專利名稱：生物活性親脂性化合物的水溶性組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物活性親脂性化合物的水溶性組合物、用于制備該組合物的化合物、制備該化合物和組合物的方法以及該組合物用作治療藥物和化妝品的用途。
先有技術(shù)已知多種克服這一限制的方法。一種已知方法是將親脂性化合物溶解于與水混溶性有機(jī)溶劑中，例如乙醇或丙二醇。親脂性化合物但是當(dāng)這樣的溶液與血液或胃腸液混合時(shí)，親脂性化合物通常沉淀為固體或液體乳濁液，導(dǎo)致生物利用度低。此外，許多親脂性化合物沒有水混溶性有機(jī)溶劑。另一種方法是將親脂性化合物摻入不同組合物中，該組合物通常是不均一多相乳濁液，包含油和溶劑以及表面活性劑。這些組合物可以提高所述化合物的生物利用度，而不能明顯提高其在水介質(zhì)中的溶解度，但是這些組合物一般只適用于特殊給藥形式，通常為局部應(yīng)用。當(dāng)必須通過攝入或注射給予所述化合物而且通常水溶液或水溶性固體組合物是唯一可接受的給藥形式時(shí)，這種組合物幾乎沒有治療應(yīng)用價(jià)值，這種組合物也可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)。
先有技術(shù)也已知幾種制備生物活性親脂性化合物的均一水溶液的方法。一種方法是制備比原化合物水溶性更好的親脂性化合物衍生物或類似物。最簡(jiǎn)單的情況是，該衍生物是所述化合物可溶性鹽，這種鹽衍生物通常保留原來的生物活性，但是這一方法僅適用于具有酸性質(zhì)或堿性質(zhì)的化合物。如果在原化合物中導(dǎo)入更多修飾以提高其溶解度，那么經(jīng)常觀察到該化合物原有的生物活性降低甚至完全喪失。
另一種加溶方法是制備在生理?xiàng)l件下能夠釋放出原生物活性化合物的水溶性衍生物。這種衍生物也稱為前體藥物，它通常提高所述化合物的生物利用度并且也可以確保靶向給予所述化合物或確保其在一段時(shí)期內(nèi)持續(xù)釋放。但是，因?yàn)檫@種方法通常依賴于原化合物中存在某些官能團(tuán)，所以不是普遍適用的。另外，通過化學(xué)修飾提高化合物的溶解度的合成方法則相對(duì)復(fù)雜而且昂貴。
另一種生物活性親脂性化合物的加溶方法取決于形成水溶性復(fù)合物。一個(gè)實(shí)例是與包含兩個(gè)相反溶解趨勢(shì)(親脂和親水)的部分的兩親化合物的復(fù)合物。這類化合物通常既溶于有機(jī)溶劑又溶于水，因此通常通過在合適的水混溶有機(jī)溶劑中溶解生物活性親脂性化合物和兩親化合物，并且用水稀釋所述溶液，可實(shí)現(xiàn)所述加溶作用。在某些情況下，通過蒸發(fā)或冷凍干燥部分或完全去除原溶液或水稀釋溶液中的有機(jī)溶劑，用合適的水介質(zhì)重新溶解濃縮物，而不溶于水的親脂性化合物不會(huì)沉淀。當(dāng)輔助性有機(jī)溶劑不能完全從所述組合物中去除時(shí)，該溶劑必須是藥學(xué)上可接受的，這就限制了適用溶劑的選擇。
需要加溶的生物活性親脂性化合物屬于不同治療藥物類型，如維生素(例如維生素E)、抗生素尤其是多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素(兩性霉素B、制霉菌素、殺念珠菌素)、自由基清除劑(例如生育酚、泛醌)、免疫抑制劑(例如環(huán)孢菌素)等。先有技術(shù)已知各種解決這些親脂性化合物以及其他親脂性化合物的溶解度問題而且提高它們的生物利用度的方法，包括形成水溶性復(fù)合物。
美國(guó)專利號(hào)5,686,110公開了不溶于水的化合物(包括兩性霉素B和環(huán)孢菌素)與端接烷基或烯烴基的聚醚聚合物的水溶性復(fù)合物，所述聚合物既溶于水又溶于有機(jī)溶劑。凍干僅在存在輔助性有機(jī)溶劑的情況下形成的所述水溶性復(fù)合物，用緩沖溶液重新溶解。重新形成的水溶液僅具有最主要決定于溶液pH的有限穩(wěn)定性。而且，分子量較高(2,000-5,000)的聚乙二醇甲醚聚合物用作優(yōu)選加溶劑，可增加使所述生物活性化合物加溶所必需的聚合物重量。
美國(guó)5,798,333公開了環(huán)孢菌素的均一水溶性組合物(濃縮物)，它能用水溶液稀釋而不會(huì)使環(huán)孢菌素發(fā)生沉淀。所述濃縮物包括溶解于親水有機(jī)溶劑(如丙二醇)的環(huán)孢菌素和水溶性維生素E(聚氧乙烯(polyoxyethanyl)-a-生育酚琥珀酸酯，TPGS)。沒有公開不合溶劑的組合物，因?yàn)樗鼈兛赡懿环€(wěn)定或不均一。
WO 96/17626公開了包含聚氧乙烯-膽甾醇癸二酸酯(polyoxyethanyl-cholesteryl sebacate)(PCS)作為加溶劑的泛醌水溶性組合物。以摩爾比約為1∶3使輔酶Q10和PCS溶解在四氫呋喃中，用水稀釋這一溶液來使泛醌尤其輔酶Q10增溶溶解。然后減壓下蒸發(fā)所述溶液至干，并用合適的緩沖溶液重新溶解。
輔酶Q10(CoQ10)是天然化合物，最近認(rèn)識(shí)到它對(duì)多種病癥具有潛在的治療作用，舉例來說包括充血性心力衰竭、肌肉萎縮(musculardistrophy)、牙周病、校正藥物性缺陷、恢復(fù)免疫力(艾滋病、變態(tài)反應(yīng))等。輔酶Q10對(duì)化妝品工業(yè)也非常重要，因?yàn)樗梢宰鳛闇p緩自然皮膚衰老過程的因子加入化妝品中。人們認(rèn)為輔酶Q10的生物活性與其以下作用有關(guān)它能夠作為抗氧化劑和自由基清除劑保護(hù)細(xì)胞膜完整性以及通過激發(fā)線粒體呼吸和產(chǎn)生ATP補(bǔ)償有病細(xì)胞不能產(chǎn)生的足夠能量而修復(fù)細(xì)胞。鑒于輔酶Q10在臨床上和美容應(yīng)用上的效力，常常需要制備具有高生物利用度和在水介質(zhì)中高溶解度的輔酶Q10。
盡管先有技術(shù)已知各種提高親脂性化合物(如輔酶Q10)在水介質(zhì)中的溶解度的方法，但是它們?cè)诤?jiǎn)便、適用范圍、制成制劑的穩(wěn)定性等方面不均衡。本發(fā)明提供一種親脂性化合物的新型加溶方法，它克服了許多先有技術(shù)的缺點(diǎn)和限制。
所述親脂性化合物優(yōu)選選自泛醌、泛醌醇、維生素、前維生素、多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素及其混合物。所述疏水部分優(yōu)選為甾醇或生育酚，而親水部分優(yōu)選為聚亞烷基二醇。在優(yōu)選實(shí)施方案中所述甾醇是膽甾醇或谷甾醇，所述生育酚是a-(+)-生育酚，所述聚亞烷基二醇是聚乙二醇或其平均分子量在600-1000之間的甲基單醚，p等于1或2，m等于0或1，n為2-18之間的整數(shù)。
按照另一方面，本發(fā)明提供水溶性組合物的制備和純化方法，所述組合物在存在或不存在輔助性有機(jī)溶劑情況下包含通式(1)的加溶劑。可通過以下步驟實(shí)現(xiàn)所述加溶作用將不溶于水的親脂性化合物和加溶劑溶解在水混溶性有機(jī)溶劑中，用水稀釋所述溶液，減壓去除所述有機(jī)溶劑和任選去除部分水?；蛘?，可將親脂性化合物和加溶劑按預(yù)定的摩爾比直接混合并加熱到它們各自熔點(diǎn)溫度以上，以便形成澄清熔融物形式的水溶性組合物，然后用水溶液將其稀釋至需要的濃度。另外，通過以下步驟可以純化所述水溶性組合物將其溶解在少量的水中，加熱所述溶液直至組合物以澄清的液相分離出來，從所述溶液中取出分離的組合物，同時(shí)保持溶液溫度基本不變。
