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      皮膚外用組合物的制作方法

      文檔序號:1024135閱讀:247來源:國知局
      專利名稱:皮膚外用組合物的制作方法
      技術(shù)領域
      本發(fā)明涉及一種皮膚外用制劑,其含有從開菲乳(Kefir)開菲乳顆粒獲得的發(fā)酵乳制品。尤其是,本發(fā)明涉及一種皮膚外用制劑,其中含有從中開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品開菲乳(Kefir)和/或開菲乳清(Kefir whey)開菲乳顆粒。本發(fā)明的皮膚外用制劑非常適于用作化妝產(chǎn)品,用于頭皮和毛發(fā)的組合物,用于清潔皮膚的組合物,用于皮膚病的治療用組合物等,其具有出色的細胞活化功效,抗皮膚老化的功效,增白功效,抑制黑色素生成的功效等等。
      背景技術(shù)
      皮膚活性不僅受諸如老化的內(nèi)環(huán)境的顯著影響,也受諸如紫外射線和各種刺激的外環(huán)境的影響,,由此容易引起一些皮膚問題,諸如皮膚粗糙,皺紋,斑點,皮膚黯淡。為了緩解這些問題,人們檢測了大量的皮膚活化成分。其中,專門針對細胞活化成分和增白成分作了大量研究。細胞活化成分可刺激細胞分裂,增強新陳代謝并對維持肌體健康起到很好的效果。并且,所述成分可活化表皮角質(zhì)細胞,促使老化角質(zhì)細胞脫落并促進被稱作皮膚更新的角質(zhì)化過程,從而改善皮膚至健康、美觀的狀態(tài)。
      開菲乳是高加索地區(qū)的一種傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品。它是一種類似于酸乳的飲料,通過采用一種稱為開菲乳顆粒的種子菌株作為菌母發(fā)酵哺乳動物奶乳而得到。尤其是,這種類似于酸乳的發(fā)酵乳制品的透明液體部分稱為開菲乳清。開菲乳可以是幾乎所有水分都去除的干態(tài),也可以是含有相對較多水分的凝膠態(tài)。生產(chǎn)干態(tài)開菲乳的方法公開于諸如JP-83842/1987公報中并且生產(chǎn)開菲乳清的方法則公開于JP-219538/1990公報中。上述文獻的公開內(nèi)容均在此引入作為參考。
      此外,很多人熱衷于開菲乳的研究,不僅為得到健康食品,也因為集中在其出色健康功效的藥物應用(JP-320069/1993公報,JP-211668/1994公報,JP-37711/1997公報,JP-191852/1997公報等)。所進行的大部分研究和開發(fā)目標均在于口服攝入含有開菲乳的食品或藥物組合物。
      盡管開菲乳具有出色的效果,但是由于最初是作為發(fā)酵乳飲料,并且具有獨特口味和pH特征(約4.20-4.40),因而與其它常見酸乳產(chǎn)品相比很難用于除口服產(chǎn)品外的其它方面,諸如皮膚外用制劑,尤其是當使用時需要更好觸感的化妝品方面。
      另一方面,健康的概念正在向多方面擴展并且開始不僅包括精神和身體方面而且也包括屬于美容領域的外貌,諸如皮膚。為了維護擴展意義上的健康,除了預料具有快速效果的藥物外,在日常生活中也需要各種顯效慢但是安全并且使用簡便的產(chǎn)品。

      發(fā)明內(nèi)容
      鑒于這些情況,本發(fā)明人一直專注于從開菲乳顆粒得到的傳統(tǒng)增進健康的食品發(fā)酵乳制品的功能,即安全,熱穩(wěn)定性和對皮膚諸如細胞活化的效果,并且通過克服上述缺陷并利用所述發(fā)酵乳制品的特性完成了本發(fā)明。
      換句話說,本發(fā)明涉及一種皮膚外用制劑的組合物,其含有從開菲乳顆粒獲得的發(fā)酵乳制品,及其藥用和化妝品用載體。同樣地,本發(fā)明涉及一種皮膚外用制劑的組合物,例如化妝品組合物,用于頭皮和毛發(fā)的組合物,以及用于皮膚清潔劑的組合物,進一步地含有一種或多種選自如下的成分自由基清除成分,抗氧化劑成分,消炎成分,紫外線防護成分及保濕成分。此外,本發(fā)明涉及含有本發(fā)明發(fā)酵乳制品的細胞活化劑,抗老化劑,皮膚增白劑或黑色素生成抑制劑。
      同樣,本發(fā)明涉及通過將從開菲乳顆粒獲得的有效量發(fā)酵乳制品施用于皮膚從而活化皮膚細胞,抗皮膚老化,抑制皮膚黑色素生物合成,和/或增白皮膚的方法。本發(fā)明方法的優(yōu)選實施例包括用于化妝或清潔皮膚的方法,用于化妝或清潔頭皮和/或毛發(fā)的方法,用于治療皮膚病患者皮膚的方法等。
      此外,本發(fā)明涉及從開菲乳顆粒獲得的發(fā)酵乳制品在生產(chǎn)皮膚外用制劑組合物中的應用。


      圖1.是作為顯示實驗實施例1結(jié)果示圖的照片。
      圖2.是顯示實驗實施例1結(jié)果的示圖(hMLH1)。
      圖3.是顯示實驗實施例1結(jié)果的示圖(hPMS1)。
      圖4.是顯示實驗實施例1結(jié)果的示圖(hPMS2)。
      圖5.是作為顯示實驗實施例2結(jié)果示圖的照片。
      圖6.是顯示實驗實施例2結(jié)果的示圖(hMLH1)。
      圖7.是作為顯示實驗實施例3結(jié)果示圖的照片。
