專利名稱：漁用抗菌藥及其加工工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種漁用抗菌藥及其加工工藝。
背景技術(shù)：
研究表明，水產(chǎn)動物的病害主要是細菌感染引起，如氣單胞菌(Aeromonassp.)是一類在自然界廣泛分布、嚴重危害各種水產(chǎn)動物的細菌，不僅引起養(yǎng)殖魚類出血性敗血癥、蝦蟹黑鰓病等多種大量嚴重流行病，而且感染了香魚、金魚、牛蛙、鯉魚、草魚、鱉、羅非魚、草魚、虹鱒等幾乎所有的水產(chǎn)養(yǎng)殖動物，這也使得在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，需大量使用漁用藥物特別是抗菌素藥物對水產(chǎn)養(yǎng)殖動物進行預防和治療。但近年來，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗菌素使用種類、劑量及頻度都有大幅度提高，如磺胺類、喹諾酮類等抗菌素已成為各種漁藥制劑中的主要成分，特別是一些人類的新藥如氧氟沙星等也在養(yǎng)殖生產(chǎn)中大量使用，從而有可能導致與人類疾病相關(guān)的細菌，也有可能對這些抗菌素產(chǎn)生耐藥性，藥物的殘留及耐藥菌株的產(chǎn)生不僅直接制約水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展、影響我國水產(chǎn)品的國際競爭力，同時對人類及其它動物的健康構(gòu)成了潛在威脅。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種對水產(chǎn)動物的細菌性病具有防治作用和預防病毒性疾病的細菌性繼發(fā)感染的漁用抗菌藥及其加工工藝。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種漁用抗菌藥，它含有氟苯尼考、維生素C、淀粉。
一種漁用抗菌藥的加工工藝，它包括下列步驟，(1)、將淀粉于105℃～110℃的溫度條件下烘干2小時，冷卻后過40目篩；(2)、按重量比例稱取氟苯尼考和維生素C；(3)、取與氟苯尼考和維生素C重量相等的淀粉，使淀粉與氟苯尼考以及維生素C充分混合制成母粉；(4)、將母粉與剩余的淀粉進行充分混合。
氟苯尼考(Florfenicol)又名氟甲砜霉素，是八十年代后期研制成功的一種新的水產(chǎn)獸牧專用氯霉素類的廣譜抗菌藥，具有抗菌譜廣、吸收好、體內(nèi)分布廣、安全高效等特點。氟苯尼考屬于氯霉素的單氟衍生物，作用機制與抗菌譜基本與氯霉素(Chlcramphenicol)相同，如生物利用度相當高，能抑制細菌的70S核糖體，與50S核糖體結(jié)合，抑制肽?；D(zhuǎn)移酶，從而抑制肽鏈的延伸，干擾細菌的蛋白合成，對革蘭氏陰性和陽性菌均有強烈的抑菌作用。但氯霉素的耐藥菌株通常產(chǎn)生質(zhì)粒中介的乙酰轉(zhuǎn)移酶，該酶能使氯霉素、甲砜霉素的α-甲基位的-OH發(fā)生乙酰化反應，從而失去藥理活性，但氟苯尼考的α-甲基位的-OH已被-F取代，因此氟苯尼考與氯霉素、甲砜霉素無交叉耐藥。同時氯霉素結(jié)構(gòu)中芳香環(huán)上對位硝基是引起再生障礙性貧血的主要基團，而氟苯尼考在結(jié)構(gòu)上以H3C-SO2取代了氯霉素的O2N基團，因此用藥后不產(chǎn)生再生障礙性貧血等不良反應。氟苯尼考對鰻弧菌、愛德華氏菌、巴斯德菌的最小抑菌濃度為0.4-0.8ug/ml，比氯霉素、甲砜霉素、土霉素等抗菌素都要低，在用于治療黃尾魚的假核性巴氏桿菌病及鏈球菌病、自然爆發(fā)的的大西洋鮭魚癤瘡病效果顯著?？