專利名稱：預(yù)防并減輕應(yīng)激相關(guān)病癥嚴(yán)重程度的方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體上涉及交感神經(jīng)系統(tǒng)和多種應(yīng)激相關(guān)的病癥(stress-related condition)，具體而言，涉及α-2腎上腺素能激動(dòng)劑溴莫尼定。
背景技術(shù)：
應(yīng)激相關(guān)的或?qū)е缕鋹夯牟“Y至少部分地通過交感神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)。該應(yīng)激相關(guān)病癥包括，但不限于胃腸??；過敏性腸綜合征；消化不良；心動(dòng)過速；驚恐發(fā)作；抗胰島素作用；II型糖尿??；皮膚??；肌肉收縮障礙，如緊張型頭痛；伴有偏頭痛的感覺過敏，如惡心、畏光和高聲恐怖癥；以及應(yīng)激相關(guān)的行為異常，如暴食和藥物依賴。
不幸的是，由于例如有害副作用，如鎮(zhèn)靜作用，導(dǎo)致對(duì)上述應(yīng)激相關(guān)病癥的治療不起作用或并不令人滿意。因此，需要一種新的方法以預(yù)防或減輕應(yīng)激相關(guān)病癥的嚴(yán)重程度。本發(fā)明滿足上述需求并具有相關(guān)優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種預(yù)防或減輕個(gè)體內(nèi)應(yīng)激相關(guān)病癥嚴(yán)重程度的方法，該方法是通過向所述個(gè)體全身給藥有效量的溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物，其中所述應(yīng)激相關(guān)病癥為下述病癥之一胃腸病；過敏性腸綜合征；消化不良；心動(dòng)過速；驚恐發(fā)作；抗胰島素作用；II型糖尿??；非炎性皮膚?。患∪馐湛s障礙；伴有偏頭痛的感覺過敏；或應(yīng)激相關(guān)的行為異常。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了胃腸病的嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了過敏性腸綜合征或消化不良的嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了除伴有心肌缺血的心動(dòng)過速以外的心動(dòng)過速，例如伴有肺病的心動(dòng)過速。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了驚恐發(fā)作的嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了抗胰島素作用的嚴(yán)重程度，或者預(yù)防或減輕了II型糖尿病的嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了非炎性皮膚病的嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了肌肉收縮障礙的嚴(yán)重程度，所述肌肉收縮障礙有例如，骨骼肌收縮障礙或平滑肌收縮障礙，如伴有膀胱炎或非細(xì)菌性前列腺炎的平滑肌收縮障礙，或者伴有緊張型頭痛的肌肉收縮障礙。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了伴有偏頭痛的感覺過敏的嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了伴有應(yīng)激相關(guān)行為異常的感覺過敏的嚴(yán)重程度。在本發(fā)明方法中，有效量的溴莫尼定可通過任何多種方法給藥，所述方法包括但不限于，口服給藥、局部給藥、靜脈內(nèi)給藥或通過貼片(patch)給藥。


圖1示出了用幾種不同的化學(xué)模型觀察到的觸覺過敏。各實(shí)驗(yàn)組包括5～6只野生型小鼠。觸覺過敏的評(píng)估如下所述；對(duì)在35分鐘的測(cè)量期內(nèi)每5分鐘測(cè)得的致敏得分進(jìn)行求和并計(jì)算出平均值+/-SEM。各組采用非配對(duì)雙尾t-檢驗(yàn)(unpaired two-tailed t-test)(*p＜0.1，**p＜0.01)與賦形劑對(duì)照相比較。(a)脊柱注射α-1激動(dòng)劑苯腎上腺素誘發(fā)劑量依賴式的觸覺過敏。注射不同劑量的苯腎上腺素(實(shí)心圓形)。在鞘內(nèi)給藥30ng苯腎上腺素前15分鐘先給藥α-1拮抗劑5-MU(30ug/kg i.p.；實(shí)心方形)。(b)全身給藥苯腎上腺素誘發(fā)劑量依賴式的觸覺過敏。腹膜內(nèi)注射不同劑量的苯腎上腺素(實(shí)心圓形)。在給藥30ng/kg的苯腎上腺素前15分鐘先給藥α-1拮抗劑5-MU(30ug/kg i.p.；實(shí)心方形)。(c)脊柱給藥一種選擇性EP1/EP3激動(dòng)劑硫前列酮誘發(fā)劑量依賴式的化學(xué)觸覺過敏。增大硫前列酮(實(shí)心圓形)鞘內(nèi)注射的劑量。在給藥200ng硫前列酮前15分鐘先注射一種EP1拮抗劑(100ng/kg i.t.；實(shí)心方形)。(d)脊柱給藥NMDA誘發(fā)劑量應(yīng)答式觸覺過敏。鞘內(nèi)注射不同劑量的NMDA(實(shí)心圓形)。在給藥100ng NMDA前15分鐘先給藥NMDA拮抗劑二甲金剛胺(1ug i.t.；實(shí)心方形)。
圖2示出α-2A和α-2C基因敲除小鼠交感緊張的提高通過激活α-1受體增強(qiáng)了觸覺過敏誘發(fā)作用。野生型(實(shí)心圓形)、α-2A基因敲除(實(shí)心方形)和α-2C基因敲除(實(shí)心三角形)小鼠腹膜內(nèi)注射增大劑量的苯腎上腺素，并檢測(cè)其觸覺過敏。在i.p.注射苯腎上腺素(空心方形)24～30小時(shí)前，α-2A基因敲除小鼠先用50mg/kg i.p.胍乙啶進(jìn)行預(yù)處理以產(chǎn)生暫時(shí)的化學(xué)性交感神經(jīng)阻斷。各組小鼠由5～6只動(dòng)物組成。計(jì)算出平均致敏得分和SEM并采用非配對(duì)雙尾t-檢驗(yàn)(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對(duì)照組相比較。
圖3示出交感神經(jīng)系統(tǒng)增大了硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏。野生型(實(shí)心圓形)、α-2A基因敲除(實(shí)心方形)和α-2C基因敲除(實(shí)心三角形)小鼠鞘內(nèi)注射增大劑量的硫前列酮，并檢測(cè)其觸覺過敏。在鞘內(nèi)注射硫前列酮(空心方形)24小時(shí)前，α-2A基因敲除小鼠先用胍乙啶(50mg/kg i.p.)進(jìn)行預(yù)處理以產(chǎn)生暫時(shí)的化學(xué)性交感神經(jīng)阻斷。各組小鼠由5～6只動(dòng)物組成。計(jì)算出平均致敏得分和SEM并采用非配對(duì)雙尾t-檢驗(yàn)(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對(duì)照組相比較。
圖4示出了α-2基因敲除小鼠未表現(xiàn)出NMDA改變誘發(fā)的觸覺過敏。野生型(實(shí)心圓形)、α-2A基因敲除(實(shí)心方形)和α-2C基因敲除(實(shí)心三角形)小鼠鞘內(nèi)注射增大劑量的NMDA。對(duì)各組5～6只小鼠的觸覺過敏進(jìn)行評(píng)分。計(jì)算出平均反應(yīng)和SEM，并采用非配對(duì)雙尾t-檢驗(yàn)(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對(duì)照組相比較。
圖5示出了α腎上腺素能激動(dòng)劑在緩解交感增強(qiáng)的感覺過敏上存在差別。對(duì)各組的5～6只小鼠的反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分；并計(jì)算出平均反應(yīng)和SEM，如上所述。各藥物治療的組采用非配對(duì)雙尾t-檢驗(yàn)(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對(duì)照組相比較。(a)脊柱給藥溴莫尼定和可樂定緩解了野生型小鼠中由NMDA誘發(fā)的觸覺過敏。小鼠鞘內(nèi)注射DMSO賦形劑或鞘內(nèi)共注射100ng NMDA與鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或1μg可樂定(“Clon”)。(b)脊柱給藥溴莫尼定和可樂定緩解了野生型小鼠中由硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏。小鼠鞘內(nèi)注射DMSO賦形劑或鞘內(nèi)共注射200ng的硫前列酮與鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或0.4μg可樂定。(c)脊柱給藥溴莫尼定和可樂定緩解了α-2C基因敲除小鼠中由NMDA誘發(fā)的觸覺過敏，但未在α-2A基因敲除小鼠中起到緩解作用。小鼠鞘內(nèi)注射DMSO賦形劑或鞘內(nèi)共注射100ng NMDA和鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或1μg可樂定。(d)在α-2C基因敲除小鼠中，脊柱注射溴莫尼定和可樂定，其緩解硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏的能力不同。小鼠鞘內(nèi)注射DMSO賦形劑或鞘內(nèi)共注射200ng(α-2C基因敲除)或30ng(α-2A基因敲除)硫前列酮和鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或0.4μg可樂定。在α-2A基因敲除小鼠中，無α-2激動(dòng)劑止痛作用；在α-2C基因敲除小鼠中也喪失了可樂定止痛作用。
圖6示出溴莫尼定可緩解硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏而不產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用，但可樂定或替扎尼定則不行。分別在硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏模型和運(yùn)動(dòng)活性模型中比較三種α-2激動(dòng)劑(替扎尼定，三角形；可樂定，方形；溴莫尼定，圓形)的劑量應(yīng)答抗過敏作用和鎮(zhèn)靜作用。計(jì)算出敏感性的平均總分以及該平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，將其表示為實(shí)線(左軸)。相對(duì)于賦形劑所治療動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性表示為百分?jǐn)?shù)，用100％減去上述百分運(yùn)動(dòng)活性計(jì)算出百分鎮(zhèn)靜作用，并表示為虛線(右軸)。