      圖8.是顯示實驗實施例3結(jié)果的示圖。
      圖9.是作為顯示實驗實施例4(1)結(jié)果示圖的照片。
      圖10.是顯示實驗實施例4(1)結(jié)果的示圖。
      圖11.是作為顯示實驗實施例4(2)結(jié)果示圖的照片。
      圖12.是顯示實驗實施例4(2)結(jié)果的示圖。
      圖13.是作為顯示實驗實施例4(3)結(jié)果示圖的照片。
      圖14.是顯示實驗實施例4(3)結(jié)果的示圖。
      圖15.是顯示實驗實施例5結(jié)果的示圖。
      實施本發(fā)明的最佳方式用于本發(fā)明的從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品可通過對哺乳動物奶乳,大豆奶,粉狀脫脂奶等由顆粒狀細菌進行發(fā)酵而得到,所述顆粒狀細菌為稱作開菲乳顆粒的種子菌株,其含有諸如乳酸,酵母等的至少5-6種組合功能等。當將開菲乳顆粒接種于哺乳動物奶諸如牛奶或山羊奶,大豆奶,脫脂奶等中時,可發(fā)生乳酸桿菌的乳酸發(fā)酵和酵母的乙醇發(fā)酵。開菲乳顆粒的發(fā)酵奶制品有別于只通過乳酸桿菌發(fā)酵而成的酸乳,有一股酸味,并且除了由酵母釋放的二氧化碳氣體引起的輕微酒精味道外,還有一種刺激性氣味。同樣,所述的發(fā)酵奶制品富含養(yǎng)分,諸如乳糖,肽,氨基酸,乳酸,維生素,礦物質(zhì)給我們的身體帶來很好的效果。
      本發(fā)明中采用的發(fā)酵奶制品可以通過普通哺乳動物奶乳發(fā)酵得到。哺乳動物奶乳的實例包括牛奶,馬奶,綿羊奶,山羊奶,水牛奶等等。從哺乳動物奶生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品的方法不限于但可以是傳統(tǒng)方法,諸如采用普通牛奶為原料并用開菲乳顆粒進行發(fā)酵,或者采用東歐較常見的馬奶。然而,優(yōu)選的是以牛奶為原料,用開菲乳顆粒發(fā)酵得到的產(chǎn)物(見JP-83842/1987公報)。
      另外,可以采用普通大豆奶,粉狀脫脂奶等等通過開菲乳顆粒生產(chǎn)得到發(fā)酵奶制品。
      對于本發(fā)明中的開菲乳和開菲乳清而言,上文提及的發(fā)酵奶制品中類似于酸乳的物質(zhì)或其干態(tài)成分即稱為開菲乳,而從類似于酸乳的物質(zhì)得到的透明液體成分即稱為開菲乳清。本發(fā)明中采用的從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品的優(yōu)選實施例可以是開菲乳或開菲乳清,或者二者的混合物。
      本發(fā)明中采用的從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品,開菲乳表現(xiàn)出多方面的用途,包括保濕效果,紫外線防護效果,抑制黑色素生成的效果,自由基去除效果以及細胞活化效果等等。由于它還表現(xiàn)出熱穩(wěn)定性并且可進行過濾除菌,因而可用于皮膚的穩(wěn)定外用制品,特別是用于化妝品材料。雖然它具有由酵母發(fā)酵和乳酸發(fā)酵而產(chǎn)生的獨特氣味和4.20-4.40的pH特征,通過與其它化妝品原料或載體混合,其可望能在使用中獲得更好的感覺,并能表現(xiàn)出有益效果和效用。
      本發(fā)明中采用的開菲乳可以是類似于酸乳的形態(tài),或者是通過干燥(冷凍干燥等)類似于酸乳的開菲乳而得到的粉末狀,或者是對粉末狀開菲乳進一步處理而得到的顆粒狀。也可以是用水,緩沖液,酒精,油等等處理而得到的液態(tài)。
      當所述開菲乳用于皮膚外用制劑時,以外用制劑總重計其優(yōu)選地包含0.01-3.00wt%的開菲乳,優(yōu)選地包括1.00-3.00wt%的開菲乳。
      另外,本發(fā)明中采用的開菲乳清是從上述類似于酸乳的發(fā)酵奶制品中得到一種透明液體成分,又稱作“乳血清”。其富含諸如乳糖,肽,氨基酸,乳酸,維生素,礦物質(zhì)的養(yǎng)分;并且認為含有原料奶中約一半的養(yǎng)分。在開菲乳清中,固體含量約6%,其余為水含量。開菲乳清比普通酸乳含有更多的L-乳糖,并且乳酸桿菌的抗菌效果正在引起人們的關(guān)注。并且,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)開菲乳清可保持皮膚濕度并調(diào)節(jié)pH至理想的溫和酸度,因為開菲乳清的結(jié)構(gòu)與皮膚角蛋白細胞中的NMF(天然保濕因子)結(jié)構(gòu)類似。此外,鑒于其抗過敏效果及出色的保濕效果,開菲乳被認為可以保護皮膚免受外部刺激或細菌侵害。
      盡管具有這些有利特性,開菲乳清一直只是被看作廢棄物。只是最近其有效利用才引起人們的討論。
      本發(fā)明中采用的通過開菲乳顆粒發(fā)酵得到的乳制品開菲乳清顯示出各種有用功效諸如與上述開菲乳相同的保濕效果,紫外線防護效果,抑制黑色素生成的效果,自由基清除效果以及細胞活化效果。同時它還表現(xiàn)出熱穩(wěn)定性,可進行過濾除菌,從而使其可以用作穩(wěn)定的化妝品原料。它具有由酵母發(fā)酵和乳酸發(fā)酵而產(chǎn)生的獨特氣味,以及4.20-4.40的獨特pH,然而,將開菲乳與其它化妝品原料或載體混合,其可望在應用中能達到更好的感覺,并能表現(xiàn)出有益效果和效用。
