專利名稱：一種新的抗菌藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種抗菌藥物的復(fù)方制劑。
背景技術(shù)：
頭孢類抗菌素為廣泛用于臨床的抗菌藥物，由于臨床上長期、大量使用，致使細(xì)菌對頭孢類抗生素產(chǎn)生耐藥性，極大地影響了該類藥物的療效。細(xì)菌對頭孢類抗生素耐藥的主要機(jī)制為產(chǎn)生特異性的β-內(nèi)酰胺酶，該酶能分解藥物，使藥物療效降低。為了克服耐藥性的缺陷，近幾年不斷有頭孢類抗生素聯(lián)合使用β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的報(bào)道，即通過抑制β-內(nèi)酰胺酶以使藥物保持最大的療效。較常用的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑有舒巴坦(sulbactam，SBT)、他佐巴坦(tazobactam，TAZ)和克拉維酸(clavulanic acid)等。
頭孢曲松為半合成的第三代頭孢菌素類抗生素，具有長效、廣譜、抗菌作用強(qiáng)的特點(diǎn)。其上市后就受到臨床醫(yī)生的歡迎，并且廣泛用于治療疾病。但長期使用也面臨耐藥性問題，影響了藥物療效。他佐巴坦為常用的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，由于其半衰期為1小時(shí)，而頭孢曲松為8小時(shí)，所以一般認(rèn)為由于兩藥半衰期相差大，聯(lián)合使用很難有協(xié)同療效(US6090801)，因此現(xiàn)在較多研究的是頭孢曲松與舒巴坦的復(fù)合制劑(CN1404834A)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在對這類復(fù)合抗菌藥物研究中發(fā)現(xiàn)，頭孢曲松與他佐巴坦聯(lián)合使用抗菌作用明顯優(yōu)于其他的藥物聯(lián)用，這種作用在特定的比例下療效更優(yōu)，并且由于加入了他佐巴坦，不僅使頭孢曲松的療效增加，而且還使頭孢曲松的療效延長，產(chǎn)生了療效的后效應(yīng)。
發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，兩藥聯(lián)用，隨著他佐巴坦比例的增加，抗菌活性也增加，但由于他佐巴坦價(jià)格非常昂貴，因此，當(dāng)頭孢曲松與他佐巴坦重量比為3～5∶1時(shí)不僅療效好(對臨床分離產(chǎn)酶的金黃色葡萄球菌、埃埃氏大腸菌和綠膿桿菌的抗菌活性是單用頭孢曲松鈉的2.6、11.6和4.3倍；是新菌必治(頭孢曲松鈉聯(lián)合舒巴坦鈉)的1.7、2.1和2.0倍；對G-桿菌的抗菌活性強(qiáng)于哌拉西林他唑巴坦，對臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌的抗菌活性均在較敏感的范圍內(nèi))，而且藥物成本低，適合于臨床使用。本發(fā)明優(yōu)選的比例為頭孢曲松∶他佐巴坦＝3∶1或5∶1。從有效治療量考慮，本發(fā)明的組合物每單位劑型含頭孢曲松210～900毫克，他佐巴坦70～300毫克。最優(yōu)選的單位劑型所用的量為頭孢曲松750毫克、他佐巴坦250毫克(3∶1的劑量)，或頭孢曲松750毫克或他佐巴坦150毫克(5∶1的劑量)。
考慮到該類產(chǎn)品注射給藥療效較好，而制備成注射劑對水溶性要求比較高，本發(fā)明人經(jīng)過多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將兩者制備成鈉鹽后不僅解決了水溶性問題，而且制備方法比較簡單，適合工業(yè)化大生產(chǎn)，因此，頭孢曲松優(yōu)選用其鈉鹽即頭孢曲松鈉，他佐巴坦也優(yōu)選其鈉鹽即他佐巴坦鈉，至于兩個(gè)鈉鹽在配制時(shí)所用量應(yīng)該將其折算成游離體后再按前面的配比和劑量計(jì)算。
本發(fā)明優(yōu)選的劑型為無菌粉針劑，也可加入賦形劑用常規(guī)方法制備成凍干劑。
盡管現(xiàn)有技術(shù)公知頭孢類抗生素和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑聯(lián)用可增加抗菌藥效，但發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)頭孢曲松和他佐巴坦聯(lián)用時(shí)藥效比頭孢曲松和舒巴坦聯(lián)用時(shí)要好很多，下面是其試驗(yàn)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)一、不同配比的頭孢曲松鈉他佐巴坦鈉等β-內(nèi)酰胺抗生素對β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定性及抑酶作用試驗(yàn)研究1、材料1.1藥物(1)注射用頭孢曲松鈉他佐巴坦鈉(1∶1、3∶1、5∶1、8∶1)規(guī)格分別為0.5、0.6、0.6、0.9(g/瓶)，分別含頭孢曲松鈉0.25、0.45、0.5、0.8g，他佐巴坦鈉0.25、0.15、0.1、0.1g。
(2)新菌必治，規(guī)格1.5g/瓶(含頭孢曲松鈉1.0g，舒巴坦鈉0.5g)。
