專利名稱：放射藥品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可以用于診斷或治療的放射藥品及其制備方法。具體而言，涉及由放射性同位素標(biāo)記的顆粒懸浮液形成的，具體用于肺閃爍攝影，以在懷疑肺栓塞時(shí)進(jìn)行診斷的放射藥品。
在本申請(qǐng)中，使用顆粒形式的產(chǎn)品，它優(yōu)選為球形和大小范圍為10-100μm。實(shí)際上，由于肺毛細(xì)管的直徑約為7μm，這種顆粒在靜脈內(nèi)注射后保持阻塞在毛細(xì)管中，從而使其能顯現(xiàn)肺血液灌注的異常。
顯然這些產(chǎn)品必須滿足一些藥學(xué)限制條件。具體而言，它們必須具有適宜的體內(nèi)降解速率，這種降解速率應(yīng)足夠緩慢以進(jìn)行成像，如通過γ射線相機(jī)成像，最小約為1小時(shí)，但同時(shí)要足夠迅速以不致于引起永久性肺毛細(xì)管阻塞，而這種阻塞會(huì)導(dǎo)致少量血栓形成。此外，這些產(chǎn)品必須對(duì)器官無毒，它們必須通過高壓滅菌法或照射法消毒，它們必須能容易地被放射性金屬標(biāo)記并能夠以穩(wěn)定標(biāo)記的試劑盒的形式包裝。
現(xiàn)有技術(shù)例如，1975年由居住瑞典的PHARMACIA AKTIEBOLAG公司所有的法國特許申請(qǐng)F(tuán)R A-2 273 516描述了采用表氯醇網(wǎng)狀化和采用99mTC的簡單混合物標(biāo)記的戊基果膠微球體用于肺灌注閃爍攝影的用途。這些顆粒存在諸多不便。事實(shí)上，僅有所用的戊基果膠羥基可以允許這種混合物標(biāo)記，而且不幸的是它們僅與锝形成的微弱的鍵并不能使標(biāo)記穩(wěn)定。此外，所述的制備方法使用大量的難以從所制的顆粒上除去的溶劑和乳化劑。而且，在這種顆粒類型上難以精確地測定和控制確切的網(wǎng)狀物形成速率。
此外，該文獻(xiàn)沒有描述與常規(guī)核醫(yī)學(xué)應(yīng)用相容的試劑盒。事實(shí)上，對(duì)于人用注射劑，需要進(jìn)行許多處理如將錫加至無菌瓶內(nèi)、離心、儲(chǔ)存懸浮液等，它們可能與無菌要求不相容。
最后，所得的溶液不穩(wěn)定，并且認(rèn)識(shí)到用于網(wǎng)狀物形成的表氯醇是非常有毒的和誘變性的。
本發(fā)明者在以下的對(duì)比實(shí)施例1和2中證明了這些微顆粒的其它缺點(diǎn)。
1975年由居住瑞典的PHARMAGIA FINE CHEMICALS AB公司所有的法國特許申請(qǐng)F(tuán)R-A-2 285 857描述了結(jié)合至不同螯合劑上并輔以放射性同位素標(biāo)記的多糖顆粒的用途。這些顆粒包含通過共價(jià)鍵結(jié)合的螯合基，在該螯合基上以螯合物類型配合物的形式結(jié)合放射性核，它主要包含至少4個(gè)，優(yōu)選至少5-8個(gè)具有5-6個(gè)基團(tuán)的圍繞金屬的環(huán)核，和兩個(gè)金屬配位原子。例如這種多糖為采用表氯醇或表溴醇化學(xué)網(wǎng)狀化的多糖。除了標(biāo)記以外，這些顆粒存在與以前在FR-A-2 273 516中所述的顆粒相同的問題。而且，該文獻(xiàn)沒有舉出任何用锝標(biāo)記的實(shí)例。而且，這種標(biāo)記方法包括在放射性元素存在下加熱至100℃，在標(biāo)記后的洗滌和干燥，它可能與上述的標(biāo)記試劑盒的思想及無菌使用的限制條件不相容。
雖然所述的標(biāo)記方法允許在相對(duì)穩(wěn)定的方式標(biāo)記顆粒，但它不能制備藥學(xué)上接受的(特別是因?yàn)樗斜砺却?和容易地用于核醫(yī)學(xué)服務(wù)的標(biāo)記試劑盒。
因此在以上特許申請(qǐng)中所述的微球體不能適應(yīng)藥學(xué)限制條件且不能被開發(fā)。而且，它們從未用于肺閃爍攝影。這種類型的產(chǎn)品從此被廢棄。
自1975年以來所進(jìn)行的許多用于完善新的放射藥品的研究關(guān)注基于白蛋白-血清的產(chǎn)品及其衍生物。這些血液產(chǎn)品實(shí)際上符合藥學(xué)限制條件并可以具體用于肺閃爍攝影。它們是目前在核醫(yī)學(xué)中所用的產(chǎn)品。例如1975年，M.A.Davis，在文獻(xiàn)″放射藥物(Radiopharmaceuticals)N.Y.″1975，第267-281頁描述了用于肺灌注研究的放射性顆粒。在該文獻(xiàn)中所述的顆粒為放射碘化的血清白蛋白(131I-MAA)的大聚集體或用锝(99mTC-HAM)標(biāo)記的變性的人血清白蛋白的微球體。優(yōu)選99mTC-HAM微球體，因?yàn)槠漕w粒大小均勻，范圍在40和50μm之間。而且，該文獻(xiàn)描述了這種放射藥物顆粒所需的一般特征。
R.Guiraud的文獻(xiàn)″大聚集體和放射活性微球體I″，Radiopharmaceuticals(放射藥學(xué))，1997，519描述了白蛋白大聚集體(MAA)和人血清白蛋白微球體。它描述了通過氯化亞錫溶液法，用锝99m標(biāo)記這種微聚集體和微粒。它還指出，微粒的最佳大小為15±5μm。它提及有機(jī)淀粉微球體。
