專利名稱：向脂質(zhì)體中包封金屬絡(luò)合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包封了99mTc等短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法。更具體地說，本發(fā)明涉及包封了99mTc等短半衰期的金屬放射性核素絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，其中所述絡(luò)合物使用以N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺為配體的99mTc等短半衰期的金屬放射性核素絡(luò)合物、以及由該方法制備的脂質(zhì)體、在該方法中使用的試劑盒。
背景技術(shù)：
使用放射性核素進(jìn)行癌的圖像診斷可以施行無創(chuàng)性的早期診斷。在圖像診斷中廣泛采用的放射性同位素(RI)中，金屬放射性同位素锝-99m(99mTc)在圖像診斷中具有適宜的半衰期(6小時)和γ射線能量(141keV)，并且，通過以99Mo為母核素的發(fā)生器系統(tǒng)，可以容易地以生理鹽水溶液的形式獲得，是最適合臨床應(yīng)用的核素。為了將99mTc選擇性地送達(dá)腫瘤，目前進(jìn)行了很多在標(biāo)記母體中使用抗體或肽的研究，脂質(zhì)體也是圖像診斷應(yīng)用中得到研究的載體之一。脂質(zhì)體是由脂質(zhì)雙分子膜構(gòu)成的封閉小囊泡，作為化療劑等藥物、蛋白質(zhì)、核酸等的膠囊型DDS載體受到了人們的重視。核醫(yī)學(xué)診斷中，其內(nèi)部可以內(nèi)包大量的放射能，通過調(diào)節(jié)粒徑或?qū)δけ砻孢M(jìn)行化學(xué)修飾，可以具有靶向性，因此，除實(shí)體癌之外，用99mTc標(biāo)記的脂質(zhì)體在前哨淋巴結(jié)、炎癥·感染部位的高靈敏度圖像診斷方面的應(yīng)用也值得期待。
已知腫瘤組織中，血管通透性亢進(jìn)或經(jīng)由淋巴系統(tǒng)的回收不足，因此高分子容易由血液中滲漏到腫瘤組織間質(zhì)中并蓄積。這樣的特性顯示透過組織間質(zhì)的脂質(zhì)體在腫瘤組織內(nèi)未被攝取到細(xì)胞內(nèi)，而是存在于細(xì)胞間質(zhì)中。而隨血流循環(huán)的脂質(zhì)體主要被捕捉到肝臟、脾臟等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)組織中，從血液中消散。目前得到普遍研究的、同樣是以腫瘤的圖像診斷為目的包封有67Ga、以及111In的氨三乙酸(NTA)絡(luò)合物的脂質(zhì)體在實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)顯示了優(yōu)異的腫瘤濃集性，但也證實(shí)在肝臟和脾臟中有高的放射能聚集，這對實(shí)際應(yīng)用造成了很大的障礙。這是由于被攝入到肝臟和脾臟的脂質(zhì)體與實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的溶酶體融合并代謝，但此時被釋放到溶酶體內(nèi)的包封絡(luò)合物67Ga和111In-NTA為水溶性，不能透過膜，并由于其穩(wěn)定性低，絡(luò)合物分解，放射性核素貯留于溶酶體內(nèi)。結(jié)果，這些組織內(nèi)顯示出長時間的放射性的滯留。
而本發(fā)明中，可認(rèn)為脂質(zhì)體被攝取到細(xì)胞內(nèi)的溶酶體內(nèi)，代謝后釋放的RI絡(luò)合物具有由溶酶體向血液中轉(zhuǎn)移，迅速排到尿液中的性質(zhì)，從而消散了這些非特異性放射性的滯留。經(jīng)選擇，具有這樣的性質(zhì)的絡(luò)合物有99mTc-亞乙雙半胱氨酸(99mTc-CD)(

圖1)。有報告指出99mTc-CD具有2個分子的游離數(shù)酸和穩(wěn)定的5價中性絡(luò)合物結(jié)構(gòu)，與對氨基馬尿酸同樣，經(jīng)由腎臟的有機(jī)陰離子遷移，以穩(wěn)定的化學(xué)形態(tài)排到尿液中。本發(fā)明人目前的研究結(jié)果表明通過將與99mTc同族的長半衰期的金屬放射性核素錸-186(186Re)與CD的絡(luò)合物186Re-CD包封在脂質(zhì)體內(nèi)，可以使聚集在肝臟、脾臟的放射能以186Re-CD的形式迅速地排到尿液中，可極大地降低這些組織的放射能滯留。這些結(jié)果顯示包封99mTc-CD絡(luò)合物的脂質(zhì)體也同樣可以消散肝臟和脾臟內(nèi)的放射性滯留。
但是，制備186Re-CD脂質(zhì)體時，如果采用直接向脂質(zhì)中添加186Re-CD絡(luò)合物，使其溶脹的直接包封法，則包封率明顯低，為3.2％，因此需要建立一種向脂質(zhì)體中包封186Re-CD或99mTc-CD的方法。另外，臨床使用時，直接包封脂質(zhì)體需要在要使用之前制備脂質(zhì)體，從實(shí)際應(yīng)用角度考慮，也希望有一種臨床標(biāo)記預(yù)先制備的脂質(zhì)體的方法。有報告提出了67Ga或111In絡(luò)合物的高效且簡便的包封方法(圖2)制備具有高脂溶性和置換活性的絡(luò)合物--67Ga和111In-喔星絡(luò)合物，通過和內(nèi)包NTA的脂質(zhì)體一起進(jìn)行培養(yǎng)，透過脂質(zhì)體膜的絡(luò)合物在內(nèi)部發(fā)生配體交換反應(yīng)，使得水溶性螯合劑67Ga和111In-NTA保持在脂質(zhì)體內(nèi)。使用被稱為配體交換反應(yīng)的該包封方法時，67Ga或111In的包封率達(dá)到約90％。另外，以高的放射化學(xué)收率獲得99mTc標(biāo)記的脂質(zhì)體的方法還有通過和內(nèi)包谷胱甘肽的脂質(zhì)體一起進(jìn)行培養(yǎng)，使脂溶性絡(luò)合物99mTc-六甲基丙烯胺肟(99mTc-HMPAO)在內(nèi)部還原性地轉(zhuǎn)化為水溶性分解產(chǎn)物。包封率大約為60％-90％。最近，核醫(yī)學(xué)上采用的RI標(biāo)記脂質(zhì)體最常見的都是采用該包封方法制備的，但67Ga、111In和99mTc的任意一種標(biāo)記的脂質(zhì)體都會產(chǎn)生上述的在肝臟、脾臟中滯留放射能的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明將消除上述現(xiàn)有技術(shù)的問題作為要解決的課題。即，為了使給予的放射能迅速消散，不僅要求高的包封率，同時還要求充分提高內(nèi)部的99mTc-CD的放射化學(xué)純度。因此，本發(fā)明的目的在于提供以可實(shí)用化的放射化學(xué)收率和純度制備包封有99mTc等短半衰期金屬放射性核素與CD的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的方法。
