技術領域：

本發(fā)明涉及多菌種發(fā)酵芝麻粕生產富含牛磺酸的菌肽飼料的制備方法，屬于農畜牧業(yè)技術領域。

背景技術：
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飼料制造業(yè)競爭激烈，飼料價格居高不下,常規(guī)蛋白原料如豆粕、魚粉緊缺導致價格不斷上漲，飼料成本急劇增加、養(yǎng)殖收益不斷降低，如何降低飼料成本成為市場廣泛關注的問題。最常用的降低成本的方法是采用較經濟的芝麻粕、棉粕等來代替部分傳統(tǒng)性品質較高的豆粕及魚粉。

芝麻粕、棉粕等植物源蛋白與魚粉相比，缺少牛磺酸這一重要物質，而對于畜禽魚類動物來說，?；撬崾菞l件性必需氨基酸，因為其自生只能合成其生理所需的30％～40％，所以必須從食物中補充一部分。牛磺酸具有提高畜禽生長、繁殖性能，改善其免疫力，促進采食等生物學功能。研究表明，缺乏牛磺酸的植物源蛋白餌料會導致魚體出現(xiàn)生長緩慢和一些病理現(xiàn)象，如綠色肝臟綜合癥和溶血性貧血等。

我國是世界芝麻產量最多的國家，芝麻粕是芝麻榨油后的副產物，成本比豆粕還要低20％-30％。其粗蛋白高達45％左右，蛋氨酸含量高出豆粕40％，而蛋氨酸正是?；撬岷铣赏緩降那绑w物質。多菌種固態(tài)發(fā)酵芝麻粕生產的菌肽飼料，能夠解決動物的營養(yǎng)性腹瀉；調理和激活細胞和機體的整體活性，促進動物的胃腸道功能，提高防疾病抗病能力；還能補充大量活性益生菌，增強有益微生物的生長繁殖，抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌的生長，改善腸道的微生態(tài)平衡，減少疾病的發(fā)生；提高動物機體的免疫功能，減少抗生素的用量；其中的營養(yǎng)物質能被道粘膜直接吸收，吸收速率快，有營養(yǎng)和提高免疫力雙重功能。同時，通過微生物發(fā)酵作用，可以有效降低粕類中抗營養(yǎng)因子。

隨著生物技術的發(fā)展，應用微生物發(fā)酵技術降解植物蛋白資源制備活性肽蛋白飼料，成為研究小肽的生物活性的重要手段，使高效、安全地獲得活性肽制品成為可能。芝麻粕蛋白是一個十分豐富的肽資源庫,用芝麻粕制備小肽飼料及添加劑，將成為提高芝麻副產品附加值,提高畜禽生產性能,改進畜禽品質的一個有效途徑。通過微生物發(fā)酵制備新型綠色的飼用活性小肽制品，對改善動物營養(yǎng)和促進養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展是十分有益的。

技術實現(xiàn)要素：
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針對上述問題，本發(fā)明要解決的技術問題是提供多菌種發(fā)酵芝麻粕生產富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒?。

本發(fā)明的多菌種發(fā)酵芝麻粕生產富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒椋翰襟E一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制：準確稱取牛肉膏3g、蛋白胨5g、氯化鈉10g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻，然后調節(jié)ph7.0～7.2；

馬鈴薯培養(yǎng)基的配制：馬鈴薯去皮，切成塊加水煮沸30min，其中馬鈴薯:水＝1:4～6，然后用紗布過濾，再加入20g葡萄糖，攪拌均勻后補足水至1000ml；

查氏培養(yǎng)基的配制：準確稱取硝酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻。

步驟二、菌種的活化、培養(yǎng)，將枯草芽孢桿菌ys-45、酵母s-78、黑曲霉pl-39的活化菌種分別加入15ml～20ml步驟一制備的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基，制成菌懸液，再將菌懸液在30℃～32℃、250r/min搖床中擴大培養(yǎng)12h～14h，離心后將上清液去除，即分別得到枯草芽孢桿菌ys-45種子菌懸液、酵母s-78種子菌懸液和黑曲霉pl-39種子菌懸液；

步驟三：將用于發(fā)酵生產含?；撬岬木娘暳系脑希褐ヂ槠?、麩皮、糖蜜、磷酸氫二鉀、氯化鈣攪拌混合均勻，在110℃～130℃高溫蒸汽滅菌25min～35min，冷卻后為固體發(fā)酵物，將步驟二中分別制備的芽孢桿菌ys-45、酵母s-78和黑曲霉pl-39種子菌懸液，各按4％～8％的體積比接種到滅菌好的固體發(fā)酵物中，再加入上述原料總質量的35％～40％的水，攪拌均勻，然后在固態(tài)發(fā)酵罐中在30℃～32℃條件下培養(yǎng)65h～70h，即得富含?；撬岬木娘暳?。

作為優(yōu)選,所述的步驟三中用于生產多菌種發(fā)酵芝麻粕生產富含?；撬岬木娘暳习韵沦|量份數(shù)的原料：芝麻粕7-9份，麩皮0.5-1.5份，糖蜜0.3-0.7份，磷酸氫二鉀0.1-0.4份，氯化鈣0.1-0.4份。

