專利名稱：一種用于治療肝臟疾病的中西藥復(fù)方藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種主要由絞股藍(lán)或其提取物和二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽制成的藥物組合物，及其制備方法和用途。
2、背景技術(shù)肝病是常見病和多發(fā)病，尤其是由病毒性肝炎所引起的急、慢性肝病在我國(guó)占主導(dǎo)地位，發(fā)病率高，覆蓋面大，僅乙肝我國(guó)就有1.2億人呈病毒感染，每年約30萬(wàn)人因肝病死亡，其中一半是原發(fā)性癌癥，由此可見，肝病對(duì)人民健康危害極大。
據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)，目前，我國(guó)成人脂肪肝的發(fā)病率約為10％，脂肪肝在臨床已成為常見病、多發(fā)病。脂肪肝不是一個(gè)獨(dú)立疾病，而是多種因素(或疾病)均可形成的肝的一種病理現(xiàn)象，營(yíng)養(yǎng)過剩、營(yíng)養(yǎng)不良、胃腸外高營(yíng)養(yǎng)、藥物中毒、大量飲酒、糖尿病、炎癥、妊娠、應(yīng)用皮質(zhì)激素、Reye綜合征、皮質(zhì)醇增多癥、甲狀腺功能亢進(jìn)、垂體前葉功能亢進(jìn)、慢性潰瘍性結(jié)腸炎、克隆病、潰瘍病和慢性肝炎等因素(或疾病)均可引起脂肪肝。
肝炎、脂肪肝等肝臟疾病已經(jīng)成為嚴(yán)重危害我國(guó)人民健康并需要優(yōu)先解決的公共衛(wèi)生與社會(huì)問題。
絞股藍(lán)為葫蘆科植物絞股藍(lán)Gynostemma pentaphylium(Thunb.)Mak.的干燥全草，又名七葉膽等。味苦、微甘，性寒；具有清熱解毒，益氣養(yǎng)陰，延緩衰老的功效?，F(xiàn)代研究表明，絞股藍(lán)的主要有效成分為總皂苷類。絞股藍(lán)總苷主要藥理作用為抗癌、增強(qiáng)免疫、抗衰老、降血脂，另外，絞股藍(lán)總苷還具有良好的抗肝炎的作用，其作用機(jī)理是①抑制谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)上升和肝過氧化脂質(zhì)的增加，降低大鼠急性肝損傷，對(duì)肝細(xì)胞變性、炎性浸潤(rùn)、壞死等均有明顯保護(hù)作用，促進(jìn)肝細(xì)胞的再生。②對(duì)免疫低下動(dòng)物有顯著的增強(qiáng)免疫作用。絞股藍(lán)總苷通過增加慢性乙肝患者的細(xì)胞免疫功能和降低脂質(zhì)過氧化物水平而實(shí)現(xiàn)其治療乙肝的作用。
二異丙胺目前上市的藥用鹽有二氯醋酸鹽和抗壞血酸鹽，兩者均對(duì)急慢性肝炎有較好的治療作用。二氯醋酸二異丙胺已收載入國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第14冊(cè)64頁(yè)(國(guó)家藥典委員會(huì)編)，其中規(guī)定按干燥品計(jì)算，含C8H17O2NCl12不得少于98.5％。二氯醋酸二異丙胺具有良好的保肝作用，可以促進(jìn)肝脂肪分解，減少肝內(nèi)脂肪聚集，抑制肝臟甘油三酯的合成，抑制脂肪酸合成，從而治療和預(yù)防脂肪肝。它還可改善肝臟機(jī)能，促進(jìn)受損肝細(xì)胞的修復(fù)，縮小肝臟壞死的范圍和抑制纖維化組織的形成，促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和分化作用，可增加肝重量及蛋白含量，增加肝細(xì)胞的氧攝取量，提高組織細(xì)胞呼吸及氧呼吸率的功能，促進(jìn)膜磷脂的序貫甲基化、增強(qiáng)肝細(xì)胞膜的流動(dòng)性，用于急、慢性肝炎的輔助治療。二異丙胺抗壞血酸鹽，又名維丙胺，已收載入國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第6冊(cè)217頁(yè)(國(guó)家藥典委員會(huì)編)，其中規(guī)定按干燥品計(jì)算，含C12H23NO6不得少于98.5％。維丙胺主要用于慢性、遷延型肝炎和急性肝炎的輔助治療。二氯醋酸二異丙胺和維丙胺的結(jié)構(gòu)式如下 二氯醋酸二異丙胺 二異丙胺抗壞血酸鹽(維丙胺)目前，利用絞股藍(lán)和二氯醋酸二異丙胺或二異丙胺抗壞血酸鹽(維丙胺)的相互作用，配伍組方，用于制備治療急慢性肝炎、脂肪肝等肝臟疾病的藥物還未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，本發(fā)明提供了一種新的用于治療肝臟疾病的藥物組合物，并提供了其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物主要由絞股藍(lán)和二異丙胺或其藥學(xué)上接受的鹽制成，其重量份數(shù)為絞股藍(lán)400～10000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽4～100份；優(yōu)選為絞股藍(lán)1000～4000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽10～40份；最佳為絞股藍(lán)2000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽20份。
絞股藍(lán)可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽、藥用輔料混合加工制成各種制劑。絞股藍(lán)提取物中所含的主要有效成分為絞股藍(lán)總苷，其含量不低于30％。