圖7示出了α腎上腺素能激動(dòng)劑可樂定和溴莫尼定的α-2/α-1激動(dòng)劑選擇性的變化。采用基于體外細(xì)胞的功能分析檢測(cè)濃度逐漸增大的苯腎上腺素(實(shí)心方形)、可樂定(實(shí)心菱形)、替扎尼定(實(shí)心圓形)、右美托咪定(實(shí)心三角形)和溴莫尼定(實(shí)心倒三角形)的α-1和α-2激動(dòng)劑活性。(a，b)α腎上腺素能激動(dòng)劑的α-1A激動(dòng)劑活性和α-1B激動(dòng)劑活性。加入不同濃度的α腎上腺素能激動(dòng)劑后，在穩(wěn)定表達(dá)牛α-1A受體(a)或倉鼠α-1B受體(b)的HEK細(xì)胞中，通過測(cè)量鈣敏感染料熒光的變化測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣的增加。對(duì)各激動(dòng)劑測(cè)試6～15次，每次重復(fù)3遍，計(jì)算各濃度下的平均熒光及SEM。一次典型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示于圖中。(c，d)α腎上腺素能激動(dòng)劑的α-2A和α-2C激動(dòng)劑活性。加入不同濃度的α腎上腺素能激動(dòng)劑后，在穩(wěn)定表達(dá)人類α-2A受體(c)或人類α-2C受體(d)的PC12細(xì)胞中，測(cè)定對(duì)由弗司扣林(forskolin)誘發(fā)的cAMP累積的抑制。對(duì)各激動(dòng)劑測(cè)試3～5次，每次重復(fù)3遍，計(jì)算各濃度下的平均％抑制及SEM。一次典型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示于圖中。(e)在α-2C基因敲除小鼠中，共同給藥哌唑嗪和可樂定恢復(fù)了可樂定介導(dǎo)的止痛作用。野生型小鼠(“WT”，空心條)和α-2C基因敲除小鼠(“2C KO”，陰影條)注射有賦形劑、哌唑嗪(“Praz”，100ng/kg i.p.)、硫前列酮(“Sulp”，200ng i.t.)、可樂定(“Clon”，400ng i.t.)或各種組合，如圖所示。對(duì)各組的5～6只小鼠的觸覺過敏進(jìn)行評(píng)分，計(jì)算出平均反應(yīng)和SEM。各藥物治療組采用非配對(duì)雙尾t-檢驗(yàn)(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對(duì)照組相比較。
具體實(shí)施例方式
腎上腺素能受體介導(dǎo)對(duì)兒茶酚胺、去甲腎上腺素和腎上腺素的生理應(yīng)答，并且是具有七個(gè)跨膜區(qū)(transmembrane domain)的G蛋白偶聯(lián)受體超家族的成員。這些在藥理學(xué)上被分為α-1、α-2和β腎上腺素能受體類型的受體涉及多種生理功能，包括心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能。α腎上腺素能受體介導(dǎo)大多數(shù)激動(dòng)性功能α-1腎上腺素能受體通常在效應(yīng)器官中介導(dǎo)應(yīng)答，而α-2腎上腺素能受體同時(shí)存在于突觸后和突觸前，并在其中調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。目前α-2腎上腺素能受體的激動(dòng)劑已臨床應(yīng)用于治療高血壓、青光眼、痙攣和注意力短缺癥及抑制戒毒反應(yīng)(opiate withdrawal)，并作為普通麻醉的輔助藥物。
目前，α-2腎上腺素能受體依照其藥理學(xué)和分子表征分為三個(gè)亞型α-2A/D(人類中為α-2A，大鼠中為α-2D)；α-2B；以及α-2C(Bylund等，Pharmacol.Rev.46121～136(1994)；及Hein和Kobilka，Neuropharmacol.34357～366(1995))。α-2A和α-2B亞型可調(diào)節(jié)一些血管床中的動(dòng)脈收縮，而α-2A和α-2C亞型介導(dǎo)交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素的反饋抑制。α-2A亞型還介導(dǎo)α-2腎上腺素能激動(dòng)劑的多種中樞效應(yīng)(Calzada和Artinano，Pharmacol.Res.44195～208(2001)；Hein等，Ann.NY Acad.Science881265～271(1999)；以及Ruffolo(編輯)，α-AdrenoreceptorsMolecular Biology，Biochemistry and PharmacologyS.KargerPublisher’s Inc.Farmington，CT(1991))。
以前的研究表明去甲腎上腺素對(duì)α-2C受體的親和力(Ki＝650nM)高于對(duì)α-2A受體的親和力(Ki＝5800nM；Link等，Mol.Pharm.4216～27(1992))。因此，在低濃度的去甲腎上腺素情況下，對(duì)去甲腎上腺素釋放的自動(dòng)抑制作用是通過α-2C受體介導(dǎo)的，而在高濃度的去甲腎上腺素情況下，則是通過α-2A受體介導(dǎo)(Altman等，MOL.Pharm.56154～161(1999))。結(jié)果，去甲腎上腺素基礎(chǔ)釋放的反饋抑制由α-2C受體介導(dǎo)，而α-2A受體在高頻率刺激的情況下介導(dǎo)釋放的反饋抑制(Hein等，Ann.N.Y.Acad.Sci.881256～271(1999))。如本發(fā)明實(shí)施例II所公開的，對(duì)于α-2C基因敲除小鼠，其在基礎(chǔ)(或低頻率刺激)情況下交感傳出的突觸前抑制較低，因此經(jīng)苯腎上腺素治療后對(duì)α-1受體活性的增大更敏感(參考圖2)。此外，如圖3所示，α-2A基因敲除小鼠對(duì)硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏更敏感，而在α-2C基因敲除小鼠中，硫前列酮的敏感性與野生型小鼠的敏感性相同。這些結(jié)果表明硫前列酮治療產(chǎn)生高頻率的交感神經(jīng)刺激，這可由如下事實(shí)證明，即僅有缺乏突觸前抑制高頻率交感傳出的α-2A基因敲除小鼠表現(xiàn)出對(duì)硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏閥值的下降。
如本發(fā)明實(shí)施例III中進(jìn)一步公開的，在硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏的野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠中，溴莫尼定具有止痛作用。相反地，可樂定在野生型小鼠中有止痛作用，但在α-2C基因敲除小鼠中則沒有(對(duì)比圖5b和圖5d)。如所預(yù)料的，可樂定和溴莫尼定在α-2A基因敲除小鼠中均無止痛作用，所述α-2A基因敲除小鼠缺乏介導(dǎo)止痛活性的脊柱α-2A腎上腺素能受體。因此，用硫前列酮治療的α-2C基因敲除小鼠，作為交感增強(qiáng)情況下的模型，其中pan激動(dòng)劑溴莫尼定和可樂定的活性顯著不同。本發(fā)明公開的其它結(jié)果表明，在野生型小鼠中，具有止痛活性且無伴隨鎮(zhèn)靜作用的是溴莫尼定，而不是諸如替扎尼定或可樂定的其它pan激動(dòng)劑(參考圖6)。此外，在功能試驗(yàn)中，與表現(xiàn)出的選擇性低于10倍的其它pan激動(dòng)劑，如可樂定和替扎尼定相比，溴莫尼定對(duì)α-2腎上腺素能受體的選擇性高于對(duì)α-1受體的選擇性(大于1000倍)(參考圖7和表2)。這些結(jié)果表明pan激動(dòng)劑溴莫尼定和可樂定的功能活性不同，并且α-2/α-1功能選擇性可有利地在無伴隨鎮(zhèn)靜作用的情況下治療交感增強(qiáng)的病癥，如應(yīng)激相關(guān)病癥。
消化不良已被稱作生物心理障礙，并且通常部分具有在用餐后上腹部不適的特征。除了用餐后上腹部不適或疼痛外，消化不良還可具有如下特征即在器官無疾病的情況下早飽、惡心、嘔吐、腹脹、胃氣脹或厭食(Thumshirn，Gut51增補(bǔ)本1i63～66(2002；Anderson，Dorland’s Illustrated Medical Dictionary，第28版，W.B.Saunder’sCompany，費(fèi)城(1994)))。
本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕消化不良的嚴(yán)重程度，本發(fā)明所述的消化不良是一個(gè)表示消化損傷的術(shù)語。任何多種消化不良均可用本發(fā)明方法治療。術(shù)語消化不良包括但不限于，酸性消化不良，這種消化不良與胃酸過多相關(guān)；闌尾炎性消化不良，又稱為闌尾炎消化不良，其中消化不良的癥狀伴有慢性闌尾炎；卡他性消化不良，這種消化不良伴有胃炎；米粉性消化不良，這是一種見于營養(yǎng)不良的嬰兒中的淀粉營養(yǎng)不良的病癥；膽石性消化不良，這種消化不良涉及與膽囊失調(diào)相關(guān)的突然消化不良的發(fā)作；結(jié)腸性消化不良，這種消化不良涉及大腸功能紊亂；發(fā)酵性消化不良，這種消化不良的特征在于所攝取食物的發(fā)酵；胃積氣性消化不良，這種消化不良與胃中產(chǎn)生的氣體有關(guān)，并且通常牽涉上腹部不適并伴有頻繁打嗝；胃消化不良，這種消化不良是由胃引起的；腸消化不良，這種消化不良是由腸引起的。應(yīng)理解的是所述病癥的上述及其它輕微或急性癥狀形式包括在本發(fā)明所述的“消化不良”的定義中。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法用于預(yù)防或減輕除了伴有胃炎的消化不良以外的消化不良的嚴(yán)重程度。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療胃腸病。炎性腸病(IBD)或過敏性腸綜合征(IBS)是在一半美國人一生中對(duì)其有影響的胃腸病，IBD造成的損失大于26億美元，而IBS造成的損失大于80億美元。對(duì)于與IBD、IBS和包括炎性胃腸病在內(nèi)的其它胃腸病相關(guān)的內(nèi)臟過敏，其頻率或嚴(yán)重程度由于應(yīng)激而加劇。如本發(fā)明所公開的，本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕涉及應(yīng)激相關(guān)的胃腸病的內(nèi)臟過敏的嚴(yán)重程度，所述胃腸病有例如，但不限于，潰瘍性結(jié)腸炎(UC)，克羅恩氏病(CD)或過敏性腸綜合征(IBS)。因此，本發(fā)明提供一種方法，以用于預(yù)防或減輕個(gè)體內(nèi)涉及應(yīng)激相關(guān)的胃腸病的內(nèi)臟過敏的嚴(yán)重程度，該方法是通過向所述個(gè)體全身給藥有效量的溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物。