      當所述的開菲乳清用于皮膚外用制劑時,以外用制劑總重計其優(yōu)選含量為0.01-3.00的wt%,特別地,優(yōu)選含量為0.01-3.00wt%。
      上述從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品,無論是開菲乳或開菲乳清均可用作細胞活化劑,因為其具有如上文所述的細胞活化效果。除此以外,由于其紫外線防護效果,抑制黑色素生成的效果,以及自由基清除效果,它也可用作抗皮膚老化劑和增白劑,并且它顯然可用作黑色素生成抑制劑。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物當用作為藥品時,是一種含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品和可作藥用的載體的組合物。當用作化妝產(chǎn)品或清潔劑時,它是一種含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品和化妝品用載體的組合物。本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物可含有通?;瘖y產(chǎn)品、準藥物或藥物中用于皮膚外用制劑的任何其它所需成分,例如選自如下的一種或多種成分含量范圍不會干擾本發(fā)明效果的自由基清除成分,抗氧化劑成分,消炎成分,紫外線防護成分和保濕成分。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物可通過與各種所需載體,含油物,潤濕劑,表面活性劑,抗菌劑,香料,水,醇類,其他堿,增稠劑等以通常方式適當混合進行生產(chǎn),所述載體包括例如,諸如凡士林或微晶蠟的碳氫化合物,諸如霍霍巴油或鯨蠟,諸如牛脂或橄欖油的甘油三酯,諸如硬脂酸或油酸的脂肪酸,諸如甘油或1,3-丁二醇的多元醇。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物中含有的自由基清除成分的實例包括一種或多種如下成分超氧化物歧化酶(SOD),甘露醇,類胡蘿卜素,蝦青素,蕓香苷及其衍生物,膽紅素,膽固醇,色氨酸,組氨酸,五羥黃酮,兒茶素及其衍生物,五倍子酸及其衍生物,谷胱甘肽及其衍生物,黃芩提取物,銀杏提取物,雞血藤提取物,野山楂提取物,玫瑰提取物,虎耳草提取物,香蜂草提取物,Geranium thunbergii提取物,牡丹提取物,巖芹提取物,Potentilla tormentilla提取物,Siraitiagrosvenori提取物,Yashajitsu提取物,枸杞根提取物(Lycium chineseroot),甜菊(Stevia rebaudiana)提取物以及Rosa multiflora thunberg提取物。
      本發(fā)明皮膚外用制劑組合物中含有的抗氧化成分的實例包括一種或多種如下成分甘露醇,蕓香苷及其衍生物,櫟精,磷脂,吡哆素,類黃酮,多元酚化合物,銀杏提取物,虎耳草提取物,維生素A族及其衍生物,維生素B族及其衍生物,維生素C族及其衍生物,維生素D族及其衍生物,維生素E族及其衍生物,二丁基羥甲苯和丁基羥基苯甲醚。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物中含有的消炎成分的實例包括一種或多種如下成分甘草酸及其衍生物,甘草亭酸及其衍生物,甲芬那酸(mefenamic acid)及其衍生物,苯基丁氮酮及其衍生物,indomethacin及其衍生物,布洛芬(ibuprofen)及其衍生物,酮洛芬(ketoprofen)及其衍生物,尿囊素及其衍生物,愈創(chuàng)木薁及其衍生物,ε-氨基己酸,雙氯芬酸鈉(diclofenac sodium),凝血酸及其衍生物,明日葉(Angelicakeiskei)提取物,山金車提取物,蘆薈提取物,蓼提取物,姜黃提取物,小連翹提取物,黃柏提取物,德國洋甘菊(Matricaria chamomilla)提取物,甘草提取物,金銀花提取物,水芥菜提取物,康復力(Symphytumofficinale)提取物,五加提取物,鼠尾草提取物,紫草根提取物,紫蘇提取物,白樺提取物,茶提取物,金盞花提取物,接骨木花提取物,香蒲(Typha latifolia)提取物,無患子(Sapindus mukurossi)提取物,蒿提取物,桉樹提取物,日本當歸提取物以及紫云英提取物。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物中含有的紫外線防護組分的實例包括一種或多種如下成分對氨基苯甲酸(PABA),乙基PABA,甘油基PABA,N,N-二甲基PABA-戊基,N,N-二甲基PABA-2-乙基己基,2-乙基己基水楊酸酯,乙二醇水楊酸酯,高薄荷基水楊酸酯,2-乙基己基-4-甲氧基-肉桂酸酯,乙氧基乙基-4-甲氧基-肉桂酸酯,4-甲氧基-肉桂酸鉀,甲基-4-5-二異丙基肉桂酸酯,甘油基單-2-乙基-己酸酯,二-p-甲氧基肉桂酸酯,2-羥基-4-甲氧基-二苯甲酮,2-羥基-4-甲氧基-二苯甲酮磺酸酯,2-羥基-4-甲氧基-二苯甲酮磺酸鈉,2,2’-二羥基-4,4’-二甲氧基-二苯甲酮,2,2’-二羥基-4,4’-二甲氧基-二苯甲酮-5-磺酸鈉,2-4-二羥基二苯甲酮,2,2’,4,4’-四羥基-二苯甲酮,2-(2-羥基-5-甲基苯基)-苯并三唑,咪唑丙烯酸,乙基咪唑丙烯酸酯,4-叔-丁基-4,-甲氧基-二苯甲酰甲烷,二氧化鈦,氧化鋅,氧化鐵,氧化鈰以及氧化鋯。