本發(fā)明人為了解決上述課題，將具有高的膜透過性和置換活性的兩種99mTc絡(luò)合物--99mTc-HMPAO和99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺(MRP20)(圖3)用于配體交換反應(yīng)，并將兩者進(jìn)行了比較研究。還研究了制備的包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體在體內(nèi)的放射能動態(tài)，對本標(biāo)記法在通過99mTc的圖像診斷和通過186Re的內(nèi)用放射線治療中的有效性進(jìn)行了評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺(99mTc-MRP20)，通過配體交換反應(yīng)，將99mTc-CD包封到脂質(zhì)體中，由此可以制備可消散非特異性放射能在肝臟、脾臟中的滯留的、包封有99mTc的脂質(zhì)體。本發(fā)明基于這些認(rèn)識而完成。
即，本發(fā)明提供包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括將短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物、以及包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合，并進(jìn)行培養(yǎng)。
優(yōu)選提供包封有99mTc-亞乙雙半胱氨酸(CD)絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括將99mTc-N-[2(1 H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺與包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合，并進(jìn)行培養(yǎng)。
本發(fā)明的另一方面在于提供包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體通過將短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物、包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合、培養(yǎng)來制備。
優(yōu)選提供包封有99mTc-亞乙雙半胱氨酸(CD)絡(luò)合物的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體通過將99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺與包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合、培養(yǎng)來制備。
本發(fā)明的又一方面在于提供含有上述脂質(zhì)體的診斷劑或治療劑。
本發(fā)明的另一方面在于提供用于實(shí)施本發(fā)明的包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法的試劑盒，該試劑盒包含至少一種選自下述的物質(zhì)一種或以上的形成脂質(zhì)體的物質(zhì)；亞乙雙半胱氨酸(CD)；包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體；短半衰期的金屬放射性核素；N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺；或短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物。
優(yōu)選短半衰期的金屬放射性核素為99mTc或其鹽。
附圖簡述圖1表示99mTc-CD的推測結(jié)構(gòu)。CD的配位原子上具有氮和硫，與5價的99mTc形成穩(wěn)定的氧絡(luò)合物。
圖2表示86Re-CD的直接包封法(A)和111In-NTA的配體交換反應(yīng)(B)。
■CD或NTA▲86Re或111In○喔星圖3表示99mTc-HMPAO(左)和99mTc-MRP20(右)的結(jié)構(gòu)。是具有高脂溶性和置換活性的99mTc絡(luò)合物，可認(rèn)為比較容易發(fā)生水解和配體交換反應(yīng)。
圖4表示99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20在其水溶液中的穩(wěn)定性。以形成絡(luò)合物0小時后為100％，表示各99mTc絡(luò)合物的放射化學(xué)純度隨時間的變化。
(A)未經(jīng)RP-HPLC提純的99mTc-HMPAO；(B)經(jīng)RP-HPLC提純的99mTc-HMPAO；(C)未經(jīng)RP-HPLC提純的99mTc-MRP20；(D)經(jīng)RP-HPLC提純的99mTc-MRP20；○25℃，□37℃圖5表示pH對99mTc-HMPAO(A)和99mTc-MRP20(B)與CD的配體交換反應(yīng)性的影響。將因交換反應(yīng)而產(chǎn)生的99mTc-CD的放射化學(xué)吸收率表示在縱軸。
○與未經(jīng)RP-HPLC提純的99mTc絡(luò)合物的交換；□與經(jīng)RP-HPLC提純的99mTc絡(luò)合物的交換；圖6表示使用99mTc-HMPAO制備的99mTc-CD脂質(zhì)體(99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體)的內(nèi)包物質(zhì)的EP分析結(jié)果。
圖7表示使用99mTc-MRP20制備的99mTc-CD脂質(zhì)體(99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體)的內(nèi)包物質(zhì)的EP分析結(jié)果(A)與RP-HPLC分析結(jié)果(B)。
