一種唐松草屬植物提取物的制備方法及其制備的唐松草屬植物提取物和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水果病害防治和保鮮領(lǐng)域，具體涉及一種具有抑制柑橘采后病原菌作 用的唐松草屬植物提取物及其制備方法和新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 柑橘是世界第一大貿(mào)易水果，也是第三大貿(mào)易農(nóng)產(chǎn)品。我國柑橘資源豐富、種植歷 史悠久。目前我國柑橘的種植面積和產(chǎn)量均居世界第一位，2013年柑橘種植面積達3600多 萬畝，總產(chǎn)量約為3200多萬噸，柑橘產(chǎn)業(yè)在我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟中占有非常重要的地位。
[0003] 柑橘果實組織細(xì)嫩多汁且富含糖分，在采摘、貯運和銷售等過程中容易發(fā)生機械 損傷，果皮損傷后易受多種病原真菌的侵染而產(chǎn)生采后病害。柑橘采后發(fā)生的病理性病害 種類多達20余種，主要有意大利青霉（Penicillium italicum)引起的青霉病和指狀青霉 (Penicillium digitatum)引起的綠霉病，這些病害易造成果實腐爛變質(zhì)，腐爛率一般為 10 %?30 %，嚴(yán)重時可高達40 %?50 %以上，造成巨大的經(jīng)濟損失。柑橘其它的病理性病 害還包括黑腐病、酸腐病、褐腐病、褐色帝腐病、炭疽病和焦腐病等。
[0004] 長期以來，人們主要采用化學(xué)合成物質(zhì)作為保鮮劑對柑橘進行保鮮，不同時期 使用的化學(xué)殺菌劑有所不同。硼砂、山梨酸及其鹽類等是最早使用的柑橘防腐劑；包括 苯菌靈（Benomy 1)、托布津（Thiophanate)、甲基托布津（Thiophanate methyl)、多菌靈 (Carbendazim)、噻菌靈（Thiabendazole)等的苯并咪挫類殺菌劑是70年代應(yīng)用的第二代 柑橘防腐劑；目前使用的第三代柑橘防腐劑包括抑霉唑（Imazalil)、雙胍鹽（Guazatine)、 咪鮮胺（Prochloraz)等。這些化學(xué)殺菌劑能殺死或抑制病原微生物的生長，有較好的防腐 保鮮效果。由于化學(xué)殺菌劑會造成藥劑殘留、污染環(huán)境，以及長期使用導(dǎo)致柑橘采后病菌產(chǎn) 生抗藥性等原因使得化學(xué)殺菌劑的使用安全性日益得到人們的關(guān)注。另外，隨著科技的發(fā) 展、檢測分析手段的完善和化學(xué)殺菌劑毒理的深入研宄，發(fā)現(xiàn)一些化學(xué)防腐劑有致癌或潛 在致癌、致突變、致畸的可能性。目前一些化學(xué)殺菌劑已被歐美等發(fā)達國家禁止或限制使 用，如苯菌靈和雙胍鹽類殺菌劑等己被美國環(huán)保局明令禁止使用或在部分果實產(chǎn)品上限制 使用。
[0005] 近年來，人們開始轉(zhuǎn)向天然植物源保鮮劑的研發(fā)。天然植物源保鮮劑具有高效、低 毒、低殘留、無污染、使用安全等優(yōu)點，采用其處理柑橘進行防腐保鮮將受到消費者的普遍 歡迎。另外，植物源藥劑是通過多成分，多靶點發(fā)揮抑菌作用，不易產(chǎn)生抗藥性。因此，有必 要從天然植物中尋找、開發(fā)天然植物源防腐劑對柑橘進行保鮮以減少對化學(xué)藥劑的依賴。
[0006] 唐松草屬為毛茛科下的一個屬，為多年生草本植物，多分布在我國西南，作為觀賞 或藥用。我國本屬植物約有29種可供藥用，不少種類均有清熱、治濕、發(fā)汗、止痢、治目赤 等作用。其中，水黃連是唐松草屬植物箭頭唐松草（Thalictrum simplex L.var.brevipes Hara)的根，以全草入藥，性寒，味苦，可用于黃疸、腹水，小便不利等癥；外用煎水洗眼可治 眼結(jié)膜炎。馬尾連為唐松草屬植物金絲馬尾連（Thalictrum glandulosissimum)、多葉唐 松草（Thalictrum foliolosum DC.)、昭通唐松草（Thalictrum glandulosissimum var. chaotungense)及高原唐松草（Thalictrum cultratum Wall. T. deciternatum Boivin)等 的根及根莖，性寒，味苦。馬尾連具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，主治濕熱泄瀉、痢疾黃疸、 感冒發(fā)熱、麻瘆、癰腫瘡癤、目赤腫痛等癥。