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物中含有的保濕成分的實例包括一種或多種選自如下的成分選自透明質(zhì)酸的粘多糖及其衍生物,硫酸軟骨素,硫酸皮膚素,硫酸乙酰肝素,硫酸肝素和角質(zhì)素;選自膠原、彈性蛋白、纖連蛋白和角質(zhì)蛋白的蛋白及其衍生物和水解物;選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、茶氨酸、orthinine、瓜氨酸、以及吡咯烷酮羧酸酯的氨基酸及其衍生物;選自山梨糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖、麥芽糖醇、木糖醇、木糖、海藻糖、肌醇、葡萄糖、季戊四醇、果糖、蔗糖及其酯、以及糊精及其衍生物的糖類;粘蛋白,D-泛醇及其衍生物,尿素,磷脂,糖脂和N-脂酰鞘氨醇,深海水,蜂蜜,紅糖提取物,蘆薈提取物,海藻提取物,榅桲(Cydonia oblonga)提取物,北美金縷梅提取物,絲瓜提取物,錦葵提取物,蘋果提取物,葡萄柚(Citrus paradisi)提取物,歐州李(Prunusdomestica)提取物,Citrus aurantifolia提取物,香橙(Citrus junos)提取物,南京椴(Tilia miqueliana)提取物,懸鉤子提取物,苦參(Sophoraflavescens)提取物,大棗(Zizyphus jujuba)提取物,麥芽提取物,茵陳蒿(Artemisia capillaris),白百合(Lilium candidum)提取物,啤酒花提取物,薄荷(Mentha piperita)提取物,魚腥草提取物,芍藥提取物,薏苡提取物,熏衣草提取物,燕麥提取物,假葉樹(Ruscus aculeatus)提取物,藥蜀葵提取物,茯苓(Wolfiporia cocos)提取物,蕁提取物,茴香提取物,獼猴桃(Actinidia chinensis)提取物,黃瓜提取物,葡萄提取物,仙人掌提取物,地黃根提取物,問荊提取物,Cnidium officinale提取物,桑提取物,百里香提取物,馬栗樹提取物,桃花(Prunus persica)提取物,Rosa damascena提取物,杏樹提取物,玉米提取物,姜提取物,酸檸檬提取物,酸橙提取物,草莓提取物,黃龍膽提取物,錦葵提取物,堇菜提取物,牛蒡提取物,羽扇豆提取物,長角豆提取物,常春藤提取物,松樹提取物,Rodgersia podophylla提取物,地榆提取物,芒柄花提取物,黃龍膽提取物,八仙花提取物,F(xiàn)ukutanpopodandelion提取物,Cydonia種子提取物,甘油和1,3-丁二醇。
      本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物可進一步的與其它具有諸如增白效果和細胞活化效果的成分適當混合。
      上述的具有增白效果的成分的實例包括維生素C及其衍生物和鹽,胎盤提取物,甘草提取物,薏苡提取物,蘆筍提取物,薔薇果實提取物,懸鉤子提取物,Sophora radix提取物,雞血藤(Millettia reticulata)提取物,五加提取物,米糠提取物,麥芽提取物,堇菜提取物,野山楂提取物,(白百合)Lilium candidum提取物,芍藥提取物,大豆提取物,茶葉提取物例如綠茶提取物,茶葉提取物和烏龍茶提取物,糖蜜提取物,白蘞提取物,山毛櫸芽提取物,葡萄提取物,啤酒花提取物,玫瑰提取物,棗提取物,Siraitia grosvenori提取物,黃芩提取物,海藻提取物等等。
      進一步地,上述具有細胞活化效果的組分的實例包括維生素A及其衍生物,檸檬酸,乳酸,酒石酸,蘋果酸,乙醇酸,琥珀酸,絲氨酸,谷氨酸,羥脯氨酸,茶氨酸,吡咯烷酮羧酸酯,酵母提取物,乳酸桿菌提取物,雙歧桿菌提取物,發(fā)酵代謝物提取物等等。在這些細胞活化劑中,尤其優(yōu)選的是維生素A及其衍生物,檸檬酸,乳酸,蘋果酸,絲氨酸和吡咯烷酮羧酸酯。
      此外,本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物可廣泛應用于諸如用于皮膚外部表層的化妝產(chǎn)品,用于頭皮和毛發(fā)的組合物,用于皮膚清潔劑的組合物,藥物,準藥物。同樣,其劑型可以是用于傳統(tǒng)皮膚外用制劑的任一形式,只要其可適用于皮膚,例如溶液體系,諸如皮膚洗液的增溶體系,諸如乳液和乳膏的乳化體系,粉末分散體系,水-油兩相體系,水-油-粉末三相體系,分散液體,軟膏,凝膠,氣霧劑等等。制備這些皮膚外用組合物時,其成分的類型和用量是可調(diào)節(jié)的,調(diào)節(jié)范圍由本領域技術(shù)人員根據(jù)傳統(tǒng)方法可合適地確定。