目前，這些用99mTc標(biāo)記的人血清白蛋白大聚集體和微球體最多地用于核醫(yī)學(xué)。但是，它們存在諸多不便。例如，人白蛋白各批的差異性和品質(zhì)有時(shí)會(huì)使診斷試劑的制備困難，含有大小和數(shù)量變化的顆粒。但是主要的不便之一是其人源，它可能有嚴(yán)重的可能致命地感染HIV類型、肝炎或克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布(Creutzfeld-Jacob)疾病的問題。
因此，能夠擁有非來源于人的99mTc標(biāo)記的微球體對(duì)于確保完好的安全性是有利的。
考慮到此，最近的文獻(xiàn)A.C.Perkins，Nuclear MedicineCommunications，1999，1-3描述了代替從血液中獲得放射藥品的方法。它特別提及重組材料、合成聚合物和多肽的用途。但是，該文獻(xiàn)沒有提及多糖。
發(fā)明描述本發(fā)明的明確的目的是通過提供能容易地被標(biāo)記，如用99mTc標(biāo)記的放射藥品而克服上述現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品的不便，表現(xiàn)出非常良好的肺截留，這種藥品已被本發(fā)明者在大鼠上證明無毒、易生物降解、易消毒以及能夠被包裝成為易于標(biāo)記、穩(wěn)定和滿足這類產(chǎn)品的藥學(xué)限制條件的包裝。這些優(yōu)點(diǎn)和其它優(yōu)點(diǎn)將從以下的描述中得到證明。
本發(fā)明的放射藥品的特征在于它包含多糖，其條件是螯合基通過共價(jià)鍵結(jié)合到多糖上，且螯合基選自下式的基團(tuán)R-NH-、R-N＝和 其中，R為包含至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基，而R’為氫原子或烷基如甲基，所述的螯合基與選自锝、錸、銅、釔、鉺、鎵和釤的放射性金屬共同形成螯合物類型的配合物。
R’可用的烷基可以是直鏈或支鏈的，并優(yōu)選具有1-5個(gè)碳原子。
根據(jù)本發(fā)明，多糖可是可溶的或微粒的形式。根據(jù)本發(fā)明，多糖可以選自天然淀粉、纖維素或網(wǎng)狀戊基果膠。
例如，天然淀粉可以是玉米淀粉。
多糖可以是微粒的形式，例如微球體的形式。
本發(fā)明者還證明了本發(fā)明的改性纖維素提供良好的肺截留和比采用淀粉更慢的消除速度。因此本發(fā)明的改性纖維素還可以用于放射治療，例如用錸、銅或上述金屬之一標(biāo)記，因?yàn)樗鼘?duì)應(yīng)于使用具有更長半衰期的微粒所需的放射治療。
根據(jù)本發(fā)明，螯合基可以選自下式的基團(tuán) 其中R1、R2、R3、R4和R5獨(dú)立地為氫原子、飽和或不飽和烴基、羧基或芳基， 為可能含有一或多個(gè)雜原子的芳核，而n為1和5之間的整數(shù)。
例如，它們可以選自下式基團(tuán) 根據(jù)本發(fā)明，用于肺閃爍攝影法診斷的微粒如微球體形狀的大小可以為0.01-100μm，優(yōu)選10-50μm，而用于治療的為0.1-5μm。
根據(jù)本發(fā)明，與多糖類型的糖相比，螯合基的水平可以為0.1-50％，優(yōu)選為2-15％。
根據(jù)本發(fā)明，在放射藥品中，特別是其用于診斷時(shí)，放射性金屬可以是99mTc或鎵-67。
例如，可以是放射藥品用于肺閃爍攝影時(shí)的情況。
根據(jù)本發(fā)明，在放射藥品中，特別是其用于治療時(shí)，放射性金屬可以是錸-186或188、銅-64或67、釔-90、鉺-169或釤-153。
根據(jù)本發(fā)明，該放射藥品可以是在生理學(xué)上可接受的液體中的微球體懸浮液的形式或凍于形式。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的放射藥品的制備方法，該制備方法包括以下步驟(a)采用高碘酸鹽控制多糖的氧化，這些多糖如上述的多糖，(b)使氧化的多糖與含有式R-NH2或 的伯胺官能團(tuán)或肼反應(yīng)，(c)其中，R為包含至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基，以便以共價(jià)方式在多糖上結(jié)合式R-NH-、R-N＝或R-NH-N＝的金屬螯合基，而R’為氫原子或烷基，如甲基，(d)使包含螯合基的多糖與選自锝、錸、銅、釔、鉺和釤的放射性金屬鹽反應(yīng)。
高碘酸鹽控制的氧化可以是適于淀粉、葡聚糖或纖維素氧化并在C.L.Mehltretter、″Methods in Carbohydrate Chemistry″，第IV卷，1964所述氧化。它用于以下的實(shí)施例。
根據(jù)本發(fā)明，含有伯胺官能團(tuán)的化合物可以對(duì)應(yīng)于式NH2-(CH2)n-SH，其中n為1和5之間的整數(shù)，并且可以在步驟(b)和(c)之間包括用氫硼化鈉還原該化合物的補(bǔ)充步驟。
