專利名稱：用氨芬酸或奈帕芬胺治療血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的血管疾病的方法
本申請(qǐng)要求于2002年5月3日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)60/377,429的優(yōu)先權(quán)。
本發(fā)明涉及2-氨基-3-苯甲?；揭宜?氨芬酸)在治療或預(yù)防血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)誘導(dǎo)的血管疾病中的用途。
背景技術(shù)：
已知某些非類固醇抗炎藥(NSAIDs)能夠抑制病理情況下新生血管的形成(血管生成)和某些炎癥模型中血管的滲出。大多數(shù)NSAIDs影響血管的滲透性及血管的生成的能力似乎與它們阻斷環(huán)加氧酶(COX-1和-2)有關(guān)。COX-1和-2的阻斷與炎癥介質(zhì)如PGE2的減少有關(guān)。此外，PGE2的抑制似乎減少了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)和產(chǎn)生。已知VEGF在臨床前模型的眼睛中產(chǎn)生血管滲出及血管生成。同樣地，在患有糖尿病性視網(wǎng)膜病和年齡相關(guān)性黃斑變性的患者眼中，也發(fā)現(xiàn)在新生血管組織和細(xì)胞外液內(nèi)VEGF水平的增加。因此，NSAIDs可以通過調(diào)節(jié)PGE2水平以及它對(duì)VEGF的表達(dá)和活性的作用來抑制血管滲出和血管生成。該理論可通過動(dòng)物腫瘤模型試驗(yàn)來驗(yàn)證，在所述動(dòng)物模型中證明全身給予COX-2抑制劑降低了PGE2和VEGF的組織水平，因此阻止腫瘤誘導(dǎo)的血管生成。在這些模型中，在COX-2受到阻斷的過程中加入外原性PGE2可恢復(fù)VEGF活性和血管生成。可是，在眼部新生血管形成(NV)的動(dòng)物模型中，NSAIDs的活性似乎不穩(wěn)定，因?yàn)檫x擇性COX抑制劑似乎并不抑制脈絡(luò)膜新血管生成。事實(shí)上，這些問題已經(jīng)引起關(guān)于COX-1和/或COX-2在CNV進(jìn)程中作用的爭(zhēng)論。
已知3-苯甲?；揭宜峒捌溲苌锞哂锌寡谆钚?。在美國(guó)專利號(hào)4,254,146、4,045,576、4,126,635和4,503,073以及英國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?,071,086A和2,093,027A中公開了各種具有抗炎活性的3-苯甲酰基苯乙酸、它的鹽和酯以及它們的水合物。美國(guó)專利號(hào)4,568,695公開了具有抗炎活性的2-氨基-3-苯甲?；揭掖?。美國(guó)專利號(hào)4,313,949公開了具有抗炎活性的2-氨基-3-苯甲酰基-苯乙酰胺。
在試圖發(fā)現(xiàn)經(jīng)口服給藥無或少有胃腸副作用的非類固醇抗炎藥物的過程中，Walsh等，J.Med Chem.，332296-2304(1990)還嘗試了某些2-氨基-3-苯甲?；揭宜?氨芬酸)和2-氨基-3-(4-氯-苯甲酰基)苯乙酸的衍生物。
美國(guó)專利號(hào)4,683,242公開了將2-氨基-3-苯甲?；揭宜?、它的鹽和酯以及它們的水合物和醇化物經(jīng)皮給藥，以用于控制炎癥和減輕疼痛。
美國(guó)專利號(hào)4,910,225公開了某些控制眼、鼻或耳炎癥的局部給藥的苯甲?；揭宜?。但是，在該專利中，只是公開了乙酸；并未涉及或公開酯或酰胺作為抗炎藥物用于眼、鼻和耳的局部給藥。
美國(guó)專利號(hào)5,475,034公開了局部給藥用于治療眼部炎癥和眼部疼痛的含有3-苯甲?；揭宜岬孽０泛王パ苌?包括奈帕芬胺)的組合物。根據(jù)該專利第35-39頁(yè)第15欄所述，“這些疾病包括但不限于眼色素層炎鞏膜炎、鞏膜外層炎、角膜炎、手術(shù)性炎癥和眼內(nèi)炎。”美國(guó)專利號(hào)6,066,671公開了某些3-苯甲?；揭宜岬孽０泛王サ难苌?包括奈帕芬胺)局部治療GLC1A青光眼的用途。