本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕未伴隨有心肌缺血的心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度。本發(fā)明所用的術(shù)語“心動(dòng)過速”表示心率過快，并且包括快速性心率失常。在成年人中，術(shù)語心動(dòng)過速通常指心率大于100次/分鐘。術(shù)語心動(dòng)過速涵蓋伴隨多種疾病(除了心肌缺血以外)的心動(dòng)過速，包括但不限于陣發(fā)性心動(dòng)過速，其中心動(dòng)過速突然發(fā)作和停止，并且為室性或室上性的；以及非陣發(fā)性心動(dòng)過速，這是一種慢發(fā)作的心動(dòng)過速，心率通常為70～130次/分鐘。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了未伴隨有心肌缺血的自主性心動(dòng)過速的嚴(yán)重性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了成年個(gè)體中心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了兒童個(gè)體中心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度。
待根據(jù)本發(fā)明方法治療的心動(dòng)過速包括由心臟任何部分產(chǎn)生的心動(dòng)過速，例如室性心動(dòng)過速和室上性心動(dòng)過速，可分為例如，房性心動(dòng)過速和交接區(qū)性(結(jié)性)心動(dòng)過速。因此，本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕，例如室性心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度，所述室性心動(dòng)過速為發(fā)生在心室中的具有異常室性刺激的異常快速室性節(jié)律，通常超過150次/分鐘，有時(shí)伴有房室分離。本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕室上性心動(dòng)過速(SVT)的嚴(yán)重程度，所述SVT為規(guī)則的心動(dòng)過速，其中刺激點(diǎn)位于束支上方，如竇房結(jié)、心房交接處或房室交接處，或者所述SVT產(chǎn)生于大折返環(huán)路(reentrant circuit)，包括心房部位和心室部位。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法用于預(yù)防或減輕房性心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度，所述房性心動(dòng)過速的特征在于心率較快，通常介于160次/分鐘至190次/分鐘之間，并且產(chǎn)生于心房部位；這種心動(dòng)過速包括但不限于，陣發(fā)性房性心動(dòng)過速。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法用于預(yù)防或減輕交接區(qū)性心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度，這種心動(dòng)過速是應(yīng)房室交接處所產(chǎn)生的脈沖而發(fā)生的，具有心率大于75次/分鐘的特征。交接區(qū)性心動(dòng)過速包括非陣發(fā)性交接區(qū)性心動(dòng)過速和陣發(fā)性交接區(qū)性心動(dòng)過速，例如由于折返或自律性提高所引起的交接區(qū)性心動(dòng)過速。應(yīng)理解本方法還可用于預(yù)防或減輕下列心動(dòng)過速的嚴(yán)重程度，所述心動(dòng)過速不限于雙重性心動(dòng)過速，這種心動(dòng)過速中包括兩種類型的異位性心動(dòng)過速；竇性心動(dòng)過速，這種心動(dòng)過速產(chǎn)生于竇房結(jié)，并可伴有休克、低血壓、充血性心力衰竭或發(fā)燒；直立性心動(dòng)過速，這種心動(dòng)過速的特征在于當(dāng)從斜躺位置起身至直立位置時(shí)，心率不相稱地加速；以及紊亂性房性心動(dòng)過速，這種心動(dòng)過速的特征在于心房率為100～130次/分鐘，P波形顯著易變，并且P-P間期不規(guī)則。
待根據(jù)本發(fā)明方法治療的心動(dòng)加速可伴有一種或多種疾病，例如肺病、糖尿病或外傷，并且所述心動(dòng)加速可發(fā)生在，例如，老年人中。舉例來說，紊亂性房性心動(dòng)過速(多源性房性心動(dòng)過速)可存在于，例如患有慢性阻塞性肺病的患者中、患有糖尿病的患者中以及老年人中。進(jìn)一步舉例來說，非陣發(fā)性交接處心動(dòng)過速可伴有，例如外傷。應(yīng)理解上述及很多已熟知的未伴隨有心肌缺血的自主性心動(dòng)過速和其它心動(dòng)過速可根據(jù)本發(fā)明方法預(yù)防或減輕其嚴(yán)重程度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種預(yù)防或減輕所有類型的心動(dòng)過速嚴(yán)重程度的方法，所述心動(dòng)過速包括伴有心肌缺血的心動(dòng)過速。
本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕驚恐發(fā)作的嚴(yán)重程度，驚恐發(fā)作是一種常見的疾病，在普通人群中的發(fā)病率為約3％(Potokar和Nutt，Int.J.Clin.Pract.54110～114(2000))。涉及驚恐反復(fù)發(fā)作的驚恐發(fā)作常見于年輕的成年人中，平均發(fā)作年齡為24歲，并且女性比男性更常見。本發(fā)明所用的術(shù)語“驚恐發(fā)作”表示伴有一種或多種如下癥狀的不連續(xù)的強(qiáng)烈恐懼期或不適期，所述癥狀有心率或心悸加速；胸痛；寒戰(zhàn)或熱潮紅；現(xiàn)實(shí)解體或人格解體；畏懼死亡；害怕失去控制或發(fā)瘋；頭暈或衰弱；感覺氣哽；惡心或腹部窘迫感；感覺異常；感覺呼吸短促或窒息；發(fā)汗；或者震顫或振動(dòng)。驚恐發(fā)作通常始于強(qiáng)烈憂懼或恐懼的突然發(fā)作，并且通常持續(xù)約5～20分鐘。術(shù)語驚恐發(fā)作涵蓋全面發(fā)作和癥狀有限的發(fā)作。全面發(fā)作涉及四種或更多的以上癥狀，而癥狀有限的發(fā)作涉及的癥狀低于四種。本發(fā)明方法可完全預(yù)防驚恐發(fā)作，或者預(yù)防或減輕上述伴隨癥狀中的一種或任意組合的嚴(yán)重程度。
一些患有驚恐發(fā)作的患者發(fā)展成為“驚恐性障礙”，其嚴(yán)重程度也可根據(jù)本發(fā)明方法使用溴莫尼定預(yù)防或減輕。本發(fā)明所用的術(shù)語驚恐發(fā)作涵蓋驚恐性障礙，所述驚恐性障礙定義為驚恐反復(fù)發(fā)作，并且在一次或多次驚恐發(fā)作后伴有歷時(shí)至少一個(gè)月的對(duì)額外發(fā)作或發(fā)作后果或行為改變的持續(xù)焦慮。
中樞交感神經(jīng)系統(tǒng)可在II型糖尿病的特征，即抗胰島素作用和高血壓的發(fā)展中起關(guān)鍵所用(Rocchini等，Hypertension33[第II部分]548～553(1999))。本發(fā)明還提供一種預(yù)防或減輕II型糖尿病嚴(yán)重程度的方法，所述II型糖尿病的特征在于高血壓、高脂血和抗胰島素作用并且應(yīng)激作用將使其惡化。如本發(fā)明所公開的，溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物可全身給藥至個(gè)體中以預(yù)防或減輕個(gè)體中II型糖尿病的嚴(yán)重程度。
本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕非炎性皮膚病的嚴(yán)重程度。該方法可用于，例如，預(yù)防或減輕與非炎性皮膚病相伴隨的諸如搔癢或其它不適的一種或多種癥狀的嚴(yán)重程度。本發(fā)明所用的術(shù)語“非炎性皮膚病”表示任何不是由炎癥引起的或未伴隨有炎癥的皮膚病或其它皮膚疾病或皮膚病癥。待根據(jù)本發(fā)明方法治療的非炎性皮膚病可在應(yīng)激情況下產(chǎn)生或惡化。非炎性皮膚病涵蓋，但不限于包括諸如大皰性表皮松解癥和卟啉癥等非炎性發(fā)皰病的非炎性皮膚??；魚鱗病；毛發(fā)角化??；青少年跖皮膚病(JPD)；扁平苔蘚皮膚?。灰约捌つw干燥病。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解上述及其它本領(lǐng)域已知的非炎性皮膚病可通過本發(fā)明所公開的方法治療。
在一個(gè)單獨(dú)的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種預(yù)防或減輕個(gè)體內(nèi)應(yīng)激相關(guān)的炎性皮膚病的方法，包括向所述個(gè)體全身給藥有效量的溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物。該方法可用于，例如，預(yù)防或減輕與炎性皮膚病相伴隨的諸如搔癢或其它不適的一種或多種癥狀的嚴(yán)重程度。由本發(fā)明方法涵蓋的任何多種炎性皮膚病包括但不限于，任何多種形式的急性或慢性皮炎，例如牛皮癬、諸如過敏性接觸性皮炎的過敏性皮炎、特應(yīng)性皮炎、熱激性皮炎、接觸性皮炎、化妝品皮炎、濕疹、剝脫性皮炎、人為性皮炎、刺激性皮炎、單純慢性苔蘚、海水皮炎、神經(jīng)性皮炎、口周皮炎、光毒性皮炎、脂溢性皮炎、停滯性皮炎和增殖性皮炎。
本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕多種肌肉收縮障礙的嚴(yán)重程度，該病癥至少部分地是由于不適當(dāng)?shù)募∪馐湛s產(chǎn)生的。待根據(jù)本發(fā)明方法治療的肌肉收縮障礙包括但不限于，骨骼肌收縮障礙、平滑肌收縮障礙、腺相關(guān)的肌肉收縮障礙、諸如充血性心力衰竭的心肌收縮障礙；待根據(jù)本發(fā)明方法預(yù)防或減輕其嚴(yán)重程度的上述和其它障礙包括其中肌細(xì)胞受到神經(jīng)支配或不受到神經(jīng)支配的肌肉收縮障礙。非限制性地舉例來說，本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕如下肌肉收縮障礙的嚴(yán)重程度，例如背肌或其它肌肉痙攣；伴有膀胱炎的肌肉收縮障礙；伴有非細(xì)菌性膀胱炎的肌肉收縮障礙；伴有磨牙的肌肉收縮障礙；伴有緊張型頭痛的肌肉收縮障礙；以及伴有充血性心力衰竭的肌肉收縮障礙。
本發(fā)明方法可用于，例如，預(yù)防或減輕諸如背痙攣的肌肉痙攣的嚴(yán)重程度。肌肉痙攣已為本領(lǐng)域所熟知。本發(fā)明所用的術(shù)語“痙攣”表示一塊肌肉或一組肌肉突然的不自覺收縮，并伴有疼痛及功能障礙。痙攣可產(chǎn)生，例如不自覺運(yùn)動(dòng)或變形。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了背痙攣的嚴(yán)重程度。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法用于預(yù)防或減輕伴有膀胱炎的肌肉收縮的嚴(yán)重程度。本發(fā)明所用的術(shù)語“膀胱炎”表示膀胱的炎癥。術(shù)語膀胱炎涵蓋，但不限于，變應(yīng)性膀胱炎、細(xì)菌性膀胱炎、急性卡他性膀胱炎、膀胱囊腫、白喉性(格魯布性)膀胱炎、嗜酸細(xì)胞性膀胱炎、剝脫性膀胱炎、濾泡性膀胱炎、腺性膀胱炎、結(jié)痂性膀胱炎、慢性間質(zhì)性(粘膜下)膀胱炎、機(jī)械性刺激膀胱炎、乳頭狀瘤性膀胱炎以及老年性女性膀胱炎(cystitiss enilis feminarum)。參考，例如，Anderson，supra，1994。膀胱炎可伴有一種或多種以下臨床癥狀尿頻、尿灼、恥骨弓上不適、精神不振、混濁尿或血尿以及有些情況下的低燒(Bennett和Plum(編輯)，Cecil Textbook of medicine，第六版，W.B.Saunders Company，費(fèi)城，1996)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解伴有任何上述或其它形式的輕微、嚴(yán)重、急性或慢性膀胱炎的肌肉收縮可根據(jù)本發(fā)明方法治療。