根據(jù)本發(fā)明，結(jié)合到多糖上的化合物對(duì)應(yīng)于下式的化合物 根據(jù)本發(fā)明，通過控制上述步驟(a)中的多糖的氧化水平來調(diào)節(jié)固定在多糖上的螯合基的水平。例如，多糖的氧化水平可以為10-50％，螯合基的水平可以2-15％。
例如為了用99mTc標(biāo)記本發(fā)明的多糖，本發(fā)明者采用兩步轉(zhuǎn)化方法。
這種方法描述為在第一步中，用高碘酸鹽控制完成多糖的氧化。這樣，氧化葡萄糖的單獨(dú)單元在下述的化學(xué)反應(yīng)圖之后在鄰位上產(chǎn)生兩個(gè)醛基 多糖的氧化水平是可以變化的和容易調(diào)節(jié)的。事實(shí)上，這種氧化反應(yīng)的產(chǎn)率接近100％并可以由加入的高碘酸鹽數(shù)量計(jì)算氧化水平。一般而言，采用低于50％的氧化水平以僅輕微地修飾大分子結(jié)構(gòu)?？梢酝ㄟ^顏色測定法容易地測定范圍為1-100％的實(shí)際氧化水平。
在第二步中，使氧化的多糖與含有通式為RNH2或RNHNH2的胺或肼基的分子反應(yīng)形成能夠螯合锝的螯合基。這樣得到席夫堿類型的配體或縮氨基硫脲。
第二步可以總結(jié)如下 其中1. R＝NR1(C＝S)SR2(從二硫肼基甲酸酯釋放出的席夫堿)2. R＝NR1(C＝S)NR2R3(縮氨基硫脲)3. R＝芳基(芳香席夫堿)4. R＝烷基(烷基席夫堿)；這種情況下的席夫堿是不穩(wěn)定的，且可以完成C＝N鍵和氫硼化物的第二還原步驟以使其穩(wěn)定，然后得到胺C-NHR鍵。
根據(jù)本發(fā)明，步驟(c)可以為在還原劑如氯化亞錫存在下將包含螯合基的多糖微球體與高锝酸鹽99mTc溶液接觸。
根據(jù)本發(fā)明，可以如此氧化微粒，例如微球體，如玉米淀粉或具有網(wǎng)狀戊基果膠基質(zhì)的淀粉，然后將其結(jié)合到含有胺或肼官能團(tuán)的分子如二硫代肼基甲酸(dithiocarbazate)S-甲酯。這種方式修飾的顆?？梢员蝗菀椎貥?biāo)記，如用99mTc標(biāo)記。
因此，本發(fā)明具體提供了從淀粉顆?；|(zhì)中制備的微粒，而這種微粒不存在上述白蛋白的諸多不便。此外，淀粉在藥典中描述為一種賦形劑，因此它是容易得到的和成本低的。
本發(fā)明的微粒還有能容易消毒如照射法消毒，和加工成容易標(biāo)記的試劑盒的優(yōu)點(diǎn)。
而且，本發(fā)明者還根據(jù)本發(fā)明證明了根據(jù)本發(fā)明中所用微粒氧化水平，可以改進(jìn)肺清除速率，而這對(duì)于采用人白蛋白微球體來說是不可能的。
本發(fā)明的另一優(yōu)點(diǎn)在于該方法操作簡單反應(yīng)條件非常溫和室溫下反應(yīng)、在含水介質(zhì)中，半定量產(chǎn)率。此外，與锝的螯合反應(yīng)是定量的，它們在室溫下發(fā)生并不經(jīng)最終的純化，從而使其能夠適應(yīng)在醫(yī)院環(huán)境中使用锝化試劑盒所需的無菌和制備簡單的要求。
本發(fā)明還提供了可以用于肺閃爍攝影的診斷試劑盒。該試劑盒包含含有本發(fā)明多糖的第一瓶，也就是說其條件是螯合基通過共價(jià)鍵結(jié)合到該多糖上，且螯合基選自下式的基團(tuán)R-NH-、R-N＝和 其中，R為包含至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基，其中的R’為氫原子或烷基如甲基。
根據(jù)本發(fā)明，多糖可以是微粒的形式，如呈微球體狀，該微粒可以是凍干的形式或處在藥學(xué)上可接受的液體中的懸浮液。
本發(fā)明試劑可以進(jìn)一步包括含有氯化亞錫的第二瓶，該氯化亞錫優(yōu)選為凍干形式，或者當(dāng)?shù)谝黄恐械亩嗵菫閮龈傻男问?，如微粒形式時(shí)，第一瓶可以另外含有凍干氯化亞錫。。
以下所述的實(shí)施例證明本發(fā)明的試劑盒穩(wěn)定至少12個(gè)月。
因此，本發(fā)明的放射藥品表現(xiàn)出作為放射藥物應(yīng)用，如用于肺灌注或放射治療的肺閃爍攝影所需的性質(zhì)。
閱讀以下關(guān)于本發(fā)明的實(shí)施例還看出其它優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例實(shí)施例1
經(jīng)10-40μm之間篩選后，制備10g藥典中的玉米淀粉懸浮液，該懸浮液含有約10％水，即在100ml水中含有0.055摩爾的葡萄糖。加入溶解在100ml水中的0.0168摩爾高碘酸鈉(0.3當(dāng)量)(NaIO4)，即3.6g。然后室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。過濾溶液并用20ml水清洗氧化淀粉5次，然后用50ml丙酮清洗2次。真空干燥淀粉得到10g 30％氧化淀粉(產(chǎn)率＝100％)。