      另外,本發(fā)明的皮膚外用制劑組合物除了用作面部化妝產(chǎn)品諸如皮膚洗液,乳液,乳膏及面膜或粉底外,其使用形式也可任選地為粉底,擦面粉,口紅,潤唇劑,其它妝飾用化妝產(chǎn)品,用于特殊目的的化妝產(chǎn)品,用于身體的化妝產(chǎn)品,用于防曬或防曬癍的化妝產(chǎn)品,用于頭皮和毛發(fā)的化妝產(chǎn)品,用于香料的化妝產(chǎn)品,面部清潔劑,用于頭發(fā)的化妝產(chǎn)品(用于頭皮和用于毛發(fā)),身體清潔劑,頭發(fā)清潔劑(用于頭皮和用于毛發(fā)),用于修面的化妝產(chǎn)品,用于洗浴的化妝產(chǎn)品等等。
      同樣,本發(fā)明的皮膚外用制劑的形式和用途并不受上述實例的限制。
      實施例本發(fā)明將通過如下的非限制性檢測實實施例和實施例進行更詳細的說明。
      下述檢測目的在于檢驗由開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品所含成分對細胞的各種效果。首先,制備各個檢測的樣品。對發(fā)酵乳制品的固體物開菲乳進行離心,并去除沉淀。然后,用0.45μm濾膜進行過濾,并將其進樣至NAP-25微型柱中,分子量為5000或以上的部分是流通組分,而分子量5000或以下的部分則被分成1,2,3和4組分。
      實驗實施例1通過開菲乳(1)檢測細胞活化作用DNA常由于DNA復制錯誤或重組而導致錯配突變,并且修復這種錯配突變的錯配修復基因(hMLH1,hPMS1,hPMS2,hMSH2,hMSH3和hMSH6)是已知的。當這些錯配修復基因發(fā)生突變時,基因組會變得不穩(wěn)定,并且有出現(xiàn)細胞惡性轉(zhuǎn)化的危險。
      將分子量5000或以上組分和組分3樣品加入人惡性黑色素瘤細胞系HIV-I,并培養(yǎng)15小時。通過RT-PCR技術(shù)分析錯配修復基因hMLH1,hPMS1和hPMS2的mRNAs表達量。結(jié)果證實了加入樣品的細胞中表達量有增長。結(jié)果如圖1到圖4所示。
      實驗實施例2通過開菲乳(2)檢測細胞活化作用將實驗實施例1中制備的組分3加入人惡性黑色素瘤細胞系HIV-I,培養(yǎng)5小時,并通過蛋白質(zhì)印跡技術(shù)分析錯配修復基因之一的hMLH1的蛋白表達量。結(jié)果,證實了加入開菲乳的細胞中表達量的增長。結(jié)果如圖5和圖6所示。
      實驗實施例3通過開菲乳檢測PCNA增長已經(jīng)知道PCNA(增殖細胞核抗原)是一種與細胞增殖或修復有很大關(guān)聯(lián)的分子,并且在缺失PCNA的細胞中,其修復功能會嚴重缺乏。
      將組分3加入人惡性黑色素瘤細胞系HIV-I,并培養(yǎng)15小時。通過蛋白質(zhì)印跡技術(shù)分析PCNA蛋白的表達量。結(jié)果證實了加入開菲乳的細胞中表達量有增長。結(jié)果如圖7和圖8所示。
      實驗實施例4檢測錯配修復基因hMLH1表達的增強(1)將組分3(3ml)進樣至3ml的陰離子交換樹脂DEAE柱中。將被吸附的物質(zhì)用NaCl進行洗脫,脫鹽,然后加入人惡性黑色素瘤細胞系HIV-I中,并培養(yǎng)15小時。通過RT-PCR技術(shù)證實了錯配修復基因hMLHl的mRNAs表達量有一個增強效果。洗脫過程如下所示。
      流通組分50mM磷酸鈉緩沖液 6ml淋洗 50mM磷酸鈉緩沖液 6ml組分150mM磷酸鈉緩沖液 6ml組分250mM磷酸鈉緩沖液0.15M NaCl 6ml組分350mM磷酸鈉緩沖液0.15M NaCl 6ml組分450mM磷酸鈉緩沖液1M NaCl6ml組分550mM磷酸鈉緩沖液1M NaCl6ml將對照結(jié)果賦值為1,則每個樣品的相對值如下,所作的圖如圖10所示。
      表1

      (2)將組分3(3ml)進樣至3ml的陽離子交換樹脂DEAE柱中。將被吸附的物質(zhì)用NaCl進行洗脫,脫鹽,然后加入人惡性黑色素瘤細胞系HIV-I中,并培養(yǎng)15小時。通過RT-PCR技術(shù)證實了錯配修復基因hMLH1的mRNA表達量有一個增強效果。洗脫過程如下所示。
      流通組分50mM磷酸鈉緩沖液6ml淋洗50mM磷酸鈉緩沖液6ml
      組分150mM磷酸鈉緩沖液 6ml組分250mM磷酸鈉緩沖液0.15M NaCl6ml組分350mM磷酸鈉緩沖液0.15M NaCl6ml組分450mM磷酸鈉緩沖液1M NaCl 6ml組分550mM磷酸鈉緩沖液1M NaCl 6ml將對照結(jié)果賦值為1,每個樣品的相對值如下,所作的圖如圖12所示。
      表2

      (3)將組分3改為進樣至疏水柱中。將被吸附的物質(zhì)用NaCl進行洗脫,脫鹽,然后加入人惡性黑色素瘤細胞系HIV-I中,并培養(yǎng)15小時。通過RT-PCR技術(shù)證實了錯配修復基因hMLH1的mRNA表達量有一個增強效果。洗脫過程如下所示。
      流通組分100mM磷酸鈉緩沖液1.8M硫酸銨6ml淋洗100mM磷酸鈉緩沖液1.8M硫酸銨6ml組分1 100mM磷酸鈉緩沖液1.8M硫酸銨6ml組分2 100mM磷酸鈉緩沖液1.44M硫酸銨 6ml組分3 100mM磷酸鈉緩沖液1.44M硫酸銨 6ml組分4 100mM磷酸鈉緩沖液 6ml
      組分5100mM磷酸鈉緩沖液6ml將對照結(jié)果賦值為1,則每個樣品的相對值如下,所作的圖如圖14所示。