如本發(fā)明所公開的，本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕伴有非細(xì)菌性前列腺炎的肌肉收縮。約有50％的男性在成年期曾患有前列腺炎癥狀；其中，約有95％是由于除了細(xì)菌感染以外的因素引起的。本發(fā)明所用的術(shù)語“非細(xì)菌性前列腺炎”與“無菌性前列腺炎”的意義相同，表示不是由細(xì)菌感染引起的前列腺的炎癥。非細(xì)菌性前列腺炎涵蓋，但不限于，慢性非細(xì)菌性前列腺炎、變應(yīng)性前列腺炎或嗜酸性前列腺炎以及非特異性肉芽腫性前列腺炎。應(yīng)理解術(shù)語非細(xì)菌性前列腺炎包括但不限于病因未知的前列腺炎，該前列腺炎的特征在于異常表達(dá)的前列腺分泌(EPS)以及正常的細(xì)菌培養(yǎng)。在某些情況下，非細(xì)菌性前列腺炎可用抗生素或通過壓力管理(stress management)有效治療(Bennett和Plum，supra，1996)。應(yīng)理解伴有上述或其它形式的輕微、嚴(yán)重、急性或慢性非細(xì)菌性前列腺炎的肌肉收縮可根據(jù)本發(fā)明方法治療。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法用于預(yù)防或減輕伴有緊張型頭痛(TTH)的肌肉收縮，所述緊張型頭痛是一種影響高達(dá)90％的美國成年人的常見形式的頭痛。本發(fā)明所用的術(shù)語“緊張型頭痛”表示至少部分由肌肉收縮引起的頭痛，所述肌肉收縮可由，例如，壓力或勞累引發(fā)。術(shù)語“緊張型頭痛”涵蓋陣發(fā)式頭痛和慢性頭痛并且包括但不限于普通的緊張性頭痛。緊張型頭痛通常涉及頭頸的后部，雖然也可能發(fā)生在頭骨的頂部或前部，并且通常還具有對(duì)稱和嚴(yán)重程度非殘疾性(non-disabling)的特征。雖然不一定有全部的診斷特征，但緊張型頭痛的診斷特征包括雙側(cè)疼痛；嚴(yán)重程度輕微至中等；具有壓迫狀特征且狀態(tài)穩(wěn)定；隨著時(shí)間的推移逐漸加??；頻率可能較高，例如每天發(fā)作或連續(xù)發(fā)作；以及較少見的偏頭痛特征，如惡心、光敏感性、聲敏感性和諸如頭部動(dòng)作的物理活動(dòng)而導(dǎo)致其惡化。
緊張型頭痛由諸如壓力、過勞、眼睛疲勞或不良姿勢(shì)等導(dǎo)致的面部、頸部和頭皮的肌肉繃緊引起。所述頭痛可持續(xù)數(shù)天或數(shù)周并可引起不同強(qiáng)度的疼痛。發(fā)生在諸如數(shù)周或數(shù)月等較長時(shí)間內(nèi)的緊張型頭痛被稱為慢性緊張性頭疼，并且涵蓋在本發(fā)明所用的術(shù)語緊張型頭痛中。
緊張型頭痛與偏頭痛的區(qū)別在于，沒有血管性特征和癥狀，如惡心、嘔吐和對(duì)光的敏感并且沒有先兆(Spira，Austr.Family Phys.27597～599(1988))。術(shù)語緊張型頭痛指無顯著血管性組成的頭痛，該術(shù)語用于區(qū)分緊張性血管性頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛、和具有主要血管性組成的其它頭痛。然而，本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕伴有其它頭痛的感覺過敏的嚴(yán)重程度，所述其它頭痛包括但不限于，頸源性頭痛、損傷后頭痛、叢集性頭痛和顳下頜關(guān)節(jié)障礙(TMJ)。
本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕伴有偏頭痛的感覺過敏的嚴(yán)重程度，所述偏頭痛是一種困擾10％以上人群的頭痛，并可與血管性組成相關(guān)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法預(yù)防或減輕了伴有偏頭痛的眼過敏的嚴(yán)重程度，例如，畏光。本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕伴有任何多種形式的偏頭痛的感覺過敏的嚴(yán)重程度，所述偏頭痛包括但不限于，無先兆的偏頭痛(“MO”)、有先兆的偏頭痛(“MA”)以及偏頭痛障礙。待根據(jù)本發(fā)明方法預(yù)防或減輕其嚴(yán)重程度的感覺過敏還可伴有，例如，腹型偏頭痛、急性精神錯(cuò)亂性偏頭痛、基底性(基底動(dòng)脈性)偏頭痛、偏癱性或遺傳性偏癱性偏頭痛、閃電狀偏頭痛、眼性(眼相關(guān)的)偏頭痛、眼肌麻痹性偏頭痛或視網(wǎng)膜性偏頭痛。此外，本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕伴有偏頭痛等同病癥的感覺過敏的嚴(yán)重程度，其中偏頭痛有先兆但不包括頭痛。偏頭痛先兆有與其相伴隨的不正常的視覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)、精神、感覺或其它神經(jīng)異常。參考Elrington，J.Neurol.Neurosurq.Psychiatry72增補(bǔ)本IIii10～ii15(2002)；Anderson，supra，1994；Bennett和Plum，supra，1996。
本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕伴有偏頭痛的多種類型的感覺過敏中的一種或多種的嚴(yán)重程度。所述感覺過敏包括但不限于，惡心；嘔吐；腹瀉；畏光(不耐光癥)；以及高聲恐怖癥(恐響癥)。所述感覺過敏還包括視覺異常，例如強(qiáng)光(bright flashing light)視覺異常(閃光暗點(diǎn)或強(qiáng)化暗點(diǎn))或單眼(視網(wǎng)膜)視覺異?；蛘咭曈X偏盲損失；感覺異常(異常觸覺)，例如單側(cè)感覺異常；失語癥(語言或理解力的喪失)；輕偏癱(身體一側(cè)的肌肉虛弱或不完全癱瘓)；單側(cè)感覺缺陷；或者眩暈、共濟(jì)失調(diào)(肌肉協(xié)調(diào)的喪失)或復(fù)視。應(yīng)理解本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕一種上述或其它類型的感覺過敏的嚴(yán)重程度，所述感覺過敏發(fā)生在偏頭痛之前、同時(shí)或之后，或者在沒有頭痛的情況下作為偏頭痛等同病癥的一部分發(fā)生。
本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕伴有其它障礙的多種類型的感覺過敏中的一種或多種的嚴(yán)重程度。所述其它障礙有例如，纖維肌痛，又稱為纖維織炎。纖維肌痛是一種在沒有結(jié)締組織或其它肌肉骨骼疾病信號(hào)的情況下，涉及多個(gè)部位的普遍的慢性肌肉骨骼痛和觸痛的障礙。具體而言，根據(jù)美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)的定義，纖維肌痛定義為發(fā)生在18個(gè)部位中的11個(gè)或更多部位的疼痛或觸痛。纖維肌痛通常伴有睡眠紊亂、慢性疲勞、頭痛和過敏性腸綜合征。
多種類型的感覺過敏可伴有纖維肌痛，并且可根據(jù)本發(fā)明方法預(yù)防或減輕其嚴(yán)重程度，所述感覺過敏包括但不限于，光、噪聲、觸覺或嗅覺過敏，不耐冷熱癥，惡心或者在沒有真正的變態(tài)反應(yīng)的情況下出現(xiàn)變應(yīng)性樣癥狀，如鼻炎、搔癢或皮疹。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕伴有纖維肌痛的任何上述或其它類型的感覺過敏的嚴(yán)重程度。
本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕應(yīng)激相關(guān)的行為異常的嚴(yán)重程度，所述行為異常是由應(yīng)激誘發(fā)或加劇的任何行為異常。非限制性的舉例來說，應(yīng)激相關(guān)的行為異?？蔀閼?yīng)激誘發(fā)或加劇的強(qiáng)迫性行為或重復(fù)有害的行為，例如但不限于，暴食或肥胖癥、強(qiáng)迫性神經(jīng)失調(diào)(OCD)、抽搐、圖雷特綜合征(TS)、酒精濫用、藥物濫用、賭博、諸如抓傷或拉扯頭發(fā)等自殘性行為(self-inflicted injuriousbehavior)、或者性無能或性激發(fā)。在一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)激相關(guān)的行為異常為除了藥物濫用以外的異常。在另一個(gè)實(shí)施方案中，應(yīng)激相關(guān)的行為異常為除了藥物濫用或酒精濫用以外的異常。
本發(fā)明方法還可用于預(yù)防或減輕應(yīng)激相關(guān)的精神異常，所述精神異常為由應(yīng)激誘發(fā)或加劇的任何精神異常。非限制性地舉例來說，本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕諸如精神分裂癥的精神異常的嚴(yán)重程度。
本發(fā)明還提供一種預(yù)防或減輕個(gè)體內(nèi)眼病嚴(yán)重程度的方法，包括向所述個(gè)體全身給藥有效量的溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物。如本發(fā)明所公開的，溴莫尼定用作神經(jīng)保護(hù)劑，即在多種影響感覺神經(jīng)視網(wǎng)膜的眼病中用于，例如，預(yù)防視網(wǎng)膜損傷?？筛鶕?jù)本發(fā)明方法使用溴莫尼定預(yù)防或減輕其嚴(yán)重程度的眼病包括但不限于，糖尿病性視網(wǎng)膜病；黃斑水腫，如伴有糖尿病或其它病癥的黃斑水腫；視網(wǎng)膜變性，如年齡相關(guān)性黃斑變性或視網(wǎng)膜色素變性；視網(wǎng)膜炎癥；視網(wǎng)膜血管閉塞病癥，如視網(wǎng)膜靜脈閉塞或視網(wǎng)膜動(dòng)脈分支阻塞或視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞；早熟性視網(wǎng)膜?。话橛兄T如鐮狀細(xì)胞貧血等血質(zhì)不調(diào)的視網(wǎng)膜??；視網(wǎng)膜脫離后的損傷；由玻璃體切除手術(shù)或視網(wǎng)膜手術(shù)造成的損傷或損害；以及其它視網(wǎng)膜損傷，包括由諸如視網(wǎng)膜激光治療引起的治療性損傷，所述激光治療有例如，針對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病的pan-視網(wǎng)膜光凝固法或針對(duì)，例如，年齡相關(guān)性黃斑變性以及諸如眼癢病的其它眼病的視網(wǎng)膜光動(dòng)力療法。可根據(jù)本發(fā)明方法預(yù)防或減輕其嚴(yán)重程度的眼病還包括但不限于，遺傳性視神經(jīng)病變和后天性視神經(jīng)病變，如主要以喪失中央視覺為特征的視神經(jīng)病變，例如，利伯式遺傳性視神經(jīng)病變(LHON)、常染色體顯性視神經(jīng)萎縮(Kjer病)以及其它視神經(jīng)病變，如涉及線粒體缺陷、異常動(dòng)力相關(guān)蛋白或不適當(dāng)?shù)募?xì)胞凋亡的視神經(jīng)病變。參考，例如，Carelli等，Neurochem.Intl.40573～584(2002)；以及Olichon等，J.Biol.Chem.2787743～7746(2003)。