在60ml體積比為2/1的水/乙醇混合物中制備10g 30％氧化淀粉懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的二硫代肼基甲酸S-甲酯(NH2NH(C＝S)SCH3)，M＝122，即1.34g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g的改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為5.4％g，對(duì)應(yīng)于7％的二硫代肼基甲酸S-甲酯(DTCZ)的結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7單元的二硫代肼基甲酸酯，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合14個(gè)二硫代肼基甲酸酯單元)。因此結(jié)合率為70％。如此得到10g 30％氧化并7％結(jié)合到DTCZ上的淀粉。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物將10mg的如此改性的淀粉加到青霉素類型的瓶中。然后加入4ml生理血清，隨后加入10μg SnCl2，2H2O(在0.1N Hcl中的20μl濃度為0.5mg/ml溶液)。然后加入1ml99mTcO4-溶液(5mc)。攪拌溶液15鐘并在0.22μm的微孔過濾器上過濾1ml溶液以進(jìn)行放射化學(xué)純度控制(RCP)，接著用2ml生理血清清洗濾液。將標(biāo)記微球體保留在過濾器上，相反，放射性雜質(zhì)沒有結(jié)合到微球體上而發(fā)現(xiàn)在濾液中。放射化學(xué)純度對(duì)應(yīng)于RCP＝(過濾器上的活性/總活性)×100它為98.9％。
實(shí)施例2
淀粉改性如實(shí)施例1處理，但在氧化反應(yīng)期間采用0.2當(dāng)量高碘酸鹽。得到20％氧化淀粉。
以與實(shí)施例1相同的方式進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，得到20％氧化和7％結(jié)合到DTCZ上的淀粉。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1處理。放射化學(xué)純度(RCP)為99％。
實(shí)施例3淀粉改性如實(shí)施例1處理，但在氧化反應(yīng)期間采用0.1當(dāng)量高碘酸鹽。得到10％氧化淀粉。
以與實(shí)施例1相同的方式進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，得到10％氧化和7％結(jié)合到DTCZ上的淀粉。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為98.8％。
實(shí)施例4如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的N-甲基-二硫代肼基甲酸S-甲酯(NH2N(CH3)(C＝S)SCH3)，M＝136，即1.50g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為5％，對(duì)應(yīng)于6.5％的二硫代肼基甲酸S-甲酯結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合6.5單元的二硫代肼基甲酸酯，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合13個(gè)二硫代肼基甲酸酯單元)。因此結(jié)合率為65％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為95％。
實(shí)施例5淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的4-苯基3-硫代氨基脲(NH2NH)(C＝S)NH(C6H5)，M＝167，即1.83g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為3.16％，對(duì)應(yīng)8％的4-苯基3-硫代氨基脲結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合8單元的硫代氨基脲，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合16個(gè)硫代氨基脲單元)。因此結(jié)合率為80％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為98％。