(3)注射用頭孢唑啉鈉(CZ)規(guī)格0.5g/瓶1.2菌株國際標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的菌株7株，購自四川抗生素研究所，其中有質(zhì)粒編碼的β-內(nèi)酰胺酶TEM-5、SHV-1、PSE-1、OXA-1、OXA-2，染色體編碼的β-內(nèi)酰胺酶K1、D31；TEM-5、SHV-1、OXA-1、D31為大腸埃希菌，K1為肺炎克雷伯菌，PSE-1為銅綠假單胞菌，OXA-2為鼠傷寒沙門氏菌。
1.3試劑Nitrocefin紙片，Becton Dickinson公司產(chǎn)品，規(guī)格50片/瓶2、試驗(yàn)方法2.2β-內(nèi)酰胺酶的提取與鑒定采用超聲波破碎細(xì)菌法提取β-內(nèi)酰胺酶粗酶。具體過程如下將上述菌株分純，挑取單個(gè)菌落接種于5ml新鮮的M-H肉湯中，37℃旋轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)5-6小時(shí)，低溫離心(4℃，7000rpm，10min)，收集菌體，用冷磷酸鹽緩沖液(50mM，pH7.0)，洗滌2次，重復(fù)離心，依細(xì)菌量，以同種冷緩沖液約10ml制成菌懸液，冰浴下進(jìn)行超聲破碎(輸出功率7-，超聲1min，停1min)，直至菌液看似清亮止，低溫下超速離心收集上清液(即β-內(nèi)酰胺酶粗提物)，分裝后-80℃保存?zhèn)溆谩?br> 2.3用Nitrocefin紙片鑒定β-內(nèi)酰胺酶粗酶將提取粗酶液滴加到Nitrocefin紙片上，10min內(nèi)，紙片由淺黃色變成紅色者即為β-內(nèi)酰胺酶陽性。
2.3 7種β-內(nèi)酰胺類抗生素對β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性試驗(yàn)(1)采用常規(guī)紫外分光光度法檢測。以各藥液中CRO(頭孢曲松鈉)的含量為依據(jù)，用磷酸緩沖液(50mM，pH7.0)配制7種抗生素藥液，濃度為10-4M，分別進(jìn)行底物光譜掃描，選擇最適波長CRO、CRO/TAZ(他佐巴坦)、CRO/SBT(舒巴坦鈉)均為241nM、CZ為272nM。
(2)分別取各藥物溶液6ml，加粗酶液100μl。另取各藥液6ml加入100μl磷酸鹽緩沖液作陰性對照，混勻后在37℃恒溫水浴中反應(yīng)2小時(shí)，分別以緩沖液加酶液和緩沖液作空白對照調(diào)零，在相應(yīng)波長處測定溫浴前后底物的OD值，并按下式計(jì)算酶對底物的水解率，酶水解率＝{[(OD酶前-OD酶后)-(OD陰對前-OD陰對后)]/OD酶前}*100％，并以CZ的水解率為100％分別按下式計(jì)算其它β-內(nèi)酰胺抗生素的相對水解率(RR，RelativeRates of Hydrolysis)。此實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。
RR＝(酶對某待測藥物的水解率/酶對CZ的水解率)*100％(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1頭孢曲松鈉等β-內(nèi)酰胺類抗生素對酶的穩(wěn)定性7種β-內(nèi)酰胺酶對頭孢曲松鈉等7種不同配比的β-內(nèi)酰胺類抗生素的絕對水解率及以頭孢唑啉鈉的水解率為100％，其它6種抗生素的相對水解率分別見表1和表2表1 7種β-內(nèi)酰胺酶對7種不同配比的β-內(nèi)酰胺類抗生素的絕對水解率

表2 7種β-內(nèi)酰胺酶對7種不同配比的β-內(nèi)酰胺類抗生素的相對水解率

由表1和表2看出，β-內(nèi)酰胺酶對頭孢唑啉的水解率達(dá)到67.31％-85.55％，對單組分的頭孢曲松鈉的水解率達(dá)到20.56-32.47％，而對不同配比的頭孢曲松鈉他佐巴坦鈉(1∶1、3∶1、5∶1)的水解率只有0.84％-21.76％，說明這幾個(gè)配比的頭孢曲松鈉他佐巴坦鈉的酶穩(wěn)定性明顯優(yōu)于單組分頭孢曲松鈉，對所試菌株產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性優(yōu)于頭孢曲松鈉配舒巴坦(2∶1)。
由表1和表2也可以看出，當(dāng)CRO/TAZ為3∶1和5∶1時(shí)的水解率與1∶1時(shí)相差不太大，而由于他佐巴坦價(jià)格昂貴，因此，選用3∶1～5∶1時(shí)既達(dá)到了療效，又節(jié)約了成本。