絞股藍(lán)可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到絞股藍(lán)總苷，提取溶劑優(yōu)選乙醇或水，絞股藍(lán)的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法，還可以根據(jù)文獻(xiàn)方法制備。
本發(fā)明提供了一種絞股藍(lán)的優(yōu)選制備工藝(以絞股藍(lán)總苷為主要有效成分)，具體如下取絞股藍(lán)藥材，加75％乙醇回流提取二次，每次2小時(shí)，濾過，流液回收乙醇至無(wú)醇味，加水使成每1ml相當(dāng)于2g生藥量的溶液，攪勻，放冷，靜置過夜，濾過，濾液通過已處理好的大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的水沖柱，棄去水液，再用3倍柱體積的60％乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.10的濃縮液，噴霧干燥，即得。
通過本工藝制備的絞股藍(lán)總苷，得率為2％～4％，絞股藍(lán)總苷的含量不低于50％。
絞股藍(lán)總苷還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法一取絞股藍(lán)藥材，加80％乙醇回流提取三次，每次2小時(shí)，加醇量為每次10倍量，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水適量，攪勻，放冷，靜置過夜，濾過，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.09～1.10的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的絞股藍(lán)總苷，得率為5～7％，絞股藍(lán)總苷的含量不低于40％。
方法二取絞股藍(lán)藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，第一次加醇10倍量，第二次8倍量，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，放置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制得的絞股藍(lán)總苷，得率為6～10％，絞股藍(lán)總苷的含量不低于30％。
上述藥物組合物，還可以用絞股藍(lán)總苷代替絞股藍(lán)投料制得，按照提取物相對(duì)于藥材的得率計(jì)算，其重量份數(shù)為絞股藍(lán)總苷12～300份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽4～100份；優(yōu)選為絞股藍(lán)總苷30～120份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽10～40份；最佳為絞股藍(lán)總苷60份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽20份。
本發(fā)明藥物組合物中，二異丙胺藥學(xué)上可接受的鹽優(yōu)選為二氯醋酸鹽和抗壞血酸鹽。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
本發(fā)明藥物組合物具有抗炎、抗病毒、改善肝細(xì)胞功能、抑制肝纖維化、抗氧化、降血脂及促進(jìn)肝脂肪分解等多種藥理活性，可以用于急慢性肝炎、脂肪肝等。
本發(fā)明的藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無(wú)菌粉針、輸液等。本組合物的優(yōu)選的劑型是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明的組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明提供了一種新的用于治療急慢性肝炎、脂肪肝的藥物組合物，滿足了臨床需要。
(2)本發(fā)明藥物組合物中，絞股藍(lán)具有良好的抗肝炎、增強(qiáng)免疫的作用，二氯醋酸二異丙胺具有良好的保肝作用，可以促進(jìn)肝脂肪分解，改善肝臟機(jī)能，促進(jìn)受損肝細(xì)胞的修復(fù)，縮小肝臟壞死的范圍和抑制纖維化組織的形成，具有良好的抗肝炎及治療脂肪肝的作用。
(3)首次通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證明本發(fā)明的藥物組合物對(duì)醋氨酚、四氯化碳所致的小鼠急性肝損傷有顯著的保護(hù)作用，可以顯著抑制鴨乙肝病毒的繁殖，可顯著對(duì)抗四氯化碳所致的大鼠肝纖維化，對(duì)實(shí)驗(yàn)性脂肪肝大鼠有顯著的保肝、降血脂及促進(jìn)肝脂肪分解的作用。二藥具有協(xié)同增效作用，療效顯著，產(chǎn)生了意想不到的效果。
(4)對(duì)本發(fā)明的藥物組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明藥物組合物的最優(yōu)配比。
(5)本發(fā)明藥物組合物制劑制備工藝簡(jiǎn)單，不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量均勻穩(wěn)定。
(6)通過穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的藥物組合物注射劑安全穩(wěn)定。
以下通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的有益效果。絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺的組合物以下簡(jiǎn)稱JE組合物。實(shí)施例中所用的絞股藍(lán)總苷均取自實(shí)施例1；所用的二氯醋酸二異丙胺為市購(gòu)，含C8H17O2NCl299.3％。