實(shí)施例6淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的4-甲基3-硫代氨基脲(NH2NH)(C＝S)NH(CH3)，M＝105，即1.15g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為2.9％，對(duì)應(yīng)于7.3％的4-甲基3-硫代半縮二氨基脲結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7.3單元的硫代氨基脲，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合14.6個(gè)硫代半縮二氨基脲單元)。因此結(jié)合率為73％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為97％。
實(shí)施例7淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的4，4-二甲基3-硫代氨基脲(NH2NH)(C＝S)N(CH3)2，M＝119，即1.30g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為3％，對(duì)應(yīng)于7.5％的4，4-二甲基3-硫代半縮二氨基脲(3-thiosemicarbazone)結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7.5單元的硫代氨基脲，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合15個(gè)硫代半縮二氨基脲單元)。因此結(jié)合率為75％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為96％。
實(shí)施例8淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的4-烯丙基3-硫代氨基脲(NH2NH)(C＝S)NH(CH2CH＝CH2)，M＝131，即1.44g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為3％，對(duì)應(yīng)于7.5％的4-烯丙基3-硫代氨基脲結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7.5單元的硫代氨基脲，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合15個(gè)硫代半縮二氨基脲單元)。因此結(jié)合率為75％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為98％。
實(shí)施例9淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的3-硫代氨基脲(NH2NH)(C＝S)NH2，M＝91，即1g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為2.9％，對(duì)應(yīng)于7.3％的3-硫代氨基脲結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7.3單元的硫代氨基脲，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合14.6個(gè)硫代半縮二氨基脲單元)。因此結(jié)合率為73％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為95％。
實(shí)施例10淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的2-氨基苯硫酚(C6H4)(NH2)(SH)，M＝125，即1.37g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為3％，對(duì)應(yīng)于7.5％的2-氨基苯硫酚結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7.5單元的氨基苯硫酚，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合15個(gè)氨基苯硫酚單元)。因此結(jié)合率為75％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為94％。
實(shí)施例11淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的2-巰基乙胺(或2-氨基乙硫醇)(NH2CH2CH2SH)，M＝91，即1g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后加入0.015摩爾氫硼化鈉(NaBH4)以還原形成的用于穩(wěn)定的席夫堿(非芳香席夫堿不穩(wěn)定)并使其反應(yīng)1小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為3.4％，對(duì)應(yīng)于8.5％的2-巰基乙胺結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合8.5單元的2-巰基乙胺，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合17個(gè)2-巰基乙胺單元)。因此結(jié)合率為85％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為95％。