诜o藥對黃尾魚(yellow-tail)巴氏桿菌感染，鰻遲鈍性愛德華氏菌感染，金魚鰻弧菌性感染，鮭殺鮭弧菌性感染均有良好的保護作用，療效超過其他常用抗菌藥物。氟苯尼考肌注或口服后，吸收迅速，分布廣泛，平均滯留時間較長，吸收半衰期較長，血液濃度高，在體內(nèi)能較長時間維持有效藥物濃度。如在大西洋鮭魚口服10mg/kg氟苯尼考后，藥代動力學的研究表明，氟苯尼考的生物利用度達到96.5％，血液中達峰時間為10.3小時，峰濃度為4ug/ml，半衰期為12.2小時，表觀分布容積為1.22L/Kg。
作為氟苯尼考的主要輔劑的高穩(wěn)維生素C又稱抗壞血酸，屬于水溶性維生素。是魚類維持生理機能所必需的物質(zhì)。自從Kitamura等(1965)首次通過實驗證實魚類的正常生長需要攝人維生素C之后，更多的研究表明維生素C對魚類的繁殖、生長發(fā)育、抗病和存活率提高等方面有重要的作用。維生素C為魚類維持其正常的生長功能和生命活動所必需。在膠原蛋白的合成過程中維生素C作為脯氨酸羥化酶的輔酶，直接影響膠原蛋白的合成，參與細胞間質(zhì)的生成。有降低毛細血管的通透性、刺激凝血功能、增加對感染的抵抗作用，并參與解毒功能。用于各種急、慢性傳染病或其它疾病以增強抵抗力，病后恢復期、創(chuàng)傷愈合期的輔助治療。此外，在體內(nèi)幾種藥物的解毒反應中必須有維生素C存在，維生素C還可促進鐵的吸收，有益于造血功能。維生素C還參與體內(nèi)的氧化還原反應，參與葉酸、鈣等的代謝及類激素的合成。在水產(chǎn)動物病害防治方面，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，維生素C可影響魚類傷口的愈合速度，飼料中缺乏維生素C時，大馬哈魚出現(xiàn)椎前、眼損傷等癥狀；在溝鯰中也觀察到維生素C能增強其對細胞感染。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有下列優(yōu)點試驗報告如下樣品臨床試驗報告

抑菌試驗報告試驗菌株河蟹的氣單胞菌致病菌CL990909-3嗜水氣單胞菌致病菌ATCC51208淡水魚類細菌性敗血癥病原菌嗜水氣單胞菌BSK-10淡水魚類細菌性敗血癥病原菌嗜水氣單胞菌DF-30鰻弧菌鰻愛德華氏菌魚害粘球菌對7株不同水產(chǎn)動物致病抑菌、殺菌濃度的測定1、培養(yǎng)基細菌培養(yǎng)基用肉汁胨培養(yǎng)基。
2、菌液的制備用接種環(huán)沾取純化的試驗菌株，接種到肉汁胨培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)18小時后，將菌液稀釋到200萬個細菌/ml。
3、測定方法取滅菌試管10支，再以無菌操作每管加滅菌生理鹽9ml(第1管)、5ml(第2-10管)。無菌操作吸取待測純二氧化氯稀釋液1ml入放第1管，混勻后吸取5ml放入第2管中，混勻后吸取5ml放入第3管中，以此作逐管稀釋第9管，混勻后吸取5ml棄去，第10管不加藥物作對照。
每管加稀釋好的菌液0.5ml，混勻后28℃培養(yǎng)。24小時后移取1ml至無菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時后肉眼觀察，含最小量尚呈不混蝕的試管所含藥物的濃度為最小抑菌濃度。試驗結(jié)果對河蟹的氣單胞菌致病菌CL990909-3菌株的最小抑菌濃度為2.2mg/L。
對嗜水氣單胞菌致病菌ATCC51208菌株的最小抑菌濃度0.91mg/L。