按照再一方面，本發(fā)明提供包括親脂性化合物和式(1)的加溶劑的水溶性組合物的藥用制劑或美容制劑。
按照又一方面，本發(fā)明提供新型式(1)加溶劑及其制備和純化方法。
圖2.圖示CoQ10的各種水溶性組合物的生物利用度。
圖3.圖示PTS-CoQ10組合物對(duì)NT2細(xì)胞的細(xì)胞ATP水平的影響。
圖4.圖示PTS-CoQ10組合物對(duì)NT2細(xì)胞低氧的保護(hù)作用。
圖5.圖示PTS-CoQ10和PTS-維生素E組合物對(duì)低氧處理的NT2細(xì)胞的活力的影響。
p為1或2，m為0或1，以及n為大于或等于0的整數(shù)。
所述加溶劑的疏水部分是具有能酯化的羥基的疏水(親脂)分子并且優(yōu)選為甾醇或生育酚，尤其優(yōu)選膽甾醇、7-脫氫膽甾醇、菜油甾醇、谷甾醇、麥角甾醇、豆甾醇或a-、b-、g-或d-生育酚。膽甾醇和谷甾醇是優(yōu)選甾醇，特別優(yōu)選谷甾醇。a-(+)-生育酚和a-(±)-生育酚是優(yōu)選生育酚，特別優(yōu)選a-(+)-生育酚(維生素E)。所述疏水部分的殘基是完全疏水的分子，除了其酯化羥基之外，如膽甾醇或谷甾醇的3-b-羥基或a-生育酚的6-羥基。
所述加溶劑的親水部分是具有可酯化羥基或羧基的親水分子，并且優(yōu)選選自聚醇、聚醚、聚陰離子、聚陽離子、多磷酸、多胺、多糖、多羥基化合物、聚賴氨酸以及其衍生物。其中優(yōu)選聚醚，特別優(yōu)選聚亞烷基二醇。術(shù)語“聚亞烷基二醇”包括至少在聚合物分子的一個(gè)末端具有能酯化的羥基的低級(jí)烯化氧的聚合物，尤其是環(huán)氧乙烷的聚合物(聚乙二醇)和1，2-環(huán)氧丙烷的聚合物(聚丙二醇)，以及這種聚合物具有能酯化的羧基的衍生物。除了其酯化羥基或羧基外，如聚乙二醇分子的末端羥基，所述親水部分的殘基是完全親水的分子。
在本發(fā)明的實(shí)施中最優(yōu)選聚乙二醇。合適的聚乙二醇可以在聚合物分子的兩個(gè)末端具有游離羥基，或者具有一個(gè)低級(jí)烷基(如甲基)醚化的羥基。具有能酯化的羧基的聚乙二醇衍生物也適用于實(shí)施本發(fā)明。聚乙二醇可以商品名PEG市售獲得，通常為用平均分子量表示其特性的聚合物的混合物。優(yōu)選平均分子量約300-5000的聚乙二醇，特別優(yōu)選平均分子量約為600-1000的聚乙二醇。
可認(rèn)為式(1)的m等于1的化合物是通式HOOC-(CH2)n-COOH的鏈烷雙酸雙酯。對(duì)于實(shí)施本發(fā)明，優(yōu)選n為0-18的鏈烷雙酸，特別優(yōu)選n為6-10的鏈烷雙酸。最優(yōu)選癸二酸(n＝8)。
應(yīng)用本發(fā)明的加溶劑可使其加溶的生物活性親脂性化合物屬于各種各樣的治療藥物和化學(xué)類別，包括泛醌、泛醌醇、甾醇、維生素、前維生素和多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素。
優(yōu)選的泛醌和泛醌醇為下式的化合物其中R是而k是6-12的整數(shù)。特別優(yōu)選k等于10(分別是泛醌-50或輔酶Q10以及泛醌醇-50或還原輔酶Q10)。
膽甾醇、谷甾醇、麥角甾醇和7-脫氫膽甾醇是優(yōu)選甾醇。維生素A、D、E和K是優(yōu)選維生素，前維生素A(b-胡蘿卜素)是優(yōu)選前維生素。多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素中，優(yōu)選兩性霉素B、制霉菌素和殺念珠菌素。
本發(fā)明的水溶性組合物包括摩爾比約1∶1至1∶5的生物活性親脂性化合物和加溶劑。優(yōu)選摩爾比約為1∶2。摩爾比的上限不是關(guān)鍵的，可以使用任何超量的加溶劑。然而，這并不是所希望的，因?yàn)樵黾蛹尤軇┑牧繉⒔档驮谒鼋M合物以及其水溶液中活性成分的濃度。
在存在或不存在輔助性有機(jī)溶劑下可用兩種不同的方法制備本發(fā)明的水溶性組合物。在第一種情況下，首先將親脂性化合物和加溶劑以預(yù)定的摩爾比溶解于水混溶性有機(jī)溶劑中，然后用預(yù)定量的水稀釋該溶液，而親脂性化合物不會(huì)沉淀。然后減壓蒸發(fā)去除所述有機(jī)溶劑和水。通常首先去除揮發(fā)性有機(jī)溶劑，然后去除水，在這種情況下可以控制從所述溶液中去除的水量，以便獲得需要濃度水溶性組合物的剩余濃縮物。或者，蒸發(fā)去除有機(jī)溶劑和水，然后用合適水介質(zhì)(如水、生理鹽水或緩沖溶液)重新溶解所述蠟狀殘余物，獲得澄清的水溶液。
在上述方法中使用的有機(jī)溶劑應(yīng)該是所述親脂性化合物和所述加溶劑的良好溶劑，并且必須是與水混溶的。如果要將水溶性組合物用于藥用制劑，則該溶劑也應(yīng)該是藥學(xué)上可接受的，因?yàn)椴⒉豢偸强烧舭l(fā)去除所述溶劑。適用于實(shí)施本發(fā)明的溶劑實(shí)例有四氫呋喃、乙醇、乙二醇、丙二醇和乙酸。優(yōu)選低沸點(diǎn)的溶劑，如四氫呋喃。
所述有機(jī)溶劑的量不是關(guān)鍵的，其量可等于或大于溶解給定量親脂性化合物和加溶劑必需的溶劑最小量。用于稀釋的水量也不是關(guān)鍵的，優(yōu)選為有機(jī)溶劑量的10-25倍。
制備水溶性組合物的一種本發(fā)明替代方法包括首先以預(yù)定摩爾比制備親脂性化合物和加溶劑的混合物。然后將所述混合物加熱至親脂性化合物和加溶劑相應(yīng)熔點(diǎn)溫度以上，加熱一段時(shí)間獲得澄清熔融物，這一過程可視為所述親脂性化合物溶解在所述加溶劑中。這樣獲得的熔融物可用預(yù)定量的合適水介質(zhì)重新溶解，獲得需要濃度的澄清水溶液。優(yōu)選這種制備水溶性組合物的本發(fā)明方法，因?yàn)樗?jiǎn)單并且避免了依賴于輔助性有機(jī)溶劑的方法的限制，例如大多數(shù)應(yīng)用需要的溶劑的藥學(xué)上可接受的特性。
能夠在沒有輔助性有機(jī)溶劑存在下溶解親脂性化合物的本發(fā)明加溶劑可用于制備水溶性型生物活性化合物，尤其是輔酶Q10，因?yàn)樵诤铣珊蟛挥猛ㄟ^結(jié)晶純化，因此降低了制備這一化合物水溶性組合物的總成本。
許多本發(fā)明的組合物隨著溶液溫度的提高，其在水中的溶解度降低。這就提供了分離和/或純化這種組合物的一種替代方法。對(duì)于純化目的，將所述組合物以組合物與水的比例不超過1∶2(體積)溶解在水中，并且例如在沸騰的水浴中加熱所述溶液，加熱一段時(shí)間(通常數(shù)分鐘)達(dá)到水溶性組合物分離為液相。然后從熱溶液中分離出油相，同時(shí)保持溶液溫度基本不變，因?yàn)楫?dāng)所述溶液冷卻使所述組合物的溶解度增加，導(dǎo)致回收量減少。例如，可通過離心實(shí)現(xiàn)快速分離油相而避免溶液冷卻。