實(shí)施例12淀粉改性如實(shí)施例1處理得到10g 30％氧化淀粉。在60ml水/乙醇(2/1體積)混合物中制備10g 30％氧化淀粉的懸浮液。然后加入溶于10ml乙醇的0.1當(dāng)量(0.1×0.055×2)，即0.011摩爾的2-氨基-4-巰基三唑(C4N2H)(SH)(NH2)M＝116，即1.27g。室溫下攪拌懸浮液18小時(shí)。然后過濾溶液并用20ml乙醇洗滌改性淀粉3次，隨后真空干燥。如此得到約10g改性淀粉。粉末的元素分析得出硫含量為2.8％，對(duì)應(yīng)于7％的2-氨基4-巰基三唑結(jié)合水平(100個(gè)理論上的醛官能團(tuán)結(jié)合7單元的巰基三唑，即100個(gè)葡萄糖單元結(jié)合14個(gè)巰基三唑單元)。因此結(jié)合率為75％。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1進(jìn)行。放射化學(xué)純度(RCP)為85％。
對(duì)比實(shí)施例1使用10g篩選的未經(jīng)化學(xué)轉(zhuǎn)化的藥典玉米并進(jìn)行與實(shí)施例1相同的方法以用99mTc進(jìn)行標(biāo)記。
RCP為19％。
該實(shí)施例很好地證明了這樣一個(gè)事實(shí)根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行的化學(xué)改性(螯合基固定)對(duì)于使用99mTc進(jìn)行標(biāo)記是當(dāng)然必須的。此外，與本發(fā)明產(chǎn)品相反，如果這些微粒未經(jīng)先前的化學(xué)轉(zhuǎn)化而標(biāo)記，則不可獲得持久的肺截留。因此，這些結(jié)果與FR-A-2 273 516所述的矛盾。
實(shí)施例13纖維素改性如實(shí)施例1處理，但使用篩選的10和40μm之間的纖維素。如此得到30％氧化和7％結(jié)合到DTCZ上的淀粉。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1處理。RCP為99.1％。
實(shí)施例14用硫噴妥鈉麻醉體重約200g的Sprague Dawley大鼠，并靜脈內(nèi)注射用實(shí)施例1-9和13的99mTc標(biāo)記的不同微球體溶液。各動(dòng)物在陰莖血管處接受0.2ml的溶液，即每只動(dòng)物0.2mc。然后將動(dòng)物置于γ射線相機(jī)下并在3小時(shí)內(nèi)連續(xù)拍攝靜電圖象。這樣在實(shí)現(xiàn)每個(gè)圖象15,000次拍攝后得到連續(xù)圖象。然后，人工確定有用區(qū)域以在注射15分鐘后評(píng)價(jià)不同器官上的活性。結(jié)果如下表I給出。
表I結(jié)果


因此注意到改性的微球體表現(xiàn)出非常良好的肺截留。此外，可以通過改變實(shí)施例1、2和3(氧化水平30、20和10％)中所示的氧化水平而調(diào)節(jié)肺清除速度。
使用纖維素能夠可觀地延長清除速度(實(shí)施例10，半衰期＞4小時(shí))。
對(duì)比實(shí)施例2在該實(shí)施例中，不使用天然淀粉，而使用在專利FR-A-2 273 516中所述的采用表氯醇制備的網(wǎng)狀戊基果膠微球體。
制備網(wǎng)狀淀粉微球體將8g玉米戊基果膠溶于40ml含有4g NaOH和0.15g氫硼化鈉的溶液。讓戊基果膠溶解24小時(shí)。然后以800轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速攪拌60ml液體石蠟和溶于4ml己烷1.6g大豆卵磷脂而制備乳劑。然后加入含有戊基果膠的含水相，接著加入3.2ml表氯醇。將乳劑加熱至55℃，持續(xù)4小時(shí)，然后攪拌過夜。用250ml的丙酮洗滌3次，所得的大小約為50μm的微球體，干燥，然后凍干。
用99mTc標(biāo)記如實(shí)施例1處理，但使用1mg的SnCl2，2H2O。RCP為90％。
淀粉改性如實(shí)施例1處理，但使用10g先前制備的采用表氯醇的網(wǎng)狀戊基果膠微球體。如此得到10g 30％氧化并7％結(jié)合到DTCZ上的戊基果膠微球體。
用99mTc標(biāo)記反應(yīng)物如實(shí)施例1處理。RCP為99％。
實(shí)施例15依照實(shí)施例14相同的操作方式測試對(duì)比實(shí)施例2的用99mTc標(biāo)記的網(wǎng)狀戊基果膠微球體。結(jié)果由下表II給出。
表II

注意到與FRA-2 273 516相反的是，用99mTc標(biāo)記未經(jīng)化學(xué)改性的網(wǎng)狀戊基果膠微球體，但并沒有表現(xiàn)出任何肺截留，這無疑是由于99mTc與微球體之間的微弱結(jié)合。另一方面，通過本發(fā)明化學(xué)轉(zhuǎn)化的微球體表現(xiàn)出良好的肺截留。
