專利名稱：一種紫云英單胞銹菌(cgmcc 0365)的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種紫云英單胞銹菌(Uromyces punctatus)(保藏號(hào)CGMCC0365)，特別是感染于黃花棘豆上的單胞銹菌的制造方法。
紫云英單胞銹菌只感染于黃花棘豆，具有專植性。黃花棘豆屬豆科、棘豆屬植物，因含有大量生物堿，草場(chǎng)上牲畜采食后中毒死亡，對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重影響。多年來，人們?yōu)榱吮苊恻S花棘豆對(duì)牲畜造成的危害，采取了許多無機(jī)、有機(jī)方法滅治毒草，但效果均不理想。但在自然界黃花棘豆一但感染紫云英單胞銹菌，次年必然死亡，而且具有專植性，即該菌只感染于黃花棘豆。如果能人工培養(yǎng)出紫云英單胞銹菌，用于滅除黃花棘豆，則將非常有利于草場(chǎng)建設(shè)。然而，到目前為止，無人能對(duì)紫云英單胞銹菌進(jìn)行人工培養(yǎng)。
本發(fā)明的目的是要解決上述問題，提供一種人工培養(yǎng)紫云英單胞銹菌的方法，為進(jìn)而用該菌滅除黃花棘豆打下技術(shù)前提。
本發(fā)明的技術(shù)方案是該紫云英單胞銹菌的制造方法，其特點(diǎn)在于培養(yǎng)基配方(重量百分比)為白碗豆粉5％-10％，瓊脂1％-4％，蒸餾水70％-90％，葡萄糖粉劑2％-15％，硫酸亞鐵0.5％-5％；其工藝方法如下首先，將帶菌葉片(黃花棘豆)剪成小片，在氯化鈉溶液中浸泡10小時(shí)以上；其次，配制培養(yǎng)液，將白碗豆粉加入蒸餾水中，攪勻，浸泡10-28小時(shí)，過濾，得濾液，將瓊脂加入蒸餾水中加熱(100℃)20-60分鐘；將加熱瓊脂液和白碗豆粉濾液合并，再加入葡萄糖粉劑和硫酸亞鐵，攪勻，再用氫氧化鈉溶液調(diào)溶液PH值至8-8.5；最后，先將配好的培養(yǎng)液加熱(100℃)滅菌，然后將上述氯化鈉溶液中浸泡的野生單胞菌接入培養(yǎng)液中，移至恒溫箱中，溫度為20℃-28℃，培養(yǎng)10-15天。
本發(fā)明的特點(diǎn)是培養(yǎng)基配方(重量百分比)為棘豆粉0.5％-5％，白碗豆粉1％-10％，蒸餾水70％-90％，葡萄糖粉劑0.5％-15％，硫酸亞鐵0.5％-2％；其工藝方法與上述相同。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及效果是實(shí)現(xiàn)了紫云英單胞銹菌的人工培養(yǎng)，為進(jìn)一步利用該銹菌特別是為生物防治棘豆毒草創(chuàng)造了前提。
實(shí)施例1a、培養(yǎng)基配方(重量百分比)白碗豆粉8％，瓊脂2％，蒸餾水85％，葡萄糖粉劑4.5％，硫酸亞鐵0.5％。
b、培養(yǎng)步驟與方法(1)將從草場(chǎng)上采得的帶菌棘豆葉片剪成小片，分別分?jǐn)?shù)片裝入25只高溫滅菌具塞試管中，每只試管中均加入氯化鈉水溶液(濃度1％)4毫升，浸泡數(shù)小時(shí)(帶菌棘豆鮮葉浸泡24小時(shí)，帶菌棘豆枯葉浸泡48小時(shí))。
(2)將白碗豆粉250克放入燒杯中，加入無菌蒸餾水1600毫升，攪勻浸泡24小時(shí)。
(3)稱瓊指20克，放入燒杯中加入蒸餾水1000毫升，加熱(100℃)30分鐘。
(4)將浸泡的白碗豆粉，用折疊兩層布進(jìn)行漏斗過濾，濾液約為750毫升。
(5)將加熱瓊脂液和豆粉汁均倒入鋁鍋中，再加入320毫升的蒸餾水，再加入15克葡萄糖粉劑，加入5克硫酸亞鐵，攪勻，用PH試紙測(cè)試為7-7.5，再用氫氧化鈉(濃度10％)滴定，將PH值調(diào)至8-8.5。