在共同擁有的美國(guó)專利申請(qǐng)序列號(hào)09/929,381中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些3-苯甲?；揭宜峒捌溲苌锟捎糜谥委熝苌傻南嚓P(guān)疾病。
發(fā)明詳述后段(posterior segment)新血管生成(NV)在病理學(xué)上具有失明的危險(xiǎn)，造成發(fā)達(dá)國(guó)家中后天失明的兩個(gè)最普遍的原因滲出性的年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)和增生性糖尿病視網(wǎng)膜病。現(xiàn)今唯一批準(zhǔn)治療滲出性AMD的后段NV的方法是激光凝固或Visudyne光動(dòng)力技術(shù)；但是，兩種治療方法均導(dǎo)致受影響的血管的閉塞，產(chǎn)生激光誘發(fā)的對(duì)視網(wǎng)膜的局部損傷。現(xiàn)今對(duì)于患有增生性糖尿病視網(wǎng)膜病的患者來說，進(jìn)行外科玻璃體摘除術(shù)和視網(wǎng)膜去除術(shù)還是唯一的選擇。對(duì)于后段NV的治療尚沒有嚴(yán)格意義上的藥理學(xué)治療。
除了糖尿病患者的高血糖癥所致的視網(wǎng)膜微循環(huán)的改變而導(dǎo)致的黃斑水腫外，新血管膜的增生也與血管滲出和視網(wǎng)膜水腫有關(guān)。水腫致使黃斑、視覺靈敏度受損。在糖尿病性視網(wǎng)膜病中，黃斑水腫是視力受損的主要原因。同血管生成性疾病一樣，激光凝固被用于緩解或治療水腫癥狀。不幸的是，激光凝固是一種細(xì)胞損傷性治療，盡管該治療可以預(yù)防水腫的進(jìn)一步惡化，但是卻改變了患眼的視野。
對(duì)于后段NV及水腫有效的藥理學(xué)治療可能將給患者提供切實(shí)的療效，因而可避免侵入性的外科手術(shù)或破壞性的激光技術(shù)。NV有效的治療可改善患者的生命質(zhì)量并提高社會(huì)生產(chǎn)力。同樣地，對(duì)失明者所提供的相關(guān)救助以及衛(wèi)生保健的社會(huì)成本將明顯下降。
氨芬酸是一種已知能夠抑制COX-1和COX-2酶活性的NSAID。出乎意料的是，在牛視網(wǎng)膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)氨氨芬酸作為有效藥物既可抑制VEGF誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖也可抑制毛細(xì)血管的形成。據(jù)申請(qǐng)人了解，就氨芬酸與其他NSAID而言，這種只產(chǎn)生COX抑制作用的NSAID對(duì)VEGF的阻斷作用是獨(dú)特的，即對(duì)通常由VEGF誘導(dǎo)的血管生成前信號(hào)阻斷的能力。這種獨(dú)特活性可以幫助解釋先前發(fā)現(xiàn)的部分原因，即在小鼠模型中局部給予奈帕芬胺(氨芬酸的前藥)可抑制脈絡(luò)膜，而局部給予VOLTAREN和VASCULAR卻無效。如果這種新的抗血管生成活性在人體產(chǎn)生，那么氨芬酸(和局部給予奈帕芬胺)能夠更有效地治療與VEGF信號(hào)有關(guān)的疾病以及治療其他NSAID治療不太有效的疾病。與VEGF上調(diào)相關(guān)的可能應(yīng)用氨芬酸(局部給予奈帕芬胺)的眼科疾病的適應(yīng)癥包括滲出性年齡相關(guān)性黃斑變性、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜靜脈閉塞、增生性玻璃體視網(wǎng)膜病、新血管生成性青光眼、角膜血管生成、視網(wǎng)膜微血管病和視網(wǎng)膜(黃斑)水腫。此外，由于氨芬酸為奈帕芬胺的活性代謝物，該藥物在臨床前模型中能夠從角膜的局部給藥到達(dá)后段，所以眼睛局部給予奈帕芬胺也能治療VEGF介導(dǎo)的眼科疾病。
根據(jù)本發(fā)明，可將治療有效量的奈帕芬胺局部給藥眼睛，而局部或全身給予氨芬酸可用于治療和/或預(yù)防VEGF介導(dǎo)的血管疾病。