實(shí)驗(yàn)例1 JE組合物合并用藥藥效研究供試品絞股藍(lán)總苷注射液，2ml，含絞股藍(lán)總苷60mg(相當(dāng)于絞股藍(lán)2g)，自制；二氯醋酸二異丙胺注射液，1ml20mg，自制；JE組合物注射液，(絞股藍(lán)總苷+二氯醋酸二異丙胺)的不同配比，自制，制備方法參照實(shí)施例2。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重18～25g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠90只，隨機(jī)分成9組，每組10只，組別見下表?？瞻讓?duì)照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)10d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見下表，連續(xù)10d?？瞻讓?duì)照組在最后一次尾靜脈注射6h后腹腔注射生理鹽水。模型組和給藥組在最后一次尾靜脈注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg鼠重，各組在腹腔注射生理鹽水及醋氨酚16h后斷頭，取血液、肝臟，進(jìn)行生化指標(biāo)血清ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)和肝組織LPO(過氧化脂質(zhì))的測(cè)試，結(jié)果見表1。
結(jié)論與空白對(duì)照組相比，模型組ALT和LPO的活性顯著升高，差異極顯著(P＜0.01)，說明造模可靠。與空白對(duì)照組相比，絞股藍(lán)總苷組、二氯醋酸二異丙胺組和JE組合物各配比組ALT和LPO的活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)，說明各藥均對(duì)醋氨酚所致小鼠肝損傷有保護(hù)作用。其中JE組合物各配比組療效更好(P＜0.01)，均優(yōu)于單用絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺，說明絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺二藥合用，有協(xié)同增效作用。JE組合物各配比組中，以絞股藍(lán)總苷+二氯醋酸二異丙胺(60mg+20mg)組療效最為顯著。
表1 JE組合物對(duì)醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響
與空白對(duì)照組比較，◇◇P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與絞股藍(lán)總苷組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與二氯醋酸二異丙胺組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)例2 JE組合物對(duì)四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用供試品化學(xué)純CCl4，成都聯(lián)合化工試劑研究所；絞股藍(lán)總苷注射液，2ml，含絞股藍(lán)總苷60mg(相當(dāng)于絞股藍(lán)2g)，自制；二氯醋酸二異丙胺注射液，1ml20mg，自制；JE組合物注射液(5ml含絞股藍(lán)總苷+二氯醋酸二異丙胺60mg+20mg)，源自實(shí)施例2。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重22～27g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠70只，隨機(jī)分為7組，分別為空白對(duì)照組、模型組、絞股藍(lán)總苷組、二氯醋酸二異丙胺組、JE組合物低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)7d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見下表，連續(xù)7d?？瞻讓?duì)照組在最后一次尾靜脈注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各組動(dòng)物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg。16h后斷頭處死動(dòng)物，取血清測(cè)試ALT、AST的值。斷頭取血后，立即剖腹取出肝臟、脾臟，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重肝臟、脾臟的重量，計(jì)算肝指數(shù)和脾指數(shù)。結(jié)果見表2。
表2 JE組合物對(duì)CCl4所致急性肝損傷小鼠肝、脾指數(shù)和血清ALT、AST含量的影響
與空白對(duì)照組比較◇P＜0.05，◇◇p＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與絞股藍(lán)總苷組比較，#P＜0.05；與二氯醋酸二異丙胺組比較，△P＜0.05。