[0007] 化學(xué)成分及藥理活性研宄證明，生物堿為唐松草屬植物的主要活性成分，包括唐 松西寧、唐松西明定、尖刺堿、箭頭唐松草堿、高車前苷等生物堿類成分，具有抗病毒、抑制 腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用。（李圣各，蘇鈺清，等；唐松草屬植物中生物堿類化學(xué)成分和藥理 作用的研宄進展，《現(xiàn)代藥物與臨床》，2014, 20(3) :312-321)。文獻報道唐松草屬植物還具 有治療急性細(xì)菌性痢疾的作用（鄧曉冬，楊昭；唐松草屬植物治療細(xì)菌性痢疾30例臨床分 析，《中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》，1996, 6(8) : 65 ;田華泳；唐松草屬植物治療急性菌痢300例療效 觀察，《湖南醫(yī)學(xué)》，1986, 3 (1) : 20-21)。王海坤等人報道了馬尾連對金黃色葡萄球菌、表皮 球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌等六種病原菌的抑菌作用（王海 坤，李淑儀；馬尾連的抗菌作用，《中國民族民間醫(yī)藥雜志》，1999, 8(5) :289-290, 310)。發(fā) 明名稱"馬尾連提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用"（公開號CN101306094A)的中國發(fā)明專 利申請，公開了馬尾連水或有機溶劑提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0008] 中國發(fā)明專利申請"一種從硬唐松草屬植物中提取箭頭唐松草堿的方法（公開號 CN102516257A) "，公開了采用超臨界二氧化碳萃取從硬唐松草屬植物中提取箭頭唐松草堿 的方法。
[0009] 分析上述文獻檢索內(nèi)容，發(fā)現(xiàn)唐松草屬植物提取物的用途主要在抗腫瘤和抑制一 些人感染病原菌；對植物病原真菌的抑菌作用未見報道，尤其在抑制柑橘采后病原真菌方 面的系統(tǒng)研宄未見報道?；谏鲜鲅绣潮尘?，發(fā)明人開展了唐松草屬植物提取物的制備及 其制備物抑制柑橘采后青霉病菌、黑腐病菌和酸腐病菌的研宄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種唐松草屬植物提取物的制備方法 及其制備的唐松草屬植物提取物新用途。本發(fā)明以天然的中草藥植物為原料，制備的唐松 草屬植物提取物對柑橘采后病原真菌的抑菌效果明顯且無化學(xué)殘留，對人體無健康危害， 對環(huán)境無污染，預(yù)示著很好的應(yīng)用前景。
[0011] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0012] 一種唐松草屬植物提取物的制備方法，采用超聲波輔助提取，以乙醇為提取溶劑， 包括如下步驟：
[0013] 所述唐松草屬植物中加入唐松草屬植物重量10?40倍的質(zhì)量百分比濃度為 40%?100%的乙醇，在提取溫度為40?60°〇，提取時間為3011^11?1201^11，超聲頻率為 30?40KHz的條件下提取；過濾，回收乙醇，濃縮，即得。
[0014] 在本發(fā)明所述制備方法中，優(yōu)選的，乙醇的重量為所述唐松草屬植物重量的10? 30倍；更優(yōu)選為20?30倍。
[0015] 優(yōu)選的，乙醇的質(zhì)量百分比濃度優(yōu)選為40%?70% ;更優(yōu)選為50%?60%。
[0016] 優(yōu)選的，超聲波輔助提取時間優(yōu)選為60?120min，更優(yōu)選為60?90min。
[0017] 優(yōu)選的，超聲波輔助提取的溫度為45 °C。
[0018] 還優(yōu)選的，乙醇提取前，所述唐松草屬植物40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩 下粉末進行超聲波輔助提取。
[0019] 作為一個優(yōu)選的【具體實施方式】，本發(fā)明提供一種唐松草屬植物提取物的制備方 法，包括如下步驟：
[0020] I.將唐松草屬植物40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉末；