本發(fā)明方法可用于預(yù)防或減輕應(yīng)激相關(guān)病癥的嚴(yán)重程度而不產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用。本發(fā)明所述的鎮(zhèn)靜作用是一個(gè)表示運(yùn)動(dòng)活性下降的術(shù)語。本發(fā)明所用的短語“不產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用”表示在一種或多種藥物劑量下，在應(yīng)激相關(guān)病癥的一種或多種癥狀嚴(yán)重程度降低的同時(shí)，其所伴隨的運(yùn)動(dòng)活性的下降較少。一種藥物通常被稱為“無伴隨鎮(zhèn)靜作用”，如果其在外周給藥時(shí)，使運(yùn)動(dòng)活性下降20％所需的劑量比使應(yīng)激相關(guān)病癥的一種或多種癥狀產(chǎn)生顯著下降所需的劑量大至少3倍。如圖6所示，溴莫尼定給藥的劑量可使致敏得分(實(shí)線，左軸)下降，而鎮(zhèn)靜作用(虛線，右軸)的提高低于20％，但替扎尼定或可樂定則不行。非限制性的舉例來說，使運(yùn)動(dòng)活性下降20％所需的劑量可高于使應(yīng)激相關(guān)病癥的一種或多種癥狀顯著下降所需劑量的至少4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、25倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1000倍、2000倍或5000倍。測(cè)定應(yīng)激相關(guān)病癥癥狀嚴(yán)重程度的下降程度的方法以及鎮(zhèn)靜程度的方法已為本領(lǐng)域所熟知。
本發(fā)明所用的術(shù)語“溴莫尼定”表示具有如下分子式的化合物 或其可藥用的衍生物，例如鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體、外消旋混合物、多晶型物、水合物或溶劑合物。所述可藥用的衍生物在硫前列酮治療的小鼠中，就降低觸覺過敏而言，可基本具有D-5-溴-6-(2-咪唑啉-2-基氨基)喹喔啉酒石酸酯(1∶1)的活性，而不產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用。術(shù)語溴莫尼定涵蓋，但不限于AlphaganTM和UK14304。溴莫尼定及其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體和外消旋混合物有市售的，例如，AlphaganTM(Allergan)。此外，溴莫尼定及其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體和外消旋混合物可通過如下實(shí)施例I所述的常規(guī)方法制備。還可參考美國專利6,323,204。
因此，應(yīng)理解本發(fā)明方法涵蓋由上述分子式表示的溴莫尼定所衍生的可藥用的鹽、酯和酰胺的用途。溴莫尼定適宜的可藥用鹽包括但不限于酸加成鹽，可通過例如將溴莫尼定的溶液與適宜的酸溶液混合形成，所述酸有例如鹽酸、硫酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、醋酸、安息香酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸?？伤幱玫柠}進(jìn)一步包括，但不限于酸式磷酸鹽、醋酸鹽、苯磺酸鹽、安息香酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣、右旋樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、棒酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸化物、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯月桂硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、對(duì)α羥乙酰氨基苯砷酸鹽、己雷瑣辛鹽(hexylresorcinate)、海巴明鹽(hydrabamine)、溴酸化物、鹽酸化物、碘酸化物、羥萘酸鹽、碘化物、異硫氰酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲烷溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘液酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、糖二酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶堿鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物和戊酸鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法的實(shí)施采用溴莫尼定酒石酸鹽。
還應(yīng)理解的是溴莫尼定的官能團(tuán)可進(jìn)行改性，例如，以提高化合物的藥理效用。所述改性在熟練藥劑師的知識(shí)范圍內(nèi)并包括，但不限于溴莫尼定的酯、酰胺、醚、N-氧化物及藥物前體，它們涵蓋在本發(fā)明所用的術(shù)語“溴莫尼定”的范圍內(nèi)?？商岣呋钚缘母男詫?shí)例包括，例如酯化作用，如形成C1到C6烷基酯，優(yōu)選C1到C4烷基酯，其中烷基為直鏈或支鏈。其它可用的酯包括，例如，C5到C7環(huán)烷基酯以及諸如芐基酯的芳香烷基酯。所述酯可由本發(fā)明所述的化合物通過有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域已熟知的常規(guī)方法制備。
其它可藥用的改性包括酰胺的形成?？捎玫孽０犯男园ǎ?，由氨衍生的胺；C1到C6烷基的二烷基伯胺，其中烷基為直鏈或支鏈；以及具有多種取代基的芳胺。當(dāng)為仲胺時(shí)，胺也可為五元環(huán)或六元環(huán)的形式。制備上述和其它酰胺的方法已為本領(lǐng)域所熟知。
還應(yīng)理解的是溴莫尼定化學(xué)區(qū)分的對(duì)映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體也涵蓋在術(shù)語“溴莫尼定”的范圍內(nèi)并且可用于本發(fā)明方法中。此外，當(dāng)化合物為晶體形式時(shí)，可作為多晶型物存在；當(dāng)有溶劑存在時(shí)，化合物可以與，例如，水或普通有機(jī)溶劑形成溶劑合物。該多晶型物、水合物和其它溶劑合物也涵蓋在術(shù)語“溴莫尼定”的范圍內(nèi)，并且可用于本發(fā)明所公開的方法中。
還應(yīng)理解的是含有溴莫尼定的可藥用組合物可用于本發(fā)明方法中。所述可藥用組合物包括溴莫尼定，并且可任選地包括賦形劑，例如可藥用的載體或稀釋劑，即給藥到個(gè)體時(shí)基本無長期或永久有害作用的任何載體或稀釋劑。所述賦形劑通常與活性化合物相混合，或可用于稀釋或封裝活性化合物。載體可為用作活性化合物賦形劑或載體的固體、半固體或液體試劑。固體載體的實(shí)例包括但不限于，醫(yī)藥級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、聚(亞烷基)二醇、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖和碳酸鎂。栓制劑可包括，例如，丙二醇作為載體?？伤幱幂d體和稀釋劑的實(shí)例包括但不限于，水，例如蒸餾水或去離子水；鹽水；水性葡萄糖、丙三醇、乙醇等。應(yīng)理解的是活性組分在所需載體或稀釋劑中可為可溶性的或可作為懸浮物遞送。
藥用組合物還可任選地包括一種或多種試劑，例如但不限于乳化劑、潤濕劑、甜味劑或調(diào)味劑、張力調(diào)節(jié)劑(tonicity adjuster)、防腐劑、緩沖劑或抗氧化劑。可用于藥用組合物的張力調(diào)節(jié)劑包括但不限于諸如醋酸鈉、氯化鈉、氯化鉀等鹽、甘露醇或丙三醇以及其它可藥用的張力調(diào)節(jié)劑?？捎糜谒幱媒M合物的防腐劑包括但不限于，苯扎氯胺、氯丁醇、硫柳汞、苯汞基乙酸酯以及苯汞基硝酸酯。制備藥用組合物時(shí)可使用多種調(diào)節(jié)pH的緩沖劑和方法，包括但不限于，醋酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑以及硼酸鹽緩沖劑。類似地，可用于藥用組合物中的抗氧化劑已為本領(lǐng)域所熟知并且包括，例如，偏亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、乙酰半胱氨酸、丁基化羥基茴香醚和丁基化羥基甲苯。應(yīng)理解的是藥理學(xué)領(lǐng)域已知的上述和其它物質(zhì)可包括在用于本發(fā)明方法的藥用組合物中。參考，例如，Remington’sPharmaceutical SciencesMack Publishing Company，Easton，PA，第16版，1980。此外，含有溴莫尼定的組合物可通過相同或不同的給藥途徑，在相同或不同的藥用組合物中，與一種或多種其它治療物質(zhì)結(jié)合給藥。
溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物以有效量給藥。所述有效量通常為使應(yīng)激相關(guān)病癥的一種或多種癥狀的嚴(yán)重程度達(dá)到所需預(yù)防或減輕效果所需的最低劑量，例如，將應(yīng)激相關(guān)病癥引起的不適降低到可容忍水平大致所需的量。上述劑量通常在0.1～1000mg/天的范圍內(nèi)并且可在，例如，0.1～500mg/天、0.5～500mg/天、0.5～100mg/天、0.5～50mg/天、0.5～20mg/天、0.5～10mg/天或0.5～5mg/天的范圍內(nèi)，其實(shí)際給藥量由醫(yī)師考慮相關(guān)情況后確定，包括應(yīng)激相關(guān)病癥的嚴(yán)重程度、患者的年齡和體重、患者的一般身體狀況，以及藥物制劑和給藥途徑。栓劑和長效釋放劑也可用于本發(fā)明方法中，包括，例如皮膚貼片、涂抹于皮膚上面或下部的制劑以及用于肌肉注射的制劑。
用于本發(fā)明方法的藥用組合物可通過多種方式給藥至個(gè)體，其給藥方式取決于，例如，待治療病癥的類型、藥物制劑以及個(gè)體的病史、危險(xiǎn)因素和癥狀。適用于本發(fā)明方法的給藥途徑包括全身給藥和局部給藥。非限制性地舉例來說，用于預(yù)防或減輕應(yīng)激相關(guān)病癥嚴(yán)重程度的藥用組合物，其給藥可通過口服；腸胃外；皮下泵；皮膚貼片；靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、皮下或肌肉注射；局部滴劑、乳膏、凝膠或軟膏；作為植入用的或注射用的長效釋放劑；皮下微型泵或其它植入裝置；鞘內(nèi)泵或鞘內(nèi)注射；或者硬膜外注射。根據(jù)給藥方式，溴莫尼定可摻入任何可藥用劑型中，例如，但不限于片劑、丸劑、膠囊、栓劑、粉劑、液體、懸液、乳劑、氣溶膠等，并且可任選地封裝于適用于單劑給藥精確劑量的單位劑型中，或適用于連續(xù)控制給藥的緩釋劑型中。
