專利名稱：治療乙肝的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療乙肝的中藥組合物。
背景技術(shù)：
目前在我國(guó)，乙肝己成為僅次于心腦血管疾病和癌癥的第三大疾病，嚴(yán)重危害人民的健康和生命。近幾年乙肝流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)乙肝發(fā)病率占全國(guó)總?cè)丝诘?0％左右，占世界乙肝總數(shù)的1/3強(qiáng)。乙肝屬于多發(fā)病，難治病。病機(jī)多為肝腎陰虛，疫邪侵淫營(yíng)血，膠結(jié)不化，使肝氣郁結(jié)，肝失疏瀉，損耗陰津，氣血不調(diào)。目前治療乙肝的中成藥為數(shù)不少，但療效卓著的品種不多。
本申請(qǐng)的組合物，由具有30余年中醫(yī)教學(xué)和臨床經(jīng)驗(yàn)的鄒經(jīng)綸主任醫(yī)師組方。他在總結(jié)民間用葉下珠治療黃疸性肝炎的基礎(chǔ)上，配以扶正要藥云芝和活血化瘀的丹參，應(yīng)用30余年，洽愈了數(shù)以千計(jì)的患者。中醫(yī)諸多古籍相繼記載葉下珠治療黃疸，現(xiàn)代文獻(xiàn)資料《中藥大辭典》中記載葉下珠平肝清熱，利水解毒，治療黃疸和傳染性肝炎。美國(guó)對(duì)葉下珠的同屬植物苦味葉下珠進(jìn)行臨床研究，發(fā)現(xiàn)用藥后37名慢性乙肝患者有22名血清指標(biāo)轉(zhuǎn)陰，隨訪9個(gè)月，無1例復(fù)發(fā)，而對(duì)照組僅1例轉(zhuǎn)陰。國(guó)內(nèi)許多臨床和研究單位也對(duì)葉下珠進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)它確實(shí)具有消除體內(nèi)病毒的作用。水提部分對(duì)乙肝病毒有較強(qiáng)的抑制作用，醇提部分對(duì)病毒具有獨(dú)特的結(jié)合溶穿活性。云芝能雙向調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，具有扶正作用。紫草具有涼血、活血、解毒作用。丹參活血化瘀，其注射液用于治療慢性、遷延性肝炎。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)的目的就是提供一種治療乙肝的中藥組合物，通過藥味之間的配合，增強(qiáng)療效，并同時(shí)提高人體的正氣，更好地發(fā)揮抗病毒的作用。
本發(fā)明的組合物的基本原料組成如下葉下珠、云芝、丹參、紫草在本方中，葉下珠平肝清熱，利水解毒，為君藥；云芝益氣養(yǎng)陰，扶正祛邪，調(diào)和陰陽，為臣藥；丹參清營(yíng)涼血，活血化瘀；紫草涼血活血解毒。全方配伍精當(dāng)，共奏清熱利濕解毒，扶正養(yǎng)陰?kù)钚?，活血化瘀之功?br> 研究證明，與云芝同屬的多孔菌科的多種菌類藥材如茯苓、豬苓、靈芝、紫芝、云芝等均具有相似的扶正、免疫作用，藥材或提取物對(duì)肝炎具有治療作用，所以本申請(qǐng)中的云芝有用多孔菌科的任意一種菌類代替。
以上是本組合物的基本方，在此基礎(chǔ)上加入清熱解毒、活血化瘀、益氣生津等功效的藥味，會(huì)增強(qiáng)本組合物的功效，也在本專利的保護(hù)范圍之內(nèi)。例如，還可以加入茵陳、龍膽、金錢草、當(dāng)歸和/或其它藥味，在此不一一列舉。
按重量份計(jì)，各原料的配比為葉下珠5-20、云芝2-8、丹參1-5、紫草1-5按重量份計(jì)，各原料的優(yōu)選配比為葉下珠10、云芝4、丹參1、紫草1本組合物可以用藥劑學(xué)的常規(guī)方法制成所有常規(guī)的劑型，例如煎劑、煎膏劑、口服液、顆粒劑、片劑、散劑、水丸、蜜丸、膠囊劑、注射液等，原料藥可以經(jīng)過提取或不經(jīng)過提取制成組合物，也可以僅限于組合物中的某種原料進(jìn)行提取，或?qū)⒛撤N原料的一部分進(jìn)行提取。
制備方法中所述的提取包括冷浸、熱浸、滲漉、加熱回流及其他方法，所用溶劑可以是制藥過程中常用的溶劑，如水、30-95％的乙醇等。
