專利名稱：變性關(guān)節(jié)病治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及變性關(guān)節(jié)病的治療和/或預(yù)防劑。
更詳細(xì)地說，含有具有基質(zhì)金屬蛋白酶抑制活性的N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺，或其非毒性鹽作為有效成分的變性關(guān)節(jié)病的治療和/或預(yù)防劑。
MMP在生理狀況下通過分解膠原、昆布氨酸、蛋白聚糖、纖連蛋白、彈性蛋白、明膠等作用于關(guān)節(jié)組織、骨組織、結(jié)締組織等的生長和組織改造。但是，病態(tài)中各組織的破壞被認(rèn)為是由于MMP調(diào)節(jié)功能的缺隕，MMP的表達(dá)或活性上升引起的。例如，有報道說MMP-1、2、3、8、9、13在變性關(guān)節(jié)病患者的軟骨破壞部位高度表達(dá)，且這些MMP與軟骨基質(zhì)的分解密切相關(guān)。[醫(yī)學(xué)進(jìn)展，182，549-553(1997)；J.Clin.Invest.，84，678-685(1989)]。
另一方面，變性關(guān)節(jié)病(osteoarthritis；以下簡稱為OA)是占中老年關(guān)節(jié)病大半的疾病，由于關(guān)節(jié)軟骨的退行性變性，引起彈性下降，磨損、裂隙等，軟骨的骨化增殖或關(guān)節(jié)周圍新骨形成被促進(jìn)，最終關(guān)節(jié)軟骨消失，骨在關(guān)節(jié)面中露出，呈現(xiàn)關(guān)節(jié)痛或關(guān)節(jié)液貯留等癥狀。作為易發(fā)病關(guān)節(jié)，有膝、胯股、脊髓、肘、肩、手指等。而且其原因不明的情況很多。作為其治療的第一選擇藥物，使用非甾性鎮(zhèn)痛劑、抗炎劑，另外，也進(jìn)行同時具有提高關(guān)節(jié)的潤滑功能和抗炎癥作用的透明質(zhì)酸制劑的關(guān)節(jié)注入療法。但是，這些都不是徹底的對癥療法，沒有確立根本的治療方法。
作為在具有MMP抑制作用的化合物的適應(yīng)癥中列舉了變性關(guān)節(jié)病的專利申請，有例如，GB2268934號說明書，EP606046號說明書。另外，有報道顯示作為MMP抑制劑的CGS-27023A(2(R)-[N-(45-甲氧苯基磺?；?-N-(3-吡啶基甲基)氨基]-3-甲基丁酰(butano)異羥肟酸·鹽酸鹽)在兔子OA模型中是有效的。[InflammRes 44，Supplement2，S117-S118，(1995)]。但是現(xiàn)在不存在具有MMP抑制作用的化合物的變性關(guān)節(jié)病的治療和/或預(yù)防劑，將其作為進(jìn)行開發(fā)的對象的具有MMP抑制活性的化合物是極其有限的。
在以上的狀況下，本發(fā)明者們積極進(jìn)行研究的結(jié)果，初次發(fā)現(xiàn)了N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺，或其非毒性鹽對變性關(guān)節(jié)病是有效的，并完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及含有式(I) 所示的N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺，或其非毒性鹽作為有效成分的變性關(guān)節(jié)病的治療和/或預(yù)防劑。
式(I)所示的N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺，作為具有MMP抑制作用的化合物，記載于WO99/19296號說明書的實(shí)施例71中。其MMP抑制活性，例如，對于MMP-2和MMP-3的IC50(nM)值分別是0.5和26。
在該說明書中記載了，含有式(I)所示化合物的氨基丁酸衍生物，由于具有MMP抑制作用，因此對于風(fēng)濕病、關(guān)節(jié)骨炎、病骨吸收、骨質(zhì)疏松癥、牙周病、間質(zhì)性腎炎、動脈硬化、肺氣腫、肝硬化、角膜損傷、癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移浸潤或增殖疾病、自身免疫疾病(克羅恩氏病、斯耶格倫氏綜合征)，白細(xì)胞系細(xì)胞的血管滲出或浸潤引起的疾病、血管新生、多發(fā)性硬化癥、主動脈瘤、子宮內(nèi)膜病等有效。但是，式(I)所示的化合物沒有記載對于變性關(guān)節(jié)病有效。