結(jié)論CCl4模型組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)較正常對(duì)照組小鼠數(shù)值顯著增高(P＜0.05)，CCl4模型組小鼠血清ALT、AST值較正常對(duì)照組小鼠數(shù)值極顯著增高(P＜0.01)，說明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝臟損傷，造模成功。與模型組相比，各給藥組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)、ALT、AST值降低，說明各藥對(duì)CCl4所致急性肝損傷均有保護(hù)作用；其中，JE組合物中、高劑量組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)顯著降低(P＜0.05)，肝、脾腫大減輕，JE組合物各劑量組血清ALT、AST值極顯著降低(P＜0.01)，說明本發(fā)明組合物對(duì)CCl4所致急性肝損傷有明顯保護(hù)作用。JE組合物各劑量組療效均優(yōu)于單用絞股藍(lán)總苷和二氯醋酸二異丙胺，說明絞股藍(lán)和二氯醋酸二異丙胺二藥合用，有協(xié)同增效作用。其中中、高劑量組療效更好(P＜0.05)。
實(shí)驗(yàn)例3 JE組合物抗鴨乙肝病毒作用供試品阿昔洛韋，新鄉(xiāng)制藥股份有限公司；絞股藍(lán)總苷，自制；二氯醋酸二異丙胺，市購(gòu)；JE組合物片(每片含絞股藍(lán)總苷+二氯醋酸二異丙胺60mg+20mg)，源自實(shí)施例6。
DHBV(鴨乙型肝炎病毒)陽(yáng)性血清，復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物市售1日齡北京鴨；實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物模型 北京鴨經(jīng)足靜脈注射0.2mlDHBV陽(yáng)性血清，7d后取血，分離血清，-20℃保存待檢。
藥物治療 篩選出感染成功的陽(yáng)性鴨42只，隨機(jī)分為7組，每組6只，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、絞股藍(lán)總苷組、二氯醋酸二異丙胺組、JE組合物低、中、高劑量組，每組6只?？瞻讓?duì)照組每日灌胃生理鹽水20ml/kg，每日2次，連續(xù)14d；給藥組灌胃給藥，每日2次，劑量見下表，連續(xù)14d。陽(yáng)性藥物作為治療對(duì)照組，以阿昔洛韋(ACV)按100mg/kg灌胃，2次/d，給藥2周。分別用于藥前(1d)、用藥第7天(T7)，用藥第14天(T14)和停藥后第7天(P7)。自鴨腿脛靜脈取血，分離血清，-20℃保存待檢。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以雜交斑點(diǎn)吸光度值(A)作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。結(jié)果見表3。
表3 JE組合物對(duì)DHBV-DNA的抑制作用
注與空白對(duì)照組比較◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；與給藥前相比@P＜0.05，@@P＜0.01。
結(jié)論陽(yáng)性對(duì)照(阿昔洛韋)組在給藥后第7天和第14天，與給藥前及與空白對(duì)照組比較，差異有極顯著性(P＜0.01)，但停藥后又顯著升高，與給藥前比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。不同劑量JE組合物均對(duì)DHBV有抑制作用，且停藥后無(wú)反跳，其中中、高劑量組抑制作用更為明顯。JE組合物各給藥組療效均優(yōu)于單用絞股藍(lán)總苷和二氯醋酸二異丙胺，說明絞股藍(lán)總苷和二氯醋酸二異丙胺二藥合用，有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4 JE組合物抗大鼠肝纖維化作用供試品化學(xué)純CCl4，成都聯(lián)合化工試劑研究所；絞股藍(lán)總苷注射液，2ml，含絞股藍(lán)總苷60mg(相當(dāng)于絞股藍(lán)2g)，自制；二氯醋酸二異丙胺注射液，1ml20mg，自制；JE組合物注射液(5ml含絞股藍(lán)總苷+二氯醋酸二異丙胺60mg+20mg)，源自實(shí)施例2。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，體重180～230g，雄性。
實(shí)驗(yàn)方法取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作為對(duì)照組。肝纖維化模型組應(yīng)用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，誘導(dǎo)肝纖維化模型。取肝纖維化模型大鼠60只，隨機(jī)分為6組，分別為模型組、絞股藍(lán)總苷組、二氯醋酸二異丙胺組、JE組合物注射液低、中、高劑量組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組繼續(xù)以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。絞股藍(lán)總苷組、二氯醋酸二異丙胺組、硫普羅寧組、JE組合物注射液低、中、高劑量組同時(shí)腹腔注射給藥相應(yīng)藥物，劑量見下表。繼續(xù)給藥2周。10周后宰殺大鼠，無(wú)菌操作取血2ml，分離血清，-20℃保存，用放射免疫法檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)和層粘蛋白(LN)；用生化法檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果見表4。
表4 JE組合物對(duì)CCl4所致肝纖維化大鼠的血清學(xué)指標(biāo)的影響