本組合物的優(yōu)選制備方法為葉下珠用水提取，所得提取液上大孔吸附樹脂柱吸附，用30-75％的乙醇洗脫完全，合并洗脫液，濃縮得浸膏I。葉下珠水煎煮后的藥渣用乙醇提取，得醇提液；丹參與紫草共同用乙醇提取，得醇提液，與葉下珠藥渣的醇提液合并，回收溶劑，得浸膏II。云芝與丹參、紫草的藥渣合并，水提取，得水提取液，回收溶劑，得浸膏III。將浸膏I、II、III混勻，制粒，烘干，可以裝入膠囊，制成膠囊劑，或制成顆粒劑、片劑。
以上制備過程可以變化，例如，云芝不經(jīng)提取，粉碎后直接加入浸膏粉中；葉下珠也可以先用乙醇提取，然后用水提取藥渣，水提取液也可以不經(jīng)過大孔吸附樹脂凈化，直接回收溶劑，得到干浸膏I。也可以將葉下珠、丹參、紫草合并，依次用乙醇和水提取，或依次用水和乙醇提取，得到醇提浸膏和水提浸膏，與云芝合并制成膠囊，也可以在水提取時(shí)加入云芝共同提取。總之，本申請(qǐng)組合物的制備方法并不限于上述具體的方案，在此基礎(chǔ)上的任何變化都在本申請(qǐng)的保護(hù)范圍之內(nèi)。
在制備組合物的過程中，可以加入需要的輔料和添加劑。
具體實(shí)施方案取原料葉下珠2100g、云芝800g、丹參200g、紫草200g
葉下珠水煎煮，過濾，所得溶液上H103大孔吸附樹脂柱吸附，水洗至無色，依次用30％及60％乙醇洗脫完全，合并洗脫液，回收溶劑并烘干，得干浸膏I。葉下珠水煎煮后的藥渣用乙醇回流提取，得醇提液；丹參與紫草共同用乙醇回流，得醇提液，與葉下珠藥渣的醇提液合并，回收溶劑并烘干，得干浸膏II。云芝與丹參、紫草的藥渣合并，水煎煮，得水煎液，回收溶劑，烘干得干浸膏III。將浸膏I、II、III粉碎、混勻，制粒，烘干，裝入膠囊，制得1000粒。每粒重約0.5g。
本膠囊的通常服用量為每日3-4次，每次4-6粒。
組合物的質(zhì)量控制方法定性方法(1)取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量75-95％7醇提取，如果組合物是液體，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量75-95％7醇提取，棄去濾液，藥渣加水適量提取，過濾，取濾液2ml，加堿性酒石酸銅試液4-5滴，置水浴中加熱5分鐘，生成紅色沉淀。
對(duì)于用
具體實(shí)施例方式
制得的膠囊，取樣量為4g，優(yōu)選用75％乙醇20ml超聲振蕩20分鐘，棄去濾液，藥渣加水20ml，超聲振蕩20分鐘，取濾液2ml進(jìn)行顯色反應(yīng)。
(2)取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量氯仿提取，如果組合物是液體，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量氯仿提取，濾液濃縮至約1ml，作為供試品溶液，另取葉下珠對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(10∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
對(duì)于用
具體實(shí)施例方式
制得的膠囊，取樣量為1g，優(yōu)選氯仿20ml回流提取1小時(shí)，濾液濃縮至約1ml，作為供試液，按上述方法操作，進(jìn)行薄層色譜鑒別。
(3)取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量乙醇提取，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液，另取丹參酮IIA對(duì)照品，用乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
對(duì)于用
具體實(shí)施例方式
制得的膠囊，取樣量為2g，用乙醇15ml超聲提取30分鐘，濾液濃縮至約2ml，作為供試液，按上述方法操作，進(jìn)行(3)和(4)所述的薄層色譜鑒別。
(4)以(3)的供試液作為供試品溶液，取在左旋紫草素對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；再噴以10％氫氧化鉀溶液，斑點(diǎn)變藍(lán)色。
