專利名稱：二色桌片參中新的抗腫瘤化合物Intercedenside B的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種從海洋動(dòng)物二色桌片參中分離到的新的抗腫瘤化合物Intercedenside B。
Intercedenside B為白色無定形粉末，熔點(diǎn)218～220℃，分子式C55H84O28S2Na2；電噴霧離子質(zhì)譜(ESI-MS)1325[M+Na]+，在ESI-MS負(fù)離子譜中出現(xiàn)1279[M-Na]+離子峰。紅外光譜3502(OH)，2932(CH3，CH2)，1746(C＝O)，1650(共軛雙鍵)，1465和1378(CH3，CH2)，1239(酯鍵)，1067(甙鍵)。1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)見表1。
表1 Intercedenside B的1H和13C核磁共振數(shù)據(jù)甙元部分 糖部分碳原子序號碳化學(xué)位移 氫化學(xué)位移(J) 碳原子序號 碳化學(xué)位移氫化學(xué)位移(J)135.405 1.267(2H，br)Xy11 1 103.826 4.665(1H，d，7.2)226.340 1.796(1H，m)，1.896(1H，m)2 81.659 3.950(1H，1H，t，78)388.900 3.152(1H，dd，3.6，12)3 74.127 4.206(1H，t，9)438.872 4 75.839 4.891(1H，m)547.735 0.869(1H，dd，9.6，12.8) 5 63.224 3.7141H，m)，4.714(1H，m)623.054 1.863(2H，m) Qui 1 104.132 4.934(1H，d，7.8)7119.8945.572(1H，s) 2 74.252 3.895(1H，m)8145.027 3 74.948 3.804(1H，m)946.683 3.240(1H，d，13.8)4 85.043 3.468(1H，t，9)10 34.917 5 71.063 3.615(1H，m)11 22.0101.442(1H，m)，1.679(1H，m) 6 17.234 1.570(3H，s)12 30.8382.093(2H，m)，) Xy12 1 103.923 4.736(1H，d，7.8)13 58.694 2 72.762 3.826(1H，m)14 46.961 3 86.421 4.024(1H，m)15 43.105 1.569(1H，m)，2.545(1H，dd，8.4，12)4 68.306 3.879(1H，m)16 75.185 5.801(1H，ddd，7.2，8.4，8.4) 5 65.132 3.580(1H，m)，4.136(1H，m)17 53.868 2.692(1H，d，8.4) 3-MeGlc 1 104.257 5.088(1H，d，7.8)18 180.142 2 73.667 3.746(1H，m)19 23.403 1.058(3H，s)3 85.711 3.644(1H，m)20 85.419 4 69.365 3.910(1H，m)21 27.733 1.558(3H，s)5 74.711 4.009(1H，m)22 38.106 1.776(1H，m)，2.364(1H，m) 6 66.844 4.620(1H，dd，6，11.4)，4.875(1H，m)23 22.665 1.810(1H，m)，1.979(1H，m) OCH3 60.8 3.84(3H，s)24 123.333 4.947(1H，d，7.8)25 131.96626 25.073 1.574(3H，s)27 17.360 1.592(3H，s)30 16.761 0.961(3H，s)31 28.178 1.127(3H，s)32 31.771 1.142(3H，s)CH3COO170.785CH3COO20.674 1.947(3H，s)Xy1木糖，Qui喹納糖，Glc葡萄糖，J值偶合常數(shù)本發(fā)明還提供了從二色桌片參提取分離Intercedenside B的方法，其步驟如下(1)提取將新鮮二色桌片參洗凈、切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡提取7天，濾出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天。合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫。50％乙醇洗脫液減壓回收乙醇，得總皂甙提取物。
(2)分離上述總皂甙提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Intercedenside B的流份，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)進(jìn)行梯度洗脫，薄層層析檢測，得Intercedenside B純品。
本發(fā)明對Intercedenside B進(jìn)行了體外抗腫瘤試驗(yàn)，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗(yàn)所用的細(xì)胞株為國際通用的腫瘤細(xì)胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)U-87-MG(神經(jīng)母細(xì)胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)試驗(yàn)方法為國際通用的SRB法根據(jù)細(xì)胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時(shí)再加藥10μl/孔。每個(gè)濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時(shí)，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細(xì)胞，4℃放置1小時(shí)后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長下測定OD值。試驗(yàn)結(jié)果見表2表2.Intercedenside B對腫瘤細(xì)胞的抑制作用腫瘤細(xì)胞株 A-549MCF-7 IA-9 CAKI-1 U-87-MG PC-3 KB KB-VIN SK-MEL-2 HCT-8IC50(μg/ml)0.71 1.4 0.61 0.77 1.9 1.51.92.01.9 1.2IC50表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Intercedenside B對10種不同的腫瘤細(xì)胞株均顯示明顯的抑制作用。
本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。
權(quán)利要求
1.一種抑制腫瘤的化合物Intercedenside B，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物Intercedenside B的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將新鮮二色桌片參洗凈、切碎，用95％乙醇浸泡提取7天，濾出提取液，再用85％乙醇浸泡提取2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫；收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂甙提取物；(2)分離上述總皂甙提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含Intercedenside B的流份，再經(jīng)C18反相柱層析，以甲醇∶水梯度洗脫，薄層層析檢測，得Intercedenside B純品。
3.權(quán)利要求1所述抑制腫瘤的化合物Intercedenside B用于制備抗腫瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種從二色桌片參中分離的抗癌化合物Intercedenside B，分子式C
文檔編號A61P35/00GK1405178SQ0214502
公開日2003年3月26日 申請日期2002年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月4日
發(fā)明者易楊華, 鄒崢嶸, 劉寶姝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)