實(shí)施例16實(shí)施例1中制備的淀粉微球體(30％氧化并7％結(jié)合DTCZ的淀粉)用于生產(chǎn)無菌標(biāo)記試劑盒，并以備用99mTc標(biāo)記。
微球體消毒將10g微球體加到卷曲燒瓶中，然后用鈷-60光源照射。
該微球體在20小時(shí)內(nèi)接受25kGy的總劑量γ照射。
制備試劑盒以無菌方式將200mg無菌微球體加到含有20ml NaCl 9/1000的反應(yīng)器中。通過氮起泡將溶液脫氣，然后加入400μl在0.1N HCl中的濃度為0.5mg/ml的SnCl2，2H2O溶液。20只瓶每只瓶分離1ml溶液，然后凍干并置于氮?dú)夥障隆?br> 每只瓶含有10mg改性微球體10μg SnCl2，2H2O9mg NaCl用99mTc標(biāo)記將5ml TcO4(Smc)溶液以凍干形式加到瓶中并使其反應(yīng)15分鐘。
如實(shí)施例1處理。RCP為98.7％。
Kit穩(wěn)定性試驗(yàn)在不同溫度下儲(chǔ)存上述制備的標(biāo)記試劑盒，然后測試99mTc標(biāo)記反應(yīng)以評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性。所得結(jié)果由下表III給出表IIIRCP(％)

注意到該試劑盒在2和8℃之間的溫度下具有很高的穩(wěn)定性。
實(shí)施例17用硫噴妥鈉麻醉體重約200g的Sprague Dawley大鼠，然后靜脈內(nèi)注射用實(shí)施例14的99mTc標(biāo)記的不同微球體溶液。各動(dòng)物在陰莖血管處接受0.2ml的溶液，即每只動(dòng)物0.2mc。注射15分鐘后處死動(dòng)物。然后檢查不同的器官，計(jì)算各器官中的放射性測定值，從而確定各器官的活性百分率。結(jié)果由下表IV給出表IV-結(jié)果％注射15分鐘后的注射劑量

因此注意到，天然淀粉微球體和網(wǎng)狀淀粉基質(zhì)微球體，具有非常高的肺截留，而在其它器官中截留弱。因此試劑盒形式的無菌產(chǎn)品似乎完全適于用作代替白蛋白和用于放射治療的肺灌注放射藥品。
實(shí)施例18如在實(shí)施例13一樣使用30％氧化并與7％與DTCZ結(jié)合的纖維素。用錸186標(biāo)記如此改性的纖維素以例舉本發(fā)明的載體用于治療的用途。
用錸186標(biāo)記反應(yīng)物將10mg改性纖維素加到青霉素類型瓶中。然后加入2ml生理血清，隨后加入20mg檸檬酸，最后加入1mg SnCl2，2H2O(在0.1N HCl中的100μl濃度為10mg/ml的溶液)。接著將對(duì)應(yīng)于2mc活性的0.1mlReO4溶液加到燒瓶內(nèi)容物中。在100℃水浴中加熱燒瓶30分鐘。通過如實(shí)施例1的微孔過濾法測定放射化學(xué)純度(RCP)。
RCP＝92％為了證明錸186和纖維素微球體之間的結(jié)合的穩(wěn)定性，進(jìn)行體外穩(wěn)定性試驗(yàn)。
37℃下用20mg/ml的HSA(人血清白蛋白)溫育混合物。得到以下的結(jié)果

因此這些結(jié)果證明用錸186標(biāo)記纖維素微球體具有非常高的穩(wěn)定性，并證明了微球體本身相對(duì)于HSA的高穩(wěn)定性。
專家將容易地理解可以將這些結(jié)果外推至錸188的用途。
實(shí)施例19用硫噴妥鈉麻醉體重約200g的Sprague Dawley大鼠，然后注射0.2ml(0.1mc)實(shí)施例18中的用Re 186標(biāo)記的纖維素微球體溶液。
隨后將動(dòng)物置于γ射線相機(jī)下并在48小時(shí)內(nèi)記錄圖象。
然后如實(shí)施例14計(jì)算有用區(qū)域的活性。

因此這些結(jié)果證明肺水平的活性保留至少48小時(shí)，因而這類微球體可以用于治療。
最重要的臨床應(yīng)用是在注射后治療肝癌，這注射不是靜脈內(nèi)而是直接注射進(jìn)入肝動(dòng)脈(代謝放射治療)。
另一可能的應(yīng)用是將這類顆粒皮下注射進(jìn)乳腺癌。這些通過淋巴系統(tǒng)移動(dòng)的顆粒能治療受癌細(xì)胞侵害的信號(hào)結(jié)。
權(quán)利要求
1.一種包含多糖的放射藥品，其條件是螯合基通過共價(jià)鍵結(jié)合到多糖上，且螯合基選自下式的基團(tuán)R-NH-、R-N＝和 其中，R為包含至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基，而R’為氫原子或烷基或甲基，所述的螯合基與選自锝、錸、銅、釔、鉺、鎵和釤的放射性金屬共同形成螯合物類型的配合物，其中該多糖為微粒的形式。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的放射藥品，其中該螯合基選自下式的基團(tuán) 其中，R1、R2、R3、R4和R5獨(dú)立地為氫原子、飽和或不飽和烴基、羧基或芳基， 為可能含有一或多個(gè)雜原子的芳核，而n為1和5之間的整數(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的放射藥品，其中該螯合基選自下式的基團(tuán)