定量方法取組合物適量，如果是固體，精密稱定，直接用適量水提取，如果組合物是液體，精密量取，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量水提取，濾過，水洗殘?jiān)匆号c濾液合并，再加水適量，35±2℃溫?zé)醾溆茫痪芪?.5mol/L硫酸鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液20ml于500ml容量瓶中，加0.025％甲基紅的乙醇溶液1滴，滴加氨水至溶液顯微黃色，將上述備用溶液緩緩并入容量瓶中，不斷振搖，加畢繼續(xù)振搖1分鐘，35±2℃加熱30分鐘，期間振搖數(shù)次，取出，冷至室溫，稀釋至刻度，搖勻后以干燥濾紙濾過，棄去初濾液；精密吸取續(xù)濾液50ml，置500ml三角瓶中，加水300ml，加pH為10的氯化銨-氨水緩沖溶液25ml，鉻黑T指示劑0.1g，搖勻，用0.05mol/L乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由紫紅色轉(zhuǎn)為藍(lán)色為終點(diǎn)，并按下式計(jì)算 其中V＝MZN2+×20-MEDTA×VEDTA×10；0.1556為由試驗(yàn)測(cè)得的比例常數(shù)；W為稱樣量。
對(duì)于用
具體實(shí)施例方式
制得的膠囊，取樣量為10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，置500ml三角瓶中，加水100ml超聲提取30分鐘，濾過，水洗殘?jiān)?，洗液與濾液合并，再加水約至400ml，濾液濃縮至約2ml，作為供試液，35±2℃溫?zé)醾溆?；精密吸?.5mol/L硫酸鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液20ml，按上述定量方法隨后的步驟進(jìn)行定量測(cè)定。
每粒糅質(zhì)含量＝0.1556×V×平均裝量×1000/W其中V＝MZN2+×20-MEDTA×VEDTA×10
W為稱樣量，0.1556為由試驗(yàn)測(cè)得的比例常數(shù)。
按
具體實(shí)施例方式
制得的每粒膠囊中含糅質(zhì)應(yīng)不低于40mg。
按標(biāo)準(zhǔn)程序，對(duì)測(cè)定膠囊中糅質(zhì)含量的方法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)，結(jié)果如下1.重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)樣品，精密稱定6份，分別測(cè)定糅質(zhì)含量，結(jié)果如表1表1重現(xiàn)性試驗(yàn)

從表1結(jié)果看，該測(cè)定方法具有良好的重現(xiàn)性，測(cè)定方法穩(wěn)定。
2.回收率試驗(yàn)被測(cè)樣品已知含量為59.7mg/粒，取樣5份，每份約0.5g，精密稱定，每個(gè)樣品加401mg的純品沒食子酸對(duì)照品(稱取401.0mg沒食子酸對(duì)照品，加水溶于l00ml量瓶中，精密量取10ml加入樣品中)，照含量測(cè)定法項(xiàng)下測(cè)其含量，結(jié)果見表2表2加樣回收率實(shí)驗(yàn)表

從表2看，平均回收率為96.2％，表明此方法具有較好的可靠性，可用于控制產(chǎn)品中糅質(zhì)含量。
3.陰性對(duì)照；取不含葉下珠的其他藥材提取物5g，同法測(cè)其糅質(zhì)含量，取樣品5批，分別測(cè)得含量為0.65％、0.80％、0.54％、0.56％、0.70％，平均為0.65％，表明該制劑中其它成分對(duì)君藥葉下珠糅質(zhì)的含量影響較小，可以通過控制糅質(zhì)含量來監(jiān)控制劑的質(zhì)量，從而保證藥品質(zhì)量的可靠性。
臨床療效總結(jié)采用
具體實(shí)施例方式
制得的膠囊-乙肝清膠囊進(jìn)行臨床試驗(yàn)。