本發(fā)明的水溶性組合物具有蠟狀稠性而且很難在這樣的高濃縮形式下進(jìn)行操作。為使它們象固體一樣更加容易操作，將它們與合適的固體、水溶性添加劑如維生素C、明膠、蛋白質(zhì)添加劑或聚乙二醇組合在一起。在后一種情況下，優(yōu)選平均分子量大于約5000的聚乙二醇。所述組合物和所述添加劑的比例不是關(guān)鍵的，但通常限定其比例以避免添加劑不必要地稀釋所述活性成分。這樣的固體組合物特別適用于制備某些劑型的生物活性化合物，如片劑或顆粒劑。
本發(fā)明的組合物表現(xiàn)出良好的水溶性并且可以制備幾乎任何濃度的水溶液。由于所述濃縮溶液可以任何比例用水介質(zhì)稀釋并且在寬范圍pH條件下親脂性化合物不會(huì)沉淀，因此例如口服或非腸道給予所述組合物后，所述化合物在生理?xiàng)l件下能保持溶解。這通?？墒顾龌衔锏纳锢枚忍岣?。
本發(fā)明的組合物以及其水溶液在長(zhǎng)時(shí)間(室溫下幾個(gè)月，冷藏至少一年或冷凍可長(zhǎng)期保存)以及在寬范圍的溫度和pH條件下(溫度80℃-120℃，pH2.0-8.0)表現(xiàn)出良好穩(wěn)定性。水溶液可以重復(fù)冷凍和解凍，而沒有任何明顯降解。在高溫條件下的穩(wěn)定性可以使所述溶液容易滅菌，而不會(huì)破壞所述活性成分的溶解性。
本發(fā)明的水溶性組合物能夠容易地?fù)饺胨幱弥苿┖兔廊葜苿?，此時(shí)其特征是所述親脂性活性成分的生物利用度提高。這樣的制劑還可以包含其他活性成分和/或藥學(xué)上或美容上可接受的添加劑或載體，包括溶劑、佐劑、賦形劑、甜味劑、填充劑、著色劑、調(diào)味劑、潤(rùn)滑劑、黏合劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑以及其混合物。所述制劑可以為適合局部施用(例如霜?jiǎng)⑾磩?、凝膠、軟膏、皮膚粘貼片)、口服給藥(例如膠囊劑、片劑、caplet、顆粒劑)或非腸道給藥(例如栓劑、無菌溶液)的形式。水、微酸化水、林格溶液(Ringer’s solution)和等滲氯化鈉溶液屬于可注射給藥的可接受載體和溶劑。
在水溶性組合物以及藥用制劑和美容制劑中，特別值得注意的是包含輔酶Q10的制劑。輔酶Q10是天然化合物，最近認(rèn)識(shí)到它對(duì)與自由基和氧化劑引起的線粒體機(jī)能障礙和/或組織損傷相關(guān)的多種疾病和病癥具有潛在的治療作用。這些病癥包括但不限于心血管疾病(如充血性心力衰竭)，肌肉病癥(如肌肉萎縮)，線粒體性腦脊髓病(即MELAS、KSS)，神經(jīng)變性病癥(如早老性癡呆、帕金森氏病、亨廷頓舞蹈病)，恢復(fù)由藥物或感染引起的免疫缺陷(愛滋病、變態(tài)反應(yīng)、癌癥)。特別引人注目的是臨床應(yīng)用輔酶Q10可使由局部缺血/再灌注引起的組織損傷(例如中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷、血管成形術(shù)、器官移植、普通外科手術(shù))最小化。另一個(gè)引人注目的方面是在治療中應(yīng)用輔酶Q10作為輔助劑，例如用作感染性疾病的輔助劑，與降膽固醇藥物聯(lián)合用于治療高膽固醇血癥，或與化學(xué)治療藥物聯(lián)合用于治療癌癥。輔酶Q10作為減緩皮膚自然老化進(jìn)程的物質(zhì)引起化妝品工業(yè)的極大興趣。含有多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素(如兩性霉素B、制霉菌素或殺念珠菌素)的水溶性組合物用于由真菌感染(包括免疫損傷患者的真菌感染)的治療特別引人注目。
按照本發(fā)明的生物活性親脂性化合物的水溶性組合物形式可以給予需要預(yù)防或治療的溫血?jiǎng)游锾貏e是人。用于治療上述疾病或病癥的生物活性親脂性化合物的劑量以及其水溶性組合物的相應(yīng)劑量根據(jù)給藥方式、給予對(duì)象的年齡、性別、體重以及所治療的病癥而不同，而且最終由主管醫(yī)生或獸醫(yī)決定。主管醫(yī)生或獸醫(yī)決定的其水溶性組合物形式的生物活性化合物量在本發(fā)明中稱為“治療有效量”。
人們認(rèn)為輔酶Q10的生物活性與其以下作用有關(guān)能夠起抗氧化劑和自由基清除劑作用，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性的能力，以及通過激發(fā)線粒體呼吸和產(chǎn)生ATP補(bǔ)償有病細(xì)胞不能產(chǎn)生的修復(fù)細(xì)胞的足夠能量。鑒于輔酶Q10在臨床和美容應(yīng)用方面的效力，常常需要高生物利用度和在水介質(zhì)中高溶解度的輔酶Q10制劑。
迄今提出的大多數(shù)輔酶Q10藥用制劑和美容制劑存在多種缺陷，例如所用成分當(dāng)非腸道給藥時(shí)引起不需要的免疫反應(yīng)或當(dāng)口服給藥時(shí)引起胃失調(diào)。部分制劑僅在窄范圍的pH值時(shí)穩(wěn)定，而大部分制劑的主要問題是活性成分(輔酶Q10)的生物利用度很低。具體來說，沒有用于靜脈內(nèi)給藥的輔酶Q10可靠制劑，也沒有一般適用于局部應(yīng)用、口服和非腸道給予途徑的制劑。包含輔酶Q10的本發(fā)明水溶性組合物沒有上述缺點(diǎn)并且能夠摻入到藥用制劑中，所述藥用制劑適用于局部給藥、口服和非腸道的所有給藥途徑，它們是穩(wěn)定的而且其特征在于所述活性成分的溶解度和生物利用度良好。
本發(fā)明還提供以下通式的新型加溶劑{X-OOC-[(CH2)n-COO]m}p-Y (1)其中X表示疏水部分的殘基，Y表示親水部分的殘基，p為1或2，m為0或1，以及n為大于或等于0的整數(shù)，前提是-當(dāng)p和m都等于1并且疏水部分是膽甾醇時(shí)，n大于4而不等于8，以及-當(dāng)p和m都等于1并且疏水部分是a-(+)-生育酚時(shí)，n不等于2，以及其中X和Y含義同上。
先有技術(shù)已知限制條件排除的化合物，具體有聚氧乙烯-膽甾醇癸二酸酯(PCS)以及聚氧乙烯-a-生育酚基琥珀酸酯(TPGS)。
式(1)的化合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的合成有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。具體來說，p等于1或2而m等于1的化合物可如下制備使通式X-OH的化合物與其中Z是離去基團(tuán)的通式Z-OC-(CH2)n-CO-Z的化合物反應(yīng)，這樣獲得的產(chǎn)物與通式HO-Y-OR的化合物進(jìn)一步反應(yīng)，其中R為氫或烷基，X、Y和n如上文定義。鹵素特別是氯和溴優(yōu)選為離去基團(tuán)Z。R優(yōu)選氫和低級(jí)烷基(C1-C4)。
許多式(1)加溶劑表現(xiàn)出隨著溶液溫度的升高，其在水中的溶解度降低，這就提供了純化這些化合物的簡(jiǎn)便方法。所述純化過程的步驟和條件與以上討論的用于純化本發(fā)明的水溶性組合物的步驟和條件基本相同。
通過下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的各個(gè)方面。