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之任一放射藥品，其中該多糖選自天然淀粉、纖維素和網(wǎng)狀戊基果膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-5之任一放射藥品，其中該微粒大小在0.01和100μm之間。
6.權(quán)利要求1-5之任一放射藥品，其中螯合基的水平相對(duì)于多糖型糖為0.1-50％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之任一放射藥品用于制備診斷產(chǎn)品的用途，其中該放射性金屬為99mTc或67Ga。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6之任一放射藥品用于制備藥物的用途，其中該放射性金屬為錸-186或188、銅-64或67、釔90、鉺169或釤153。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7之任一放射藥品用于制備肺閃爍攝影用產(chǎn)品的用途，其中該放射性金屬為99mTc。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-6之任一放射藥品，該放射藥品是處在生理學(xué)上可接受的液體中的微球懸浮液的形式或凍干的形式。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-6之任一放射藥品的制備方法，該制備方法包括以下步驟(a)采用高碘酸鹽氧化多糖，(b)使氧化多糖與含有式R-NH2或 伯胺官能團(tuán)或者肼反應(yīng)，其中，R為包含至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基，以便以共價(jià)方式在多糖上結(jié)合式R-NH-、R-N＝或R-NH-N＝的金屬螯合基，而R’為氫原子或烷基或甲基，(c)使包含螯合基的多糖與選自锝、錸、銅、釔、鉺和釤的放射性金屬鹽反應(yīng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中含有伯胺官能團(tuán)的化合物對(duì)應(yīng)于式NH2-(CH2)n-SH，其中n為1-5的整數(shù)，并包括在步驟(b)和(c)之間通過氫硼化鈉還原該化合物的補(bǔ)充步驟。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中結(jié)合到氧化多糖的化合物對(duì)應(yīng)于下式
14.根據(jù)權(quán)利要求11-13之任一方法，其中通過控制步驟(a)中氧化多糖的水平而調(diào)節(jié)固定在多糖上的螯合基的水平。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中多糖的氧化水平為10-50％。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中螯合基的水平為2-15％。
17.根據(jù)權(quán)利要求10-16之任一方法，其中步驟(c)是在還原劑存在下，使包含螯合基的多糖微球體和高锝酸鹽99mTcO4-溶液接觸。
18.一種可以用于肺閃爍攝影的診斷試劑盒，包括含有多糖的第一瓶，其條件是螯合基通過共價(jià)鍵結(jié)合到該多糖上，且螯合基選自下式的基團(tuán)R-NH-、R-N＝和 其中，R為包含至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基，而R’為氫原子或烷基或甲基，其中該多糖為凍干微粒的形式或處在藥學(xué)上可接受的液體上的懸浮液中。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的試劑盒，還包括含有凍干形式的氯化亞錫的第二瓶。
20.根據(jù)權(quán)利要求18的試劑盒，其中多糖的形式為在第一瓶中的凍干微粒，該第一瓶還包含凍干的氯化亞錫。
全文摘要
本發(fā)明涉及放射藥品及其制備方法。這些產(chǎn)品可以用于肺閃爍攝影或治療。它們包含多糖和式R－NH－、R－N=與式(I)的螯合基,在式(I)中,R為含有至少一個(gè)硫原子的烴基或芳基,而R’為氫原子或烷基如甲基,該螯合基與放射性金屬如锝形成螯合物類型配合物。
文檔編號(hào)A61K51/12GK1371292SQ00812300
公開日2002年9月25日 申請(qǐng)日期2000年8月23日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月1日
發(fā)明者E·彼蘭德, P·杰萊特, B·德尼佐特 申請(qǐng)人:舍林股份公司