圖8表示將99mTc標(biāo)記的脂質(zhì)體靜脈給予小鼠時的體內(nèi)放射能動態(tài)。
△99mTc/GSH脂質(zhì)體■99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體；●99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體；圖9表示將包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體給予小鼠后，向外排放的放射能占所給予的放射能的比例。
■99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體給予組；□(斜線)99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體給予組；圖10表示將99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體給予小鼠后，通過EP(A)和RP-HPLC(B)對排到尿液中的放射能的分析結(jié)果。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式以下對本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說明。
本發(fā)明提供的包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于將短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物、包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合，并進(jìn)行培養(yǎng)。
可用于本發(fā)明的短半衰期的金屬放射性核素的種類并沒有特別限定，優(yōu)選99mTc(锝99m)或186/188Re，特別優(yōu)選99mTc。
關(guān)于本發(fā)明中使用的短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺(MRP20)的絡(luò)合物，例如短半衰期的金屬放射性核素為99mTc時，可通過將MRP20的乙醇溶液與氯化亞錫的鹽酸溶液混合，向其中加入99mTcO4-溶液，在室溫下放置來制備。使用除99mTc以外的短半衰期的金屬放射性核素時，可以使用相應(yīng)的含有短半衰期的金屬放射性核素的溶液來代替99mTcO4-溶液。
本發(fā)明中使用的包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體可以使用形成脂質(zhì)體的物質(zhì)，按照常規(guī)方法制備。
形成脂質(zhì)體的物質(zhì)只要是本領(lǐng)域中通常使用的物質(zhì)即可，并沒有特別限定，從在生物體內(nèi)提供穩(wěn)定的脂質(zhì)體的角度考慮，優(yōu)選使用磷脂或其衍生物、除磷脂以外的脂質(zhì)或其衍生物。
上述磷脂的例子有二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿(卵磷脂)、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、心磷脂、大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂等天然或合成的磷脂，或按照常規(guī)方法向上述磷脂加氫的產(chǎn)物。
還可以加入親水性高分子的脂質(zhì)衍生物，以修飾脂質(zhì)體的表面。可以使用的親水性高分子脂質(zhì)衍生物只要無損脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定即可，并沒有特別限定，例如有聚乙二醇、葡聚糖、普魯蘭、菲可(聚糖體)、聚乙烯醇、合成多聚氨基酸、直鏈淀粉、支鏈淀粉、甘露聚糖、環(huán)糊精、果膠、角叉藻聚糖以及它們的衍生物等，可特別優(yōu)選使用聚乙二醇和聚乙二醇衍生物。
本發(fā)明中使用的脂質(zhì)體可以根據(jù)需要使用穩(wěn)定劑、抗氧化劑等。穩(wěn)定劑的例子有降低膜流動性的膽固醇等固醇；甘油；蔗糖等糖類?？寡趸瘎┑睦佑猩油滴铩⒗缇S生素E等。
為了制備脂質(zhì)體，可以在燒瓶中，將溶解于溶劑中的形成脂質(zhì)體的物質(zhì)(可以是2種或以上的混合物)減壓餾去溶劑，在燒瓶的內(nèi)壁上形成脂質(zhì)薄膜。
作為溶劑，只要可溶解要使用的脂質(zhì)，可以是任何溶劑，例如氯仿、三氯乙烷、二氯甲烷等鹵化烴類；己烷、庚烷等烴類；苯、甲苯、二甲苯等芳烴類；二乙醚、二異丙醚、乙二醇二甲醚、四氫呋喃等醚類等。
接著，移入減壓干燥器，減壓下完全餾去溶劑，然后加入CD水溶液，使脂質(zhì)溶脹，可獲得多室脂質(zhì)體(MLV)混懸液。再使用0.2μm、0.05μm等的膜濾器依次加壓過濾，可獲得單室脂質(zhì)體。
按照凝膠過濾、離心等公知的方法，純化所得脂質(zhì)體分散液，可以將脂質(zhì)體與未包入脂質(zhì)體的物質(zhì)分離。
接著，向上述得到的包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體中加入短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物(特別優(yōu)選99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺等)，進(jìn)行培養(yǎng)，由此可制備包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體。培養(yǎng)溫度和時間并沒有特別限定，可以適當(dāng)設(shè)定。例如通過在室溫下培養(yǎng)30分鐘至數(shù)小時左右，可以制備包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體。