實(shí)施例在整個(gè)實(shí)施例中使用下列縮寫CoQ10，CoQ10-輔酶Q10PCS-聚氧乙烯-膽甾醇癸二酸酯PTS-聚氧乙烯-a-生育酚癸二酸酯PSS-聚氧乙烯-谷甾醇癸二酸酯PTD-聚氧乙烯-a-生育酚十二碳烯雙酸酯PTSr-聚氧乙烯-a-生育酚辛二酸酯PTAz-聚氧乙烯-a-生育酚壬二酸酯TPGS-聚氧乙烯-a-生育酚琥珀酸酯上述縮寫后面的數(shù)字(例如PCS-600)表示所述化合物的聚氧乙烯部分的平均分子量。數(shù)字后面接Me縮寫(例如PTS-750Me)表示甲基封端的聚氧乙烯基部分(甲氧基聚氧乙烯基)。實(shí)施例1和2闡明本發(fā)明制備加溶劑的方法。實(shí)施例1.聚氧乙烯-谷甾醇癸二酸酯(PSS-600)的制備將0.83克b-谷甾醇(Sigma Chem.Co.，#S-5753產(chǎn)品，大約60％)在40℃溶于3ml無水甲苯中，接著加入1.33mM的三乙胺(TEA)。然后向所述b-谷甾醇-TEA溶液中加入(滴加，同時(shí)攪拌，并且在無水條件下)1.33mM溶于2ml無水甲苯的癸二酰氯。所述反應(yīng)在室溫下進(jìn)行10分鐘時(shí)，此時(shí)向反應(yīng)混合物中滴加溶于3ml無水甲苯的2mMPEG-600(聚乙二醇，Sigma Chem.Co.，#P-3390產(chǎn)品)以及2.66mMTEA。所述反應(yīng)物于室溫下繼續(xù)再攪拌下20分鐘，萃取所述反應(yīng)混合物四次，每次用3ml氯化鈉飽和溶液。減壓下去除所述甲苯，留下蠟狀殘余物。將這一產(chǎn)物溶于15ml水并且過濾去除不溶于水的物質(zhì)。凍干所述濾液，獲得0.8g淺黃色蠟狀產(chǎn)物(PSS-600)。用同樣的方法制備聚氧乙烯-膽甾醇癸二酸酯(PCS-600)。實(shí)施例2.聚氧乙烯-a-生育酚癸二酸酯(PTS-600)的制備向1.33mM溶于2ml無水甲苯的癸二酰氯中加入(在無水的條件下滴加，同時(shí)攪拌)1mM a-生育酚(Sigma Chem.Co.，#P-3251產(chǎn)品)以及1.33mM TEA的3ml無水甲苯溶液。所述反應(yīng)在室溫下進(jìn)行10分鐘，接著滴加溶于3ml甲苯的2mM PEG-600(聚乙二醇，Sigma，P-3390)以及2.66mM TEA。所述反應(yīng)物于室溫繼續(xù)恒速攪拌20分鐘。萃取所述反應(yīng)混合物四次，每次用3ml氯化鈉飽和溶液，減壓下蒸發(fā)甲苯。將所述產(chǎn)物溶于5ml水，在減壓下與水共同蒸發(fā)進(jìn)一步去除殘余的甲苯。凍干獲得最終的蠟狀產(chǎn)物(1.15g)。
應(yīng)用己二酰二氯、辛二酰二氯、壬二酰二氯或十二烷二酰二氯將聚乙二醇(平均分子量為1000，Sigma Chem.Co.，#P-3515產(chǎn)品)或聚乙二醇甲醚(平均分子量為750，Sigma Chem.Co.，#P-7018產(chǎn)品)與a-生育酚連接獲得其他加溶劑(表1)。它們是按照實(shí)施例2的方法合成的，應(yīng)用MALDI-TOF技術(shù)經(jīng)質(zhì)譜分析證實(shí)其特性。實(shí)施例3提供合成加溶劑的分子特性。實(shí)施例3.MALDI-TOF質(zhì)譜分析獲得的加溶劑的分子特性表1.合成加溶劑的分子量
實(shí)施例4闡明加溶劑的純化方法。
表6表明了用于水溶性泛醌醇(還原型輔酶Q10)組合物的原料量。首先用下列方法制備泛醌醇。將0.3g輔酶Q10和0.2g鋅粉懸浮于2.5ml冰醋酸中。將所述混合物置于50℃水浴中并不時(shí)振蕩大約15分鐘。用2.5ml水稀釋所述反應(yīng)混合物并用5ml己烷萃取兩次。合并正己烷萃取物，用2.5ml水沖洗2次，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，在減壓下蒸發(fā)，最后在高真空下蒸發(fā)。將獲得的白色蠟狀泛醌醇?xì)堄辔锱c0.9g TPGS混合并加熱至60℃-80℃，直至所述混合物熔化并變得澄清。當(dāng)用水重新溶解時(shí)，形成不透明的溶液。當(dāng)在氬氣下密封并冷凍時(shí)，該組合物保持不變長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月。以表6中給出比例與丙二醇混合可以提高該組合物的水溶解度。該組合物的水性(水和鹽水)溶液是穩(wěn)定的并可氬氣下密封后冷凍保存。實(shí)施例10和11闡明了水溶性維生素E和b-胡蘿卜素組合物的制備。實(shí)施例10.水溶性維生素制劑的制備表7.維生素E和b-胡蘿卜素水溶性組合物的成分
表7表明了用于通過直接混合法(實(shí)施例5)或用輔助性溶劑的幫助(實(shí)施例7)制備各種組合物的原料量。發(fā)現(xiàn)加溶劑和維生素E的最適比例為2∶1 mol/mol或6∶1 w/w。所述濃縮組合物可冷藏保存長(zhǎng)達(dá)2年。水溶液(水或鹽水)也是穩(wěn)定的并可冷凍保存。實(shí)施例11闡明按照本發(fā)明所述組合物的分離、濃縮和滅菌方法。實(shí)施例11.水溶性組合物的分離、濃縮和滅菌按照本發(fā)明，可以應(yīng)用兩種方法制備親脂性化合物的水溶性組合物(i)親脂性化合物和加溶劑可以直接混合并熔化在一起，或(ii)首先將二者溶于水混溶性輔助溶劑，使所述溶液與水混合，蒸發(fā)去除所述溶劑和過量的水。所獲得的組合物在室溫下可溶于水介質(zhì)，但在溫度高于大約80℃時(shí)不溶于水。當(dāng)加熱時(shí)它們從水中沉淀出來，但當(dāng)冷卻時(shí)恢復(fù)為溶液。這就為其分離、濃縮和滅菌提供了一個(gè)簡(jiǎn)單、有效而廉價(jià)的方法。
一般將所述組合物的水溶液(TPGS-輔酶Q10除外，實(shí)施例9)在沸水浴中加熱大約2分鐘或直至形成可見沉淀。以2000xgg快速離心加速所述沉淀物從熱水中分離。傾析水相，所獲得的蠟狀透明組合物冷藏保存于密閉小瓶中。它可保持穩(wěn)定至少8個(gè)月并能進(jìn)一步用水介質(zhì)(水、鹽水或緩沖液)稀釋。當(dāng)冷藏時(shí)，這些溶液至少3年是穩(wěn)定的。所述沉淀/溶解過程是可逆的，重復(fù)數(shù)次可提高所述組合物的稀釋性水溶液的穩(wěn)定性。如果在保存期間發(fā)生所述組合物沉淀，那么可以通過施加以上加熱/離心循環(huán)恢復(fù)其溶解性。所述組合物也可適用于注射，因?yàn)樗龇椒捎糜谒鼈兊臏缇?。?shí)施例12闡明了包含輔酶Q10的干粉組合物的制備。實(shí)施例12.輔酶Q10干粉組合物的制備表8.輔酶Q10干粉組合物的成分
表8表明了用于制備輔酶Q10干粉組合物的原料量。將以上成分的水溶液混合并凍干。所獲得的干粉制品可以壓成片，所壓制的片劑保持穩(wěn)定和水溶性。實(shí)施例13闡明了包含多種成分的干粉組合物的制備。實(shí)施例13.包含輔酶Q10、維生素E和維生素C的組合物的制備表9.水溶性復(fù)合組合物的成分
表9表明了使用的原料量。將以上成分的水溶液合并并凍干。所獲得的干粉產(chǎn)物可以壓成保持穩(wěn)定和水溶性的片劑。實(shí)施例14證實(shí)所述加溶劑無毒性。實(shí)施例14.體外毒性研究。