本發(fā)明方法的實(shí)施可通過外周給藥溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物。本發(fā)明所用的術(shù)語“外周給藥”或“通過外周給藥”表示將溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物引入個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)以外。外周給藥涵蓋除了直接給藥至脊柱或腦以外的任何給藥途徑。
外周給藥可為局部或全身性的。局部給藥導(dǎo)致遞送至局部給藥部位或其周圍的藥用組合物顯著多于遠(yuǎn)離給藥部位的區(qū)域。全身給藥導(dǎo)致藥用組合物基本遞送至個(gè)體的至少整個(gè)外周系統(tǒng)。
可用于本發(fā)明方法的外周給藥途徑涵蓋但不限于，口服給藥、局部給藥、靜脈內(nèi)注射或其它注射、以及植入的微型泵或其它長效釋放裝置或長效釋放劑。用于本發(fā)明的藥用組合物可外周給藥，例如，以諸如片劑、口服液、膠囊、粉劑等任何可接受的形式口服；通過靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉、皮下或腸胃外注射；通過皮膚擴(kuò)散或電泳；以諸如滴劑、乳膏、凝膠或軟膏等任何可接受的形式局部給藥；以及通過微型泵或其它植入的長效釋放裝置或長效釋放劑。
以下實(shí)施例旨在說明本發(fā)明，而并不構(gòu)成對(duì)其的限制。
實(shí)施例I溴莫尼定的制備本實(shí)施例描述溴莫尼定(5-溴-6-(2-咪唑啉-2-基氨基)喹喔啉)的制備。
6-氨基-5-溴喹喔啉氫溴酸鹽的制備將6-氨基喹喔啉(2.08g，14.4mmol)溶于11.5ml冰醋酸中。將溶液冷卻在水中，并在15分鐘內(nèi)緩慢加入于1.5ml冰醋酸中的溴(0.74ml，2.3g，14.4mmol)溶液。繼續(xù)攪拌30分鐘后，將形成的桔紅色固體過濾，并用干燥的醚充分洗滌。固體在真空中干燥過夜，從而得到4.44g粗產(chǎn)物(產(chǎn)率為100％)。化合物6-氨基-5-溴喹喔啉氫溴酸鹽沒有確定的熔點(diǎn)。在約220℃觀察到從細(xì)粉變?yōu)榧t色晶體的相變化。在約245℃觀察到分解。該物質(zhì)直接用于制備6-氨基-5-溴喹喔啉，如下所述。
6-氨基-5-溴喹喔啉將上面制得的6-氨基-5-溴喹喔啉粗品溶于水中，并加入飽和的亞硫酸氫鈉溶液直至得到的溶液用淀粉-碘化物試紙測(cè)為陰性。然后將該溶液用2N的氫氧化鈉堿化并用乙酸乙酯充分萃取。有機(jī)萃取相用硫酸鎂干燥并減壓濃縮生成游離堿。粗產(chǎn)物用沸騰的苯重結(jié)晶得到熔點(diǎn)為155-6℃的黃色晶體。采用各種分析方法，確定該黃色晶體為6-氨基-5-溴喹喔啉。產(chǎn)率為82％。
6-溴-6-異硫氰酸根合喹喔啉將上述氫溴酸鹽粗產(chǎn)物(4.27g，14.0mmol)溶于60ml水中；在劇烈攪拌下，將二氯硫化碳(Aldrich，1.28ml，16.8mmol)分成小部分加入。2小時(shí)后，排出紅色溶液。將形成的固體過濾，并用水充分洗滌。在25℃下于真空中干燥，得到3.38g熔點(diǎn)為157-8℃的磚紅色晶體，表示其產(chǎn)率為90％。通過柱色譜將一部分該物質(zhì)進(jìn)一步純化得到熔點(diǎn)為157-8℃的白色晶體。采用各種分析方法確定該白色晶體為
5-溴-6-異硫氰酸根合喹喔啉。
5-溴-6(-N-(2-氨乙基)硫脲基)喹喔啉25℃下，在兩小時(shí)內(nèi)將異硫氰酸鹽(3.25g，12.2mmol)于145ml苯中的溶液加入至乙二胺(Aldrich，5.43g，90.0mmol)于18ml苯中的溶液中。繼續(xù)攪拌30分鐘后，倒掉上清液。剩余的油相通過用干燥的醚回蕩洗滌三次，并直接用于下一步驟。
將一部分上述產(chǎn)物通過柱色譜法(SiO2，CHCl3)進(jìn)一步純化以用于表征。回收白色固體，該固體在175℃下分解，同時(shí)有氣體逸出(噴霧)。確定該白色固體為5-溴-6(-N-(2-氨乙基)硫脲基)喹喔啉。
5-溴-6-(2-咪唑啉-2-基氨基)喹喔啉將上面制得的粗產(chǎn)物溶于100ml干燥的甲醇中并將褐色溶液回流19小時(shí)直至沒有硫化氫氣體逸出。將混合物冷卻至室溫，并濃縮至約50ml。將黃色的固體過濾并在真空中干燥；固體重2.52g(產(chǎn)率為70％)，并且熔點(diǎn)為242-4℃。
由于粗產(chǎn)物不溶于大多數(shù)普通的有機(jī)溶劑，因此初步純化是通過酸-堿萃取法實(shí)現(xiàn)的。將粗產(chǎn)物(23g)溶于100ml 0.5N鹽酸中。將混濁的黃色溶液過濾得到澄清的桔黃色溶液，用乙酸乙酯(每次萃取用10ml)萃取該澄清溶液兩次。水相冷卻至0℃并用6N的氫氧化鈉堿化，始終保持溶液的溫度低于15℃。將沉淀下來的黃色固體過濾并用水充分洗滌直至清洗液用pH試紙測(cè)為中性。固體真空干燥過夜得到1.97g黃色固體，熔點(diǎn)為249～250℃。回收率為約88％。
通過重結(jié)晶實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步純化。在劇烈攪拌下，于100℃將部分純化的上述產(chǎn)物溶于N，N-二甲基甲酰胺(約17ml/g)中。溶液趁熱過濾并置于一邊冷卻過夜。通過過濾收集亮黃色晶體，熔點(diǎn)為252～253℃?；厥章蕿?5～77％。采用多種分析方法確定該亮黃色固體為5-溴-6-(2-咪唑啉-2-基氨基)喹喔啉。
實(shí)施例II具有不同感覺致敏機(jī)理的小鼠模型本實(shí)施例表明提高α-2A和α-2C基因敲除小鼠的交感緊張將通過激活α-1受體促進(jìn)誘發(fā)觸覺過敏。
A.硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏通過交感神經(jīng)系統(tǒng)驅(qū)動(dòng)，而苯腎上腺素誘發(fā)的觸覺過敏不依賴于交感神經(jīng)系統(tǒng)傳入為詳細(xì)分析交感神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)感覺致敏的貢獻(xiàn)，建立了具有不同感覺致敏機(jī)理的小鼠模型。鞘內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射誘發(fā)劑后，用畫刷輕敲小鼠的肋腹，通過對(duì)其的反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，測(cè)量小鼠中的觸覺過敏。為模擬提高交感緊張，注射一種α-1腎上腺素能受體激動(dòng)劑苯腎上腺素。如圖1a和圖1b所示，鞘內(nèi)(i.t.)或腹膜內(nèi)(i.p.)給藥苯腎上腺素產(chǎn)生觸覺過敏，并且在3ng i.t.和3ng/kg i.p.的劑量下開始觀察到顯著反應(yīng)。觸覺過敏的誘發(fā)依賴于α-1受體，這可由如下事實(shí)證明，即α-1受體拮抗劑5-甲基烏拉地爾(5-MU)在腹膜內(nèi)注射時(shí)能阻斷過敏反應(yīng)。
另外還檢測(cè)了合成EP1/EP3受體選擇性前列腺素激動(dòng)劑硫前列酮的活性。如圖1c所示，不斷提高硫前列酮鞘內(nèi)注射的劑量發(fā)現(xiàn)觸覺過敏依賴于劑量；100ng和200ng的劑量產(chǎn)生顯著的過敏反應(yīng)。同時(shí)給藥特異性的EP1受體拮抗劑完全阻斷硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏，這表明硫前列酮通過激活EP1受體介導(dǎo)觸覺過敏。
在第三個(gè)小鼠模型中，通過鞘內(nèi)注射劑量不斷增大的NMDA誘發(fā)化學(xué)性致敏，NMDA可激活突觸后背角神經(jīng)元上的NMDA通道(Woolf等，Science2881765～1769(2000))。鞘內(nèi)給藥NMDA產(chǎn)生劑量依賴的觸覺過敏，其最大作用出現(xiàn)在100ng劑量處。過敏用NMDA拮抗劑二甲金剛胺阻斷，如圖1d所示。
為評(píng)估三種刺激是否是通過不同的機(jī)理使感覺通道致敏，檢測(cè)了一組藥劑預(yù)防或改善觸覺過敏的能力。如表1所示，各受體拮抗劑(5-MU、EP1受體拮抗劑或二甲金剛胺)僅阻斷由各相應(yīng)的受體激動(dòng)劑(分別為苯腎上腺素、硫前列酮或NMDA)引起的觸覺過敏。另外還檢測(cè)了加巴噴丁阻斷觸覺過敏的能力，所述加巴噴丁在臨床上通過減輕脊柱致敏緩解神經(jīng)性疼痛。加巴噴丁抑制由硫前列酮和NMDA引起的觸覺過敏，但不能抑制苯腎上腺素引起的觸覺過敏，這進(jìn)一步表明不同刺激所涉及的感覺通道之間存在差異。

α-2基因敲除小鼠由Brian Kobilka博士提供(斯坦佛大學(xué)；Link等，Mol.Pharmacol.4848～55(1995)；Altman等，Mol.Pharmacol.56154～161(1999))。α-2基因敲除小鼠具有C57BL/6背景，并由純合基因敲除小鼠繁殖對(duì)繁殖得到。使用年齡和性別相匹配的C57BL/6野生型小鼠作為對(duì)照。
將硫前列酮(Cayman Chemical；Ann Arbor，Michigan)和NMDA(Sigma；St Louis，MO)溶于二甲基亞砜(DMSO)中。將基本按照美國專利5,843,942合成的EP1受體拮抗劑

和加巴噴丁(Victor Medical；Irvine，CA)溶于50％DMSO，50％鹽水中?；景凑彰绹鴮＠?,061,703(還可參考Schneider等，Dtsch Med.Wochenschr.109987(1984))合成二甲金剛胺(1-氨基-3，5-二甲基金剛烷氫氯酸鹽)，一種熟知的抗病毒劑金剛胺(1-金剛烷胺氫氯酸鹽)的類似物。從Sigma購得5-甲基烏拉地爾、溴莫尼定、苯腎上腺素、可樂定和胍乙啶，并將其溶于鹽水中。將哌唑嗪(Sigma)和替扎尼定(Biomol；Plymouth Meeting，PA)溶于蒸餾水中。
如下所示進(jìn)行脊柱藥物注射。按照Hylden和Wilcox，Eur.J.Pharmacol.67313～316(1980)所述對(duì)小鼠(20～30g)進(jìn)行鞘內(nèi)注射。簡言之，將附著于微型注射器上的30規(guī)格1/2英寸的無菌針頭推入L5和L6椎骨之間。一只手緊握住小鼠的骨盆帶，而另一只手握住注射器，使其在脊柱上方約20°角的位置。將針頭推入L6棘突一側(cè)的組織中，即棘突和橫突之間的溝中。將針頭的角度降低至約10°，然后將針頭緩慢推入椎間隙中直至感覺到裂開聲，并且尾巴出現(xiàn)明顯的蜿蜒運(yùn)動(dòng)。將體積5μl的化合物緩慢注入蛛網(wǎng)膜下間隙。各種化合物以多種劑量進(jìn)行測(cè)試。在隨后的全部實(shí)驗(yàn)中使用最小有效劑量。