上述由本發(fā)明的方法得到的、包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體，其特征在于短半衰期的金屬放射性核素(例如99mTc)-CD絡(luò)合物的純度高。這樣，脂質(zhì)體內(nèi)部的短半衰期的金屬放射性核素(例如99mTc)-CD絡(luò)合物的放射化學(xué)純度越高，則越有望使放射性從肝臟和脾臟中迅速消散，因此按照本發(fā)明的方法制備的、包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體具有與現(xiàn)有的包封有99mTc的脂質(zhì)體或99mTc-HMPAO-CD脂質(zhì)體相比，使肝臟和脾臟中的放射性滯留大幅降低的特征。具有這樣特征的脂質(zhì)體本身也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
由本發(fā)明的方法得到的包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體，例如可用作包括癌或腫瘤等的各種疾病的診斷劑或治療劑。
本發(fā)明的脂質(zhì)體可以經(jīng)口或腸道外給予生物體。給予方法優(yōu)選通過注射給予，根據(jù)癌或腫瘤的存在部位，可以采用靜脈注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、動脈注射等任意的形式，優(yōu)選靜脈注射。
將本發(fā)明的脂質(zhì)體作為診斷劑或治療劑給予時，可以直接給予脂質(zhì)體，但優(yōu)選以含有脂質(zhì)體的藥物組合物的形式給予。上述藥物組合物含有本發(fā)明的脂質(zhì)體和藥學(xué)上可接受的賦形劑，還可根據(jù)需要含有其它藥學(xué)制劑、載體、輔藥。
通過注射，將本發(fā)明的脂質(zhì)體給予受試者時，優(yōu)選制備成液體藥物組合物。
液體藥物組合物例如可將本發(fā)明的脂質(zhì)體溶解或分散于如水、生理鹽水、水性葡萄糖、甘油、乙二醇、乙醇等的載體中，還可根據(jù)需要添加佐劑，以此來制備溶液或混懸液。
根據(jù)需要，本發(fā)明的藥物組合物中可以含有少量濕潤劑、乳化劑或助溶劑、pH緩沖劑等，例如乙酸、枸櫞酸鈉、環(huán)糊精衍生物、單月桂酸山梨糖醇酐、乙酸三乙醇胺鈉、油酸三乙醇胺等的助劑。這樣的藥物組合物的制備方法是本領(lǐng)域人員已知的。
本發(fā)明的脂質(zhì)體的給予量根據(jù)給予目的、包封的短半衰期的金屬放射性核素的種類和載藥量等而不同，通常成人給予0.1mg-1mg左右。
本發(fā)明中還使用下式 所示的99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺(99mTc-MRP20)。
99mTc-MRP20可如下制備將N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺(MRP20)的乙醇溶液與氯化亞錫的鹽酸溶液混合，向其中加入99mTcO4-溶液，在室溫下放置。
本發(fā)明提供用于實(shí)施本發(fā)明的包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法的試劑盒，該試劑盒包含至少一種選自下述的物質(zhì)一種或以上的形成脂質(zhì)體的物質(zhì)；亞乙雙半胱氨酸(CD)；包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體；短半衰期的金屬放射性核素；N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺；或短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物。
上述中，一種或以上的形成脂質(zhì)體的物質(zhì)和亞乙雙半胱氨酸(CD)是用于制備包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體的試劑，可以將它們單獨(dú)或兩者包含在試劑盒中，或?qū)⒅苽浜玫陌庥衼喴译p半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體本身包含在試劑盒中。
同樣，短半衰期的金屬放射性核素和N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺是用于制備短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡略基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物的試劑，可以將它們單獨(dú)或兩者包含在試劑盒中，或?qū)⒅苽浜玫亩贪胨テ诘慕饘俜派湫院怂嘏cN-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物包含在試劑盒中。
通過以下的實(shí)施例進(jìn)一步具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受實(shí)施例的限定。
實(shí)施例(實(shí)驗(yàn)材料和方法)1.一般方法99mTcO4-溶液采用99Mo/99mTc發(fā)生器(Ultra Techne Kow，第一同位素)的生理鹽水洗脫液。絡(luò)合物合成中的產(chǎn)物的確認(rèn)采用薄層色譜(TLC)、紙色譜(PC)、醋酸纖維素膜電泳法(EP)和反相高效液相色譜(RP-HPLC)。TLC使用Merck公司制造的硅膠(Silica gel 60F254)，用氯仿和甲醇的混合溶劑(4∶1)展開。PC使用Whatman公司制造的濾紙(No.1)，用50％乙腈展開。EP的電泳膜采用醋酸纖維素膜(SELECA-V，東洋濾紙株式會社)，緩沖液采用巴比妥緩沖液(pH＝8.6，I＝0.06，Nacalai Tesque)，以一定的電流(1mA/cm)電泳25分鐘。RP-HPLC的柱使用COSMOSIL C18-AR-300(4.6mm×150mm，Nacalai Tesque)，與流分收集器(Pharmacia)連接，用γ計數(shù)器(ARC-380M，Aloka)測定收集的所有流分。標(biāo)記化合物的分析以流速0.5ml/分鐘、移動相在(A)使用0.01M磷酸緩沖液(pH＝7.0)和乙腈，其中乙腈的比例為10分鐘內(nèi)由0增至100％的測定條件下；(B)使用0.0125M磷酸緩沖液(pH＝2.5)和乙腈，其中乙腈的比例為12分鐘內(nèi)由0增至9％、20分鐘到40分鐘內(nèi)由9％增至100％的測定條件下進(jìn)行。
2.CD和MRP20的合成N，N’-亞乙雙半胱氨酸(CD)的合成按照Brondeau等人的方法進(jìn)行(Brondeau等人，Canadian J Chem 4549-52，1967)。向L-硫代脯氨酸(噻唑烷-4-甲酸，東京化成)的氨溶液中加入金屬鈉，攪拌，然后加入NH4Cl，在室溫下攪拌過夜，將生成的晶體溶于水，用鹽酸析出而得(收率23％，熔點(diǎn)251-254℃)。