制備加溶劑儲(chǔ)液(1mg/ml PBS)，并將其以制成最終濃度為200、100和50mg/ml培養(yǎng)基的需要量直接加入淋巴細(xì)胞Jurkat細(xì)胞培養(yǎng)物和成神經(jīng)細(xì)胞瘤NT2細(xì)胞培養(yǎng)物，以錐蟲藍(lán)排阻分析測(cè)定細(xì)胞活力。測(cè)定結(jié)果見

圖1。
除了市售TPGS之外，在體外當(dāng)向細(xì)胞培養(yǎng)物加入200mg/ml以內(nèi)的本發(fā)明加溶劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和活力都沒有不利影響。此外，當(dāng)以20mg/kg體重以下的濃度給予Sprague Dawley大鼠包含CoQ10和PTS、PCS或PSS的組合物時(shí)，沒有觀察到毒性，見圖2。
盡管沒有理論能解釋在所用實(shí)驗(yàn)性范例中觀察到的TPGS毒性，但是應(yīng)該進(jìn)一步研究其用作藥用制劑中的加溶劑的效用，并且應(yīng)該謹(jǐn)慎使用。實(shí)施例15闡明了水溶型CoQ10的生物利用度提高。實(shí)施例15.水溶型輔酶Q10的生物利用度以6mg/kg體重的劑量管飼法給予300-350g雄性Sprague Dawley大鼠水溶或油溶組合物形式的CoQ10。收集血樣，應(yīng)用我們開發(fā)用于分析生物樣品中的CoQ10的HPLC方法(Graves等，人血漿和其他生物樣品中的輔酶Q10含量的分析。載于Free Radicals and AntioxidantProtocols，D.Armstrong編著，Humana Press，第353-365頁，1998年)，測(cè)定血漿中的CoQ10含量。
簡(jiǎn)要地說，取0.1ml血漿樣品或裂解細(xì)胞樣品(實(shí)施例15和16)與0.33ml的1-丙醇混合，渦旋攪拌30秒并置于室溫1分鐘。然后加入0.86ml正己烷，將所述樣品劇烈渦旋攪拌30秒，離心實(shí)現(xiàn)相分離并沉淀變性蛋白。收集正己烷和1-丙醇以及所包含的CoQ10組成的上相，并在氬氣下蒸發(fā)至干。將保留的干燥殘余物再溶解于60ml乙醇和2ml H2O2中，以便使所有的CoQ10都轉(zhuǎn)變?yōu)槠溲趸问健Ｓ靡掖肌眉状紴?0∶20(v/v)的流動(dòng)相以1ml/分鐘的流速在Supelcosil LC-18-DB柱(5mm粒度，30cm×4.0mm內(nèi)徑，Supelco)上通過反相色譜分析樣品等分。監(jiān)測(cè)275和290nm處的吸光度。
應(yīng)用CoQ10標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線和Beckman系統(tǒng)黃金軟件定量數(shù)據(jù)。根據(jù)測(cè)量的分析樣品的峰面積計(jì)算輔酶Q10量。根據(jù)在275nm處其消光系數(shù)＝14,200的分光光度法測(cè)定的CoQ10乙醇溶液濃度，制備校準(zhǔn)曲線。CoQ10乙醇溶液可于-20℃保存在密閉琥珀瓶中。
圖2中的數(shù)據(jù)表明，與油制劑相比，口服給予CoQ10水溶性組合物的生物利用度明顯提高(1.5-2倍)。重要的是，當(dāng)給予水溶性型CoQ10時(shí)，吸收動(dòng)力學(xué)快得多(大約3小時(shí)達(dá)到血漿水平峰值)并且達(dá)到的最高血漿水平也高得多(2倍)。實(shí)施例16闡明細(xì)胞能夠攝入(internalize)水溶型CoQ10實(shí)施例16.細(xì)胞內(nèi)攝取的輔酶Q10設(shè)計(jì)以下實(shí)驗(yàn)來證實(shí)人角質(zhì)形成細(xì)胞攝入外源性CoQ10的能力。用SFM(不含血清培養(yǎng)基，Gibco BRL，產(chǎn)品目錄號(hào)10724)培養(yǎng)基培養(yǎng)人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞(ATCC CRL-8858)培養(yǎng)，SEM培養(yǎng)基中加有0.2ng/ml的EGF(表皮生長(zhǎng)因子)、30mg/ml的牛垂體提取液和不同濃度的CoQ10，其中CoQ10以水溶性PCS制劑形式直接加入所述組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中。所述細(xì)胞在這樣的條件下培養(yǎng)長(zhǎng)達(dá)3天，然后收獲并充分洗滌細(xì)胞。將所述細(xì)胞(大約每個(gè)樣品1-3×106)重新懸浮于ddH2O，在冷凍和融化循環(huán)后滲透震蕩破壞所述細(xì)胞。用丙醇/正己烷溶劑混合物萃取CoQ10，以上述HPLC測(cè)定其含量。
為了獲得線粒體部分，用包含250mM蔗糖、50mM Tris-HCl pH7.4、5mM氯化鎂和1mM EDTA的緩沖液勻漿細(xì)胞。在4℃下以800g離心均漿10分鐘。收集上清液，再在4℃下以10,000g離心10分鐘。將為粗制線粒體部分的沉淀物重新懸浮于100ml ddH2O中，用丙醇/己烷溶劑混合物萃取并處理用于CoQ10分析。表10.培養(yǎng)的人角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)攝入的CoQ10
表10中概括的數(shù)據(jù)表明人角質(zhì)形成細(xì)胞從組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的水性環(huán)境中攝入了CoQ10。在實(shí)驗(yàn)的3天期間，在分別用PCS制劑重新懸浮的包含10mg/ml和100mg/ml CoQ10的培養(yǎng)基中，細(xì)胞內(nèi)CoQ10含量分別增長(zhǎng)了大約2倍和5倍。表11.角質(zhì)形成細(xì)胞中增加的線粒體CoQ10含量
表11所示結(jié)果證實(shí)在存在10mg/ml的CoQ10下培養(yǎng)3天的細(xì)胞的線粒體部分中的CoQ10含量顯著增加?？梢灶A(yù)期，除了其作為脂溶性抗氧化劑作用之外，特別是線粒體中的CoQ10含量提高將增強(qiáng)對(duì)于細(xì)胞活力至關(guān)重要的產(chǎn)能呼吸鏈的效率。實(shí)施例17用來證實(shí)CoQ10增強(qiáng)線粒體呼吸鏈產(chǎn)生更多ATP的效率的能力。實(shí)施例17.輔酶Q10對(duì)人NT2細(xì)胞中的細(xì)胞ATP含量的影響用DME培養(yǎng)基(GiBco BRL)培養(yǎng)人畸胎瘤NT2(Stratagene，SanDiego，CA)，在所述EME培養(yǎng)基中加有10％FBS(胎牛血清)和以水溶性PTS制劑形式直接加入所述組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的10mg/ml的CoQ10。每隔24小時(shí)收獲所述細(xì)胞，重新懸浮于包含0.02M甘氨酸、0.05M硫酸鎂、0.004 M EDTA，pH7.4的緩沖液中并等分為100μL樣品。
