專利名稱：一種銀杏葉滴丸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑及其制備方法，更具體地說(shuō)本發(fā)明涉及一種銀杏葉滴丸制劑。
背景技術(shù)：
銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物銀杏(Ginkgobiloba L.)的葉。含黃酮類(約20余種)，萜類、酚類，有益微量元素和17種氨基酸等有效成分，具有降低血清膽固醇、增加冠狀動(dòng)脈血流量、改善腦血液循環(huán)、解除平滑肌痙攣，松弛支氣管和抑菌等藥理作用。臨床上不僅應(yīng)用于治療心腦血管疾病，而且對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等也具有良好的效果。法國(guó)以及德國(guó)等科學(xué)家已經(jīng)證實(shí)，銀杏葉提取物在治療腦缺血、腦損傷后遺癥和抗衰老方面均有顯著療效。近年來(lái)，以銀杏葉為原料制成的保健食品和化妝品風(fēng)靡世界，僅歐洲年產(chǎn)值逾50億美元。銀杏樹是我國(guó)的特產(chǎn)植物，資源豐富，約占世界總量的70％左右，深入開發(fā)具有廣闊的市場(chǎng)前景。
銀杏葉的化學(xué)成分較為復(fù)雜，迄今為止已經(jīng)從銀杏葉中發(fā)現(xiàn)了100多種化學(xué)成分，其中有黃酮類化合物、萜類內(nèi)酯、聚異戊烯醇類，此外還有有機(jī)酸、烷基酚和甾體類化合物等。酮類化合物、萜類內(nèi)酯、聚異戊烯醇類被認(rèn)為是主要活性成分，銀杏酸被認(rèn)為是主要毒性成分。自上世紀(jì)60年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)銀杏的化學(xué)成分及其提取工藝作了大量的深入研究，目前已經(jīng)成為國(guó)際上植物藥理研究的“熱點(diǎn)”課題。主要采用的提取方法如下水或有機(jī)溶劑提取法此方法是國(guó)內(nèi)外使用最為廣泛的方法。廣泛使用的溶劑系統(tǒng)有乙醇-水(60～70％)或丙酮-水溶液(50～60％)進(jìn)行浸提?，F(xiàn)將具體操作方法簡(jiǎn)述如下乙醇提取法將干銀杏葉粉碎，浸泡在乙醇中，在60℃加熱回流，濃縮回收乙醇，得銀杏葉提取物；丙酮提取法將銀杏葉粉碎，用60％丙酮水溶液在約55℃處理5h左右，冷卻過(guò)濾，濾液用CCl4萃取3次，減壓回收丙酮，得銀杏葉提取物；水提取法將干銀杏葉粉碎，用水提取3h，濾過(guò)，醇沉，濃縮回收乙醇，得銀杏葉提取物。
水或有機(jī)溶劑提取加大孔樹脂精制法由于采用上述“水或有機(jī)溶劑提取法”所得提取物中的黃酮類化合物和內(nèi)酯類化合物較少(分別為1.7％和0.6％左右)，因此必須將由該種方法得到的浸膏進(jìn)一步分離純化，純化的方法很多，其中常用的就是采用大孔吸附樹脂進(jìn)行精制。胡敏等[武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，1998，44(2)255]，探討了溶劑萃取法和樹脂吸附法精制銀杏葉黃酮的原理，結(jié)果表明樹脂吸附精制方法優(yōu)于溶劑萃取精制法。近年來(lái)，主要使用的樹脂為非極性大孔樹脂，如HP-20、XAD-4、D101等樹脂。采用樹脂吸附法的主要特點(diǎn)為成本低、回收率高，有機(jī)溶劑殘留少。
超臨界流體提取法(SFE法)SFE法是近年來(lái)興起的分離植物中活性成分的新型方法。其主要通過(guò)控制溫度、壓力以及該性劑的加入等可以實(shí)現(xiàn)選擇性的萃取分離、純化。鄧啟章等[中草藥，1999，30(6)419]建立了一套超臨界流體小試、中試裝置和試驗(yàn)方法，所得到的銀杏葉提取物黃酮含量為28％，銀杏內(nèi)酯含量為7.2％，均高于國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)。與有機(jī)溶劑相比，具有提取率高、無(wú)溶劑殘留、活性成分和熱不穩(wěn)定成分不易被破壞等優(yōu)點(diǎn)。
高速逆流色譜提取法(High Speed Counter Current Chromatography，HSCCC)高速逆流色譜提取法是一種不用任何固定載體的液－液分配色譜技術(shù)。蔡定國(guó)等[中藥新藥與臨床藥理，1999，10(1)44]報(bào)道采用HSCCC技術(shù)，從銀杏葉中分離得到了3種主要甙元。此方法具有對(duì)樣品的分離率高、所得產(chǎn)品濃度高、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，是制備銀杏黃酮甙元以及各銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯對(duì)照品的較佳手段。
酶法在銀杏葉所含的脂溶性成分或難溶于水的有效成分中，通過(guò)加入淀粉部分水解產(chǎn)物對(duì)葡萄糖基殘基有轉(zhuǎn)移作用的葡萄糖苷酶或轉(zhuǎn)糖苷酶，使得脂溶性或難溶性成分或不溶于水的有效成分轉(zhuǎn)移到水溶性糖中。李兆龍等[中成藥，1994，16(10)52]報(bào)道了日本高跟芳春用此方法通過(guò)加入糊精及對(duì)葡萄糖殘基有轉(zhuǎn)移作用的葡萄糖甙酶，調(diào)節(jié)PH2.0，溫度50℃進(jìn)行轉(zhuǎn)糖反應(yīng)，使油溶性成分和難溶于水的有效成分轉(zhuǎn)變成易溶于水的糖甙類而提取出來(lái)，然后升溫，使酶失活，上清液過(guò)HP-20大孔吸附樹脂，收集濾液，干燥即得。次方法提取的有效成分含量高，且在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成糖甙后極易吸收。
目前，《中國(guó)藥典》(2000版增補(bǔ)本)規(guī)定了銀杏葉提取物(GBE)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，即銀杏總黃酮苷不得少于24％，銀杏內(nèi)酯不得少于6％。