對淡水魚類細菌性敗血癥病原菌嗜水氣單胞菌BSK-10的最小抑菌濃度為0.91mg/L。
對淡水魚類細菌性敗血癥病原菌嗜水氣單胞菌DF-30的最小抑菌濃度為0.91mg/L。
對鰻弧菌的最小抑菌濃度為1.1mg/L。
對鰻愛德華氏菌的最小抑菌濃度為2.2mg/L。
對魚害粘球菌的最小抑菌濃度為0.91mg/L。
對淡水青蝦的急性毒性試驗在面積0.5平方米、深0.5米的網(wǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)5.19±1.03g/只淡水青蝦40只，暫養(yǎng)7天后進行急性毒性試驗，試驗前三天停止喂食。試驗采用拌餌口服法，飼料投喂量為淡水青蝦體重的5％。
試驗前，將淡水青蝦飼料粉碎后，加入20％的魚粉和0.5％的飼料粘合劑，將適量的本抗菌藥拌入已粉碎的淡水青蝦飼料中，加水重新制成顆粒飼料并在45℃條件下干燥。藥物餌料中含有本抗菌藥分別為2、4、6、8和10g/Kg，按5％的投飼量計算，則相當于每公斤淡水青蝦每天攝入100、200、300、400和500mg抗菌藥。
試驗時，每天投喂含本抗菌藥的藥餌一次，連續(xù)投喂四天后統(tǒng)計每只網(wǎng)箱內(nèi)淡水青蝦數(shù)量并計算成活率。同時設空白對照組。每24小時至少觀察三次，記錄死亡數(shù)，進行96小時觀察記錄。試驗期間的水溫為22±2℃，PH為7.50。
試驗結(jié)果各給藥組和對照組的淡水青蝦未出現(xiàn)大量死亡，對照組淡水青蝦的成活率為92.5％，100mg/Kg組成活率為87.5％；200mg/Kg組成活率為92.5％；300mg/Kg組成活率為87.5％；400mg/Kg組成活率為90.0％；500mg/Kg組成活率為92.5％。經(jīng)統(tǒng)計軟件分析，試驗組和對照組成活率無顯著差異，因此結(jié)果表明樣品對淡水青蝦的96小時LD50≥500mg/Kg體重。結(jié)果見表表 對青蝦的急性毒性試驗

結(jié)果表面，本產(chǎn)品的使用是安全的。
對淡水魚類出血性敗血癥的防治試驗試驗菌株采用淡水魚類出血性敗血癥的病原菌嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila，Ah)BSK-10菌株(由中國水產(chǎn)科學研究院魚病研究室實驗室分離，經(jīng)中科院北京微生物所鑒定)，接種于普通肉胨培養(yǎng)液中，25-27℃培養(yǎng)20-24小時的菌懸液備用。在進行魚體試驗時，先測菌株對魚的半致死量(LD50)，再以LD50的倍量腹腔注射接種魚體，注射的劑量為4000萬/尾。
試驗的材料魚為鯽魚，體重為50～60克，購自農(nóng)貿(mào)市場。試驗前先在水溫為25～28℃的室內(nèi)水泥池中暫養(yǎng)一周后，并隨機抽取五尾鯽魚，對血液和肉臟器官進行細菌分離，確認無嗜水氣單胞菌進行試驗。
一、試驗方法1、試驗分組參照產(chǎn)品的使用說明飼料中添加劑量為1％，并以5％投餌量投喂。即每公斤魚攝入樣品為0.05g。
試驗分三組，一組為高劑量組，口灌劑量為0.500g/Kg，一組為使用劑量組，口灌劑量為0.050mg/Kg，另一組為低劑量組，口灌劑量為0.005mg/Kg。每個劑量組中分別以4×107個菌/尾劑量攻毒2小時后口灌樣品組和口灌樣品4小時后攻毒組，分別評價樣品的治療效果和預防效果。同時設口灌等量的幼鰻飼料攻毒組和口灌等量幼鰻的空白對照組。
2、試驗方法在試驗時，分別稱取0.0625克、0.625克和6.250克的樣品，拌入30克幼鰻飼料，加水制成糊狀后，定容于250毫升，口灌劑量為每公斤魚體重口灌20ml。使鯽魚的日攝入樣品的量分別為0.005g/Kg、0.050g/Kg、0.500g/Kg。
