專利名稱：一種治療肝炎和黃疸的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝炎和黃疸的藥物組合物，該藥物組合物的有效組分為中藥茵陳、梔子和苦參的提取物。
背景技術(shù)：
乙型肝炎(Hepatitis B)是由乙肝病毒(Hepatitis B Virus)引起的一種臨床常見病，發(fā)病率高，危害性大，它能引起肝硬化、肝癌的發(fā)生，甚至導(dǎo)致患者死亡。據(jù)報(bào)道，我國乙肝病毒攜帶者高達(dá)10％。
近年來，西醫(yī)臨床治療乙型肝炎的主要方法是使用干擾素、拉米呋啶等抗病毒藥，但這些藥或價(jià)格昂貴，或副作用明顯。
大量研究表明，中醫(yī)藥在乙肝的臨床治療中顯示出極大優(yōu)勢(shì)，但目前應(yīng)用的多為醫(yī)生自擬的處方湯藥或粗提物中成藥，缺乏有效成份和藥效作用明確、療效肯定、劑型先進(jìn)、服用攜帶方便的中藥制劑。
本發(fā)明在長(zhǎng)期有效成份和藥理作用研究的基礎(chǔ)上，采用一系列新技術(shù)，將茵陳、梔子和苦參三味常用中藥分別提取有效成份后進(jìn)行配伍。藥理試驗(yàn)證明具有顯著的抗病毒和退黃疸作用。該藥物組合物有效成份和藥理作用清楚，劑型先進(jìn)，質(zhì)量可控，穩(wěn)定性好，有效期長(zhǎng)，可用于制備治療肝炎和黃疸的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療肝炎和黃疸的藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物的特征是，其有效組分為中藥茵陳、梔子和苦參的提取物，再輔以制藥中允許使用的輔助添加性成份組成。各有效藥用成份提取物以相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份。其中茵陳提取物中包括黃酮類和香豆素類成份(兩類成份總和含量大于50％(wt％))，梔子提取物中包括環(huán)烯醚萜類成份(含量大于50％(wt％))，苦參提取物中包括生物堿類成份(含量大于50％(wt％))。
在本發(fā)明的藥物組合物中，茵陳的提取物可采用乙醇提取，大孔吸附樹脂純化得到。梔子提取物可采用乙醇提取，大孔吸附樹脂純化得到，苦參提取物可采用乙醇提取，大孔吸附樹脂純化得到。
郁建平，何照范，熊綠蕓等，大孔吸附樹脂提取蕎麥蘆丁工藝研究，貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997，25(2)，3-8；[2]秦學(xué)功，元英進(jìn)，用大孔樹脂吸附分離苦豆子生物堿，中國中藥雜志，2002，27(6)，428-429，470；[3]鄭小江，“恩七葉甜”絞股藍(lán)總皂甙提取工藝研究，湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2001，19(3)，17-19；[4]《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第14冊(cè)98-99頁。
本發(fā)明的藥物組合物可通過臨床上常用的各種給藥途徑給藥，如口服給藥，注射給藥。
本發(fā)明的藥物組合物可選用藥學(xué)上可接受的各種附加劑，包括填充劑如淀粉、糊精、粉狀纖維素等；濕潤劑如乙基纖維素、糊精、微晶纖維素等；黏合劑如乙基纖維素、玉米朊、阿拉伯膠等；崩解劑如甲基纖維素、預(yù)凝膠淀粉、淀粉、微晶纖維素等；表面活性劑如吐溫-80、PEG4000、PVP等；稀釋劑如淀粉、葡萄糖、微晶纖維素等；潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、硅酸鈣等。
采用本領(lǐng)域常規(guī)制劑技術(shù)，按照《中華人民共和國藥典》2000年版一部、二部和董方言主編的《現(xiàn)代中藥新劑型新技術(shù)》2001版，即可把本發(fā)明藥物組合物制成藥學(xué)上的各種制劑，包括普通制劑和緩(控)釋制劑，如片劑，膠囊劑，滴丸劑，溶液劑，緩釋劑，控釋劑及液體注射劑和固體注射劑。
總黃酮成份含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁10.768mg，置50ml量瓶中，加甲醇5ml，水浴微熱溶解，放冷，加水至刻度，搖勻，即得(每1ml含無水蘆丁0.2154mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取對(duì)照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，于500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備取茵陳提取物、制劑加水溶解，過濾，濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法取供試品溶液1ml按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下操作，測(cè)定吸收度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得。