近年來(lái)，隨著人們對(duì)銀杏葉研究的深入，現(xiàn)已開發(fā)出口服液、片劑、膠囊和沖劑在內(nèi)的一系列制劑。由于劑型本身的原因，它們存在著一下問(wèn)題①固體口服制劑(如片劑、膠囊等)崩解速度慢，有效成分釋放速度低。固體口服制劑的崩解是其溶出的前提，崩解時(shí)間越長(zhǎng)，則其有效成分的溶出速度越慢?！吨袊?guó)藥典2000版》規(guī)定了片劑、膠囊崩解時(shí)間應(yīng)在1小時(shí)之內(nèi)。這樣長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)于藥物有效成分的快速釋放無(wú)疑是沒(méi)有任何幫助的。②首過(guò)效應(yīng)問(wèn)題。首過(guò)效應(yīng)(Firist-pass Effect)又稱第一關(guān)卡效應(yīng)，是指口服藥物在胃腸道吸收后，首先經(jīng)過(guò)門靜脈到肝，再進(jìn)入體循環(huán)。有些藥物在通過(guò)肝臟時(shí)被代謝，這種現(xiàn)象成為首過(guò)效應(yīng)?？诜苿┯捎诒旧淼脑?，大部分在胃腸道內(nèi)吸收，容易產(chǎn)生首過(guò)效應(yīng)，使其有效成分降低。針對(duì)以上存在的問(wèn)題，我們需要一種速效、高效的銀杏葉制劑滿足臨床應(yīng)用的需要。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種高效、速效的銀杏葉滴丸制劑，本發(fā)明還意外的發(fā)現(xiàn)，該制劑在治療腦梗塞方面比現(xiàn)有制劑具有顯著的良好效果。
本發(fā)明的目的通過(guò)以下方案予以實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明的一種銀杏葉滴丸，其中銀杏葉提取物與輔料的比例為1∶1.5～10。
所述各組分的含量較好為銀杏葉提取物與輔料的比例為1∶2～4，所述各組分的含量最好為銀杏葉提取物與輔料的比例為1∶3。
本發(fā)明除含有上述銀杏葉提取物和輔料以外，還含有其它藥用或非活性組分，無(wú)論其單獨(dú)使用還是它們之間的任意組合其含量均不超過(guò)銀杏提取物重量的10％。以上所述輔料具體為聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或者聚乙二醇4000、6000的混合物、或其它適宜制成滴丸的分子量在2000至10000之間的聚乙二醇以及它們的混合物，或者甘油明膠、或者硬質(zhì)酸鈉等。
本發(fā)明的一種銀杏葉滴丸的制備采取以下步驟①準(zhǔn)備好下述原料銀杏葉提取物、輔料以及其它藥用和非活性組分；②將上述原料混合均勻；③加熱化料，移入滴丸機(jī)的滴灌，藥液通過(guò)滴頭滴入液體低溫液體石蠟中，除去液體石蠟，選丸，即得。
步驟①所述的輔料包括聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或者聚乙二醇4000、6000的混合物、或者甘油明膠、或者硬質(zhì)酸鈉，其中聚乙二醇4000、6000的混合物的比例為1∶0.01～99.9。
所述藥用組分為黃芪、人參、白術(shù)、茯苓、五味子、白芍、丹參、三七等藥物的提取物，它們的制備法簡(jiǎn)述如下黃芪提取物取黃芪，粉碎，加水提取，醇沉，濃縮回收醇，得黃芪提取物；人參提取物取人參，粉碎，加醇回流，過(guò)大孔吸附樹脂，用醇洗脫，收集洗脫液，濃縮除去醇，得人參提取物。
白術(shù)提取物取白術(shù)，粉碎，加水提取，濾過(guò)，濃縮得白術(shù)提取物。
茯苓提取物取茯苓，加水提取，濾過(guò)，濃縮，醇沉，回收醇得提取物。
五味子提取物取五味子，加醇回流提取，濾過(guò)，濃縮回收醇得提取物。
白芍提取物取白芍，加水提取，濾過(guò)，醇沉，濃縮得白芍提取物。
丹參提取物取丹參，水提取，濃縮，醇沉，回收醇得丹參提取物。
三七提取物取三七，加水提取，濃縮，過(guò)大孔吸附樹脂，用醇洗脫，洗脫液濃縮得三七提取物。
滴丸劑系指將固體或液體藥物與基質(zhì)混合后滴入不相溶的冷凝劑中收縮而成的一種制劑。其具有如下特點(diǎn)①比表面積大，體內(nèi)釋放速度快，生物利用度高；②由于滴丸劑型本身是將藥物與基質(zhì)通過(guò)加熱熔融制成的固體分散體，藥物分子直接分散入基質(zhì)中，所以藥物分子可經(jīng)舌下靜脈直接吸收入血，避免了因胃腸道吸收而長(zhǎng)生的首過(guò)效應(yīng)，保證了藥物有效成分的充分吸收；③滴丸劑型體積小，方便攜帶，服用劑量易于掌握。
下面通過(guò)藥效實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。
藥效學(xué)試驗(yàn)本發(fā)明一種銀杏葉滴丸與金納多片進(jìn)行比較，采用三氯化鐵局部貼服大腦中動(dòng)脈造成局灶性腦缺血損傷模型，探討本發(fā)明對(duì)大鼠腦缺血的保護(hù)作用。
1.實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物SD大鼠，雌雄兼用，體重180±10g，合格證號(hào)SCXK11-00-0008，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。
1.2藥品與試劑銀杏葉滴丸，采用實(shí)施例14方法制造，天津天士力集團(tuán)提供，批號(hào)001204；陽(yáng)性對(duì)照藥，金納多片(活性成分為銀杏葉提取物)，德國(guó)威瑪舒培博士藥廠生產(chǎn)，批號(hào)2770601，進(jìn)口藥品注冊(cè)證號(hào)X20000521。
1.3儀器XTT實(shí)體顯微鏡，云南光學(xué)儀器廠產(chǎn)品；AEG-220電子分析天平，日本Shimadzu公司產(chǎn)品；307-6臺(tái)式牙科車，上海齒科醫(yī)械廠產(chǎn)品。