N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺(MRP20)的合成按照Morgan等人的方法進(jìn)行(Morgan等人.Inorg.Chim.Acta 190257-264，1991)。將吡咯-2-醛和乙二胺在乙腈中攪拌過夜，然后在甲醇溶劑下用NaBH4還原，在堿性條件下萃取到氯仿中，得到中間體。接著將中間體和乙酰丙酮在乙腈中攪拌，然后用氯仿萃取，通過硅膠柱(溶劑為乙酸乙酯∶甲醇＝5∶1)和苯進(jìn)行重結(jié)晶，提純。收率15.9％，熔點(diǎn)74-75℃(文獻(xiàn)值75℃)。
3.99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20的合成99mTc-HMPAO(99mTc-六甲基丙烯胺肟)通過由日本Medi-Physics公司供應(yīng)的試劑盒(Cerebrotec(注冊商標(biāo))，Nycomed AmershamInternational)制備。向試劑盒中加入99mTcO4-生理鹽水溶液，溶解后立即使用。
99Tc-MRP20如下制備將190μl MRP20的乙醇溶液(17mM)和10μl0.01N氯化亞錫的HCl溶液(1.35M)混合，向其中加入200μl99mTcO4-溶液，在室溫下放置15分鐘后使用。
通過TLC、PC、EP、RP-HPLC求出所得99mTc絡(luò)合物(99Tc-HMPAO、99mTc-MRP20和99mTc-CD)的放射化學(xué)收率。放射化學(xué)收率的計算如下進(jìn)行將干燥的TLC板、濾紙和醋酸纖維素膜裁成5mm寬度，用γ計數(shù)器測定各裁片，以各板上的全部的放射能為100％，求出不同Rf值下的放射能比例。
4.HMPAO和MRP20的分配系數(shù)的測定向500μl辛醇和500μl pH7.0的HEPES緩沖液或pH12.0的Na2HPO4-NaOH緩沖液中加入20μl用生理鹽水制備成8mM的HMPAO或MRP20溶液，攪拌、靜置后測定辛醇層、水層的吸光度，比較兩種絡(luò)合物的脂溶性。
5.99mTc絡(luò)合物在其水溶液中的穩(wěn)定性為了比較99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20在其水溶液中的穩(wěn)定性，將99mTc-HMPAO水溶液用50mM氨緩沖液(pH9.4)稀釋為最終配體濃度1mM，在25℃或37℃的水浴中培養(yǎng)，一定時間(0.5、2、4、8、24小時)后，通過上述的分析方法分別求出放射化學(xué)純度。99mTc-MRP20水溶液用50mM磷酸緩沖液(pH8.3)稀釋，進(jìn)行同樣的操作。
為了研究游離配體對穩(wěn)定性的影響，用RP-HPLC提純99mTc絡(luò)合物溶液，將洗脫到100％乙腈中的純化99mTc絡(luò)合物溶液用緩沖液按照1∶1的比例混合、稀釋，與提純前同樣，研究絡(luò)合物的放射化學(xué)純度隨時間的變化。
6.99mTc絡(luò)合物與CD的配體交換反應(yīng)性將CD用1N NaOH溶解，濃度為66.7mM，然后用緩沖液稀釋至10倍，用2N HCl調(diào)節(jié)pH，以此作為CD水溶液。將該CD水溶液與99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20溶液按照3∶1的比例混合，在37℃培養(yǎng)30分鐘，然后通過EP求出Tc-CD的放射化學(xué)收率。稀釋CD的緩沖液使用pH7.0或8.3的HEPES緩沖液、pH9.4或10.5的氨緩沖液、pH11.2的磷酸鈉緩沖液(均為50mM)。CD溶液與99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20溶液進(jìn)行溶液混合后的CD濃度為5mM，HMPAO和MRP20濃度為2mM。
7.脂質(zhì)體的制備在茄型燒瓶中，將用2ml氯仿溶解的硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC，日本油脂)和膽固醇(CH，Sigma)以2∶1摩爾比(15μ摩爾∶7.5μ摩爾)混合，然后在65℃減壓下餾去溶劑，在燒瓶內(nèi)壁形成脂質(zhì)的薄膜。移入減壓干燥器，花4小時或以上減壓完全餾去溶劑，然后加入大致等滲的包封物質(zhì)的水溶液，在65℃使脂質(zhì)溶脹，得到多室脂質(zhì)體(MLV)的混懸液。使用0.2μm、0.05μm的聚碳酸酯膜濾器(Nuclepore(注冊商標(biāo))，野村Micro Science)依次加壓過濾，得到單室脂質(zhì)體(SUV)。將生成的脂質(zhì)體進(jìn)行凝膠過濾(凝膠過濾柱，1×30cm，Bio-Rad)，其中以用5％甘露糖醇水溶液溶脹的Bio-Gel A-1.5m(Bio-Rad)為載體，用5％甘露糖醇水溶液洗脫提純。接著將脂質(zhì)體以400,000g離心20分鐘，用生理鹽水使沉淀再混懸，制備脂質(zhì)體溶液。
8.包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體的制備包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體通過配體交換反應(yīng)制備。將CD溶于生理鹽水，將1.5ml由2N NaOH調(diào)節(jié)為pH11.8的5mM CD溶液添加到由上述方法制備的磷脂的薄膜中，制備脂質(zhì)體，然后通過凝膠過濾除去未封入的CD。將500μl所得純化脂質(zhì)體用等量生理鹽水稀釋，然后將140μl99mTc-HMPAO溶液和99mTc-MRP20溶液加入其中，在37℃培養(yǎng)60分鐘，得到包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體。將反應(yīng)溶液離心分離，沉淀的級分為包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體。
9.99mTc/GSH脂質(zhì)體的制備按照現(xiàn)有方法制備99mTc/GSH脂質(zhì)體。將GSH溶于135mM NaCl/10mMHEPES緩沖液(pH7.4)中，用2N NaOH調(diào)節(jié)pH＝6.7，制備50mM GSH溶液。將1.5ml GSH溶液添加到磷脂的薄膜中，制備脂質(zhì)體，然后通過凝膠過濾除去未封入的GSH。接著將250μl99mTc-HMPAO加入到500μl純化脂質(zhì)體中，在25℃培養(yǎng)40分鐘，得到99mTc/GSH脂質(zhì)體。離心反應(yīng)溶液，沉淀的級分為99mTc/GSH脂質(zhì)體。
