專利名稱：阿比朵爾在制備預(yù)防和治療sars病毒藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及阿比朵爾新的藥物用途，具體而言是涉及該化合物在制備預(yù)防和治療SARS病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前所知，冠狀病毒科(Coronaviridae)只感染脊椎動(dòng)物，與人和動(dòng)物的許多疾病有關(guān)。人冠狀病毒分別屬于OC43和229E兩個(gè)抗原型，它是引起人類上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒，尚無特異性治療和預(yù)防手段。SARS全稱是嚴(yán)重急性呼吸綜合癥，它與一種新的從未在人類或動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)過的冠狀病毒相關(guān)。
鹽酸阿比朵爾是非核苷類抗病毒新藥，是一種防治甲型和乙型流感及其它急性呼吸道病毒感染的高效藥物，通過激活2，5-寡聚腺苷酸合成酶，特異性抑制病毒囊膜與宿主細(xì)胞膜的融合，從而阻斷流感病毒的復(fù)制。相比其他類抗流感病毒藥物具有以下特點(diǎn)1、對(duì)流感病毒甲型、乙型均有效。2、兼有直接抑制病毒復(fù)制和誘導(dǎo)內(nèi)源性干擾素的雙重作用。3、毒性低、耐受性良好。
阿比朵爾具有以下藥效學(xué)性質(zhì)1、抗流感病毒本品對(duì)甲型和乙型流感病毒均有抑制作用。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)顯示它對(duì)甲型和乙型流感病毒的抑制率分別為80％和60％，對(duì)所有甲型流感病毒的抗原亞型均有活性。
國內(nèi)體外試驗(yàn)結(jié)果顯示阿比朵爾對(duì)流感病毒甲型的H1N1、H2N2、臨床分離株均有抑制作用，其50％抑制病毒病變濃度(IC50)分別為1.22±0.015、1.50±0.056和1.65±0.12μg/mL；其治療指數(shù)(TI)分別為37.6±0.48、30.6±1.13和27.9±1.94。表明阿比朵爾有直接抗甲型流感病毒作用。
體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示連續(xù)給藥7～8次，阿比朵爾15～125mg/kg，使小鼠平均生活日明顯延長(zhǎng)、死亡率顯著降低、病變明顯減輕，而且其作用明顯優(yōu)于陽性對(duì)照藥病毒唑。表明阿比朵爾對(duì)整體動(dòng)物具有顯著的抗流感病毒作用。
2、誘生干擾素作用國內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明小鼠灌胃給予阿比朵爾31.3～125mg/kg或腹腔注射阿比朵爾15～45mg/kg后，其血清中均出現(xiàn)一定濃度的IFN，峰值出現(xiàn)在給藥后18h，以后滴度下降，表明阿比朵爾具有誘生干擾素作用。
國外文獻(xiàn)報(bào)道阿比朵爾對(duì)人和動(dòng)物都有誘生干擾素作用，給藥24h可見最大滴度。人口服阿比朵爾服300mg/kg，24小時(shí)的干擾素滴度為160IU/mL。
3、免疫調(diào)節(jié)作用國內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果阿比朵爾灌胃給藥5d，劑量為25～100mg/kg·d使正常昆明種小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)顯著增加；50～100mg/kg·d，使氫化可的松所致免疫低下昆明種小鼠碳廓清K值明顯增加，劑量為12.5～50mg/kg·d使環(huán)磷酰胺所致免疫低下昆明種小鼠DTH反應(yīng)明顯增加，表明給予阿比朵爾不同劑量對(duì)正常及免疫低下昆明種小鼠的非特異性免疫功能、體液免疫功能和免疫低下小鼠的細(xì)胞免疫功能均有一定的促進(jìn)作用。
國外文獻(xiàn)報(bào)道阿比朵爾在體內(nèi)外試驗(yàn)中對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能有明顯的激活作用，對(duì)遲發(fā)型超敏反應(yīng)和宿主移植反應(yīng)等細(xì)胞免疫功能，對(duì)環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的體液免疫功能均有明顯的促進(jìn)作用。
本品毒性很低。國外文獻(xiàn)報(bào)道大鼠和豚鼠單劑口服2000mg/kg，耐受良好，表明口服急性毒性很低，估計(jì)LD50＞3000mg/kg。小鼠口服LD＝340mg/kg慢性毒性試驗(yàn)，大鼠100-125mg/kg，狗25mg/kg，口服給藥6個(gè)月，均未出現(xiàn)病理學(xué)變化。對(duì)兔和豚鼠長(zhǎng)期用藥也是安全的。