2.實(shí)驗(yàn)方法2.1分組及給藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組，即假手術(shù)對(duì)照組、模型I組、模型II組、銀杏葉滴丸治療組、金納多片等效量組(其中EGB 24mg/kg)、金納多片高劑量組(其中EGB 48mg/kg)動(dòng)物先連續(xù)灌胃給藥兩天，第三天給藥90分鐘后施行手術(shù)，術(shù)后繼續(xù)灌胃給藥一天。其中假手術(shù)組和模型I組灌服等量的0.5％cmc，模型II組灌服等量的聚乙二醇(PEG)-0.5％cmc溶液(其中PEG 25mg/kg)。
2.2大腦中動(dòng)脈血栓模型(MCAT)大鼠模型制作大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉。按Tamura等的方法，稍加改進(jìn)。大鼠右側(cè)臥位固定，在眼外眥和外耳道連線中點(diǎn)作一弧形切口，長(zhǎng)約1.5cm，夾斷顳肌并切除，暴露顳骨，于實(shí)體顯微鏡下，用牙科鉆在顴骨與顳鱗骨接合處靠近口側(cè)1mm處作一直徑2.5mm的骨窗，清理殘?jiān)┞洞竽X中動(dòng)脈(位于嗅束及大腦下靜脈之間)。置一小片塑料薄膜保護(hù)血管周圍組織。將吸有50％氯化鐵溶液10μL的小片定量濾紙敷在此段大腦中動(dòng)脈上，30min后取下濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合，回籠飼養(yǎng)。室溫控制在27℃。假手術(shù)組除不滴加氯化鐵溶液外，其余手術(shù)步驟同模型組。
2.3神經(jīng)癥狀評(píng)分方法對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物在術(shù)后24h，進(jìn)行行為檢測(cè)，按Bederson等的方法加以改進(jìn)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)①提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對(duì)稱前伸，記為0分；如手術(shù)對(duì)側(cè)前肢出現(xiàn)肩屈曲、肘屈曲、肩內(nèi)旋或兼具，記為1分。②將動(dòng)物置于平面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對(duì)等且有力記為0分；如手術(shù)對(duì)側(cè)阻力下降，記為1分。③將動(dòng)物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察肌張力。雙側(cè)肌張力對(duì)等且有力為0分；手術(shù)對(duì)側(cè)前肢肌張力下降記為；1分。④提鼠尾，動(dòng)物有不停地向手術(shù)對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)者，記為1分。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，滿分為4分，分?jǐn)?shù)越高，動(dòng)物的行為障礙越嚴(yán)重。
2.4腦梗塞范圍的測(cè)定方法動(dòng)物經(jīng)行為評(píng)分后，斷頭取腦。去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在4℃以下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中(每5ml染液中含4％TTC 1.5ml，1M K2HPO40.1ml，其余加蒸餾水至刻度)，37℃避光溫孵30分鐘，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量及患側(cè)腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)采用組間配對(duì)比較t檢驗(yàn)，結(jié)果表4。
表1銀杏葉滴丸對(duì)大鼠神經(jīng)癥狀及腦梗塞范圍的影響

注與相應(yīng)模型相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與假手術(shù)組相比，△△P＜0.01，與金納多相比，P＜0.01。
結(jié)論從上表可以看出，本發(fā)明的銀杏葉滴丸在改善大鼠神經(jīng)癥狀及腦梗塞范圍等方面優(yōu)于金納多片，具有顯著性差異(P＜0.01)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)銀杏葉提取物的制備取1000g銀杏葉粉碎，用5倍量丙酮∶水(70∶30)混合液加熱提取2次，每次2小時(shí)，溫度為50～60℃，合并提取液，濾過(guò)，減壓濃縮成銀杏葉提取物；(2)將上述銀杏葉提取物100g與300聚乙二醇6000混合；(3)產(chǎn)品的制備取上述銀杏葉提取物和聚乙二醇6000加熱至85℃，化料20min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在85℃。藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
實(shí)施例2(1)銀杏葉提取物的制備取1000g銀杏葉粉碎，加5倍量65％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，溫度為60℃，合并提取液，濾過(guò)，減壓濃縮回收乙醇得銀杏葉提取物；(2)黃芪提取物的制備取黃芪粗粉200g，用水提取2次，第一次加水量為黃芪10倍，2小時(shí)，第二次加8倍量水，1.5小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濃縮至藥液體積與藥材量比為1∶1，加入90％的乙醇，是藥液的含醇濃度到70-75％，靜置12小時(shí)，取出上清液，減壓濃縮回收乙醇，得黃芪藥材提取物；(3)取上述銀杏葉提取物100g與8g黃芪提取物和300g聚乙二醇4000混合；(4)產(chǎn)品的制備取上述銀杏葉提取物、黃芪提取物和聚乙二醇4000加熱至86℃，化料25min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在89℃。藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