10.包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體的內(nèi)包物質(zhì)的分析向使用99mTc-HMPAO制備的99mTc-CD脂質(zhì)體(99mTc-HMPAO-CD脂質(zhì)體)和使用99mTc-MRP20制備的99mTc-CD脂質(zhì)體(99mTc-MRP20-CD脂質(zhì)體)的各沉淀級分中加入大約250kBq/ml量的乙醇，充分?jǐn)嚢?，靜置20分鐘，溶解脂質(zhì)膜。通過EP對溶出的脂質(zhì)體內(nèi)包物質(zhì)進(jìn)行分析。
11.正常小鼠的體內(nèi)動態(tài)將包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體級分或99mTc/GSH脂質(zhì)體級分用生理鹽水稀釋，使磷脂濃度為1.4-1.8μ摩爾/ml。將0.1ml各脂質(zhì)體溶液由尾靜脈給予一組5只5周齡的ddY系雄性小鼠。給予10分鐘、1、3、6、24小時后斷頭處死，然后摘取各組織，由γ射線檢測裝置測定組織重量和放射能。以所給予的量為100％，分布于各組織的放射性以1g各組織的放射性(％ID/g組織)來表示。
給予24小時后，對尿液中的放射性進(jìn)行分析。將300μl采集的尿液裝入用于離心過濾的濾器中(Microcon(注冊商標(biāo))，Millipore)，在4℃以8800rpm離心15分鐘，除去蛋白質(zhì)，然后用0.45μm的針頭濾器過濾，將過濾物通過EP、RP-HPLC進(jìn)行分析。
(結(jié)果)1.99mTc化合物的化學(xué)性質(zhì)99mTcO4-在EP中泳動至陽極一側(cè)8.0cm處；在由氯仿和甲醇的混合溶劑展開的TLC中，Rf值為0.8-0.9；在由50％乙腈展開的PC中，Rf值為0.9-1.0?？梢哉J(rèn)為在EP、TLC和PC中，由99mTcO4-水解而產(chǎn)生的99mTcO2殘留在原點(diǎn)。99mTc-CD在EP中泳動到陽極一側(cè)6.0cm處；在RP-HPLC(B)中是在22.0分鐘后被洗脫。99mTc-HMPAO在EP中在原點(diǎn)不泳動，在TLC中的Rf值為0.9，因此TLC的Rf值為0.9附近的放射能比例減去由EP求出的99mTcO4-的比例，以所得值作為放射化學(xué)收率。RP-HPLC(A)中的保留時間為16.9分鐘。按照如下所示的方法合成的99mTc-MRP20在EP中在原點(diǎn)不泳動，在PC中的Rf值為0.8-1.0，因此通過求出EP中殘存于原點(diǎn)的放射能的比例和PC中殘存于原點(diǎn)的放射能的比例，可計算放射化學(xué)收率。RP-HPLC(A)中的保留時間為18.1分鐘。這些結(jié)果的匯總(99mTc化合物的分析值)如表1所示。
表1表199mTc化合物的分析值99mTc-99mTc-99mTcO4-99mTcO299mTc-CDHMPAO MRP20TLC/CH3Cl+MeOH Rf值0.8-0.9 0 -- --0.9PC/50％CH3CN Rf值 0.9-1.0 0 -- 0.8-1.0 --EP電泳距離(cm) 8.0 0 6.0-8.00 0RP-HPLc(A)保留時間(分鐘)4-5 ---- 18.1 16.9RP-HPLC(B)保留時間(分鐘)4-5 --22.0 ----2.HMPAO和MRP20的分配系數(shù)轉(zhuǎn)移到辛醇層的HMPAO的吸光度在檢測下限或以下。當(dāng)緩沖液的pH為7.0時，辛醇層中的MRP20的吸光度和水層中MRP20的吸光度之比為2.1±0.7；當(dāng)pH為12.0時，為5.0±1.6。
3.99mTc-MRP20的合成在通常的操作下，用99mTc標(biāo)記MRP20時，生成50％或以上的具有負(fù)電荷的水解產(chǎn)物，目標(biāo)標(biāo)記物的收率最高為35-40％左右。這里，將溶劑乙醇和鹽酸用氮?dú)庵脫Q6小時或以上，另外將錫的鹽酸溶液少量分次加入到反應(yīng)溶液中，此時99mTc-MRP20得到了81-92％的放射化學(xué)收率。RP-HPLC(A)提純后的99mTc-MRP20的放射化學(xué)純度大致為100％。
4.99mTc絡(luò)合物在其水溶液中的穩(wěn)定性對RP-HPLC提純前和提純后的99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20兩種絡(luò)合物溶液，對于存在于各溶液中的各絡(luò)合物的放射化學(xué)純度隨時間的變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表示在圖4中。
未經(jīng)提純的99mTc-HMPAO在形成絡(luò)合物后的30分鐘內(nèi)大約分解至40％，之后的分解比較緩慢地進(jìn)行。而99mTc-MRP20在形成絡(luò)合物后的2小時內(nèi)，放射化學(xué)純度約為70％，在25℃下，分解至約40％時已是4小時以后。提純后，在37℃下，兩種絡(luò)合物的穩(wěn)定性未見大的差異，但在25℃，反而99mTc-HMPAO比99mTc-MRP20穩(wěn)定。24小時后，99mTc-MRP20分解至6％，而99mTc-HMPAO的放射化學(xué)純度為59％。
5.99mTc絡(luò)合物與CD的配體交換反應(yīng)性RP-HPLC對99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20進(jìn)行提純前后，pH對于與CD的配體交換反應(yīng)性的影響結(jié)果如圖5所示。
在未經(jīng)提純的99mTc-HMPAO與CD的交換反應(yīng)中，隨著混合溶液的pH的上升，99mTc-CD的收率增加，在pH11.9時的收率為57％。另外，提純后的交換反應(yīng)率在pH11.9時達(dá)到74％。
在提純前后，99mTc-MRP20與CD的交換反應(yīng)性都比99mTc-HMPAO高很多，在測定范圍的pH下，顯示了90％或以上的99mTc-CD收率。特別是提純后的99mTc-MRP20總是顯示95％或以上的99mTc-CD收率，未見pH引起的影響。