6，7-二甲氧基香豆素含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，水-甲醇(70∶30)為流動(dòng)相，柱溫30℃，流量1.0ml/分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)為343nm。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取6，7-二甲氧基香豆素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.058mg的溶液。
供試品溶液的制備取茵陳提取物、抗肝炎制劑加甲醇溶解，過濾，濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法精密吸取取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10ul注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算，即得。
總生物堿成份含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿5.200mg，以無水乙醇溶解并稀釋至50ml量瓶中。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置50ml磨口具塞三角瓶中，加2×10-4M(即0.0125％)溴麝香草酚藍(lán)pH7.6的緩沖液(用0.1M磷酸二氫鈉溶液50ml加0.1M氫氧化鈉溶液42.2ml，再加水7.6ml配成，再用pH計(jì)校正pH值為7.6)6.00ml，氯仿6.00ml，密塞劇烈振搖2分鐘，倒入60ml分液漏斗中，靜置約40分鐘，使水層與氯仿層完全分開清后，分出氯仿層于磨口試管中，于413nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，測(cè)定時(shí)用溴麝香草酚藍(lán)pH7.6的緩沖液12.00ml，加氯仿12.00ml，如上振搖，分出氯仿層作為比色空白。用測(cè)得的吸收度為縱坐標(biāo)，生物堿的μg數(shù)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備取苦參提取物、制劑加水溶解，過濾，濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法取供試品溶液1.0ml按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下操作，測(cè)定吸收度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得。
環(huán)烯醚萜苷類成份含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取梔子苷10.061mg，以乙醇溶解并稀釋至25ml量瓶中。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對(duì)照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，于具塞試管中，水浴蒸干，加入0.2ml的5％香草醛冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，60℃水浴加熱15分鐘，置冰水浴中3分鐘，加入冰醋酸5ml，隨行空白，于530nm處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備取梔子提取物、制劑加水溶解，過濾，取濾液以乙酸乙酯提取三次(10、10、10ml)，酯層棄去，水層置水浴上蒸干，以乙醇溶解定容于25ml，作為供試品溶液。
測(cè)定法取供試品溶液1ml，于具塞試管中，水浴蒸干，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下操作，測(cè)定吸收度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，即得。
本發(fā)明藥物組合物對(duì)2.2.15細(xì)胞HBeAg，HBsAg的影響試驗(yàn)HBeAg是位于細(xì)胞核表面的抗原，可用來衡量乙肝病毒復(fù)制的強(qiáng)弱，若它的表達(dá)水平高，則說明病毒正在大量復(fù)制。而HBsAg是表面抗原，它的高水平表達(dá)說明病毒已感染了肝細(xì)胞。若藥物有效，則HBeAg和HBsAg的表達(dá)水平可明顯降低。