與正常對(duì)照組比較◇◇◇P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與絞股藍(lán)總苷組比較，#P＜0.05；與二氯醋酸二異丙胺組比較，△P＜0.05。
結(jié)論與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有極顯著性差異(P＜0.001)，說明模型可靠。絞股藍(lán)、二氯醋酸二異丙胺和JE組合物治療后肝纖維化大鼠血清ALT和AST均低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示絞股藍(lán)、二氯醋酸二異丙胺和JE組合物有降酶和保護(hù)肝功能的作用；絞股藍(lán)、二氯醋酸二異丙胺和JE組合物治療后血清HA和LN水平均顯著低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示絞股藍(lán)、JE組合物均可改善肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)，具有抗肝纖維化的作用。JE組合物組療效優(yōu)于單用絞股藍(lán)、二氯醋酸二異丙胺，提示絞股藍(lán)總苷和二氯醋酸二異丙胺二藥合用，有協(xié)同增效作用。其中，JE組合物高劑量組療效更好(P＜0.05)。
試驗(yàn)例5 JE組合物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性脂肪肝的作用試驗(yàn)動(dòng)物；Wistar大鼠，雌雄各半，體重208～230g。
供試品絞股藍(lán)總苷，自制；二氯醋酸二異丙胺，市購(gòu)；JE組合物片(每片含絞股藍(lán)總苷+二氯醋酸二異丙胺60mg+20mg)，源自實(shí)施例6。
試驗(yàn)方法大鼠，測(cè)藥前肝功能各項(xiàng)指標(biāo)、膽固醇及甘油三酯水平后，建高脂模型。除空白對(duì)照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂飼料(含豬油20％、膽固醇10％、膽鹽0.5％，硫氧嘧啶0.2％)，連續(xù)喂飼7周后，測(cè)肝功能各項(xiàng)指標(biāo)、血清膽固醇及甘油三酯水平，確定高脂模型建成。取模型大鼠60只，隨機(jī)分為6組，分別為模型組、絞股藍(lán)總苷組、二氯醋酸二異丙胺組和JE組合物低、中、高劑量組，每組10只。繼續(xù)飼高脂飼料，除模型組外，其它各組分別灌胃給藥絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺和JE組合物，每日灌胃給藥1次，灌胃給藥10天后腹腔注射硫代乙酰胺450mg/kg(造成肝功能損害)，然后繼續(xù)給予實(shí)驗(yàn)樣品，于給硫代乙酰胺后第4天用動(dòng)物用馬拉坦麻醉，腹主動(dòng)脈采血。離心分離血清，檢測(cè)肝功能AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)，ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)，ALP(堿性磷酸酶)，HDL(高密度脂蛋白)，LDL(低密度脂蛋白)；另取肝臟400mg，加脂質(zhì)提取液(正庚烷∶異丙醇4∶7 v/v)4ml勻漿，震蕩提取脂質(zhì)，離心沉淀后取上清液測(cè)定肝臟TG和CHO。血清生化學(xué)和肝臟脂質(zhì)測(cè)定均采用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。結(jié)果見表5和表6。
表5 JE組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性脂肪肝大鼠肝功能指標(biāo)的影響
與正常對(duì)照組比較◇◇◇P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與絞股藍(lán)總苷組比較，#P＜0.05，##P＜0.05；與二氯醋酸二異丙胺組比較，△P＜0.05。
表6 JE組合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性脂肪肝血脂和肝臟脂肪指標(biāo)的影響
與正常對(duì)照組比較◇◇P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與絞股藍(lán)總苷組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與二氯醋酸二異丙胺組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。
結(jié)論給高脂飲食加腹腔注射硫代乙酰胺后，可見模型組AST、ALT、ALP較正常組極顯著升高(P＜0.001)，血清HDL、LDL極顯著升高(P＜0.01)，肝臟TG和CHO顯著升高(P＜0.01)，說明模型可靠。JE組合物給藥后，AST、ALT、ALP較之模型組顯著降低(P＜0.01)，表明JE組合物有降酶保肝的作用，療效優(yōu)于單用絞股藍(lán)總苷和單用二氯醋酸二異丙胺，表明絞股藍(lán)和二氯醋酸二異丙胺合用，有協(xié)同增效作用，其中中、高劑量組療效更好(P＜0.01和P＜0.05)；JE組合物給藥后，血清HDL、LDL較之模型組顯著降低(P＜0.01和P＜0.05)，肝臟TG和CHO較模型組顯著降低(P＜0.01)，提示JE組合物具有降血脂和促進(jìn)肝脂肪分解的作用，療效優(yōu)于單用絞股藍(lán)總苷和單用二氯醋酸二異丙胺，表明絞股藍(lán)總苷和二氯醋酸二異丙胺合用，有協(xié)同增效作用，其中中、高劑量組療效更好(P＜0.01和P＜0.05)實(shí)驗(yàn)例6 JE組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品JE組合物注射液，劑型水針，規(guī)格5ml，來源于實(shí)施例2。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度。