(6)將配好的培養(yǎng)液加熱(100℃)15分鐘，再分別裝入經(jīng)高溫滅菌的500毫升的三角瓶?jī)?nèi)，三角瓶具塞包裝。
(7)將培養(yǎng)液三角瓶裝入高壓鍋內(nèi)，高溫高壓滅菌30分鐘。
(8)在無菌室內(nèi)，分別將試管內(nèi)的野生單胞銹菌用吸管接入三角瓶培養(yǎng)液中，然后移至恒溫箱中，溫度26℃。
(9)在恒溫箱培養(yǎng)10-15天，銹菌胞子形成。
將生成的銹菌胞子用10％的碗豆粉溶液稀釋成10000毫升，同時(shí)加入抗氧化劑硫酸亞鐵(濃度2％，5毫升)即可。
實(shí)施例2，在22℃時(shí)，培養(yǎng)生產(chǎn)紫云英單胞銹菌胞子。培養(yǎng)基配方(重量百分比)白碗豆粉6％，瓊脂2％，蒸餾水82％，葡萄糖粉劑6％，硫酸亞鐵0.5％，棘豆粉3.5％。操作方法中先將白碗豆粉與棘豆粉混合，其余操作方法與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3，在28℃時(shí)，培養(yǎng)生產(chǎn)紫云英單胞銹菌胞子。培養(yǎng)基配方(重量百分比)白碗豆粉6.5％，蒸餾水85％，葡萄糖粉劑2.5％，硫酸亞鐵1％，棘豆粉5％。操作方法中先將白碗豆粉與棘豆粉混合，本例中不加瓊脂，其余操作方法與實(shí)施例1相同。
權(quán)利要求
1.一種紫云英單胞銹菌(CGMCC0365)的制造方法，其特征在于培養(yǎng)基配方(重量百分比)為白碗豆粉5％-10％，瓊脂1％-4％，蒸餾水70％-90％，葡萄糖粉劑2％-15％，硫酸亞鐵0.5％-5％；其工藝方法如下首先，將帶菌葉片剪成小片，在氯化鈉溶液中浸泡10小時(shí)以上；其次，配制培養(yǎng)液，將白碗豆粉加入蒸餾水中，攪勻浸泡10-28小時(shí)，過濾得濾液，將瓊脂加入蒸餾水中加熱(100℃)20-60分鐘；將加熱瓊指液和白碗豆粉濾液合并，再加入葡萄糖粉劑和硫酸亞鐵，攪勻，再用氫氧化鈉溶液調(diào)溶液PH值至8-8.5 ；最后，先將配好的培養(yǎng)液加熱(100℃)滅菌，然后將上述氯化鈉溶液中浸泡的野生單胞菌接入培養(yǎng)液中，移至恒溫箱中，溫度為20℃-28℃，培養(yǎng)10-15天。
2.如權(quán)利要求1所述的一種紫云英單胞銹菌(CGMCC0365)的制造方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基配方(重量百分比)為棘豆粉0.5％-5％，白碗豆粉1％-10％，蒸餾水70％-90％，葡萄糖粉劑0.5％-15％，硫酸亞鐵0.5％-2％，其工藝方法與權(quán)利要求1相同。
全文摘要
一種紫云英單胞銹菌(CGMCC0365)的制造方法,其特點(diǎn)是培養(yǎng)基配方為(重量百分比):白碗豆粉5—10,瓊脂1—4,蒸餾水70—90,葡萄糖粉劑2—15,硫酸亞鐵0.5—5。將上述物質(zhì)配制成培養(yǎng)基,用氫氧化鈉溶液將培養(yǎng)基液的pH值調(diào)至8—8.5;再將野生單胞菌接入培養(yǎng)液中,恒溫(22℃—28℃)無菌培養(yǎng)10—15天而成。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了紫云英單胞銹菌的人工培養(yǎng),為進(jìn)一步利用該菌滅除毒草黃花棘豆提供了條件。
文檔編號(hào)C12N1/04GK1262325SQ9910251
公開日2000年8月9日 申請(qǐng)日期1999年2月5日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月5日
發(fā)明者阿翰林, 黨生貴, 李措, 倪青躍, 蘇慶義, 東措毛, 王玉宏 申請(qǐng)人:海北藏族自治州草原工作站