[0021] II.步驟I得到的粉末中加入所述唐松草屬植物重量20?30倍的質(zhì)量百分比 濃度為40 %?70 %的乙醇進行超聲波輔助提取，提取溫度為40 °C?60 °C，提取時間為 60min?120min，超聲頻率為30?40KHz ;過濾，得到醇提取液；
[0022] III.步驟II得到的醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，即得。
[0023] 作為一個更優(yōu)選的【具體實施方式】，本發(fā)明提供一種唐松草屬植物提取物的制備方 法，包括如下步驟：
[0024] I.將唐松草屬植物40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉末；
[0025] II.步驟I得到的粉末中加入所述唐松草屬植物重量20?30倍的質(zhì)量百分比濃 度為50%?60 %的乙醇進行超聲波輔助提取，提取溫度為45°C，提取時間為60?90min， 超聲頻率為30?40KHz ;過濾，得到醇提取液；
[0026] III.步驟II得到的醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，即得。
[0027] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述唐松草屬植物選自水黃連和/或馬尾連。
[0028] 作為一個優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明提供一種水黃連提取物的制備方法，包括如下 步驟：
[0029] I.將水黃連40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉末；
[0030] II.步驟I得到的粉末中加入所述水黃連重量20倍的質(zhì)量百分比濃度為60%的 乙醇進行超聲波輔助提取，提取溫度為45°C，提取時間為60min，超聲頻率為30?40KHz ; 過濾，得到醇提取液；
[0031] III.步驟II得到的醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，即得。
[0032] 作為另一個優(yōu)選的實施方法，本發(fā)明提供一種馬尾連提取物的制備方法，具體包 括如下步驟：
[0033] I.將馬尾連40?50°C烘干，粉碎后過40目篩，取篩下粉末；
[0034] II.步驟I得到的粉末中加入所述馬尾連重量30倍的質(zhì)量百分比濃度為50%的 乙醇進行超聲波輔助提取，提取溫度為45°C，提取時間為90min，超聲頻率為30?40KHz ; 過濾，得到醇提取液；
[0035] III.步驟II得到的醇提取液，減壓回收乙醇至無醇味，即得。
[0036] 本發(fā)明的另一個目的，在于提供上述制備方法制備得到的唐松草屬植物提取物； 特別是水黃連提取物和馬尾連提取物。
[0037] 本發(fā)明還有一個目的，在于提供唐松草屬植物或唐松草屬植物提取物在制備用于 防治柑橘采后病原菌的藥物組合物和/或柑橘采后保鮮劑中的用途；優(yōu)選的，所述唐松草 屬植物提取物通過本發(fā)明所述制備方法制備得到。
[0038] 所述柑橘采后病原菌選自意大利青霉（Penicillium italicum)，柑橘酸腐病菌 (Geotrichum candidum)和柑橘黑腐病菌（Alternaria citri)中的一種或幾種。
[0039] 由此，本發(fā)明提供一種防治柑橘采后病原菌的藥物組合物，包括本發(fā)明所述制備 方法制備得到的唐松草屬植物提取物。
[0040] 另外，本發(fā)明還提供一種柑橘采后保鮮劑，包括本發(fā)明所述制備方法制備得到的 所述唐松草屬植物提取物。
[0041] 本發(fā)明所述的藥物組合物或柑橘采后保鮮劑，除所述唐松草屬植物提取物外，還 可以包括可以接受的輔料，例如選自羧甲基纖維素、殼聚糖等成膜劑，選自甘油、鹿糖醋、吐 溫等的助溶劑，選自檸檬酸、丙酸鈣、山梨酸鉀或苯甲酸鈉等的防腐劑，以及適當(dāng)?shù)娜軇?，?水。
[0042] 超聲波具有"空化效應(yīng)"，"機械振動"以及"熱效應(yīng)"等特性，"空化效應(yīng)"可瞬間產(chǎn) 生幾千個大氣壓力，使提取介質(zhì)的微小氣泡壓縮、爆裂、破碎提取原料的細(xì)胞壁，加