1.對(duì)2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)中HBeAg和HBsAg表達(dá)的作用(體外)2.2.15細(xì)胞是乙型肝炎病毒DNA克隆轉(zhuǎn)染人尬癌細(xì)胞(HepG2)的細(xì)胞系。2.2.15細(xì)胞每毫升20萬個(gè)接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔1ml，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。分為HBsAg、HBeAg陽性對(duì)照組，加入拉米呋啶(經(jīng)培養(yǎng)液浸泡、溶解，離心去沉淀)；陰性對(duì)照組，HepG2細(xì)胞加入培養(yǎng)液；細(xì)胞對(duì)照組，2.2.15細(xì)胞加入培養(yǎng)液；藥物組，藥液無毒濃度以下2倍稀釋，共5個(gè)稀釋度1/80，1/160，1/320，1/640，1/1280，每濃度4個(gè)孔。37℃培養(yǎng)，每4天換原濃度藥液培養(yǎng)。
第8天時(shí)收獲培養(yǎng)液。分別測(cè)定HBsAg、HBeAg。用γ-記數(shù)儀測(cè)定每孔cpm值。計(jì)算抗原抑制百分率抗原抑制百分率＝(細(xì)胞對(duì)照cpm-給藥組cpm)/細(xì)胞對(duì)照cpm計(jì)算藥物抑制抗原半數(shù)有效濃度(IC50)IC50＝Antilog[B+(50-B)/(A-B)×C]A＝log＞50％藥物濃度 B＝log＜50％藥物濃度 C＝log稀釋倍數(shù)表1本品在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對(duì)HBsAg和HBeAg的抑制作用(％)藥物 HBsAg(CPM)HBeAg(CPM)稀釋度抑制％ IC50(稀釋度) SI抑制％ IC50(稀釋度) SI1/80 84.13±4.16 1/379.1453.59±9.341/166 62.39 3.72±1.391/160 63.73±12.8239.51±4.311/320 54.49±10.8828.74±12.041/640 42.04±5.82 22.80±18.951/128027.25±2.67 11.45±9.62結(jié)果表明本品對(duì)2.2.15細(xì)胞的乙肝病毒顆粒分泌具有顯著的抑制作用，對(duì)HBsAg抑制率達(dá)84.13％，對(duì)HBeAg抑制率達(dá)53.59％。
2.對(duì)2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)上清液HBV-DNA的抑制作用(體外)第8天收獲細(xì)胞上清液后，經(jīng)聚乙二醇沉淀，蛋白酶K裂解，苯酚∶氯仿∶異戊醇抽提，無水乙醇沉淀核酸等步驟，真空抽干，重溶于TE緩沖液中作樣品。
進(jìn)行斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)點(diǎn)樣取20ul(DNA含量25ug)，經(jīng)變性、中和，并以20×SSC緩沖液對(duì)倍稀釋至1∶8倍稀釋于硝酸纖維素膜上，并經(jīng)干烤、預(yù)雜交、雜交、洗膜、放射自顯影等步驟。以常規(guī)方法沖洗X光片。掃描儀掃描光片，用gel-pro軟件測(cè)定密度，計(jì)算抑制率及IC50。
表2抗肝炎復(fù)方提取物對(duì)2.2.15細(xì)胞HBV-DNA的作用藥物濃度細(xì)胞上清液HBV-DNA稀釋倍數(shù)/抑制率％(稀釋度)稀釋1/2(CPM) 抑制率％ IC50SI1/80669.34866.39 1/611.7910.631/160 583.03870.721/320 597.29570.011/640 950.48952.271/1280 1191.3840.17細(xì)胞對(duì)照1991.42結(jié)果表明本品對(duì)2.2.15細(xì)胞HBV-DNA的復(fù)制有顯著的抑制作用。
3.對(duì)2.2.15細(xì)胞HBV-DNA Southern Blot的抑制作用(體外)Southernblot第8天吸除培養(yǎng)液收取細(xì)胞，細(xì)胞經(jīng)裂解液裂解，等體積苯酚∶氯仿∶異戊醇抽提2次，加無水乙醇沉淀核酸，真空抽干，重溶于20ulTE緩沖液中，加入DNA樣品緩沖液，將樣品加于瓊脂糖膠上電泳。電泳后依次經(jīng)變性、中和、轉(zhuǎn)膜后。同斑點(diǎn)雜交膜一起烤膜、雜交、暴光。掃描儀掃描光片，用gel-pro軟件測(cè)定密度，計(jì)算抑制率及IC50。