      表3

      實驗實施例5檢測開菲乳清的黑色素生成抑制效果對源自開菲乳發(fā)酵液的開菲乳清對人黑色素細胞系SK-MEL的黑色素生成的抗氧化劑作用效果進行了研究??紤]到開菲乳清將用于培養(yǎng)細胞體系,采用的樣品為中和作用后在滲透壓為0.300osmol/kg條件下制備得到。
      &lt;實驗方法&gt;
      將SK-MEL細胞以4×105細胞/毫升的細胞密度接種于5ml皿中。預培養(yǎng)后,將培養(yǎng)基更換為相對于培養(yǎng)基組分含0%(對照),0.1%和1%開菲乳清的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng)24小時。用胰蛋白酶處理回收細胞,在所有條件下均稀釋至總細胞數(shù)為3×106個細胞,并回收至1.5ml管中。將該管離心(5000rpm,10min),將400μl的1M NaOH加入細胞沉淀中,100℃下煮沸10分鐘。將溶胞產(chǎn)物充分混合,在每種條件下將三等份(100μl)置于96孔板中。然后通過板讀數(shù)器檢測405nm下的吸光度,并確定黑色素的量。
      &lt;結(jié)果&gt;
      結(jié)果見于表4和圖15。從結(jié)果可以看出當黑色素瘤在加入開菲乳清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時,其黑色素生成被明顯抑制。
      表4

      實驗實施例6檢測改善頭皮和毛發(fā)的效果20名健康受試者(12名男性,8名女性)連續(xù)1個月使用含有發(fā)酵乳制品開菲乳的護發(fā)產(chǎn)品。通過每天洗發(fā)后施用該產(chǎn)品于頭皮和毛發(fā)上,主要在發(fā)癢部位,觀察頭發(fā)光澤,頭皮屑,毛發(fā)脫落和頭皮瘙癢進行檢測。
      結(jié)果如下。
      頭發(fā)光澤改善12例,無改變6例,惡化0例,未知2例頭皮屑顯著減少8例,無改變10例,惡化0例未知2例毛發(fā)脫落減少5例,無改變12例,惡化1例,未知2例頭皮瘙癢減少9例,無改變8例,惡化1例,未知2例結(jié)果表明含有開菲乳的護發(fā)產(chǎn)品作為用于頭皮和毛發(fā)的組合物是有效果的,可以改善毛發(fā)光澤,減少頭皮屑,減少毛發(fā)脫落,并可預防頭皮瘙癢。
      實驗實施例7采用了含發(fā)酵乳制品開菲乳的一種凝膠(商標名kefran),結(jié)果如下。
      (1)26歲女性我所用過的幾乎所有皮膚洗液等中,每次我將它們倒入手掌時,它們一接觸我手指上由于特異反應性而形成的傷口時,都痛的直跳,直至現(xiàn)在也這樣。因此當我姐姐推薦kefran時,我很擔心它會以同樣的方式傷害我,然而事實上根本沒有。當然,我可以將它施用于臉上,沒有任何痛感,因此從今以后我可以沒有任何擔心的使用它了。
      (2)34歲女性我的第二個孩子出生后,我產(chǎn)生特異反應性,并且我的皮膚變得非常敏感。部分由于我的年齡的原因,過去我對使用時具有溫和觸感的護膚產(chǎn)品不滿意,一直尋求好的產(chǎn)品,自從買了kefran后我現(xiàn)在一直用它。真的非常好。
      (3)23歲女性以前我一直為尋找一種適合我的特異反應性皮膚的基礎護膚產(chǎn)品而苦惱,但是自從我用了kefran后,我的皮膚得到了顯著改善。
      (4)45歲女性我對日光敏感。我的臉等等可以通過化妝、戴帽子等避免日光的傷害。然而,如果我的手背和胳膊時不時暴露于太陽底下,到晚上皮膚就會變得象goosebump似的,并且劇烈的瘙癢令我痛苦不堪。當我注意到這個問題時,如果及早使用kefran,我的皮膚會很快得到恢復,并且劇烈的瘙癢也會得到緩解。
      實施例1乳膏&lt;配方(重量%)&gt;
      (1)聚氧乙烯(40E.O.)一硬脂酸 2.00(2)甘油一硬脂酸酯(自乳化型) 5.00(3)硬脂酸5.00(4)二十二烷醇0.50(5)角鯊烯15.00(6)十六烷基異辛酸酯 5.00(7)抗菌劑適量(8)1,3-丁二醇 5.00(9)開菲乳濾液1.00
      (10)納豆提取物 1.00(11)大豆提取物 0.20(12)虎耳草提取物0.10(13)黃瓜提取物 0.10(14)甘草提取物 0.10(15)甘草酸二鉀 0.05(16)桑提取物0.05(17)黃芩提取物 0.05(18)角蛋白水解液1.00(19)香料適量(20)純化水 余量&lt;制備過程&gt;
      上述成分(1)至(7)在70℃加熱條件下溶解。然后,將(8)和一部分(20)加熱至70℃并加入前面的溶解成分中,然后,待冷卻時將成分(9)至(18),(19)和剩余部分的(20)加入,從而得到乳膏。
      實施例2洗液&lt;配方(重量%)&gt;
      (1)甘油 5.00(2)1,3-丁二醇6.50(3)聚氧乙烯(20mol)脫水山梨醇一月桂酸酯1.20(4)乙醇 8.00(5)開菲乳濾液 1.00(6)納豆提取物 1.00(7)抗菌劑,抗氧化劑 適量(8)香料 適量(9)純化水 余量
      &lt;制備過程&gt;
      首先,將上述成分(3),(4),(7)和(8)混合并溶解,然后將(1),(2),(5),(6)和(9)混合并溶解。將這些混合并溶解的成分進一步均勻混合,這樣即得到洗液。