用小畫刷輕敲小鼠的肋腹(正常情況下是不疼的)，通過對(duì)其的反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，量化輕觸的敏感性。在注射后的15～50分鐘之間，按照如下標(biāo)準(zhǔn)每5分鐘對(duì)小鼠進(jìn)行一次評(píng)分表現(xiàn)出強(qiáng)烈逃跑反應(yīng)并尖叫撕咬畫刷的動(dòng)物得“2”分；表現(xiàn)出輕聲尖叫并企圖逃跑的動(dòng)物得“1”分；對(duì)畫刷輕觸無反應(yīng)的動(dòng)物得“0”分。分?jǐn)?shù)計(jì)總產(chǎn)生一個(gè)0～16的累積得分，如Minami等，Pain57217～223(1994)所述。采用雙尾學(xué)生t檢驗(yàn)(two-tailed Students t-test)對(duì)體內(nèi)研究進(jìn)行顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算。
胍乙啶交感神經(jīng)阻斷基本按下述方式進(jìn)行。動(dòng)物先腹膜內(nèi)注射50mg/kg的胍乙啶(Malmberg和Basbaum，Pain76215～222(1998))，24小時(shí)后評(píng)估其基線觸覺敏感性。對(duì)表現(xiàn)出正常觸覺敏感性的動(dòng)物，檢測(cè)其對(duì)觸覺過敏化學(xué)誘發(fā)的敏感性。6～8天后，小鼠從交感神經(jīng)阻斷中恢復(fù)過來，表現(xiàn)為恢復(fù)到交感神經(jīng)阻斷術(shù)之前的反應(yīng)。
B.α-2A和α-2C基因敲除小鼠中提高交感緊張將通過激活α-1受體增強(qiáng)其對(duì)觸覺過敏誘發(fā)的敏感性為評(píng)估交感緊張是否可影響對(duì)感覺致敏的易感性，將α-2A和α-2C基因敲除小鼠對(duì)觸覺過敏化學(xué)誘發(fā)的敏感性與野生型小鼠的敏感性進(jìn)行比較。與野生型對(duì)照相比，α-2A和α-2C基因敲除小鼠未表現(xiàn)出基線觸覺過敏。首先，比較基因敲除小鼠和野生型小鼠中引起觸覺過敏的苯腎上腺素的濃度。如圖2所示，在α-2A和α-2C基因敲除小鼠中，苯腎上腺素劑量應(yīng)答均有明顯的左移。該結(jié)果表明苯腎上腺素引起觸覺過敏的能力在α-2基因敲除小鼠系中均有提高，其中α-2C基因敲除小鼠中的提高較大。具體而言，與野生型小鼠系中30ng/kg苯腎上腺素的強(qiáng)觸覺過敏誘發(fā)劑量相比，0.1和0.3ng/kg的苯腎上腺素已分別在α-2C和α-2A基因敲除小鼠中引起最大過敏。圖2還證明野生型小鼠中漸進(jìn)式兩階段劑量應(yīng)答在兩個(gè)基因敲除小鼠系中變?yōu)槎盖褪絼┝繎?yīng)答。
全身給藥胍乙啶通過消耗交感神經(jīng)末梢的去甲腎上腺素產(chǎn)生功能性交感神經(jīng)阻斷。為檢驗(yàn)苯腎上腺素劑量應(yīng)答曲線的變化是否由于α-2基因敲除小鼠中交感緊張的提高而引起的，將α-2A基因敲除小鼠通過胍乙啶處理(50mg/kg i.p.)進(jìn)行化學(xué)性交感神經(jīng)阻斷，并在24～30小時(shí)后檢測(cè)苯腎上腺素誘發(fā)的敏感性。在胍乙啶處理的α-2A小鼠中，部分除去了增大的對(duì)苯腎上腺素的敏感性，以使劑量應(yīng)答與野生型小鼠中觀察到的兩階段劑量應(yīng)答(參考圖2)相似。該結(jié)果證實(shí)在α-2A基因敲除小鼠中提高交感緊張將增強(qiáng)感覺致敏。
C.交感神經(jīng)系統(tǒng)增強(qiáng)硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏將濃度逐漸加大的硫前列酮鞘內(nèi)注射至野生型小鼠和α-2基因敲除小鼠中，以測(cè)定基因敲除小鼠是否對(duì)初級(jí)傳入的致敏更敏感。如圖3所示，在野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠中，硫前列酮的劑量應(yīng)答相同，但在α-2A基因敲除小鼠中有左移。具體而言，與野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠中100ng的部分過敏誘發(fā)劑量以及200ng的最大劑量相比，α-2A基因敲除小鼠中30ng的劑量已達(dá)到最大有效劑量。胍乙啶(50mg/kg i.p.)化學(xué)性交感神經(jīng)阻斷降低了α-2A基因敲除小鼠對(duì)硫前列酮的敏感性。如圖3所示，與經(jīng)胍乙啶處理的α-2A基因敲除小鼠相比，硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏的劑量應(yīng)答右移了約10倍。該結(jié)果表明交感神經(jīng)系統(tǒng)增強(qiáng)了硫前列酮致敏作用。
D.交感神經(jīng)系統(tǒng)不影響NMDA誘發(fā)的觸覺過敏為評(píng)估α-2基因敲除小鼠是否對(duì)NMDA誘發(fā)的背角致敏敏感，向野生型小鼠和α-2基因敲除小鼠中注射濃度變化的NMDA。如圖4所示，與野生型小鼠相比，α-2A和α-2C基因敲除小鼠對(duì)NMDA并不更敏感。該結(jié)果表明交感神經(jīng)系統(tǒng)似乎對(duì)NMDA誘發(fā)的觸覺過敏無影響。
總而言之，上述結(jié)果表明α-2基因敲除小鼠表現(xiàn)出水平更高的交感神經(jīng)活性，該結(jié)果還說明α-2基因敲除小鼠表現(xiàn)出較高的刺激部位和刺激方式特異性的致敏。
實(shí)施例IIIα-2激動(dòng)劑溴莫尼定和可樂定活性的比較本實(shí)施例表明α腎上腺素能激動(dòng)劑緩解感覺過敏的能力不同，所述感覺過敏可通過交感神經(jīng)系統(tǒng)增強(qiáng)。
A.溴莫尼定緩解交感增強(qiáng)的觸覺過敏。而可樂定則不行脊柱給藥的α-2腎上腺素能激動(dòng)劑通過脊柱α-2A受體緩解神經(jīng)性疼痛。為確定α-2基因敲除小鼠中交感活性提高是否改變?chǔ)?2激動(dòng)劑的止痛活性，檢測(cè)了幾種激動(dòng)劑的活性。首先在NMDA模型中測(cè)試α-2激動(dòng)劑溴莫尼定和可樂定，在NMDA模型中，致敏不受基因敲除小鼠基礎(chǔ)交感緊張的影響。在野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠(分別為圖5a和圖5c)中鞘內(nèi)同時(shí)給藥NMDA與可樂定或溴莫尼定導(dǎo)致觸覺過敏的完全抑制。正如所預(yù)料的，在α-2A基因敲除小鼠(圖5c)中，可樂定和溴莫尼定均未抑制NMDA誘發(fā)的觸覺過敏，這與前面的研究相一致，說明脊柱α-2A腎上腺素能受體亞型介導(dǎo)α-2腎上腺素能激動(dòng)劑的止痛作用(Lakhlani等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA949950～9955(1997)；Stone等，J.Neurosci.177157-1765(1997)；Hunter等，Br.J.Pharmacol.1221339～1344(1997))。在硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏模型中也觀察到相同模式的溴莫尼定止痛活性，所述模型對(duì)交感緊張敏感(參考圖5b和圖5d)。相反地，可樂定得到的結(jié)果完全不同可樂定在野生型小鼠中是止痛的，但在α-2A或α-2C基因敲除小鼠中則沒有止痛活性(比較圖5b和圖5d)。該結(jié)果表明α-2pan激動(dòng)劑在交感增強(qiáng)的情況下，可具有不同活性，如溴莫尼定表現(xiàn)出活性而可樂定則無活性。
B.溴莫尼定緩解硫前列酮誘發(fā)的過敏而不產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用，但可樂定或替扎尼定則不行鎮(zhèn)靜作用限制了包括α-2激動(dòng)劑在內(nèi)的很多藥物的應(yīng)用。因此，對(duì)α-2激動(dòng)劑進(jìn)行比較，以測(cè)試引起感覺過敏緩解的劑量相對(duì)于引起鎮(zhèn)靜作用的劑量是否不同。
對(duì)于三種α-2激動(dòng)劑(替扎尼定、可樂定和溴莫尼定)，分別在運(yùn)動(dòng)活性模型和硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏模型中，于不同劑量下比較其鎮(zhèn)靜作用和阻斷觸覺過敏的能力。在腹膜內(nèi)給藥后的15至50分鐘內(nèi)，每5分鐘對(duì)各組的5～6只小鼠的觸覺過敏進(jìn)行一次評(píng)分。賦形劑治療的動(dòng)物通常得約4分。此外，腹膜內(nèi)給藥后30分鐘，在5分鐘的時(shí)間內(nèi)對(duì)各組5～6只小鼠的運(yùn)動(dòng)活性進(jìn)行測(cè)量。相對(duì)于賦形劑治療動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性表示為百分比；將100％減去百分運(yùn)動(dòng)活性計(jì)算得到百分鎮(zhèn)靜作用。如圖6所示，在所檢測(cè)的三種α腎上腺素能激動(dòng)劑中，僅有溴莫尼定產(chǎn)生可與鎮(zhèn)靜作用相分離的止痛作用。該結(jié)果表明溴莫尼定在無伴隨鎮(zhèn)靜作用的情況下緩解交感增強(qiáng)障礙的能力，如緩解硫前列酮誘發(fā)的觸覺過敏的能力，不同于其它α-2 pan激動(dòng)劑，如可樂定和替扎尼定。
C.α腎上腺素能pan激動(dòng)劑α-2/α-1功能選擇性的變化在試驗(yàn)中，采用穩(wěn)定表達(dá)α-2A、α-2C、α-1A和α-1B受體的細(xì)胞系分析溴莫尼定和可樂定的α腎上腺素能受體藥物圖。
與前面的研究相一致的是，在穩(wěn)定表達(dá)α-2A受體或α-2C受體(圖7a、b；表2)的PC12細(xì)胞中，抑制弗司扣林誘發(fā)的cAMP累積的效能順序?yàn)橛颐劳羞涠ā蒌迥岫ǎ究蓸范ǎ咎嬖岫ā荼侥I上腺素(Jasper等，Biochem.Pharmacol.551035～1043(1998)；Pihlavisto等，Eur.J.Pharmacol.385247～253(1999))。溴莫尼定、可樂定和替扎尼定在α-2A受體上的效能比在α-2C受體上的效能大約10倍。
在穩(wěn)定表達(dá)α-1A受體和α-1B受體(圖7c、d；表2)的HEK293細(xì)胞中，對(duì)相同化合物刺激α-1介導(dǎo)增加細(xì)胞內(nèi)鈣的能力進(jìn)行功能測(cè)試。在α-1A和α-1B受體上的效能順序?yàn)楸侥I上腺素＞可樂定＞替扎尼定＝右美托咪定＞溴莫尼定。α-2激動(dòng)劑可樂定、替扎尼定和右美托咪定為部分激動(dòng)劑，而溴莫尼定在α-1A受體上表現(xiàn)出弱的活性且在α-1B受體上無活性。因此，雖然在結(jié)合試驗(yàn)中，可樂定和替扎尼定以前被歸為“α-2選擇性”激動(dòng)劑，但在功能試驗(yàn)中，上述化合物在α-2和α-1受體間表現(xiàn)出的選擇性低10倍。相反地，右美托咪定在功能試驗(yàn)中的選擇性為約300倍，溴莫尼定是功能試驗(yàn)中選擇性最高的化合物，其α-2受體選擇性比α-1受體選擇性大1000倍(參考表2)。該結(jié)果表明溴莫尼定是一種高α-2/α-1選擇性的激動(dòng)劑，并且溴莫尼定的α-2/α-1選擇性差異與諸如可樂定的其它pan激動(dòng)劑的選擇性形成鮮明對(duì)比。
可樂定與溴莫尼定之間α-2/α-1選擇性的差別說明在硫前列酮模型中，可樂定的α-1激動(dòng)劑活性可增大α-2C基因敲除小鼠中較高的交感緊張，并掩蓋可樂定的止痛活性。該結(jié)果得到下述事實(shí)的支持，即在α-2C基因敲除小鼠(圖7e)中，共同給藥α-1拮抗劑哌唑嗪與可樂定能恢復(fù)可樂定的止痛活性。在野生型小鼠或α-2C基因敲除小鼠中，哌唑嗪自身無止痛活性。