一.一般資料60例病例，選自診斷為慢性乙型肝炎的患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)高等醫(yī)藥院校傳染病學(xué)的“病毒性肝炎”診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中乙肝病毒攜帶者32例，慢性遷延性乙肝24例，慢性活動(dòng)性乙肝4例，男性33例，女性27例，年齡18-49歲，病程最短10個(gè)月，最長(zhǎng)12年。
治療前HBV標(biāo)記物HBsAg(+)者60例，HBeAg(+)者32例，HBV-DNA(+)者58例，肝功檢查ALT＞40u者25例，膽紅素輕度升高8例，膽紅素大于85mmol/L3例，白蛋白及蛋白比值異常4例，查體肝腫大11例，脾腫大5例。
二.治療方法采用乙肝清膠囊，口服，每次5粒，每日4次，連服90天。
治療前查HBV標(biāo)記物及肝功HBsAg、HBeAg、抗HBcIgM、HBV-DNA(PCR)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、白蛋白及白蛋白/球蛋白比值，于治療第90天及停藥后90天分別檢查肝功能及HBV標(biāo)記物各一次，記錄臨床癥狀及肝脾大小情況。
三.臨床治療結(jié)果治療第90天時(shí)，HBsAg60例轉(zhuǎn)(-)性21例(35％)，HBeAg32例轉(zhuǎn)(-)性22例(71％)，HBV-DNA58例轉(zhuǎn)(-)性46例(79％)，肝功檢查ALT＞40u降至40u以下者24例(96％)，膽紅素8例輕度升高及白蛋白及蛋白比值4例異常者全部恢復(fù)正常。
停藥后90天復(fù)查，另有2例HBV-DNA繼續(xù)轉(zhuǎn)為(-)外(82.8％)，其余與服藥第90天時(shí)血清指標(biāo)和肝功檢查結(jié)果相同。
以上結(jié)果顯示，乙肝清膠囊對(duì)乙肝HBV標(biāo)記物的清除及肝功能的恢復(fù)有顯著作用，對(duì)患者血清指標(biāo)HBsAg、HbeAg、HBV-DNA均有明顯的轉(zhuǎn)陰作用。在用藥過程中，病人的主要自覺癥狀，如肝瘀氣滯、肝腎陰虛所致的胸悶脅痛、肢體倦怠、肝區(qū)疼痛、口苦納差、失眠、脈弦細(xì)數(shù)、舌質(zhì)紅嫩等癥狀均有顯著的改觀。通過以上研究肯定了乙肝清膠囊對(duì)乙肝的治療作用。
另外，還進(jìn)行了乙肝清的藥效學(xué)研究，選用鴨肝模型進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本品大劑量給藥后5天和10天，鴨血清DHBV-DNA顯著下降，P＜0.05-0.01。
權(quán)利要求
1.一種治療乙肝的組合物，其制備所用的原料中含有以下重量配比的物質(zhì)葉下珠5-20、云芝2-8、丹參1-5、紫草1-5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述原料的重量配比為葉下珠10、云芝4、丹參1、紫草1。
3.制備權(quán)利要求1或2所述組合物的方法，其特征在于包括以下步驟葉下珠依次用水提取和乙醇提取，得到水提液浸膏I和醇提液；丹參與紫草共同用乙醇提取，得醇提液，與葉下珠的醇提液合并，回收溶劑，得浸膏II；云芝與丹參、紫草的藥渣合并，水提取，得水提取液，回收溶劑，得浸膏III；將浸膏I、II、III混勻，制粒，烘干，制成膠囊劑或顆粒劑，或制粒后壓片制成片劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于葉下珠依次用乙醇和水提取。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于葉下珠的水提取液上大孔吸附樹脂柱吸附，用30-75％的乙醇洗脫完全，合并洗脫液，濃縮得浸膏I。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于葉下珠的水提取液上H103大孔吸附樹脂柱吸附，依次用30％和60％的乙醇洗脫完全，合并洗脫液，濃縮得浸膏I。