在盛有0.3M3曝氣自來水的小水池中，每池飼養(yǎng)65.3～76.8克的鯽魚10尾，暫養(yǎng)一周后開始試驗。將使已配制的環(huán)丙沙星吸入1ml注射器，注射器連接軟橡膠管，排凈空氣。將鯽魚從水池中撈取出，稱重后，從魚嘴中插入軟膠管約5cm，根據(jù)鯽魚的體重，分別灌入1.31～1.54ml樣品，使鯽魚攝入樣品量分別為0.005g/Kg、0.050g/Kg、0.500g/Kg。攝入幼鰻飼料的量為2.4克/Kg，每天口灌一次，連續(xù)口灌4天，同時設按口灌2.4克/Kg幼鰻飼料的攻毒組和空白對照組。每24小時至少觀察三次，記錄死亡數(shù)，進行觀察記錄7天。試驗期間水溫為25±1℃，PH為7.4。
二、試驗結(jié)果口灌樣品高劑量組中，口灌4小時后攻毒組鯽魚的成活率為90％，攻毒2小時后口灌組鯽魚的成活率為80％；使用組中，口灌4小時后攻毒組鯽魚的成活率為80％，攻毒2小時后口灌組鯽魚的成活率為70％；低劑量組中，口灌4小時后攻毒組鯽魚的成活率為60％，攻毒2小時后口灌組鯽魚的成活率為40％；口灌飼料攻毒組的成活率為10％，口灌飼料空白組的成活率為100％。結(jié)果見下表表 對嗜淡水魚類出血性敗血癥的防治效果


結(jié)果表明對由嗜水氣單胞菌引起的淡水魚類出血性敗血癥有較好的防治作用，特別是在在發(fā)病初期有良好的治療作用，并對此病有較好的預防作用。
漁用藥物制劑的穩(wěn)定性測定氟苯尼考標準品純度含量為≥98.0％乙腈為色譜純，二甲基甲酰胺為分析純。
一、實驗方法色譜條件 色譜柱C18(5μm，4mm×300mm)；流動相為乙腈∶水(4∶6)，流動相使用前用超聲波脫氣處理。檢測波長223nm，柱溫為室溫，流速1.0ml/ml，加樣量10ul。
標準曲線精密稱取氟苯尼考約0.0500mg于50ml容量瓶中，加少量二甲基甲酰胺溶解后.再加流動相稀釋至標線。分別取2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00ml于50ml容量瓶，用流動相稀釋至刻度，則氟苯尼考的濃度分別為0.05、0.10、0.1、0.2、0.3、0.4mg/ml，分別取10ul進樣，以峰面積(Y)對濃度(C)回歸，兩者線性關(guān)系良好，回歸方程C＝2837861.25X+6637.41，r＝0.9995氟苯尼考標準溶液精密稱取氟苯尼考對照品，以0.1mol/L NaOH為溶劑配成200mg/L的標準貯備液，于冰箱內(nèi)4℃保存。
二、試驗結(jié)果1、樣品回收率測定精密稱取樣品5.00g(按1％生產(chǎn)標準，應含氟苯尼考50mg左右)，置于250ml燒杯中，加入二甲基甲酰胺20ml。振蕩10min，置于具塞離心管中，高速離心機4℃、5000rpm離心15min，取上清，殘渣繼續(xù)加入二甲基甲酰胺20ml攪拌均勻后，繼續(xù)用按上述方法處理，離心后合并上清于50ml容量瓶定容。然后取10ml提取液10ml置100ml容量瓶中，加流動相至標線，用0.45um濾膜過濾后，取10ul進樣，記錄峰面積并計算氟苯尼考的回收率。見下表

2、樣品藥物制劑穩(wěn)定性考察藥物制劑穩(wěn)定性考察參照衛(wèi)生部藥政局《新藥臨床前研究指導原則匯編》有關(guān)加速試驗進行。
由于本產(chǎn)品的主劑為氟苯尼考，而輔劑為高穩(wěn)維生素C和淀粉，因為主劑與輔劑間不會產(chǎn)生氧化、水解等降解反應，因此將三個批次的樣品分裝于棕色玻璃瓶中，置于40±2℃，相對濕度為75±5％的培養(yǎng)箱中，隔5、15、30、60、90天取樣，按樣品回收率測定中的方法提取樣品中氟苯尼考，用高效液相色譜法測定制劑中氟苯尼考的含量，結(jié)果見下表