實(shí)施例3(1)銀杏葉提取物的制備取1000g銀杏葉，加5倍量的水，煎煮2次，每次2小時(shí)，溫度為50～60℃，合并提取液，濃縮，過(guò)大孔吸附樹脂(AB-8)精制，用80％乙醇洗脫，洗脫液濃縮回收乙醇，得銀杏葉提取物；(2)取上述銀杏葉提取物100g與300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)混合；(3)產(chǎn)品的制備取上述銀杏葉提取物和聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)加熱至88℃，化料30min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在86℃。
藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
實(shí)施例4(1)銀杏葉提取物的制備取1000g銀杏葉，加5倍量65％乙醇，加熱回流提取2次，每次1小時(shí)，溫度60℃，合并提取液，濃縮，過(guò)大孔吸附樹脂(D101)精制，用85％乙醇洗脫，洗脫液濃縮回收乙醇，得銀杏葉提取物；(2)人參提取物的制備取人參切片100g，加8倍量70％乙醇，提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，濃縮至每5ml含有1g人參藥材，
得人參提取物；(3)取上述銀杏葉提取物100g，人參提取物4g和300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(4)產(chǎn)品的制備取上述銀杏葉提取物、人參提取物和聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)加熱至90℃，化料40min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在88℃。藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
實(shí)施例5(1)銀杏葉提取物的制備取粉碎銀杏葉1000g，采用采用CO2超臨界萃取法，得銀杏葉提取物，工藝條件為溫度為45℃，萃取壓力為25Mpa，流量0.8ml/min，時(shí)間2小時(shí)。其中銀杏總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％；(2)取上述銀杏葉提取物100g與300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(3)產(chǎn)品的制備取上述混合物加熱至90℃，化料35min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在88℃。藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
對(duì)比實(shí)驗(yàn)例本發(fā)明銀杏葉滴丸與天保寧片、舒血寧片、GinkgoBiloba片和膠囊等進(jìn)行比較，考察其體外崩解時(shí)限。結(jié)果表明，銀杏葉滴丸溶散速度快，崩解明顯快于片劑，與Gingomax膠囊接近，但明顯快于Sundown Herbals銀杏膠囊。
(1)試藥銀杏葉滴丸，天津天士力集團(tuán)現(xiàn)代中藥研究所提供，按實(shí)施例5法生產(chǎn)，批號(hào)20010222；天保寧片，浙江康恩貝制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)000713；舒血寧片，揚(yáng)子江藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)000420 3；Kingo Vital Tablet OY VALIORAVINTOAB生產(chǎn)，批號(hào)01 2001 BA00；GinkgoBiloba膠囊，Ginkgomax公司生產(chǎn)，批號(hào)00182；GinkgoBiloba膠囊，Sundown Herbals公司生產(chǎn)。
(2)方法和結(jié)果按照《中國(guó)藥典》(2000版)附錄崩解時(shí)限的方法測(cè)定，滴丸選用篩網(wǎng)孔徑為φ0.425mm的吊籃，其它片劑、膠囊選用篩網(wǎng)孔徑為φ2mm的吊籃。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2銀杏的不同制劑在水中崩解時(shí)限實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩網(wǎng)孔徑產(chǎn)品名稱 劑型 生產(chǎn)廠家 批號(hào) 崩解時(shí)間(min)(mm)銀杏滴丸 滴丸劑天津天士力 20010222 0.425 4.89±0.65
銀否滴丸 滴丸劑 天津天士力20010222 2.03.88±0.37天保寧 片劑浙江康恩貝000713 2.010.81±1.04舒血寧片 片劑揚(yáng)子江藥業(yè)00042032.028.28±3.31OY VALIORAVINTOKingoTablet01 2001 BA00 2.019.69±0.47VitalABGinkgoCapsule Ginkgomax 00182 2.03.64±0.13BilobaGinkgoCapsule Sundown Herbals 