6.包封有99mTc的脂質(zhì)體的制備將包封有99mTc的脂質(zhì)體進(jìn)行離心，分取離心后的上清，分別測定沉淀和上清的放射能，求出包封率。包封率是沉淀中的放射性除以沉淀中的放射能和上清中的放射能的和所得的值。使用99mTc-HMPAO進(jìn)行配體交換反應(yīng)，得到的99mTc-CD包封率為66.4％，使用99mTc-MRP20得到的99mTc-CD包封率為70.0％。使用99mTc-HMPAO得到的GSH脂質(zhì)體的包封率為75.1％。
對包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體的內(nèi)包物質(zhì)進(jìn)行分析，結(jié)果如圖6、圖7所示。99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體、99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體的任意一種的內(nèi)包物質(zhì)，其在EP中的主要峰都在陽極一側(cè)7.5cm-8.0cm處。但是，99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體的內(nèi)部存在的放射能中，與99mTc-CD相當(dāng)?shù)姆遄罡哒?4％。而對于99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體的內(nèi)包物質(zhì)，在EP中，91％的放射能泳動到陽極一側(cè)6.5cm處，在RP-HPLC(B)中幾乎全部的放射性在保留時間22.3分鐘時洗脫出來。
7.正常小鼠的體內(nèi)動態(tài)將用99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20標(biāo)記的包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體和作為比較對照的99mTc/GSH脂質(zhì)體靜脈給予正常小鼠，其體內(nèi)放射性動態(tài)如圖8所示。三者由血液中消散的程度相同，給予早期，放射能在肝臟和脾臟中的聚集未見大的差異。但是隨著時間推移，99mTc/GSH脂質(zhì)體在這些組織中的放射性聚集增加，6小時后，與99mTc-CD脂質(zhì)體的差異明顯，24小時后，肝臟中1g組織滯留了所給予的放射性的20％，脾臟中在24小時后也見放射性的蓄積傾向，殘留了所給予的放射性的56％。而對于包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體，肝臟在給予30分鐘時、脾臟在給予3小時時，所給予的放射性達(dá)到最高值，之后隨時間的推移而減少。比較兩種99mTc-CD脂質(zhì)體，則99mTc-MRP20-CD脂質(zhì)體與99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體相比，特別是在給予6小時和24小時時顯示了更迅速的放射性的消散。
給予24小時后，排到體外的放射能量如圖9所示，對尿液中的放射性的分析結(jié)果如圖10所示。所給予的放射能中，排到尿液中的放射能的比例在99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體給予組為59％，99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體給予組為74％。對于給予99mTc(MRP20)-CD脂質(zhì)體后排到尿液中的放射能，其中的91.2％泳動到EP中陽極一側(cè)6.0cm處，在RP-HPLC(B)中在保留時間22.5分鐘后被洗脫出來。
(討論)在脂質(zhì)體的99mTc標(biāo)記法中最為通常的、內(nèi)包99mTc-HMPAO和谷胱甘肽的脂質(zhì)體的包封是可以以高效率進(jìn)行的。但是，由于這樣的包封有99mTc的脂質(zhì)體中內(nèi)包了99mTc-HMPAO的還原性分解產(chǎn)物，由于99mTc化合物聚集在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)而產(chǎn)生非特異性放射性滯留，這產(chǎn)生了圖像精度降低的問題。通過直接包封制備的99mTc-CD脂質(zhì)體，包封效率非常低，實(shí)用性差，不過脂質(zhì)體中內(nèi)包的99mTc-CD的放射化學(xué)純度的理論值大體為100％，從之前的討論中已清楚實(shí)際給予小鼠后，所給予的放射能的約80％排到尿液中，顯示放射性迅速地從非目標(biāo)組織中消散。在考慮在圖像診斷中的實(shí)際應(yīng)用時，需要實(shí)現(xiàn)與現(xiàn)有的標(biāo)記法同樣高的放射化學(xué)收率，同時還要實(shí)現(xiàn)與直接包封法相匹敵的高的放射化學(xué)純度。
本實(shí)施例中，通過使用99mTc-HMPAO或99mTc-MRP20進(jìn)行配體交換反應(yīng)，制備包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體，使包封率由直接包封186Re-CD時的3.2％，大幅上升到66-70％。使用99mTc-HMPAO和99mTc-MRP20的任意一種作為膜透過性絡(luò)合物，均未見包封率有大的差異，但可見到包封后，脂質(zhì)體中內(nèi)包的99mTc-CD的放射化學(xué)純度的顯著的差異。與99mTc-MRP20相比，99mTc(HMPAO)-CD脂質(zhì)體內(nèi)的99mTc-CD純度低很多。其原因是生成了可能是99mTc-HMPAO的水解產(chǎn)物、具有負(fù)電荷的放射性化合物。配體交換反應(yīng)中，作為起始原料的絡(luò)合物需要置換活性高，比較不穩(wěn)定，因此目標(biāo)絡(luò)合物的生成反應(yīng)與原料絡(luò)合物的分解反應(yīng)競爭性地進(jìn)行。哪一個反應(yīng)優(yōu)先進(jìn)行，這與原料絡(luò)合物的穩(wěn)定性有很強(qiáng)的相關(guān)關(guān)系，但不僅是絡(luò)合物本身的穩(wěn)定性，推測脂質(zhì)體內(nèi)的配體濃度也是重要的因素。由HMPAO和MRP20的分配系數(shù)可知游離狀態(tài)下的MRP20比HMPAO的脂溶性高很多。膜外的MRP20通過被動擴(kuò)散容易地透過脂質(zhì)體膜，因此在脂質(zhì)體內(nèi)部也顯示高的游離MRP20濃度，可認(rèn)為有這樣的過剩的游離配體的共存，可能使絡(luò)合物處于難以被水解的狀態(tài)。另外還顯示作為絡(luò)合物的99mTc-MRP20本身比99mTc-HMPAO的穩(wěn)定性高(圖4)，是與CD的反應(yīng)性高的絡(luò)合物(圖5)，可推斷這些因素有利于與CD的配體交換反應(yīng)，在脂質(zhì)體內(nèi)也可以以高純度生成99mTc-CD。