制劑中氟苯尼考90天時的含量減少0.7％。加速試驗結(jié)果表明，本藥物制劑穩(wěn)定性較好，有效期暫訂為兩年。
三、基本結(jié)論三批次的氟苯尼考的回收率為100.44％，結(jié)果表明，本產(chǎn)品的有效成分較為穩(wěn)定；氟苯尼考在40±2℃，相對濕度為75±5％條件下保存三個月后的平均含量變化率為99.93％。因此較為穩(wěn)定。
具體實施例方式
一種漁用抗菌藥，它含有氟苯尼考、維生素C、淀粉。
所述的氟苯尼考的重量配比為0.5％～1.5％，所述的維生素C的重量配比為2％～3％，所述的淀粉的重量配比為96％～97％。
該漁用抗菌藥的加工工藝包括下列步驟(1)、將淀粉于105℃～110℃的溫度條件下烘干2小時，冷卻后過40目篩；(2)、按重量比例稱取氟苯尼考和維生素C；(3)、取與氟苯尼考和維生素C重量相等的淀粉，使淀粉與氟苯尼考以及維生素C充分混合制成母粉；(4)、將母粉與剩余的淀粉進行充分混合。
步驟(2)中所取的氟苯尼考的純度含量大于98％。
本產(chǎn)品的主要優(yōu)點可通過試驗具體證明，其所含的氟苯尼考的最小抑菌濃度較小，使用安全，對由嗜水氣單胞菌引起的淡水魚類出血性敗血癥有較好的防治作用，特別在發(fā)病初期有良好的治療作用，并對此病有較好的預防作用，且本抗菌藥物制劑的有效成分的穩(wěn)定性較好。
針對藥物在魚肉上不易粘附的情況，將本產(chǎn)品的淀粉用α淀粉，可解決藥物的粘附性。另外根據(jù)生產(chǎn)需求，加工蝦、蟹專用顆粒餌料供養(yǎng)殖戶使用，其對顫抖病、黑鰓病、腐殼病、腸炎等蝦蟹細菌性病害的防治均收到了良好的效果。
權(quán)利要求
1.一種漁用抗菌藥，其特征在于它含有氟苯尼考、維生素C、淀粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的漁用抗菌藥，其特征在于所述的氟苯尼考的重量配比為0.5％～1.5％，所述的維生素C的重量配比為2％～3％，所述的淀粉的重量配比為96％～97％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的漁用抗菌藥，其特征在于所述的淀粉為α淀粉。
4.一種漁用抗菌藥的加工工藝，其特征在于它包括下列步驟，(1)、將淀粉于105℃～110℃的溫度條件下烘干2小時，冷卻后過40目篩；(2)、按重量比例稱取氟苯尼考和維生素C；(3)、取與氟苯尼考和維生素C的總重量相等的淀粉，使淀粉與氟苯尼考以及維生素C充分混合制成母粉；(4)、將母粉與剩余的淀粉進行充分混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的漁用抗菌藥的加工工藝，其特征在于步驟(2)中所取的氟苯尼考的純度含量大于或等于98％。
全文摘要
一種漁用抗菌藥，它含有氟苯尼考、維生素C、淀粉，該抗菌藥在特殊的工藝中制得。通過臨床試驗證明，其有效成分氟苯尼考的最小抑菌濃度較低，本抗菌藥對由嗜水氣單胞菌引起的淡水魚類出血性敗血癥有較好的防治作用，特別是在發(fā)病初期有良好的治療作用，并對此病有較好的預防作用，且其使用安全，穩(wěn)定性較好。
文檔編號A61P31/04GK1660079SQ20041010322
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月30日
發(fā)明者徐建春, 惠永樂, 孫濤, 譚云娥, 鮑俊杰 申請人:吳江市魚病防治中心