      實施例(3)乳液&lt;配方(重量%)&gt;
      (1)硬脂酸 1.50(2)十六烷醇 0.50(3)蜂蠟 2.00(4)聚氧乙烯(20mol)一油酸酯1.00(5)甘油一硬脂酸酯 1.00(6)乙醇 10.00(7)熊果苷 20.00(8)亞硫酸氫鈉 0.03(9)丙二醇 5.00(10)開菲乳濾液1.00(11)納豆提取物1.00(12)大豆提取物0.20(13)虎耳草提取物 0.10(14)黃瓜提取物0.10(15)甘草提取物0.10(16)甘草酸二鉀0.05(17)桑提取物 0.05(18)黃芩提取物0.05(19)香料 適量(20)抗菌劑,抗氧化劑 適量(21)純化水余量&lt;制備過程&gt;
      將上述成分(7)、(9)和(10)至(18)加入(21)中,加熱條件下溶解,并保持70℃以形成水相。將成分(19)加入(6)中并溶解以形成醇相。將成分(1)至(5),(8)和(20)混合,加熱條件下溶解,并保持70℃以形成油相。將油相加入水相進行初乳化,然后通過均勻攪拌機進行均勻乳化作用。于攪拌時將醇相加入,然后攪拌時將所得到的混合物冷卻至30℃,這樣即得到乳液。
      實施例4凝膠劑&lt;配方(重量%)&gt;
      (1)1,3-丁二醇 5.00(2)海藻糖溶液 3.00(3)開菲乳濾液 1.00(4)納豆提取物 1.00(5)海藻提取物 1.00(6)尿素 0.80(7)聚羧乙烯 0.80(8)甘油 0.50(9)L-抗壞血酸-磷酸鎂0.50(10)氫氧化鉀0.50(11)苯氧基乙醇 0.30(12)羧甲基纖維素鈉 0.20(13)大豆提取物 0.20(14)虎耳草提取物0.10(15)黃瓜提取物 0.10(16)甘草提取物 0.10(17)甘草酸二鉀 0.05(18)桑提取物0.05(19)黃芩提取物 0.05(20)純化水 84.75
      &lt;制備過程&gt;
      將上述成分(3)至(8)和(13)至(19)均勻溶解于(20)中以形成水相。另一面,將(1)、(2)、(9)和(11)溶解并加入水相中。然后,將混合物用(10)和(12)進行中和和增稠,這樣即得到凝膠。
      實施例5剝離型面膜&lt;配方(重量%)&gt;
      (1)95%乙醇10.00(2)聚氧乙烯(15mol)油醇醚 2.00(3)抗菌劑,抗氧化劑適量(4)香料適量(5)乳清1.00(6)海藻提取物 1.00(7)甘草酸二鉀 0.05(8)聚乙烯醇12.00(9)甘油3.00(10)聚乙二醇 1.00(11)純化水 余量&lt;制備過程&gt;
      從上述成分(5)至(11)在80℃下制備水相,并冷卻至50℃。然后,在室溫下將成分(1)至(4)制備生成一個醇相,將該醇相加入水相中,并均勻混合。然后將混合物冷卻,這樣即得到面膜。
      實施例6液體粉底&lt;配方(重量%)&gt;
      (1)羊毛脂7.00(2)液體石蠟 5.00(3)硬脂酸2.00
      (4)十六烷醇 1.00(5)2-乙基己基對-甲氧基肉桂酸酯 3.00(6)甘油 5.00(7)三乙醇胺 1.00(8)羧甲基纖維素 0.70(9)純化水 余量(10)二氧化鈦8.00(11)微?;趸? 2.00(12)氧化鋅 5.00(13)云母15.00(14)滑石6.00(15)色素6.00(16)開菲乳濾液 0.50(17)桑提取物0.05(18)黃芩提取物 0.05(19)香料適量&lt;制備過程&gt;
      首先,將上述成分(1)至(5)混合并溶解。然后,加入成分(10)至(15),均勻混合,并保持溫度70℃。隨后,將(6)至(9)均勻溶解,保持在70℃,并加入前面的溶解混合物中,并進行均勻乳化。
      待所得混合物冷卻后,加入成分(16)至(19),這樣即得到液體粉底。
      對本發(fā)明的皮膚外用制劑的感覺評測邀請了20名女性使用含有用開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品的皮膚外用制劑,每天早晚洗臉后將制劑施用于整個面部,連用3個月,其效力由一名醫(yī)生進行評測。
      I.干性皮膚1.非常有效11例2.有效6例3.無變化 5例4.惡化0例II.對面部黃褐斑的效力1.非常有效6例2.有效9例3.無變化 4例4.惡化1例III.硬性膚質(zhì)1.非常有效3例2.有效8例3.無變化 8例4.惡化1例從上述評測可以明顯看出,根據(jù)本發(fā)明的皮膚外用制劑對于干性皮膚,斑點和硬性膚質(zhì)是安全和有效的,并且可以提高皮膚細胞活性。
      工業(yè)實用性從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品具有廣泛用途,包括保濕效果,紫外線防護效果,黑色素生成抑制效果和自由基清除效果。同時它還具有熱穩(wěn)定性,并可進行過濾除菌,這就使其有可能用作穩(wěn)定的皮膚外用制劑,特別是化妝品原料。然而,它具有獨特的酵母發(fā)酵和乳酸發(fā)酵氣味,以及4.20-4.40的pH。因而可以認為,通過與其他化妝品原料適當混合,證實當使用時具有舒適的觸感,并且具有由開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品所表現(xiàn)出來的最初效果和效力。