7.鑒定權(quán)利要求1或2所述的組合物中某類成分的方法，包括以下至少一項(xiàng)(1)取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量75-95％乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量75-95％7醇提取，棄去濾液，藥渣加水適量提取，過濾，取濾液2ml，加堿性酒石酸銅試液4-5滴，置水浴中加熱5分鐘，生成紅色沉淀。(2)取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量氯仿提取，如果組合物是液體，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量氯仿提取，濾液濃縮至約1ml，作為供試品溶液，另取葉下珠對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(10∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(3)取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量乙醇提取，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液，另取丹參酮IIA對(duì)照品，用乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(4)以(3)的供試液作為供試品溶液，取在左旋紫草素對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；再噴以10％氫氧化鉀溶液，斑點(diǎn)變藍(lán)色。
8.測(cè)定權(quán)利要求1或2所述的組合物中糅質(zhì)含量的方法，包括以下步驟取組合物適量，如果是固體，精密稱定，直接用適量水提取，如果組合物是液體，精密量取，蒸發(fā)除去溶劑后，用適量水提取，濾過，水洗殘?jiān)?，洗液與濾液合并，再加水適量，35±2℃溫?zé)醾溆?；精密吸?.5mol/L硫酸鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液20ml于500ml容量瓶中，加0.025％甲基紅的乙醇溶液1滴，滴加氨水至溶液顯微黃色，將上述備用溶液緩緩并入容量瓶中，不斷振搖，加畢繼續(xù)振搖1分鐘，35±2℃加熱30分鐘，期間振搖數(shù)次，取出，冷至室溫，稀釋至刻度，搖勻后以干燥濾紙濾過，棄去初濾液；精密吸取續(xù)濾液50ml，置500ml三角瓶中，加水300ml，加pH為10的氯化銨-氨水緩沖溶液25ml，鉻黑T指示劑0.1g，搖勻，用0.05mol/L乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由紫紅色轉(zhuǎn)為藍(lán)色為終點(diǎn)，并按下式計(jì)算 其中V＝MZN2+×20-MEDTA×VEDTA×10；0.1556為由試驗(yàn)測(cè)得的比例常數(shù)；W為稱樣量。
9.葉下珠、云芝、丹參、紫草的組合或其提取物的組合在制備治療乙肝的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求1-9中任一權(quán)利要求所述的組合物或方法，其特征在于其中的云芝可以用多孔菌科的任何菌類代替，如茯苓、豬苓、靈芝、紫芝等。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療乙肝的組合物，原料組成中包括葉下珠、云芝、丹參、紫草。本申請(qǐng)還包括組合物的制備方法和其中所含某些成分的鑒別方法，及測(cè)定其中糅質(zhì)的方法。本組合物經(jīng)臨床和藥效學(xué)研究證明具有確切療效。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1491684SQ0214655
公開日2004年4月28日 申請(qǐng)日期2002年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月22日
發(fā)明者徐遠(yuǎn)鶴, 林德良 申請(qǐng)人:北京漢典中西藥研究開發(fā)中心