用于治療或預(yù)防VEGF介導(dǎo)的血管異常的氨芬酸或奈帕芬胺的劑量根據(jù)預(yù)防或治療的異常類型、患者的年齡和體重以及制劑的劑型/給藥的途徑的不同而不同。眼用局部給藥的典型組合物通常含有奈帕芬胺的有效量約0.001-約4.0％(w/v)，優(yōu)選約0.01-約0.5％(w/v)，每天一次至幾次，每次1-2滴。同樣地，對(duì)于用于注射或局部給藥的其他制劑形式而言，典型劑量為每成人每天約1-100mg氨芬酸，對(duì)于口服制劑，為每成人每天約10-1000mg氨芬酸，分一次至幾次給藥。
也可加入其他的治療藥物用于補(bǔ)充奈帕芬胺或氨基苯?；揭宜岬膽?yīng)用。
如下實(shí)施例用于說明本發(fā)明的不同方面，但并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。百分比以重量/容積為基礎(chǔ)。
實(shí)施例1如下制劑為本發(fā)明局部用組合物的典型示例。
制劑1奈帕芬胺0.01-0.5％多乙氧基醚800.01％苯扎氯銨0.01％+超量10％乙二胺四乙酸二鈉0.1％磷酸二氫鈉 0.03％磷酸氫二鈉 0.1％氯化鈉 適量調(diào)節(jié)至290-300mOsm/KgNaOH和/或HCl調(diào)節(jié)的pHpH4.2-7.4水 適量調(diào)節(jié)至100％制劑2奈帕芬胺0.01-0.5％羥丙基甲基纖維素0.5％多乙氧基醚800.01％苯扎氯銨0.01％+超量5％乙二胺四乙酸二鈉0.01％
磷酸氫二鈉 0.2％氯化鈉 適量調(diào)節(jié)至290-300mOsm/KgNaOH和/或HCl調(diào)節(jié)的pHpH4.2-7.4水 適量調(diào)節(jié)至100％制劑3奈帕芬胺0.1+超量6％卡波普974P 0.08％泰洛沙泊0.01％甘油2.4％乙二胺四乙酸二鈉0.01％苯扎氯銨0.01％NaOH和/或HCl調(diào)節(jié)的pHpH7.5±0.2水 適量調(diào)節(jié)至100％實(shí)施例2AL06295A(氨芬酸)對(duì)BRMEC(牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞)增殖的作用將3×103BRMEC平鋪于96孔培養(yǎng)板(Corning)的纖連蛋白/透明質(zhì)酸基質(zhì)上，籍此通過改良的MTT試驗(yàn)測(cè)定VEGF誘導(dǎo)的BRMEC增殖。加入培養(yǎng)基兩天后加入無血清培養(yǎng)基(SFM)過夜，隨后加入測(cè)定培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基在100μl SFM內(nèi)含有0或25ng/ml VEGF。在37℃、5％CO2情況下24小時(shí)后，每孔加入25μl的MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5二聯(lián)苯基四唑鎓溴化物)并孵育4小時(shí)。然后向每孔加入100μl的裂解緩沖液(溶于DMF∶H2O(50∶50)中的20％SDS+2.0％乙酸和0.05％HCl)，在37℃下孵育培養(yǎng)板過夜并在570nm波長(zhǎng)下讀板(SPECTRAmax 190，MolecularDevices；Sunnyvale，CA)。在試驗(yàn)中，將25ng/ml VEGF分別與0.1、0.3、1.0或3μM化合物AL06295混合進(jìn)行測(cè)定。
如

圖1，結(jié)果顯示1和3uM劑量的氨芬酸明顯減少了VEGF誘導(dǎo)的BRMEC增殖。
實(shí)施例3AL06295A(氨芬酸)對(duì)BRMEC血管形成的作用制備8體積Vitrogen 100(Cohesion；Palo Alto，CA)、1體積0.2NNaOH和1體積10×RPMI-1640培養(yǎng)基(含有5μg/ml纖連蛋白和5μg/ml層粘連蛋白)的混合物并且在24孔培養(yǎng)板中的每一孔內(nèi)加入400μl的混合物。在37℃下孵育3小時(shí)使膠固化，每孔加入104BRMEC并在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中孵育3天。然后小心地抽吸培養(yǎng)基，將200μl凝膠溶液放置于細(xì)胞上并在37℃下孵育1小時(shí)。隨后加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基，24小時(shí)后每孔加入2ml的試驗(yàn)培養(yǎng)基(無血清(SF)培養(yǎng)基+VEGF或者SF培養(yǎng)基+VEGF以及AL06295A)。24小時(shí)后檢測(cè)凝膠。