      權(quán)利要求
      1.一種皮膚外用制劑組合物,含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品以及藥用或化妝品用載體。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1的皮膚外用制劑組合物,進一步含有一種或多種如下的組分自由基清除組分,抗氧化劑組分,消炎組分,紫外線防護組分和保濕組分。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的皮膚外用制劑組合物,其中從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品是開菲乳和/或開菲乳清。
      4.根據(jù)權(quán)利要求3的皮膚外用制劑組合物,其中開菲乳和/或開菲乳清的含量是總組合物的0.01-3.00wt%。
      5.根據(jù)權(quán)利要求1到4的皮膚外用制劑組合物,其中皮膚外用制劑組合物為液體,乳液,凝膠,乳膏,糊劑或薄片的任一形式。
      6.根據(jù)權(quán)利要求1到5任一項的皮膚外用制劑組合物,其中皮膚外用制劑組合物是一種化妝品組合物。
      7.根據(jù)權(quán)利要求6的皮膚外用制劑組合物,其中的化妝品組合物是一種用于身體的化妝品組合物。
      8.根據(jù)權(quán)利要求7的皮膚外用制劑組合物,其中用于身體的化妝品組合物是一種皮膚清潔劑組合物。
      9.根據(jù)權(quán)利要求1到5任一項的皮膚外用制劑組合物,其中的皮膚外用制劑組合物是一種用于頭皮和毛發(fā)的組合物。
      10.一種活化皮膚細胞,預防皮膚老化,抑制皮膚中黑色素生物合成,和/或增白皮膚的方法,所述方法是給皮膚施用有效量的從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品。
      11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法,是一種用于皮膚化妝或清潔的方法。
      12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法,是一種用于頭皮和/或毛發(fā)化裝或清潔的方法。
      13.根據(jù)權(quán)利要求10的方法,是一種治療皮膚病患者皮膚的方法。
      14.根據(jù)權(quán)利要求10的方法,其中從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品是開菲乳和/或開菲乳清。
      15.從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品在生產(chǎn)皮膚外用制劑組合物中的應用。
      16.根據(jù)權(quán)利要求15的應用,其中從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品是開菲乳和/或開菲乳清。
      17.一種細胞活化劑,含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品。
      18.一種抗皮膚老化劑,含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品。
      19.一種皮膚增白劑,含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品。
      20.一種黑色素生成抑制劑,含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品。
      全文摘要
      本發(fā)明公開了皮膚外用組合物,其含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品以及可作藥用或化妝品用的載體;一種使用上述組合物處理皮膚的方法;上述組合物的應用;含有從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品的細胞活化劑、皮膚老化抑制劑、增白劑或黑色素生成抑制劑。上述皮膚外用組合物含有作為活性成分的從開菲乳顆粒得到的發(fā)酵乳制品,優(yōu)選地為開菲乳和/或開菲乳清。由于具有活化細胞、預防皮膚老化、增白、抑制黑色素生成等各種有利效果,這些皮膚外用組合物非常適合用作化妝品組合物,頭皮/毛發(fā)護理組合物,皮膚病治療用組合物等等。
      文檔編號A61K35/74GK1638784SQ0380489
      公開日2005年7月13日 申請日期2003年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月28日
      發(fā)明者德丸千之助, 德丸浩一郎, 白畑實隆 申請人:日本克非爾株式會社, 德丸千之助
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