表3本品對(duì)2.2.15細(xì)胞HBV-DNA Southern Blot的抑制數(shù)據(jù)1/1280抑制1/640抑制1/320抑制1/160抑制1/80抑制RowsIC50SI(％) (％) (％) (％)(％)r1 46.4947.04 63.37 61.89 88.121/482.9410.82r2 48.7947.98 56.29 71.01 83.301/479.5310.76r3 16.8625.47 54.86 73.32 68.181/306.626.87r4 4.93 20.42 50.51 57.33 86.401/262.015.89Sum 11.4724.95 52.17 62.33 81.651/288.956.4結(jié)果表明通過用Southern blot檢測(cè)，證明本品對(duì)2.2.15細(xì)胞內(nèi)總HBV-DNA的表達(dá)有顯著的抑制作用。
本發(fā)明藥物組合物對(duì)鴨乙型肝炎病毒感染鴨的血清鴨乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影響試驗(yàn)(體內(nèi))1日齡北京鴨經(jīng)脛靜脈注射上海麻鴨DHBV-DNA陽性血清，每只0.2ml，感染7天后隨機(jī)分組如下病毒對(duì)照組腹腔注射生理鹽水2.0ml，1天2次，連續(xù)給藥10天；
陽性對(duì)照組口服給拉米呋啶50mg/kg，1天2次，連續(xù)給藥10天給藥組腹腔注射本發(fā)明藥物組合物溶液(原液1∶2稀釋)2.0ml，1天2次，連續(xù)給藥10天。
在用藥前、用藥第5天、用藥第10天和停藥后第3天，自鴨脛靜脈取血，分離血清，采用ElISA法測(cè)定其中鴨乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的OD值。并由此計(jì)算抑制率抑制率＝(給藥前OD值-給藥后OD值)/給藥前OD值×100％OD值越高，則DHBV-DNA的含量越高，說明病毒復(fù)制水平高。若藥物有效，則DHV-DNA的水平在給藥后會(huì)下降。
1.抗肝炎有效部位腹腔注射對(duì)鴨血清DHBV-DNA OD的影響(體內(nèi))取鴨血清，同時(shí)點(diǎn)膜，測(cè)定鴨血清中DHBV-DNA水平的動(dòng)態(tài)，按缺口翻譯試劑盒說明書方法，用32P標(biāo)記DHBV-DNA探針，并作鴨血清斑點(diǎn)雜交，放射自顯影膜片斑點(diǎn)，在酶標(biāo)檢測(cè)儀測(cè)定OD值(濾光片為490nm)，計(jì)算血清DHBV-DNA密度，以雜交斑點(diǎn)OD值作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。
計(jì)算每組鴨不同時(shí)間血清DNA OD值的平均值(X±SD)，并將每組鴨用藥后不同時(shí)間(T5，T10)和停藥后3天(P3)血清DHBV-DNA水平與同組給藥前(T0)OD值比較，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
計(jì)算不同時(shí)間抑制百分率，比較各組鴨血清DHBV-DNA抑制率的動(dòng)態(tài)。
DNA抑制％＝[給藥前(T0)OD值-給藥后(T5，T10，P3)OD值]/給藥前(T0)OD值×100％表4抗肝炎有效部位腹腔注射對(duì)鴨血清DHBV-DNA OD值比較組別劑量 鴨數(shù) 鴨血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)(ml/只) (只) T0 T5 T10 P3生理鹽水6 0.676±0.050.695 ± 0.652 ± 0.711 ±0.08 0.07 0.07原液1/20稀釋 0.5 6 0.580±0.020.552 ± 0.567 ± 0.609 ±0.03** 0.08 0.08原液1/20稀釋 1.0 6 0.705±0.100.573 ± 0.531 ± 0.538 ±0.12** 0.05**0.04***原液1/20稀釋 2.0 6 1.118±0.150.779 ± 0.895 ± 1.002 ±0.36*0.32* 0.22拉米呋啶 50mg/kg 6 1.478±0.410.905 ± 0.830 ± 1.534 ±0.29* 0.23*0.31統(tǒng)計(jì)處理t1，p1給藥組不同時(shí)間(T5、T10，P3)鴨血清DHBV-DNAOD值與感染前(T0)OD值比較(配對(duì)t檢驗(yàn))。*p1＜0.05，**p1＜0.01。
結(jié)果表明抗肝炎有效部位腹腔注射第5，10天和停藥后第3天(P3)，能顯著降低鴨血清DHBV-DNA含量(P＜0.05-0.01)。說明本品具有顯著的抑制病毒復(fù)制作用。
2.抗肝炎有效部位腹腔注射對(duì)鴨血清DHBV-DNA水平抑制率的影響(體內(nèi))表5抗肝炎有效部位腹腔注射對(duì)鴨血清DHBV-DNA水平抑制率的比較藥物劑量 鴨數(shù)抑制率(％)(ml/只)(只)T5T10 P3病毒對(duì)照 6 -3.59 2.75 -5.61原液1/20稀釋0.56 4.84 2.60 -4.96原液1/20稀釋1.06 18.82*23.58*22.54**原液1/20稀釋2.06 32.30*21.18 9.83拉米呋啶50mg/kg 6 36.66** 40.82** -13.46統(tǒng)計(jì)處理t2，p2給藥組不同時(shí)間(T5、T10，P3)鴨血清DHBV-DNA水平與感染前(T0)比較的抑制％與病毒對(duì)照組抑制％比較(成組t檢驗(yàn))。*p2＜0.05，**p2＜0.01。