2.013.75±1.25Biloba實(shí)施例6(1)銀杏葉提取物的制備取銀杏葉粗提物為原料，采用高速逆流色譜法(HSCCC)制備銀杏葉提取物，采用氯仿甲醇水(4∶3∶2)的溶劑系統(tǒng)，待兩相溶劑充分混合后，臨用前將其分開，在室溫下，下相作流動(dòng)相，上相作固定相，以2.0ml/min的流速，由首端向尾端洗脫，主機(jī)正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)速為800r/min，固定相保留值為78％，進(jìn)樣2.0ml，定時(shí)收集餾分，即得；(2)白術(shù)提取物的制備取白術(shù)藥材100g，加水提取2次，第一次加7倍量的水，時(shí)間為3小時(shí)，第二次為5倍量水，時(shí)間為1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至藥液體積與生藥比為1∶1，即得白術(shù)提取物；(3)取上述銀杏葉提取物100g，白術(shù)提取物5g和甜味劑0.5g以及300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(4)產(chǎn)品的制備取上述銀杏葉提取物、白術(shù)提取物和聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)加熱至88℃，化料100min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在85℃。藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
實(shí)施例7(1)銀杏葉提取物的制備采用酶法制得銀杏葉提取物；(2)取上述銀杏葉提取物100g，300g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(3)產(chǎn)品的制備取上述銀杏葉提取物和聚乙二醇聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)加熱至90℃，化料40min后，移入滴丸機(jī)的滴灌保持在88℃。藥液滴至7～8℃的液體石蠟中，取出滴丸，除去液體石蠟，選丸，即得。
實(shí)施例8(1)取100g銀杏葉提取物與400g聚乙二醇6000混合；(2)銀杏葉提取物制備方法，以及產(chǎn)品制造方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例9(1)五味子提取物的制備取100g五味子藥材，加4倍量85％的乙醇，回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓濃縮，回收乙醇得五味子提取物；(2)取銀杏葉提取物100g，5g黃芪提取物、3g五味子提取物和400g聚乙二醇6000混合；(3)黃芪提取物的制備同實(shí)施例2；(4)銀杏葉提取物的制備以及產(chǎn)品的制備同實(shí)施例2。
實(shí)施例10(1)茯苓提取物的制備取茯苓100g，切片，加入5倍量水，加熱提取3次，時(shí)間分別為第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，第三次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，減壓濃縮至每1ml藥液相當(dāng)于7g生藥材，加入90％的乙醇使其含醇量達(dá)到75％，離心，收集上清液，濃縮除去乙醇得茯苓提取物；(2)取銀杏葉提取物100g，茯苓提取物8g以及400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)混合；(3)銀杏提取物的制備方法及產(chǎn)品的制備方法同實(shí)施例3。
實(shí)施例11(1)取銀杏葉提取物100g(總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％)，400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例12(1)白芍提取物的制備取100g白芍，粉碎，加6倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至每1ml藥液相當(dāng)于5g生藥材，加入95％乙醇使其含醇量達(dá)到80％，取上清液，濃縮回收乙醇得白芍提取物；(2)取銀杏葉提取物100g，白芍提取物7g和甜味劑0.1g以及400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(3)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例5。
實(shí)施例13(1)取銀杏葉提取物100g和400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例6。
對(duì)比實(shí)驗(yàn)例體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)銀杏葉滴丸中銀杏內(nèi)酯藥代動(dòng)力學(xué)研究本試驗(yàn)利用銀杏內(nèi)酯(A、B和白果內(nèi)酯)的3H標(biāo)記物放射性示蹤技術(shù)，研究了本發(fā)明的一種銀杏葉滴丸和Ginkgomax膠囊(芬蘭產(chǎn))兩種制劑家兔口服后其銀杏內(nèi)酯藥代動(dòng)力學(xué)的特征。結(jié)果表明，本發(fā)明銀杏葉滴丸和膠囊中不同內(nèi)酯的相同給藥劑量組藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC和Cmax數(shù)值相近，Tpeak和t1/2ka滴丸明顯低于膠囊。本發(fā)明的銀杏葉滴丸中銀杏內(nèi)酯的吸收峰比膠囊來(lái)得快，血內(nèi)達(dá)峰時(shí)間一般提前30-45min，表明本發(fā)明銀杏葉滴丸比膠囊劑型具有快速吸收的特點(diǎn)。
1.實(shí)驗(yàn)材料1.1藥物銀杏內(nèi)酯A、B和白果內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品HPLC純，批號(hào)0864-9902，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。對(duì)照藥物采用芬蘭Hankintatukku公司生產(chǎn)的Ginkgomax膠囊，每粒膠囊內(nèi)容物270mg含EGb 61mg，其中含GIN 15mg，批號(hào)08022003；銀杏葉滴丸，采用實(shí)施例13的方法制造，由天津天士力集團(tuán)現(xiàn)代中藥研究所提供，批號(hào)010507。