已知MMP和變性關(guān)節(jié)病(OA)有一些關(guān)系。但是，本發(fā)明者們使用作為實(shí)際OA病態(tài)模型進(jìn)行評價的兔子外側(cè)半月板部分切除模型對幾種MMP抑制劑進(jìn)行試驗(yàn)時，只有式(I)所示的化合物顯示有效性。
發(fā)明的詳細(xì)說明在本發(fā)明中使用的化合物，可以鹽的形式使用。鹽優(yōu)選無毒的、水溶性的鹽。
作為合適的鹽，可列舉堿金屬(鉀、鈉等)的鹽，堿土金屬(鈣、鎂等)的鹽，銨鹽、藥學(xué)上可接受的有機(jī)胺(四甲基銨、三乙胺、甲基胺、二甲基胺、環(huán)戊胺、芐基胺、苯乙胺、哌啶、單乙醇胺、二乙醇胺、三(羥甲基)胺、賴氨酸、精氨酸、N-甲基-D-葡糖胺等)的鹽。
在本發(fā)明中使用的化合物或其非毒性鹽可用公知的方法轉(zhuǎn)化為水合物。
對兔子從頸背部皮下使用賽拉嗪2％注射液(0.05ml/kg)(拜爾)給藥，對耳邊緣靜脈內(nèi)使用戊巴比妥注射液(20mg/kg)(ダィナボット)給藥實(shí)施麻醉。將右后肢膝關(guān)節(jié)周圍的毛用推子剪掉，使用游標(biāo)卡尺(ABSデジマチックキャリバCDC，Mitutoyo)，測量右后肢膝關(guān)節(jié)的寬度(相當(dāng)于內(nèi)外側(cè)半月板的中央連接線)。之后，將右膝用蒸餾水5倍稀釋的碘酊(東洋制藥化成)消毒。根據(jù)需要，向切開部分中滴加利多卡因注射液2％(ASTRA Japan)，進(jìn)行局部麻醉。
然后，使用No.10刀片(Blade；夏目制作所；D-13)，將右后肢膝外側(cè)的上皮和關(guān)節(jié)囊相對于膝蓋韌帶90°切開，切離外側(cè)側(cè)副韌帶，然后切離子骨韌帶。此時，滴加保斯民(鹽酸腎上腺素)(第一制藥)用于止血。用肉眼確認(rèn)外側(cè)半月板后，將與半月板前方組織結(jié)合部分組織用鉗子抓住，將半月板拉出到手前，將半月板中央1/3用No.15刀片(夏目制作所D-13)切除。之后，用生理食鹽注射液(大塚制藥工廠)將手術(shù)部分洗凈，將滑膜和關(guān)節(jié)囊用4-0絲線的帶滅菌針的縫合線(ァズゥエル)縫合。然后，肌肉層和外皮同樣分別用4-0的絲線縫合線縫合。將外皮的縫合部分用碘酊消毒后，縫合外皮的縫合線結(jié)點(diǎn)用一種醫(yī)用粘合劑ァロンァルファA“三共”(三共)固定。
手術(shù)后，為防止感染，從左后肢肌肉注射結(jié)晶青霉素G鉀明治(5000U/動物)(明治制果)和硫酸鏈霉素明治(100mg/動物)(明治制果)。飼養(yǎng)直到手術(shù)后第7天解剖，其間使用被檢化合物1天2次口服給藥。
對耳邊緣靜脈內(nèi)使用戊巴比妥注射液(40mg/kg)(ダィナボット)給藥實(shí)施麻醉后，將右后肢膝關(guān)節(jié)周圍的毛用推子剪掉，使用游標(biāo)卡尺(ABSデジマチックキャリバ CDC，Mitutoyo)，測量右后肢膝關(guān)節(jié)的寬度(相當(dāng)于內(nèi)外側(cè)半月板的中央連接線)。之后，將動物放血致死，采取右膝關(guān)節(jié)部分。之后，使用剪刀和解剖刀不損傷關(guān)節(jié)軟骨地切開，采取大腿骨和脛骨頭。將大腿骨和脛骨頭在裝入了10％中性緩沖福爾馬林(和光純藥工業(yè))的組織包中在室溫保存。全部樣品采取完成后，將大腿骨和脛骨頭掩蔽化。之后，用實(shí)體顯微鏡進(jìn)行侵蝕面積的計算測量。
統(tǒng)計處理方法是將載體組(vehicle)和式(I)所示化合物給藥組的軟骨浸蝕面積的比較進(jìn)行Williams的多重比較(EXSAS，Ver5.00，ァム(有))。結(jié)果如

圖1所示。產(chǎn)業(yè)上的可利用性[效果]本模型可誘導(dǎo)與人的變性關(guān)節(jié)病酷似的軟骨破壞，一般被認(rèn)為是作為OA模型。在該模型中，判定了通式(I)所示化合物顯示高的有效性。因此，可判斷通式(I)所示化合物對變性關(guān)節(jié)病是有效的。[毒性]本發(fā)明化合物的毒性是非常低的，可判斷作為藥物使用是十分安全的。例如，使用大鼠的單次口服給藥的最低致死量是2000mg/kg。[作為藥物的應(yīng)用]在本發(fā)明中使用的，對于基質(zhì)金屬蛋白酶，例如，明膠酶、基質(zhì)溶素或膠原酶等有抑制作用的N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺，或其非毒性鹽，對包含人在內(nèi)的動物，特別是在人中，在變性關(guān)節(jié)病的治療和/或預(yù)防中是有效的。
本發(fā)明化合物、其非毒性鹽、酸加成鹽、或其水合物在用于上述目的時，通常，可以全身或局部，口服或非口服的形式給藥。