總而言之，該結(jié)果說明在α-2C基因敲除小鼠中，可樂定喪失止痛活性，而溴莫尼定未喪失，可能是由于可樂定的α-1激動(dòng)劑活性，并且很多“α-2激動(dòng)劑”的α-1激動(dòng)劑活性可限制其治療應(yīng)激相關(guān)障礙以及其它交感增強(qiáng)障礙的能力。
按如下所述建立表達(dá)腎上腺素能受體的穩(wěn)定細(xì)胞系。將牛α-1A、倉鼠α-1B、人類α-2A和人類α-2C受體的cDNA平端亞克隆至逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pCL BABE Puro中的NheI-EcoRI位點(diǎn)。逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建體由雙鏈DNA測(cè)序證實(shí)。高滴度的假型逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒通過如下方法生成用適宜的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體以及PMD.G(一種水泡性口膜炎病毒包膜蛋白VSV-G的表達(dá)載體)共轉(zhuǎn)染HEK2939GP(一種穩(wěn)定表達(dá)Maloney白血病病毒Gag-Pol的HEK293細(xì)胞系)。轉(zhuǎn)染后16小時(shí)，更換培養(yǎng)基(DMEM，10％FCS)；48小時(shí)后收獲高滴度(～1×106pfu/mL)培養(yǎng)基。通過0.4uM的過濾器過濾上清液。
將變化量的人類α-2A和α-2C受體上清液加入至原初PC12細(xì)胞中，然后培育48小時(shí)。使轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞群以更低的密度再鋪平板(replate)，并在含有100μg/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基中生長。未轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞在三天內(nèi)殺死，并且在兩個(gè)月內(nèi)長出單細(xì)胞灶。挑取細(xì)胞灶并擴(kuò)增，通過溴莫尼定放射性配體結(jié)合檢測(cè)受體密度。功能性α-2受體活性通過抑制弗司扣林誘發(fā)的cAMP累積得到證實(shí)。
將變化量的牛α-1A受體和倉鼠α-1B受體上清液加入至原初HEK293細(xì)胞中，然后培育48小時(shí)。將轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞群以更低的密度再鋪平板，并在含有0.25ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基中生長。顯著的細(xì)胞死亡在三天內(nèi)非常明顯，并在兩周內(nèi)出現(xiàn)單細(xì)胞灶。挑取并擴(kuò)增細(xì)胞灶后，通過測(cè)量苯腎上腺素誘發(fā)的細(xì)胞內(nèi)Ca+2累積對(duì)擴(kuò)增的亞克隆的α-1受體表達(dá)進(jìn)行功能檢測(cè)。受體密度在哌唑嗪放射性配體結(jié)合試驗(yàn)中測(cè)量。
在穩(wěn)定表達(dá)牛α-1A或倉鼠α-1B腎上腺素能受體的HEK293細(xì)胞中測(cè)量細(xì)胞內(nèi)Ca+2應(yīng)答，如下所述。在使用前一天，于含有10％熱滅活致死小牛血清、1％抗生素-抗真菌劑和0.25μg/ml嘌呤霉素的0.2ml DMEM中，在涂布有聚-D-賴氨酸的96孔板的各孔中涂覆40,000～50,000個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞用HBSS洗滌兩次，所述HBSS補(bǔ)加有10mMHEPES、2.0mM CaCl2以及2.5mM丙磺舒(probenicid)，隨后在37℃下與4μM Fluo-4(Molecular Probes；Eugene，Oregon)培育60分鐘。沖洗板上的細(xì)胞外染料兩次，然后將板置于熒光測(cè)定成像板讀數(shù)器(FLIPR；Molecular Devices；Sunnyvale，California)中。在HBSS中稀釋配體并等分至96孔微型板中。在0.64nM至10,000nM的濃度范圍內(nèi)測(cè)試藥物。Ca+2應(yīng)答的數(shù)據(jù)在任意熒光單位獲得。

細(xì)胞內(nèi)cAMP的測(cè)量按如下方式進(jìn)行。在補(bǔ)加有10％馬血清、5％熱滅活致死牛血清、1％抗生素-抗真菌劑和100μg/ml嘌呤霉素的100μl DMEM中，將穩(wěn)定表達(dá)人類α-2A或人類α-2C腎上腺素能受體的PC12細(xì)胞以30,000細(xì)胞/孔的密度涂覆到涂布有聚-D-賴氨酸的96孔板中。細(xì)胞在37℃下及5％的CO2中生長過夜。細(xì)胞給藥是通過加入等體積的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基含有IBMX(至最終濃度為1mM)、弗司扣林(至最終濃度為10μM)以及適宜的藥物稀釋液(至最終濃度為10-5M到10-12M)。培育10分鐘后，吸出培養(yǎng)基，細(xì)胞用200μl溶胞緩沖液(Amersham Biosciences；Piscataway，New Jersey)溶解。測(cè)試前，板在-20℃下保存至多24小時(shí)。采用Biotrak cAMP酶免疫測(cè)定系統(tǒng)(Amersham Biosciences)按照制造商的說明書測(cè)定細(xì)胞內(nèi)cAMP。用板讀數(shù)器在450nm處對(duì)板進(jìn)行讀數(shù)。
采用KaleidaGraph(Synergy Software；Reading，PA)通過對(duì)方程應(yīng)答＝最大應(yīng)答+((最小應(yīng)答-最大應(yīng)答)/(1+(配體濃度/EC50))進(jìn)行最小二乘擬合產(chǎn)生體外試驗(yàn)的劑量應(yīng)答曲線。百分效能通過比較化合物的最大作用與標(biāo)準(zhǔn)全激動(dòng)劑的作用測(cè)定，所述標(biāo)準(zhǔn)全激動(dòng)劑對(duì)于α-1受體為苯腎上腺素，而對(duì)于α-2受體為溴莫尼定。
上述在括號(hào)中的或其它位置的全部期刊文章、參考文獻(xiàn)以及專利引文，不論先前聲明與否，均通過援引的方式完整納入本說明書中。
雖然結(jié)合上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)理解的是可在不偏本發(fā)明主旨的情況下進(jìn)行各種改進(jìn)。因此，本發(fā)明僅由權(quán)利要求限定。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或減輕個(gè)體內(nèi)應(yīng)激相關(guān)病癥嚴(yán)重程度的方法，包括向所述個(gè)體全身給藥有效量的溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物，其中所述應(yīng)激相關(guān)病癥選自胃腸病、過敏性腸綜合征(IBS)、消化不良、未伴隨有心肌缺血的心動(dòng)過速、驚恐發(fā)作、抗胰島素作用、II型糖尿病、非炎性皮膚病、肌肉收縮障礙、伴有偏頭痛的感覺過敏以及行為異常。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為胃腸病。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為過敏性腸綜合征。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為消化不良。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為心動(dòng)過速，只要該心動(dòng)過速未伴隨有心肌缺血。
6.權(quán)利要求5方法，其中所述病癥為伴有肺病的心動(dòng)過速。
7權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為驚恐發(fā)作。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為抗胰島素作用。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為II型糖尿病。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為非炎性皮膚病。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為肌肉收縮障礙。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述肌肉收縮障礙為骨骼肌收縮障礙。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述肌肉收縮障礙為平滑肌收縮障礙。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述平滑肌收縮障礙伴有膀胱炎。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述平滑肌收縮障礙伴有非細(xì)菌性前列腺炎。
16.權(quán)利要求11的方法，其中所述肌肉收縮障礙伴有緊張型頭痛。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為伴有偏頭痛的感覺過敏。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述病癥為行為異常。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為口服給藥。
20.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為局部給藥。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量通過貼片給藥。
22.權(quán)利要求1的方法，其中所述有效量為靜脈內(nèi)給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供一種預(yù)防或減輕個(gè)體內(nèi)應(yīng)激相關(guān)病癥嚴(yán)重程度的方法，包括向所述個(gè)體全身給藥有效量的溴莫尼定或其可藥用的鹽、酯、酰胺、立體異構(gòu)體或外消旋混合物。可根據(jù)本發(fā)明方法治療的應(yīng)激相關(guān)病癥包括但不限于消化不良、未伴隨有心肌缺血的心動(dòng)過速、驚恐發(fā)作、非炎性皮膚病、肌肉收縮障礙、伴有偏頭痛的感覺過敏以及行為異常。
文檔編號(hào)A61P25/00GK1812791SQ200480017842
公開日2006年8月2日 申請(qǐng)日期2004年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月25日
發(fā)明者D·W·吉爾, S·M·惠特卡普, M·F·布林, J·E·唐奈羅 申請(qǐng)人:阿勒根公司