1.2試劑3H-銀杏內(nèi)酯A放射性比度74.83MBq/mg，3H-銀杏內(nèi)酯B放射性比度109.83MBq/mg，3H-白果內(nèi)酯放射性比度90.40MBq/mg。三種3H標(biāo)記物均不含3H雜質(zhì)，由中國(guó)原子能科學(xué)研究院同位素研究所提供。閃爍體2.5-二苯基啞唑(2.5-Diphenyloxazol)縮寫PPO，2.2-對(duì)撐雙(5-苯基啞唑)-P-Phenyl-bis(5-Phenyloxazole)]縮寫POPOP，由Fluka公司提供。閃爍液0.3％PPO和0.03％POPOP與等體積二甲苯與乙二醇甲醚混溶液。
1.3動(dòng)物健康大耳白家兔體重1.5±0.1Kg，雌雄各半，由天津津南實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供，合格證號(hào)2001016。
2.實(shí)驗(yàn)方法2.1取1.0mci的3H-銀杏內(nèi)酯A、B和3H-白果內(nèi)酯(50％乙醇溶液)加入8.0gGinkgomax內(nèi)容物中研勻干燥后移入KL-50球磨機(jī)內(nèi)研磨20min。稱取120±5mg(約含銀杏葉提取物30mg)粉裝入上海膠囊廠生產(chǎn)的4號(hào)膠囊內(nèi)備用。
2.2實(shí)驗(yàn)分組和樣品收集實(shí)驗(yàn)分滴丸和膠囊兩種劑型，每種劑型設(shè)銀杏內(nèi)酯A、B和白果內(nèi)酯三種藥物組，每種藥物組設(shè)三個(gè)給藥劑量組(銀杏葉提取物20、40和60mg/Kg)，每實(shí)驗(yàn)組6只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)采用自制的投藥器將滴丸或膠囊投入受試動(dòng)物胃中，投藥后10、20、40、60、90、120、150、180、240、300、360和480min從動(dòng)物耳緣靜脈取血約0.8ml，檸檬酸抗凝，5000rpm離心15-20min得血漿備用。
2.3樣品處理和結(jié)果計(jì)算0.4ml待測(cè)血清漿加0.4ml消化液(過(guò)氮酸∶雙氧水＝2∶1)混均后置于60℃水浴中消化2h呈清澄溶液，取消化液0.4ml加到含10ml閃爍液的測(cè)量杯中制成均相溶液，置LKB-1217液體閃爍計(jì)數(shù)計(jì)測(cè)量放射性活度。樣品的放射性活度乘稀釋倍數(shù)換算成每毫升血漿的放射性活度，再除以標(biāo)記物的比放射性活度即求得樣品每毫升血漿的微克數(shù)。
3.結(jié)論銀杏內(nèi)酯藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)根據(jù)銀杏葉滴丸和膠囊不同給藥劑量中銀杏內(nèi)酯A、B和白果內(nèi)酯在血漿中含量，利用藥代動(dòng)力學(xué)軟件(即3P97)擬合處理求得各自的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，銀杏內(nèi)酯A、B和白果內(nèi)酯口服吸收過(guò)程的AUC、Cmax、Tpeak和t1/2ka等參數(shù)的比較見(jiàn)下表3、4、5。
表3銀杏葉滴丸與Ginkgomax膠囊中銀杏內(nèi)酯A的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的比較

表4銀杏葉滴丸與Ginkgomax膠囊中銀杏內(nèi)酯B的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的比較

表5銀杏葉滴丸與Ginkgomax膠囊中白果內(nèi)酯的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的比較

上表提示銀杏葉滴丸和膠囊劑型AUC和Cmax數(shù)值相近，Tpeak和t1/2ka滴丸明顯低于膠囊。表明本發(fā)明銀杏葉滴丸中銀杏內(nèi)酯的吸收峰比膠囊來(lái)得快，血內(nèi)達(dá)峰時(shí)間一般提前30-45min，表明本發(fā)明銀杏葉滴丸比膠囊劑型具有快速吸收的特點(diǎn)。
實(shí)施例14(1)取銀杏葉提取物100g與400g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例7。
實(shí)施例15(1)取銀杏葉提取物100g，與200g聚乙二醇6000混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例16(1)丹參提取物的制備取100g丹參，粉碎，加入5倍量的水，煎煮2小時(shí)，濾過(guò)，第二次提取，加入4倍量水，時(shí)間為1小時(shí)，合并濾液，濃縮至藥液體積與生藥量比為1∶1，加入95％的乙醇，使藥液含醇量達(dá)70％，靜置，取上清液，濃縮回收乙醇，得丹參提取物；(2)取銀杏葉提取物100g，丹參提取物8g和200g聚乙二醇4000混合；(3)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例2。
實(shí)施例17(1)取銀杏葉提取物100g，其中銀杏總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％，與200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例3。
實(shí)施例18(1)三七提取物的制備取三七100g，加7倍量水，加熱提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，上大孔吸附樹脂(AB-8)，用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得三七提取物；(2)取銀杏葉提取物100g，三七提取物7g以及200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(3)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例19(1)三七提取物的制備同實(shí)施例18。