本發(fā)明的有益效果：枯草芽孢桿菌ys-45含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，能夠分解芝麻粕蛋白，產生小分子活性物質，在動物腸道內具有較強的生物多樣能力。酵母s-78具有促生長特性，細胞內含有豐富的蛋白質、維生素、氨基酸，其中蛋白質占其干重的50％以上，能為動物提供大量的菌體營養(yǎng)，在發(fā)酵過程中能產生醇類物質，可以增加飼料的風味，提高適口性，同時能改善動物腸道的微生態(tài)環(huán)境，提高動物免疫力；黑曲霉pl-39能夠分泌產生植酸酶和纖維素酶，能有效降解植酸、纖維素等抗營養(yǎng)因子。且三種菌對動物均無毒害作用。三者共同作用產生多種類型酶，發(fā)酵降解芝麻粕生成富含牛磺酸的菌肽飼料，牛磺酸是調節(jié)機體正常生理活動的活性物質，具有維持正常視覺功能、維持機體滲透壓平衡，調節(jié)細胞鈣平衡等優(yōu)點，且?；撬崤c細胞膜的流動性有關，能降血糖、調節(jié)神經傳導、參與內分泌活動、調節(jié)脂類消化與吸收、增加心臟收縮能力、提高機體免疫能力、增強細胞膜抗氧化能力、保護心肌細胞等廣泛生物學作用。發(fā)酵產物含有多種多肽，提供豐富營養(yǎng)并促進營養(yǎng)的充分吸收。且作為發(fā)酵底物的芝麻粕，來源廣泛，價格低廉。因此含?；撬岬木娘暳峡赏耆虿糠痔娲~粉，從而降低飼料成本。

附圖說明：

為了易于說明，本發(fā)明由下述的具體實施及附圖作以詳細描述。

圖1為本發(fā)明實施例中?；撬針藴势返母咝б合嗌V圖。

圖2為本發(fā)明實施例1在固態(tài)發(fā)酵罐中制備的富含?；撬峋娘暳现信；撬岬母咝б合嗌V圖。

圖3為本發(fā)明實施例2中菌肽飼料替代魚粉對草魚生產性能影響的實驗數(shù)據(jù)圖。

具體實施方式：

以下結合具體實施例，對本發(fā)明的多菌種發(fā)酵芝麻粕生產富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒ㄗ鲞M一步的詳細說明。

實施例1：多菌種發(fā)酵生產富含?；撬岬木娘暳习韵沦|量份數(shù)的原料：芝麻粕9份，麩皮0.5份，糖蜜0.3份，磷酸氫二鉀0.1份，氯化鈣0.1份。

多菌種發(fā)酵生產富含?；撬岬木娘暳系闹苽浞椒ú襟E為：

步驟一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制：準確稱取牛肉膏3g、蛋白胨5g、氯化鈉10g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻，然后調節(jié)ph7.0；

馬鈴薯培養(yǎng)基的配制：馬鈴薯去皮，切成塊加水煮沸30min，其中馬鈴薯:水＝1:4，然后用紗布過濾，再加入20g葡萄糖，攪拌均勻后補足水至1000ml；

查氏培養(yǎng)基的配制：準確稱取硝酸鈉2g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g放入燒杯中，加入1000ml水用玻璃棒攪拌均勻。

步驟二、菌種的活化、培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌ys-45、酵母s-78、黑曲霉pl-39的活化菌種分別加入15ml步驟一制備的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基，制成菌懸液，再將菌懸液在30℃、250r/min搖床中擴大培養(yǎng)12h，離心后將上清液去除，即分別得到枯草芽孢桿菌ys-45、酵母s-78和黑曲霉pl-39的種子菌懸液；

步驟三：將用于多菌種發(fā)酵生產富含?；撬岬木娘暳系脑希褐ヂ槠?、麩皮以及糖蜜、磷酸氫二鉀、氯化鈣等營養(yǎng)因子按比例稱取后，攪拌混合均勻，在110℃下高溫蒸汽滅菌25min，冷卻后為固體發(fā)酵物，將步驟二中分別制備的芽孢桿菌ys-45、酵母s-78和黑曲霉pl-39種子菌懸液，各按8％的體積比接種到滅菌好的固體發(fā)酵物中，再加入上述原料總質量的40％的水，攪拌均勻，然后在固態(tài)發(fā)酵罐中30℃條件下培養(yǎng)70h，即得富含?；撬岬木娘暳?。

牛磺酸含量的檢測：取實施例1制備的富含?；撬岬木娘暳?0g溶于50ml水，離心取上清，加等量體積三氯乙酸除蛋白，等量乙醚脫脂，凍干，取5mg凍干粉溶于100μl水中，加入300μl衍生劑，衍生30min，再凍干，采用高效液相色譜法檢測牛磺酸，圖2為實施例中富含牛磺酸的菌肽飼料中?；撬岬母咝б合嗌V圖。

進口魚粉?；撬岷?％左右，國產魚粉牛磺酸含量0.5％左右，參照圖2所示，實施例1中富含?；撬岬木娘暳现信；撬岷繛?.57％(即100g干物質中牛磺酸的含量是3.57g)。

通過實施例1可以看出采用此方法制備的富含?；撬岬木娘暳现信；撬岷勘冗M口魚粉中的?；撬岷扛?。

實施例2：試驗采用單因子試驗設計，選用初始體重約為10g的草魚，隨機分成4個處理，每個處理3個重復，每個重復20尾魚，養(yǎng)殖地點在長沙學院內水產養(yǎng)殖產學研基地進行，室內循環(huán)控溫玻璃水族缸規(guī)格為120cm×80cm×80cm，進行為期60天的試驗。每天飼喂3次，分別為8:00、12:00、16:00。在對照組配方中魚粉用量為51％的基礎上，分別用24％、34％和44％的菌肽飼料代替配方中16％、23％和31％的魚粉用量，研究菌肽飼料代替魚粉對草魚生長性能的影響(測定指標包括成活率、增重率、飼料系數(shù)和特定生長率)。

從圖3可以看出，相對于對照組，試驗組1、2、3養(yǎng)殖效果好，增重率、飼料系數(shù)、特定生長率等都提高顯著，其中用34％菌肽飼料代替23％的進口魚粉，效果最佳。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。