長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將JE組合物注射液置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明JE組合物注射液長(zhǎng)期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)施例2～8中所用的絞股藍(lán)總苷均取自實(shí)施例1。
實(shí)施例1 絞股藍(lán)總苷的制備取絞股藍(lán)藥材，加75％乙醇回流提取二次，每次2小時(shí)，濾過，流液回收乙醇至無(wú)醇味，加水使成每1ml相當(dāng)于2g生藥量的溶液，攪勻，放冷，靜置過夜，濾過，濾液通過已處理好的大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的水沖柱，棄去水液，再用3倍柱體積的60％乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.10的濃縮液，噴霧干燥，即得。
分別制得三批絞股藍(lán)提取物，提取物得率和含量見表7。
鑒別取絞股藍(lán)總苷0.5g，加甲醇溶解，制成每1ml含10mg的溶液，作為供試品溶溶液。另取絞股藍(lán)皂甙-A對(duì)照品，加甲醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，展距12cm，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光下及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)及熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在60℃減壓干燥3小時(shí)的絞股藍(lán)皂苷-A對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取本品50mg，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
測(cè)定法 精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各100μl，分別置15ml具塞試管中，精密加入新配制的含5％香草醛冰醋酸溶液與高氯酸(2∶8)的混合液2ml，搖勻，密塞，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸10ml，搖勻，以試劑作空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄)試驗(yàn)，在555±5nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。
本品按干燥品計(jì)算，含絞股藍(lán)總苷以絞股藍(lán)皂苷-A(C53H90O21)計(jì)，不得少于50.0％。
表7 絞股藍(lán)總苷的得率及含量
實(shí)施例2 JE組合物水針劑的制備處方絞股藍(lán)總苷 60g二氯醋酸二異丙胺20g葡萄糖酸鈉 19g聚山梨酯80 50g注射用水加至5000ml共制備 1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將絞股藍(lán)總苷加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈉加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例3 JE組合物粉針劑的制備處方絞股藍(lán)總苷60g二氯醋酸二異丙胺 20g葡萄糖酸鈉19g聚山梨酯8020g甘露醇400g無(wú)菌注射用水 加至3000ml共制備1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將絞股藍(lán)總苷加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈉加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4 JE組合物氯化鈉輸液的制備處方絞股藍(lán)總苷60g二氯醋酸二異丙胺 20g葡萄糖酸鈉19g聚山梨酯8020g氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將絞股藍(lán)總苷加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈉加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5 JE組合物葡萄糖輸液的制備處方絞股藍(lán)總苷60g二氯醋酸二異丙胺 20g葡萄糖酸鈉19g聚山梨酯8020g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將絞股藍(lán)總苷加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈉加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6 JE組合物片劑的制備處方絞股藍(lán)總苷60g二氯醋酸二異丙胺 20g葡萄糖酸鈣19.5g淀粉 50.0g微晶纖維素50.