應(yīng)用熒光素-熒光素酶生物發(fā)光分析(Sigma，St.Louis MO)測(cè)定ATP含量。熒光素酶催化熒光素脫羧和ATP水解產(chǎn)生焦磷酸鹽和氧化熒光素。這些反應(yīng)導(dǎo)致在560nm處發(fā)光。發(fā)光強(qiáng)度和ATP濃度成正比。通過將100μL樣品和75μL的0.5mg/ml熒光素酶-熒光素溶液混合進(jìn)行所述ATP分析。用Beckman LS 3801閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)發(fā)出的光。制備10-100pmol ATP范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。ATP水平表示為pmol ATP/μg蛋白。
圖3顯示PTS-CoQ10組合物對(duì)NY2細(xì)胞的細(xì)胞ATP水平的影響。在存在水溶性PTS-CoQ10制劑下培養(yǎng)3天的細(xì)胞中ATP水平可重復(fù)性升高。數(shù)據(jù)點(diǎn)代表三個(gè)獨(dú)離實(shí)驗(yàn)的平均值+/-SEM。實(shí)施例18表明CoQ10對(duì)人成神經(jīng)細(xì)胞瘤NT2細(xì)胞低氧的保護(hù)作用。實(shí)施例18.對(duì)低氧的保護(hù)作用將人畸胎瘤NT2(Stratagene，San Diego，CA)接種到25cm2組織培養(yǎng)瓶中(密度為0.3×106細(xì)胞/ml)，在加有10％FBS和存在或沒有直接加入組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的10mg/ml的CoQ10-PTS制劑的DME培養(yǎng)基(GiBco BRL)中培養(yǎng)細(xì)胞3天。將所述培養(yǎng)瓶密閉在含有GasPak Plus氣體發(fā)生器封套的無氧室中，在無氧條件下用不含葡萄糖的培養(yǎng)基于37℃溫育17.5小時(shí)。低氧處理后將細(xì)胞再放入完全培養(yǎng)基(含有和不含CoQ10或維生素E)中，立即分析(時(shí)間0)或在含氧量正常的條件下再培養(yǎng)24小時(shí)。利用錐蟲藍(lán)排阻分析測(cè)定細(xì)胞活力。結(jié)果見圖4。
CoQ10對(duì)NT2細(xì)胞低氧的保護(hù)作用是顯而易見的。與沒有接受CoQ10的細(xì)胞相比，大約不足50％的用PTS-CoQ10預(yù)處理3天的細(xì)胞在24小時(shí)恢復(fù)期間因低氧死亡。實(shí)施例19表明CoQ10與維生素E在保護(hù)細(xì)胞對(duì)低氧引發(fā)的細(xì)胞死亡中具有等同的作用。實(shí)施例19.輔酶Q10和維生素E抗氧化劑作用的比較將人畸胎瘤NT2(Stratagene，San Diego，CA)接種到25cm2組織培養(yǎng)瓶中(密度為0.3×106細(xì)胞/ml)，用加有10％FBS和存在或不存在直接加入組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的10mg/ml的CoQ10-PTS制劑或相同濃度的維生素E-PTS制劑補(bǔ)充的DME培養(yǎng)基(GiBco BRL)培養(yǎng)3天。將所述培養(yǎng)瓶密閉在含有Gas Pak Plus氣體發(fā)生器封套的無氧室中，在該無氧條件下用不含葡萄糖的培養(yǎng)基于37℃溫育17.5小時(shí)。低氧處理后將細(xì)胞再放入完全培養(yǎng)基(含有和不含CoQ10或維生素E)中，立即分析(時(shí)間0)或在含氧量正常的條件下再培養(yǎng)24小時(shí)。用錐蟲藍(lán)排阻分析測(cè)定細(xì)胞活力。結(jié)果總結(jié)于圖5。
在CoQ10和維生素E處理的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)性范例中，在24小時(shí)恢復(fù)期間因低氧致死的百分率減少一半。這說明CoQ10對(duì)低氧引起的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用與已經(jīng)證實(shí)有效的抗氧化劑維生素E相當(dāng)。實(shí)施例20證實(shí)CoQ10對(duì)局部缺血/再灌注引起的組織損傷的保護(hù)作用。盡管使用的動(dòng)物模型是人中風(fēng)的實(shí)驗(yàn)性范例，但其數(shù)據(jù)與任何因?yàn)榫植咳毖?再灌注引起組織損傷的應(yīng)用是相關(guān)的。實(shí)施例20.CoQ10對(duì)局部缺血/再灌注的保護(hù)作用短期血管閉塞后很容易出現(xiàn)中風(fēng)特征性損傷、體重為225-250g的成年自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)用于大腦中動(dòng)脈閉塞模型(MCAO)。麻醉大鼠，將右側(cè)頸總動(dòng)脈永久性閉合。暴露頭顱骨，通過其穿過頭顱骨的2mm棘孔找到右側(cè)大腦中動(dòng)脈(MCA)。在解剖顯微鏡下應(yīng)用一個(gè)微夾夾住MCA血管。閉合60分鐘之后，去除血管夾，閉合傷口。用與加熱燈連接的直腸熱敏電阻探針來保持整個(gè)手術(shù)和恢復(fù)期間的體溫于37.5℃。去除血管夾后立即靜脈(頸靜脈)給予CoQ10(6mg/kg)。利用四唑鎓鹽TTC(2，3，5-三苯基，2H-四唑鎓(tetrazolium)鹽酸鹽)定量測(cè)定60分鐘局部缺血的影響。
為了定量測(cè)定組織損傷，將大鼠大腦切成5mm冠狀切片，用2％TTC染色過夜。用乙腈萃取著色的甲并用分光光度法在480nm處測(cè)定其濃度。結(jié)果表示為OD/g的干燥腦組織。表12.CoQ10對(duì)局部缺血引起的腦損傷的保護(hù)作用
四唑鎓鹽是線粒體呼吸酶的組織化學(xué)指示劑并用于檢測(cè)組織梗塞。TTC與完整的氧化酶系統(tǒng)(如琥珀酸鹽和NADH脫氫酶)反應(yīng)，接受電子還原為將組織染成紅色的有色甲。相反，沒有完整氧化酶系統(tǒng)的線粒體不可逆性損傷不能還原TTC，因而組織不被染色保持白色。因此，組織越健康OD讀數(shù)越高。比較模擬手術(shù)對(duì)照大鼠大腦(大約1250 OD/g組織)和實(shí)驗(yàn)大鼠大腦(898.3 OD/g組織)獲得的值。CoQ10對(duì)局部缺血引起的組織損傷的保護(hù)作用是顯而易見的，TTC含量較高，所以局部缺血后接受CoQ10-處理的大鼠大腦獲得較高OD讀數(shù)。實(shí)施例21闡明了在化妝品中水溶性CoQ10組合物的適用性和適合性。實(shí)施例21.水溶性CoQ10組合物的化妝品表13.化妝品的制備
表13表明了用于制備包含CoQ10的護(hù)膚產(chǎn)品的原料量，所述護(hù)膚產(chǎn)品按照以下方法組合。將兩種成分在室溫下混合在一起直至形成均一的組合物霜，其中輔酶Q10保持水溶性。這一點(diǎn)通過向0.2ml的霜?jiǎng)悠分屑尤胨畞頇z測(cè)(總體積為1ml)。將所述樣品劇烈渦旋攪拌，離心分離各相。水相因?yàn)楹腥芙獾腃oQ10仍然為黃色。所述霜?jiǎng)┦欠€(wěn)定的，甚至在室溫下幾個(gè)月后都沒有觀察到相分離。