從每個(gè)處理組的含有血管的區(qū)域內(nèi)選擇六個(gè)區(qū)進(jìn)行定量分析；每個(gè)處理組選用7個(gè)孔。用數(shù)碼影像測(cè)定管的長(zhǎng)度，并將數(shù)據(jù)表示在圖2中，每個(gè)觀察區(qū)內(nèi)的總長(zhǎng)度以μm計(jì)。結(jié)果表明，所有劑量的氨芬酸都明顯有效地抑制了VEGF誘導(dǎo)的BRMEC的毛細(xì)血管形成。
雖然本發(fā)明是通過對(duì)一些優(yōu)選的實(shí)施方案的說明來描述的；但是，應(yīng)該明白本發(fā)明也可以以其他具體形式或變通方案實(shí)施而并不偏離其特定或基本的特征。因此，上述實(shí)施方案僅作為對(duì)本發(fā)明的全面說明而并不是要限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求闡明而不是由之前的描述來闡明。
權(quán)利要求
1.治療血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的血管疾病的方法，該方法包括給予藥學(xué)上有效量的氨芬酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病選自滲出性年齡相關(guān)性黃斑變性、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜靜脈閉塞、增生性玻璃體視網(wǎng)膜病、新血管生成性青光眼、角膜血管生成、視網(wǎng)膜微血管病和視網(wǎng)膜(黃斑)水腫。
3.治療血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的血管疾病的方法，該方法包括給予藥學(xué)上有效量的奈帕芬胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述疾病選自滲出性年齡相關(guān)性黃斑變性、增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜靜脈閉塞、增生性玻璃體視網(wǎng)膜病、新血管生成性青光眼、角膜血管生成、視網(wǎng)膜微血管病和視網(wǎng)膜(黃斑)水腫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病為眼科疾病。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述疾病為眼科疾病。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述疾病為視網(wǎng)膜(黃斑)水腫。
8.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述疾病為視網(wǎng)膜(黃斑)水腫。
9.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述疾病為增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
10.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述疾病為增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病。
全文摘要
本發(fā)明公開氨芬酸和它的衍生物(包括奈帕芬胺)在治療血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的血管疾病中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/196GK1649575SQ03809479
公開日2005年8月3日 申請(qǐng)日期2003年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月3日
發(fā)明者D·P·賓加曼, M·A·考平, D·A·格瑪施, G·格拉夫, J·M·亞妮 申請(qǐng)人:愛爾康公司