脂質(zhì)體內(nèi)部的99mTc-CD的放射化學(xué)純度越高，則越有望使放射性從肝臟和脾臟迅速消散，因此99mTc-MRP20-CD脂質(zhì)體比現(xiàn)有的包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體和99mTc-HMPAO-CD脂質(zhì)體更能大幅降低肝臟和脾臟中的放射性滯留，這可能是由于內(nèi)部的99mTc-CD純度對給予后的體內(nèi)放射性分布有很大影響。從所給予的放射性的74％排到尿液中，其中的91％以99mTc-CD的化學(xué)形式被檢測出這一結(jié)果也支持上述推測。以上結(jié)果顯示通過使用99mTc-MRP20進(jìn)行配體交換反應(yīng)，可以以高的放射化學(xué)收率制備可解決現(xiàn)有技術(shù)的問題——使非特異性放射能的滯留降低、包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體。本發(fā)明的包封法對于可進(jìn)行高精度圖像診斷的99mTc標(biāo)記脂質(zhì)體的制備有效。另外本發(fā)明的包封法有望為以癌的內(nèi)用放射治療為目的的細(xì)胞殺傷性186/188Re標(biāo)記脂質(zhì)體的制備提供基礎(chǔ)認(rèn)識。
產(chǎn)業(yè)實(shí)用性通過膜透過性絡(luò)合物99mTc-MRP20與CD的配體交換反應(yīng)，可以高收率獲得99mTc-CD，因此通過本發(fā)明的使用99mTc-MRP20進(jìn)行的配體交換反應(yīng)，可以以高的放射化學(xué)收率和純度制備包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體。另外，由本方法制備的包封有99mTc-CD的脂質(zhì)體顯示可解決現(xiàn)有技術(shù)的問題——大幅降低肝臟和脾臟中的非特異性放射性滯留。本發(fā)明可以提高使用99mTc標(biāo)記脂質(zhì)體的圖像診斷精度。另外，本發(fā)明的方法也可應(yīng)用于以癌的內(nèi)用放射線治療為目的的細(xì)胞殺傷性186/188Re標(biāo)記脂質(zhì)體的制備。
權(quán)利要求
1.包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括將短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物、包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合，進(jìn)行培養(yǎng)。
2.包封有99mTc-亞乙雙半胱氨酸(CD)絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括將99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺和包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合，進(jìn)行培養(yǎng)。
3.包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體通過將短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物、包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合、培養(yǎng)來制備。
4.包封有99mTc-亞乙雙半胱氨酸(CD)絡(luò)合物的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體將99mTc-N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺和包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合、培養(yǎng)來制備。
5.診斷劑或治療劑，該診斷劑或治療劑含有權(quán)利要求3或4的脂質(zhì)體。
6.用于實(shí)施權(quán)利要求1的包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法的試劑盒，該試劑盒包含至少一種選自下述的物質(zhì)一種或以上的形成脂質(zhì)體的物質(zhì)；亞乙雙半胱氨酸(CD)；包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體；短半衰期的金屬放射性核素；N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺；或短半衰期的金屬放射性核素與N-[2(1H-吡咯基甲基)]-N’-(4-戊烯-3-酮-2)乙-1，2-二胺的絡(luò)合物。
7.權(quán)利要求6的試劑盒，其中短半衰期的金屬放射性核素為99mTc或其鹽。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供以可實(shí)用化的放射化學(xué)收率和純度制備包封有短半衰期的金屬放射性核素與CD的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的方法。本發(fā)明提供包封有短半衰期的金屬放射性核素與亞乙雙半胱氨酸(CD)的絡(luò)合物的脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括將短半衰期的金屬放射性核素與N－[2(1H－吡咯基甲基)]－N’－(4－戊烯－3－酮－2)乙－1，2－二胺的絡(luò)合物、包封有亞乙雙半胱氨酸(CD)的脂質(zhì)體混合，進(jìn)行培養(yǎng)。
文檔編號A61P35/00GK1649628SQ0380944
公開日2005年8月3日 申請日期2003年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月26日
發(fā)明者荒野泰, 金子惠美, 村上正裕 申請人:天藤制藥株式會社