結(jié)果表明本品腹腔注射對(duì)感染鴨血清DHBV-DNA水平的抑制效果顯著(P＜0.05-0.01)，無毒性反應(yīng)。表明抗肝炎有效部位腹腔注射治療乙型肝炎病毒感染鴨有效。3.抗肝炎有效部位口服對(duì)鴨血清DHBV-DNA OD的影響(體內(nèi))實(shí)驗(yàn)分組同前，只將給藥方式由腹腔注射改為口服，實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)及結(jié)果處理方法亦同前。
表6抗肝炎有效部位口服對(duì)鴨血清DHBV-DNA OD值比較組別劑量 鴨數(shù)鴨血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)(ml/只) (只)T0 T5 T10 P3生理鹽水 6 0.708 ± 0.742 ± 0.659 ± 0.567 ±0.11 0.13 0.08 0.09原液1/20稀釋 2.0 6 0.735 ± 0.711 ± 0.645 ± 0.606 ±0.10 0.11 0.04 0.07原液1/10稀釋 2.0 6 0.760 ± 0.687 ± 0.559 ± 0.520 ±0.18 0.19 0.09*0.08*原液1/5稀釋2.0 6 0.652 ± 0.646 ± 0.553 ± 0.703 ±0.03 0.09 0.07** 0.07拉米呋啶 50mg6 1.146 ± 0.754 ± 0.366 ± 0.924 ±0.15 0.16*0.07**0.13*統(tǒng)計(jì)處理t1，p1給藥組不同時(shí)間(T5、T10，P3)鴨血清DHBV-DNAOD值與感染前(T0)OD值比較(配對(duì)t檢驗(yàn))。*p1＜0.05，**p1＜0.0l，***p1＜0.001。
結(jié)果表明本品口服給藥后第10天和停藥后第3天(P3)，能顯著降低鴨血清DHBV-DNA含量(P＜0.05-0.01)。說明抗肝炎有效部位口服對(duì)乙肝病毒復(fù)制有抑制作用。
4.抗肝炎有效部位口服對(duì)鴨血清DHBV-DNA水平抑制率的影響(體內(nèi))表7抗肝炎有效部位口服對(duì)鴨血清DHBV-DNA水平抑制率的比較藥物 劑量 鴨數(shù) 抑制率(％)(ml/只) (只) T5 T10 P3病毒對(duì)照 6 -9.14 3.20 11.89原液1/20稀釋 2.06 4.57 15.9922.30原液1/10稀釋 2.06 6.08 15.97-22.73原液1/5稀釋2.06 22.65**28.51* 2.14拉米呋啶 50mg 6 32.37**67.92** 18.29統(tǒng)計(jì)處理t2，p2給藥組不同時(shí)間(T5、T10，P3)鴨血清DHBV-DNA水平與感染前(T0)比較的抑制％與病毒對(duì)照組抑制％比較(成組t檢驗(yàn))。p2＜0.05，**p2＜0.01。
結(jié)果表明本品口服對(duì)感染鴨血清DHBV-DNA水平的抑制效果顯著(P＜0.05-0.01)。表明抗肝炎有效部位口服治療乙型肝炎病毒感染鴨有效。
本發(fā)明藥物組合物對(duì)大鼠膽汁分泌的影響試驗(yàn)大鼠靜脈注射藥物組合物(4g生藥/kg)約一小時(shí)后，膽汁分泌量及膽汁中膽紅素含量明顯增加，與對(duì)照組(生理鹽水)相比，具有極顯著意義(p＜0.01)。提示本品具有明顯的退黃作用。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述，但不對(duì)其有任何限制。
實(shí)施例1 茵陳提取物的制備方法取茵陳成熟全草切成約1cm小段，以70％乙醇回流提取2次，第一次加8倍量，提取2.5小時(shí)，第二次加6倍量，提取1.5小時(shí)，濾過，濾液合并，60℃減壓回收乙醇至濃縮液無醇味，濾液減壓濃縮至4g生藥/ml，以D101大孔吸附樹脂吸附12小時(shí)后，先以水洗至洗出液幾乎無色，水液棄取，以50％乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色，減壓濃縮洗脫液至無醇味，再加水約至2g生藥/ml于0℃冷藏24小時(shí)，過濾后將濾液減壓濃縮至干，低溫干燥，粉碎，即得。
用分光光度法測(cè)定提取物中黃酮類成份含量，應(yīng)不低于50％。