給藥量可根據(jù)年齡、體重、癥狀、治療效果、給藥方法、處理時間等不同，但是通常，對于每個成人，每次從1mg到1000mg的范圍，1天1次至數(shù)次口服給藥，或?qū)τ诿總€成人，每次從0.1mg到100mg的范圍，1天1次至數(shù)次非口服給藥(優(yōu)選靜脈給藥)，或1天1小時到24小時靜脈內(nèi)連續(xù)給藥。
當(dāng)然，如前所述，給藥量根據(jù)各種條件變動，有少于上述給藥量就足夠的情況，也有需要超過上述范圍的情況。
給藥本發(fā)明化合物時，可以用于口服給藥的內(nèi)服固形劑、內(nèi)服液劑、和用于非口服給藥的注射劑、外用劑、栓劑等使用。
在用于口服給藥的內(nèi)服固形劑中包括片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑等。膠囊劑中包括硬膠囊劑和軟膠囊劑。
在這樣的內(nèi)服固形劑中，可直接使用一個或一個以上的活性物質(zhì)，或與賦形劑(乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、微晶纖維素、淀粉等)，粘合劑(羥丙基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、偏硅酸鋁酸鎂等)，崩解劑(纖維素羥基乙酸鈣)、潤滑劑(硬脂酸鎂等)、穩(wěn)定劑、溶解助劑(谷氨酸、天門冬氨酸等)混合，用常規(guī)方法制劑化后使用。另外，根據(jù)需要可用包衣劑(白糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸鹽)包覆，或被覆2層以上。另外，也包括明膠等可吸收物質(zhì)的膠囊。
用于口服給藥的內(nèi)服液劑包括藥劑上允許的水劑、懸浮劑、乳劑、糖漿劑、酏劑等。在這樣的液劑中，一個或一個以上的活性物質(zhì)被溶解、懸浮或乳化在通常使用的稀釋劑(純化水、乙醇或其混合液等)中。進(jìn)一步，該液劑可含有濕潤劑、懸濁化劑、乳化劑、甜味劑、矯味劑、芳香劑、防腐劑、緩沖劑等。
作為用于非口服給藥的注射劑，包含溶液、懸浮液、乳液和使用時溶解或懸浮于溶劑后使用的固形注射劑。注射劑可以將一個或一個以上的活性物質(zhì)溶解、懸浮或乳化于溶劑中使用。作為溶劑，可使用例如，注射用蒸餾水、生理鹽水、植物油、丙二醇、聚乙二醇、乙醇等醇類及其組合。另外，該注射劑可含有穩(wěn)定劑、溶解助劑(谷氨酸、天門冬氨酸、聚山梨酯80(登記商標(biāo))等)、懸濁化劑、乳化劑、無痛化劑、緩沖劑、防腐劑等。這些可在最后工序中通過滅菌或無菌操作法制備。另外，無菌的固形劑，例如，制造冷凍干燥品，在其使用前無菌化或溶解在無菌的注射用蒸餾水或其他溶劑中后可使用。
作為用于非口服給藥的其他制劑，包括含有一個或一個以上的活性物質(zhì)，通過常規(guī)方法配方的外用液劑、軟膏劑、涂布劑、吸入劑、噴霧劑、栓劑和陰道內(nèi)給藥的子宮托等。
噴霧劑，可含有通常使用的稀釋劑以外的亞硫酸氫鈉等的穩(wěn)定劑和賦予等滲性的緩沖劑，例如氯化鈉、檸檬酸鈉或檸檬酸等的等滲劑。噴霧劑的制造方法，例如在美國專利第2,868,691號和第3,095,355號中有詳細(xì)記載。[制劑例]制劑例1將以下各成分通過常規(guī)方法混合后打片，得到一片中含有50mg活性成分的片劑100片。·N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺 …5.0g·羧甲基纖維素鈣(崩解劑) …0.2g·硬脂酸鎂(潤滑劑) …0.1g·微晶纖維素 …4.7g制劑例2將以下各成分通過常規(guī)方法混合，溶液用常規(guī)方法滅菌，每個安瓿填充5ml，用常規(guī)方法冷凍干燥，得到1安瓿中含有20mg活性成分的安瓿100瓶?！-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺 …2.0g·甘露糖醇 …20g·蒸餾水 …500ml
權(quán)利要求
1.含有式(I) 所示的N-羥基-5-乙氧甲基氧-2(S)-甲基-4(S)-(4-苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺、或其非毒性鹽作為有效成分的變性關(guān)節(jié)病治療和/或預(yù)防劑。
全文摘要
具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶活性的，含有N－羥基－5－乙氧甲基氧－2(S)－甲基－4(S)－(4－苯氧苯甲?；?氨基戊酰胺，或其非毒性鹽作為有效成分的變性關(guān)節(jié)病治療和/或預(yù)防劑。
文檔編號A61P19/00GK1400895SQ01804855
公開日2003年3月5日 申請日期2001年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月10日
發(fā)明者前田佳蔵, 米富康雄, 小川公二 申請人:小野藥品工業(yè)株式會社