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉10.0g共制備1000片制備工藝1)將絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈣分別粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺、葡萄糖酸鈣、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 JE組合物膠囊劑的制備處方絞股藍(lán)總苷60g二氯醋酸二異丙胺 20g葡萄糖酸鈣19.5g淀粉 20.0g微晶纖維素60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 5.0g共制備1000粒制備工藝1)將絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈣分別粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺、葡萄糖酸鈣、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8 JE組合物顆粒劑的制備處方絞股藍(lán)總苷60g二氯醋酸二異丙胺 20g葡萄糖酸鈣19.5g糖粉 600.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備1000包制備工藝1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺和葡萄糖酸鈣分別粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原輔料。
3)將絞股藍(lán)總苷、二氯醋酸二異丙胺、葡萄糖酸鈣與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成絞股藍(lán)400～10000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽4～100份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成絞股藍(lán)1000～4000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽10～40份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成絞股藍(lán)2000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽20份。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于所述的絞股藍(lán)可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽、藥用輔料混合加工制成各種制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于絞股藍(lán)提取物中所含的主要有效成分為絞股藍(lán)總苷，其含量不低于30％。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可主要由下列原料藥制成絞股藍(lán)總苷和二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽；其重量配比為絞股藍(lán)總苷12～300份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽4～100份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于其重量配比為絞股藍(lán)總苷30～120份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽10～40份。
8.如權(quán)利要求6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的絞股藍(lán)總苷的含量不低于30％。
9.如權(quán)利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的二異丙胺藥學(xué)上可接受的鹽為二氯醋酸鹽或抗壞血酸鹽。
10.如權(quán)利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于該藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由絞股藍(lán)和二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽制成，其重量配比為絞股藍(lán)400～10000份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽4～100份。或者由絞股藍(lán)總苷和二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽制成，其重量配比為絞股藍(lán)總苷12～300份、二異丙胺或其藥學(xué)上可接受的鹽4～100份。其中二異丙胺藥學(xué)上可接收的鹽優(yōu)選二氯醋酸鹽和抗壞血酸鹽。該藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選為注射劑和口服制劑。該藥物組合物主要用于肝病。
文檔編號(hào)A61K31/375GK1989992SQ200510131120
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月26日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華