實(shí)施例2 梔子提取物的制備方法取梔子藥材粉碎成10目粗粉，以80％乙醇回流提取2次，每次加入4倍量，各回流1小時(shí)，濾過，合并濾液，60℃減壓濃縮至2g生藥/ml，加入8.5倍乙醇充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)，將上清液于60℃減壓濃縮至無醇味，再加水至0.25g生藥/ml，將藥液于120℃加熱1小時(shí)，放入0℃冰箱冷藏24小時(shí)，濾過，低溫減壓濃縮至2g生藥/ml，以D101大孔吸附樹脂吸附12小時(shí)后，先以水至洗出液為淺黃色，棄取，繼續(xù)以乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色，減壓濃縮洗脫液至無醇味，再加水約至2g/ml于0℃冷藏24小時(shí)，過濾后將濾液減壓濃縮至干，低溫干燥，粉碎，即得。
用分光光度法測(cè)定提取物中環(huán)烯醚萜苷類成份含量，應(yīng)不低于50％(wt％)。
實(shí)施例3 苦參提取物的制備方法取苦參10目粗粉，30％乙醇提取4次，第一次加8倍量提取2小時(shí)，第二次加6倍量提取1小時(shí)，后兩次各加4倍量各提取1小時(shí)，濾過，濾液于60℃減壓濃縮至1g生藥/ml加入乙醇使含醇量至50％，靜置12小時(shí)，低溫減壓回收上清液，濃縮至4g生藥/ml，以D101大孔吸附樹脂吸附12小時(shí)后，先以水洗至洗出液幾乎無色，棄去水液，繼續(xù)以80％乙醇洗脫至洗脫液幾無色，減壓濃縮至洗脫液至無醇味，再加水至2g/ml于0℃冷藏24小時(shí)后過濾，將濾液低溫濃縮至干，低溫干燥，粉碎，即得。
用分光光度法測(cè)定提取物中苦參總堿含量，應(yīng)不低于50％(wt％)。
實(shí)施例4分別稱取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶0.5份∶0.5份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于22.5％(重量百分比)，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于15.5％(重量百分比)，苦參總堿含量應(yīng)不低于(重量百分比)12％。
實(shí)施例5分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶0.5份∶1份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于18％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于12％，苦參總堿含量應(yīng)不低于20％。
實(shí)施例6分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶0.5份∶1.5份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；
取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于15％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于11％，苦參總堿含量應(yīng)不低于24％。
實(shí)施例7分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶1份∶0.5份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于17％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于24％，苦參總堿含量應(yīng)不低于9％。
實(shí)施例8分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶1份∶1份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；
取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于15％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于20％，苦參總堿含量應(yīng)不低于15％。
實(shí)施例9分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶1份∶1.5份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于13％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于18％，苦參總堿含量應(yīng)不低于19％。
實(shí)施例10分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶1.5份∶0.5份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；
取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于14％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于29％，苦參總堿含量應(yīng)不低于7％。