這些化妝品在20位健康志愿者試驗(yàn)一年時(shí)間。所有人都述說皮膚狀況得到改善，即皮膚彈性增加和皺紋減少。沒有人報(bào)告副作用。實(shí)施例22闡明了包含多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素的水溶性組合物的制備。實(shí)施例22.抗真菌抗生素組合物的制備表14.抗真菌抗生素水溶性制劑的制備
表14表明了用于制備抗生素水溶性組合物的原料量。將抗生素和加溶劑分別溶于適當(dāng)?shù)娜軇┗蛉軇┗旌衔镏小⑺鋈芤夯旌?，用水稀釋。在減壓下蒸發(fā)去除溶劑和過量的水。當(dāng)冰醋酸用作溶劑時(shí)，與水共同蒸發(fā)重復(fù)數(shù)次。通過蒸發(fā)溶劑獲得含有20mg/ml抗生素的組合物。它們是穩(wěn)定的并可冷凍保存很長(zhǎng)時(shí)間(8個(gè)月)。這些組合物也可分離，用實(shí)施例11所述的技術(shù)進(jìn)一步濃縮和滅菌。最終的產(chǎn)品是蠟狀澄清沉淀物，最好在氬氣下密閉在小瓶中冷凍保存(長(zhǎng)達(dá)8個(gè)月)。它們能以水介質(zhì)(水或鹽水)重新溶解為需要濃度。
權(quán)利要求
1.一種水溶性組合物，它包含生物活性親脂性化合物和下述通式的加溶劑{X-OOC-[(CH2)n-COO]m}p-Y其中X為疏水部分的殘基，Y為親水部分的殘基，p為1或2，m為0或1，以及n為大于或等于0的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述生物活性親脂性化合物選自泛醌、泛醌醇、維生素、前維生素、多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素及其混合物。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述疏水部分選自甾醇、生育酚及其衍生物。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述疏水部分選自膽甾醇、7-脫氫膽甾醇、菜油甾醇、谷甾醇、麥角甾醇、豆甾醇以及a-、b-、g-和d-生育酚。
5.權(quán)利要求的4的組合物，其中所述親水部分選自聚醇、聚醚、聚陰離子、聚陽離子、多磷酸、多胺、多糖、多羥基化合物、聚賴氨酸及其衍生物。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述親水部分是聚醚。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述聚醚選自聚乙二醇。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述聚乙二醇的平均分子量約300-約5000。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述聚乙二醇的平均分子量約600-約1000。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述疏水部分選自膽甾醇、b-谷甾醇、a-(+)-生育酚和a-(±)-生育酚，p為1或2，m為0或1，并且n為2-18的整數(shù)。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述生物活性親脂性化合物選自泛醌、泛醌醇、甾醇、維生素E、維生素A、前維生素A、維生素K、維生素D、兩性霉素B、制霉菌素、殺念珠菌素及其混合物。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述泛醌和泛醌醇具有下式結(jié)構(gòu) 其中R是 并且k為6-12的整數(shù)。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中k等于10。
14.權(quán)利要求11的組合物，它還包括藥學(xué)上可接受的水溶性添加劑。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述添加劑選自維生素C、明膠、蛋白質(zhì)添加劑、分子量約5000以上的聚乙二醇及其混合物。
16.一種制備權(quán)利要求1的水溶性組合物的方法，該方法包括以下步驟-以預(yù)定摩爾比制備所述親脂性化合物和所述加溶劑的混合物，以及-以高于其相應(yīng)熔點(diǎn)的溫度加熱所述親脂性化合物和所述加溶劑的混合物，加熱一段時(shí)間獲得澄清熔融物，以及-回收這樣獲得的水溶性組合物。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述生物活性親脂性化合物和所述加溶劑的摩爾比約1∶1-約1∶5。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述摩爾比為約1∶2。
19.一種制備權(quán)利要求1的水溶性組合物的方法，該方法包括以下步驟-將所述生物活性親脂性化合物和所述加溶劑以預(yù)定摩爾比溶解于水混溶性有機(jī)溶劑中，-用預(yù)定量的水稀釋所述溶液，以及-從所述溶液中去除所述有機(jī)溶劑和任選去除必要量的水以便獲得需要濃度的所述水溶性組合物。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述有機(jī)溶劑和水通過減壓下蒸發(fā)去除。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述生物活性親脂性化合物和所述加溶劑的摩爾比約1∶1-約1∶5。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述摩爾比為約1∶2。
23.一種純化權(quán)利要求1的水溶性組合物的方法，該方法包括以下步驟-將所述水溶性組合物以所述組合物與水不超過1∶2體積比溶于水，-加熱所述溶液一段時(shí)間，使所述水溶性組合物以液相分離出，以及-從所述熱溶液中分離所述液相，同時(shí)保持所述溶液的溫度基本不變。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述液相與所述溶液的分離是通過離心完成的。
25.一種下述通式的加溶劑{X-OOC-[(CH2)n-COO]m}p-Y其中X為疏水部分的殘基，Y為親水部分的殘基，p為1或2，m為0或1，以及n為大于或等于0的整數(shù)，前提是-當(dāng)p和m等于1并且疏水部分是膽甾醇時(shí)，n大于4并且不等于8，以及-當(dāng)p和m等于1并且所述疏水部分是(+)-a-生育酚時(shí)，n不等于2。
26.權(quán)利要求25的加溶劑，其中所述疏水部分選自甾醇、生育酚及其衍生物。
27.權(quán)利要求26的加溶劑，其中所述疏水部分選自膽甾醇、7-脫氫膽甾醇、菜油甾醇、谷甾醇、麥角甾醇、豆甾醇以及a-、b-、g-和d-生育酚。
28.權(quán)利要求27的加溶劑，其中所述親水部分選自聚醇、聚醚、聚陰離子、聚陽離子、多磷酸、多胺、多糖、多羥基化合物和聚賴氨酸。