(2)取銀杏葉提取物100g，三七提取物7g，以及200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(3)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例20
(1)取銀杏葉提取物100g與200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例5。
實(shí)施例21(1)取銀杏葉提取物100g，與200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例6。
實(shí)施例22(1)取銀杏葉提取物100g與200g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例7。
實(shí)施例23(1)取銀杏葉提取物100g銀杏總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％，150g聚乙二醇6000混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例24(4)取銀杏葉提取物100g，與150g聚乙二醇4000混合；(5)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例2。
實(shí)施例25(1)人參提取物的制備同實(shí)施例4；(2)白芍提取物的制備同實(shí)施例12；(3)取銀杏葉提取物100g，人參提取物4g，白芍提取物4g以及150g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)混合；(4)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例3。
實(shí)施例26(1)取銀杏葉提取物100g與150g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例27(1)取銀杏葉提取物100g，其中銀杏總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％，與150g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例5。
實(shí)施例28(1)茯苓提取物的制備同實(shí)施例10；
(2)五味子提取物的制備同實(shí)施例9；(3)三七提取物的制備同實(shí)施例18；(4)取銀杏葉提取物100g與3g茯苓提取物、3g五味子提取物3g三七提取物以及150g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(5)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例6。
實(shí)施例29(1)取銀杏葉提取物100g與150g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例7。
實(shí)施例30(1)取銀杏葉提取物100g與600g聚乙二醇6000混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例31(1)丹參提取物的制備同實(shí)施例16；(2)三七提取物的制備同實(shí)施例18；(3)取銀杏葉提取物100g，與5g丹參提取物、2g三七提取物以及600g聚乙二醇4000混合；(4)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例2。
實(shí)施例32(1)取銀杏葉提取物100g與600g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例3。
實(shí)施例33(1)取銀杏葉提取物100g(總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％)與600g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例34(1)丹參提取物的制備同實(shí)施例16；(2)三七提取物的制備同實(shí)施例18；(3)人參提取物的制備同實(shí)施例14；(4)取銀杏葉提取物100g，與2g丹參提取物、2g人參提取物、2g三七提取物、2g甜味劑以及600g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(5)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例5。
實(shí)施例35
(1)取銀杏葉提取物100g與600g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例6。
實(shí)施例36(1)取銀杏葉提取物100g與600g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例7。
實(shí)施例37(1)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇6000混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例38(1)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇4000混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例2。
實(shí)施例39(1)三七提取物的制備同實(shí)施例18；(2)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶0.01)混合；(3)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例3。