實(shí)施例11分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶1.5份∶1份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于12％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于25％，苦參總堿含量應(yīng)不低于13％。
實(shí)施例12分別取茵陳提取物、梔子提取物、苦參提取物，相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶1.5份∶1.5份，混合均勻，即得本發(fā)明藥物組合物。
取藥粉加淀粉，糊精，糖粉適量，以乙醇制粒，干燥，整粒，加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成片劑；取藥粉加2份，加淀粉1份，適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成膠囊劑；取藥粉1份，加聚乙二醇(4000或6000)1份，加熱熔融，滴入甲基硅油、液體石蠟或植物油中，收集滴丸，制成滴丸劑；取藥粉3份，加蔗糖1份，加適量苯甲酸類或尼泊金類防腐劑，加水稀釋，制成溶液劑；取藥粉加羥丙甲基纖維素、乳糖，混合均勻，以適量乙醇制粒，干燥，整粒，裝入膠囊，制成緩(控)釋膠囊劑；加適量硬脂酸鎂壓片，包衣，制成緩(控)釋片劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加5％葡萄糖溶液或0.9％生理鹽水溶液稀釋，微孔濾膜過濾至澄明，灌封，115℃熱壓滅菌，制成液體注射劑；取藥粉加注射用水溶解，超濾，濾液加甘露醇、山梨醇或葡萄糖，混合均勻，冷凍干燥，制成凍干粉針注射劑。
制劑中黃酮及香豆素類成份含量總和應(yīng)不低于11％，環(huán)烯醚萜苷類成份含量應(yīng)不低于22％，苦參總堿含量應(yīng)不低于17％。
本發(fā)明所提及的“份”均為重量份。
本發(fā)明所提及的“％”均為重量百分比。
權(quán)利要求
1.一種用于治療肝炎和黃疸的藥物組合物，其特征在于以中藥茵陳、梔子和苦參的提取物為有效藥用成份，和制藥中允許使用的輔助添加成份組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于有效藥用成份提取物的比例為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份，加入適量藥用附加劑配制制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所說的提取物有效藥用成份為，茵陳提取物中包括黃酮類和香豆素類成份(兩類成份總和大于50％(wt％))，梔子提取物中包括環(huán)烯醚萜類成份(大于50％(wt％))，苦參提取物中包括生物堿類成份(大于50％(wt％))。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于藥學(xué)上可接受的附加劑包括填充劑如淀粉、糊精、粉狀纖維素；濕潤劑如乙基纖維素、糊精、微晶纖維素；黏合劑如乙基纖維素、玉米朊、阿拉伯膠；崩解劑如甲基纖維素、預(yù)凝膠淀粉、淀粉、微晶纖維素；表面活性劑如吐溫-80、PEG4000、PVP；稀釋劑如淀粉、葡萄糖、微晶纖維素；潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、硅酸鈣。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其劑型包括片劑，膠囊劑，滴丸劑，溶液劑，緩釋劑，控釋劑及液體注射劑和固體注射劑。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物的醫(yī)學(xué)用途，該藥物組合物可作治療肝炎和黃疸的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療肝炎和黃膽的藥物組合物，以中藥茵陳、梔子和苦參的提取物為有效藥用成分，和制藥中允許使用的輔助添加成分組成。各有效藥用組分提取物以相當(dāng)于其提取所用的原料生藥重量表示的重量組成為茵陳∶梔子∶苦參＝2份∶0.5～1.5份∶0.5～1.5份，經(jīng)藥理試驗(yàn)證明可抗肝炎和降黃疸，可作治療肝炎和黃疸的藥物。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1589792SQ0315053
公開日2005年3月9日 申請(qǐng)日期2003年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月25日
發(fā)明者黃成鋼, 張振秋, 朱海燕, 王冰, 葉冠 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院上海藥物研究所