有相當(dāng)?shù)娜斯ゐB(yǎng)殖規(guī)模。然而，近年來卵形鯧鰺病害頻發(fā)，弓丨 起了較高的死亡率，成為制約卵形鯧鰺養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的技術(shù)瓶頸之一。目前，還未有 人對(duì)卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因進(jìn)行研宄。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl (Peroxiredoxin 1型）的cDNA和由此推斷的氨基酸序列。
[0005] 本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供包含上述卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的表 達(dá)載體和利用該表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的重組微生物。
[0006] 本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種從所述的微生物制備重組卵形鯧鰺過氧化物 還原酶基因 Prxl的過程。
[0007] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種卵形鯧鰺過氧化物還原 酶基因 Prxl的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0008] 由其推斷的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的氨基酸序列如SEQ ID :2所示。
[0009] 本發(fā)明的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的全長基因是以轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到卵 形鯧鰺過氧化物還原酶序列，以卵形鯧鰺肝臟總RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，然后經(jīng) Smart-RACE方法擴(kuò)增得到末端序列，最后經(jīng)序列拼接獲得卵形鯧鰺過氧化物還原酶cDNA 基因全長序列。
[0010] 本發(fā)明用于表達(dá)卵形鯧鰺過氧化物還原酶重組蛋白的過氧化物還原酶成熟肽基 因序列是以卵形鯧鰺過氧化物還原酶cDNA為模板，經(jīng)PCR方法擴(kuò)增而得到的，它來源于卵 形鯧鰺過氧化物還原酶全長基因的成熟肽區(qū)域所對(duì)應(yīng)的基因片段。
[0011] 按照上述的卵形鯧鰺過氧化物還原酶重組蛋白的成熟肽基因序列，它正好是卵形 鯧鰺過氧化物還原酶全長基因128bp至721bp (相當(dāng)于第43至第240位氨基酸）的片段， 其核苷酸序列及其所編碼的氨基酸序列如下所示。
[0012] 卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因的cDNA，它的核苷酸序列如下所示：
[0013]
[0014]

【權(quán)利要求】
1. 一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1 所示。
2. -種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl，它的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
3. 包括權(quán)利要求1所述的cDNA的表達(dá)載體。
4. 包括權(quán)利要求1所述的cDNA的表達(dá)載體pRSET-Prxl。
5. 制備重組卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的方法，其特征是：包括用權(quán)利要求3 所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化寄主細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體，獲得重組的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是：其中寄主細(xì)胞是大腸桿菌。
7. -種重組卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl，包括用權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn) 化寄主細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體，從培養(yǎng)物獲得重組的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的步驟 的方法制備。
【文檔編號(hào)】C12N9/08GK104480126SQ201410735312
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】張殿昌, 王龍, 郭華陽, 馬振華, 張楠, 江世貴 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所