二、最低抑菌濃度(MIC)的比較發(fā)明人將CRO/TAZ(8∶1、5∶1、3∶1、1∶1)與頭孢哌酮鈉/舒巴坦(CFP/SUB)(1∶1)及哌拉西林/他佐巴坦(PIPC/TAZ)(8∶1)也進(jìn)行了抗菌作用的比較，發(fā)現(xiàn)，頭孢曲松和他佐巴坦聯(lián)合使用明顯比別的頭孢或青霉烯類抗菌素與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑聯(lián)合使用效果要好。下面的部分試驗(yàn)及數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)方法MIC(最低抑菌濃度)的測定真空冷凍干燥法保存菌種，用前復(fù)蘇，用Nitrocefin紙片(Cefinase，美國BBL公司生產(chǎn))確定β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生情況，30株產(chǎn)ESBLs酶臨床分離菌(排除AmpC酶)按NCCLS(2001年版)推薦的方法進(jìn)行篩選和確認(rèn)。選用非產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)株、產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)株(非產(chǎn)ESBLs)及產(chǎn)ESBLs標(biāo)準(zhǔn)株平行檢測進(jìn)行質(zhì)控。每次實(shí)驗(yàn)前用菌落比濁儀測定所試菌液濃度。
MIC的測定采用瓊脂平皿二倍稀釋法進(jìn)行。配制不同配比的實(shí)驗(yàn)用藥及對照藥物，使其終濃度梯度為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125mg/l，用多點(diǎn)定量接種儀接種細(xì)菌在含不同配比不同濃度各藥的瓊脂平皿表面，菌液終濃度為104CFU/點(diǎn)。置35℃培養(yǎng)18小時(shí)，觀察結(jié)果，未見細(xì)菌生長的最低藥物濃度即為該藥對細(xì)菌的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果見表3和表4表3幾中組合物對分離的腸桿菌科細(xì)菌的MIC(mg/L)


PIPC/TAZ-哌拉西林鈉他佐巴坦鈉、CFP/TAZ-頭孢哌酮他佐巴坦鈉、CRO/TAZ頭孢曲松鈉他佐巴坦鈉(括號內(nèi)表示不同配比)表4幾中組合物對分離的腸桿菌科細(xì)菌的MIC(mg/L)

由以上試驗(yàn)可知，頭孢曲松和他佐巴坦組合后的抗菌效果優(yōu)于其他的同類產(chǎn)品的組合，重量比為3～5∶1時(shí)抗菌效果更佳。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1頭孢曲松鈉和他佐巴坦鈉粉針劑(3∶1)及其制備方法在無菌潔凈和空氣相對濕度不大于55％的環(huán)境下，將頭孢曲松鈉894g(相當(dāng)與頭孢曲松750g)和他佐巴坦鈉294g(相當(dāng)于250g他佐巴坦)無菌粉混勻、研磨，過6號篩，分裝成1000瓶。
實(shí)施例2頭孢曲松鈉和他佐巴坦鈉粉針劑(5∶1)及其制備方法在無菌潔凈和空氣相對濕度不大于55％的環(huán)境下，將頭孢曲松鈉893.9g(相當(dāng)與頭孢曲松750g)和他佐巴坦鈉176.5g(相當(dāng)于150g他佐巴坦)無菌粉混勻、研磨，過6號篩，分裝成1000瓶。
實(shí)施例3凍干制劑及其制備方法將孢曲松鈉894g、他佐巴坦鈉294g、甘露醇70g溶于注射用水1000ml中，使溶，加針用活性炭，攪拌8分鐘，加注射用水至2000ml，趁熱經(jīng)鈦砂芯除炭抽濾至潔凈的容器中，濾液再經(jīng)0.22um微孔濾膜除菌過濾，灌裝(每單位2ml)，凍干。
權(quán)利要求
1.一種抗菌藥物組合物，由頭孢曲松和他佐巴坦組成，其特征是兩者的重量比為3～5∶1。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征是兩者的重量比為3∶1。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征是兩者的重量比為5∶1。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征是每單位劑型含頭孢曲松210～900毫克，他佐巴坦70～300毫克。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其特征是每單位劑型含頭孢曲松750毫克，他佐巴坦250毫克。
6.權(quán)利要求4的藥物組合物，其特征是每單位劑型含頭孢曲松750毫克，他唑巴坦150毫克。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征是頭孢曲松和他佐巴坦均為鈉鹽，其重量比折算成頭孢曲松和他佐巴坦計(jì)算。
8.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征是還含有賦形劑。
9.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征是劑型為粉針劑或凍干劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種抗菌藥物的復(fù)方制劑。本發(fā)明抗菌藥物復(fù)方由頭孢曲松與他佐巴坦組成，可以是兩者的鈉鹽，兩個(gè)藥物的重量比為3～5∶1，由于兩藥聯(lián)用，不僅使頭孢曲松的療效增加，而且還使頭孢曲松的療效延長，產(chǎn)生了療效的后效應(yīng)。
文檔編號A61P31/00GK1679585SQ200510037640
公開日2005年10月12日 申請日期2005年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月7日
發(fā)明者韓克勝 申請人:海口奇力制藥有限公司