體內(nèi)外試驗(yàn)均表明本品無誘變作用。大鼠繁殖毒性研究表明本品無致畸作用。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述阿比朵爾的作用，我們通過體外病毒初篩實(shí)驗(yàn)來證明阿比朵爾對(duì)SARS病毒是否敏感，是否對(duì)SARS有效，從而獲得治療因SARS病毒感染引起的呼吸道疾病的藥物，這一設(shè)想得到了以下實(shí)驗(yàn)強(qiáng)有力的支持，取得預(yù)期效果。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明阿比朵爾對(duì)預(yù)防和治療冠狀病毒有效，尤其對(duì)預(yù)防和治療SARS病毒有效，而且優(yōu)選鹽酸阿比朵爾。
實(shí)施例1、鹽酸阿比朵爾體外抗SARS病毒初篩試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)材料1、藥品鹽酸阿比朵爾原料藥2、細(xì)胞非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero E6)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病毒室細(xì)胞庫提供3、病毒SARS病毒，BJ-01株，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病毒室提供4、培養(yǎng)基DMEM培養(yǎng)基加10％小牛血清二、試驗(yàn)的基本條件病毒測(cè)定在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室。
三、病毒毒力測(cè)定Vero E6細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μ1，含細(xì)胞2×104，37□培養(yǎng)24h，細(xì)胞長(zhǎng)成單層，加入10倍稀釋9個(gè)濃度的病毒培養(yǎng)基，37□，5％CO2溫箱培養(yǎng)，每天用顯微鏡觀察細(xì)胞病變(CPE)，每濃度4孔，用Reed-Muench法計(jì)算病毒半數(shù)感染劑量(TCID50)。
四、藥物對(duì)細(xì)胞毒性的測(cè)定Vero E6細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μl，含細(xì)胞2×104，37□培養(yǎng)24h，細(xì)胞長(zhǎng)成單層。藥物設(shè)3個(gè)濃度即100、50、10μg/ml(終濃度)，每濃度4孔，設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。每天觀察給藥細(xì)胞病變，觀察到7天，確定藥物的無毒濃度。
五、藥物抗病毒藥效測(cè)定VeroE6細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μl，含細(xì)胞2×104個(gè)/孔，37℃培養(yǎng)24h，細(xì)胞長(zhǎng)成單層。每孔加100μl病毒(100TCID50)，吸附2小時(shí)后，棄去病毒。然后加入不同濃度待測(cè)藥物。將最大無毒濃度以下的藥物對(duì)倍稀釋5個(gè)濃度，分別加入細(xì)胞板中，每孔100μl，每濃度4個(gè)孔，37℃5％CO2溫箱繼續(xù)培養(yǎng)。同時(shí)設(shè)病毒對(duì)照、細(xì)胞對(duì)照、藥物對(duì)照。當(dāng)病毒對(duì)照孔出現(xiàn)明顯病變時(shí)，用CPE法判斷藥效。
六、結(jié)果1、病毒毒力測(cè)定病毒的TCID50是10-7；2、藥物對(duì)細(xì)胞毒性的測(cè)定阿比朵爾的無毒濃度為10μg/ml，在此濃度下細(xì)胞形態(tài)與正常照相同，沒有出現(xiàn)病變(表1)；3、藥物抗病毒作用藥物濃度為10μg/ml時(shí)對(duì)病毒有完全的抑制作用(表2)。
表1阿比朵爾的細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果

“+”為細(xì)胞病變“-”為細(xì)胞正常表2阿比朵爾抗SARS病毒的作用

“-/4”為4個(gè)孔均為陰性，“+/4”為4個(gè)孔均為陽性
權(quán)利要求
1.阿比朵爾在制備預(yù)防和治療SARS病毒藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中的阿比朵爾優(yōu)選鹽酸阿比朵爾。
全文摘要
本發(fā)明涉及阿比朵爾在制備預(yù)防和治療SARS病毒藥物中的應(yīng)用。阿比朵爾已經(jīng)作為抗流感病毒藥物廣泛應(yīng)用，本發(fā)明通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，阿比朵爾對(duì)SARS病毒具有顯著的抑制作用，因此本品可以作為預(yù)防和治療SARS病毒的藥物應(yīng)用于臨床。
文檔編號(hào)A61P11/00GK1552321SQ0313714
公開日2004年12月8日 申請(qǐng)日期2003年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月5日
發(fā)明者李建青, 張宏武, 劉超, 王榮端, 申東民, 李銀貴 申請(qǐng)人:中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司