實(shí)施例40(1)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例41(1)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例5。
實(shí)施例42(1)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例6。
實(shí)施例43(1)取銀杏提取物100g與800g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例7。
實(shí)施例44(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇6000混合物混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例45(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇4000混合物混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例2。
實(shí)施例46(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶20)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例3。
實(shí)施例47(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶40)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例4。
實(shí)施例48(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶60)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例5。
實(shí)施例49(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶80)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例6。
實(shí)施例50(1)取銀杏提取物100g與1000g聚乙二醇4000、6000混合物(比例為1∶99.9)混合；(2)銀杏葉提取物的制備方法以及產(chǎn)品的制造方法同實(shí)施例7。
權(quán)利要求
1.一種銀杏葉滴丸，其特征是銀杏葉提取物與聚乙二醇4000，或者與聚乙二醇6000，或者與聚乙二醇4000和聚乙二醇6000兩者混合物的重量比為1∶1.5～10。
2.一種銀杏葉滴丸，包括經(jīng)水或有機(jī)溶劑提取而得到銀杏葉提取物，或經(jīng)水或有機(jī)溶劑提取后再用吸附樹脂精制而得到的銀杏葉提取物，或用超臨界流體提取而得到的銀杏葉提取物，或用高速逆流色譜技術(shù)提取而得到的銀杏葉提取物，或加用酶法而得到的銀杏葉提取物，其特征是所述銀杏葉提取物與聚乙二醇4000或聚乙二醇6000或聚乙二醇4000和聚乙二醇6000的混合物的重量比為1∶1.5～10。
3.一種銀杏葉滴丸，其中銀杏葉提取物的總黃酮≥24％，萜內(nèi)酯≥6％，其特征是所述銀杏葉提取物與聚乙二醇4000或聚乙二醇6000或聚乙二醇4000和聚乙二醇6000的混合物的重量比為1∶1.5～10。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的銀杏葉滴丸，其特征是銀杏葉提取物與聚乙二醇4000，或者與聚乙二醇6000，或者與聚乙二醇4000和聚乙二醇6000兩者混合物的重量比為1∶2～4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的銀杏葉滴丸，其特征是所述聚乙二醇4000與聚乙二醇6000的混合物的重量比為1∶0.01～99.9。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的銀杏葉滴丸，其特征是除組分中有所述的銀杏葉提取物與聚乙二醇外，還含有其它輔助藥用組分或非活性的組分，其含量為銀杏葉提取物重量的10％以下。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的銀杏葉滴丸，其特征是所述其它輔助藥用組分為以下中藥的常規(guī)提取物黃芪、人參、白術(shù)、茯苓、五味子、白芍、丹參、三七，無(wú)論是單用還是它們之間的任意組合，其總量為銀杏葉提取物重量的10％以下。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的銀杏葉滴丸，其特征是銀杏葉提取物與聚乙二醇4000，或者與聚乙二醇6000，或者與聚乙二醇4000和聚乙二醇6000兩者混合物的重量比為1∶2～4。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的銀杏葉滴丸，其特征是所述聚乙二醇4000與聚乙二醇6000的混合物的重量比為1∶0.01～99.9。
10.一種中藥滴丸制劑，由銀杏葉提取物和聚乙二醇組成，二者重量配比為1∶2-4，所述銀杏葉提取物是用溶劑提取制得的，其中銀杏總黃酮含量≥24％，銀杏萜內(nèi)酯含量≥6％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種銀杏葉滴丸制劑，它是由銀杏葉提取物、藥用輔料，以及包括黃芪、人參、白術(shù)等在內(nèi)的輔助成分組成。它不僅可以用于保護(hù)血管內(nèi)皮損傷，降低膽固醇，還對(duì)腦缺血損傷具有很好的保護(hù)作用。本發(fā)明提供了制備方法和藥理作用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1485061SQ0213126
公開日2004年3月31日 申請(qǐng)日期2002年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月23日
發(fā)明者葉正良, 章順楠, 孫鑫, 張文生, 肖時(shí)棟 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司