29.權(quán)利要求28的加溶劑，其中所述親水部分是聚醚。
30.權(quán)利要求29的加溶劑，其中所述聚醚選自聚乙二醇。
31.權(quán)利要求30的加溶劑，其中所述聚乙二醇的平均分子量約300-約5000。
32.權(quán)利要求31的加溶劑，其中所述聚乙二醇的平均分子量約600-約1000。
33.權(quán)利要求32的加溶劑，其中所述疏水部分選自膽甾醇、b-谷甾醇、a-(+)-生育酚和a-(±)-生育酚，p為1或2，m為0或1，并且n為2-18的整數(shù)。
34.一種制備權(quán)利要求25的加溶劑的方法，其中m等于1，該方法包括以下步驟-將通式X-OH的化合物與其中Z是離去基團(tuán)的通式Z-OC-(CH2)n-CO-Z的化合物反應(yīng)，-將這樣獲得的化合物與其中R為氫或烷基的通式HO-Y-OR的化合物反應(yīng)，以及-回收這樣獲得的產(chǎn)物。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述離去基團(tuán)是鹵素，R是氫或C1-C4烷基。
36.權(quán)利要求34的方法，它還包括純化所述加溶劑。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述純化包括以下步驟-將所述加溶劑以所述加溶劑與水不超過1∶2的體積比溶于水，-加熱所述溶液一段時(shí)間，使所述加溶劑以液相分離出，以及-從所述熱溶液中取出所述分離的加溶劑，同時(shí)保持所述溶液的溫度基本不變。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述分離的加溶劑是通過離心從所述溶液中取出的。
39.一種藥用制劑或美容制劑，它包括藥學(xué)或美容有效量的權(quán)利要求1的水溶性組合物形式的生物活性親脂性化合物，所述制劑還包括藥學(xué)上或美容學(xué)上可接受的添加劑或載體，所述添加劑或載體選自溶劑、佐劑、甜味劑、填充劑、著色劑、調(diào)味劑、潤(rùn)滑劑、黏合劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑及其混合物。
40.權(quán)利要求39的制劑，其中所述生物活性親脂性化合物選自泛醌、泛醌醇、維生素、前維生素、多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素及其混合物。
41.權(quán)利要求39的制劑，其中所述疏水部分選自甾醇、生育酚及其衍生物。
42.權(quán)利要求41的制劑，其中所述疏水部分選自膽甾醇、7-脫氫膽甾醇、菜油甾醇、谷甾醇、麥角甾醇、豆甾醇以及a-、b-、g-和d-生育酚。
43.權(quán)利要求42的制劑，其中所述親水部分選自聚醇、聚醚、聚陰離子、聚陽離子、多磷酸、多胺、多糖、多羥基化合物、聚賴氨酸及其衍生物。
44.權(quán)利要求43的制劑，其中所述親水部分是聚醚。
45.權(quán)利要求44的制劑，其中所述聚醚選自聚乙二醇。
46.權(quán)利要求45的制劑，其中所述聚乙二醇的平均分子量約300-約5000。
47.權(quán)利要求46的制劑，其中所述聚乙二醇的平均分子量約600-約1000。
48.權(quán)利要求47的制劑，其中所述疏水部分選自膽甾醇、b-谷甾醇、a-(+)-生育酚和a-(±)-生育酚，p為1或2，m為0或1，并且n為2-18的整數(shù)。
49.權(quán)利要求48的制劑，其中所述生物活性親脂性化合物選自泛醌、泛醌醇、甾醇、維生素E、維生素A、前維生素A、維生素K、維生素D、兩性霉素B、制霉菌素、殺念珠菌素及其混合物。
50.權(quán)利要求49的制劑，其中所述泛醌和泛醌醇具有下式結(jié)構(gòu) 其中R是 并且k為6-12的整數(shù)。
51.權(quán)利要求50的制劑，其中k等于10。
52.權(quán)利要求38的制劑，它為適用于局部應(yīng)用、口服或非腸道給予的形式。
53.權(quán)利要求52的制劑，它為膠囊劑、片劑、caplet、顆粒劑、栓劑、無菌溶液劑、霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠或軟膏形式。
54.一種預(yù)防或治療與氧化性組織損傷或線粒體機(jī)能障礙有關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥的方法，該方法包括將治療有效量的權(quán)利要求1的水溶性組合物給予需要這種預(yù)防或治療的人或溫血?jiǎng)游?，所述水溶性組合物包含作為生物活性親脂性化合物的輔酶Q10和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所述病癥選自心臟疾病、局部缺血/再灌注性組織損傷、神經(jīng)變性病癥和線粒體性腦脊髓病。
56.一種預(yù)防或治療需要輔酶Q10作為輔助劑的醫(yī)學(xué)病癥的方法，該方法包括將治療有效量的權(quán)利要求1的水溶性組合物給予需要這種預(yù)防或治療的人或溫血?jiǎng)游?，所述水溶性組合物包含作為生物活性親脂性化合物的輔酶Q10和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述病癥選自高膽固醇血癥、感染性疾病和癌癥。
58.一種治療真菌感染的方法，該方法包括將治療有效量的權(quán)利要求1的水溶性組合物給予需要這種治療的人或溫血?jiǎng)游?，所述水溶性組合物包含作為生物活性親脂性化合物的多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
59.一種制備輔酶Q10水溶性組合物的方法，該方法包括以下步驟-將合成的輔酶Q10非結(jié)晶產(chǎn)品直接溶解在下述通式的加溶劑中{X-OOC-[(CH2)n-COO]m}p-Y其中X為疏水部分的殘基，Y為親水部分的殘基，p為1或2，m為0或1，n為大于或等于0的整數(shù)，以及-回收這樣獲得的水溶性組合物。
60.權(quán)利要求59的方法，它還包括純化水溶性組合物，所述純化包括以下步驟-將所述水溶性組合物以所述組合物與水不超過1∶2的體積比溶于水，-加熱所述溶液一段時(shí)間，使所述水溶性組合物以液相分離出，以及-從所述熱溶液中分離所述液相，同時(shí)保持所述溶液的溫度基本不變。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述液相與所述溶液的分離是通過離心完成的。
全文摘要
本發(fā)明公開了包括親脂性化合物和通式(1)的加溶劑的水溶性組合物,通式(1)為:{X－OOC－[(CH
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1352568SQ00808089
公開日2002年6月5日 申請(qǐng)日期2000年2月3日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月2日
發(fā)明者H·波羅維－波羅斯基, M·斯科爾斯卡－瓦爾克, P·R·瓦爾克 申請(qǐng)人:加拿大國(guó)家研究局