專利名稱：：用于治療hiv感染患者的亞型匹配的滅活全病毒疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于治療病毒感染的疫苗，尤其是用于治療人類HIV感染的疫苗。
背景技術(shù)：
：在發(fā)現(xiàn)人類免疫缺陷性病毒(HIV)二十年后，迄今為止還沒有可利用的有效的預(yù)防性或治療性疫苗。來自世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國艾滋病毒/艾滋病項目的最新預(yù)測表明，如果按照目前艾滋病的流行趨勢，到2010年將出現(xiàn)4,500萬新感染者1。盡管通過抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療在延長HIV感染者的存活時間和減少母嬰HIV傳播方面取得了重大進展，但在長期抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的情況下出現(xiàn)藥物抗性和/或與藥物相關(guān)的嚴重副作用的患者的數(shù)目不斷增加。因此急需其他的替代治療策略以保護HIV感染個體使其免于疾病發(fā)展。在一個大規(guī)模的人類III期試驗中，一種用以誘發(fā)體液免疫以中和HIV的候選疫苗最近被證明是無效的2。這種保護作用的缺乏與已知的現(xiàn)有疫苗不能在體內(nèi)誘發(fā)有效的抗HIV中和抗體(Nab)是一致的3。這種誘發(fā)有效的Nab的能力的缺失可能是由感染原的性質(zhì)決定的。例如，迄今為止還沒有用于慢性感染(例如結(jié)核、麻風和丙型肝炎病毒感染)的成功的預(yù)防性疫苗。相反，成功的疫苗可以通過誘導Nab預(yù)防急性傳染病(例如脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、白喉、破傷風或天花)，其中Nab也可經(jīng)胎盤或經(jīng)乳汁傳遞以保護胎兒或新生兒免遭感染。眾所皆知，持久性細胞免疫可潛在地控制處于感染原未被清除的狀態(tài)的疾病，例如結(jié)核、麻風、乙型或丙型肝炎病毒和HIV慢性感染。在這點上，已表明強烈的病毒特異性CD4+輔助性T細胞1(Th1)和效應(yīng)物(穿孔素+)細胞毒性T淋巴細胞(CTL)應(yīng)答與慢性HIV-1感染個體中病毒血癥的控制和長期不進展有關(guān)4-10。此外，在急性感染期或急性感染后不久采用高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)早期介入可增強HIV-1特異性CD4+Th1細胞應(yīng)答11，12。相反，HAART在之后的階段導致HIV-1特異性CD4+Th1細胞和CTL應(yīng)答的降低5，13，14，這表明捕獲HIV-1的抗原呈遞細胞(APC)的功能活性(這是誘導免疫應(yīng)答必需的)隨感染進程逐漸喪失15-18。由此可見，用于誘發(fā)HIV特異性持久性細胞免疫應(yīng)答的治療性疫苗在以下兩個先決條件下是可行的1)發(fā)現(xiàn)能夠誘發(fā)強烈、廣泛和持續(xù)的保護性細胞免疫的合適的免疫原；和2)通過離體激活的APC的過繼轉(zhuǎn)移(即，替代策略)，或通過所述免疫原與合適的細胞因子或佐劑同時聯(lián)用在體內(nèi)直接激活損傷較小的樹突細胞(例如郎格漢斯細胞)，重建體內(nèi)損傷的APC的功能。成功的治療性疫苗的最終目標是持續(xù)地將HIV-1感染患者的病毒載量降低至盡可能低的水平。這將阻止他們的疾病進展，并因此可以減少對有害的和昂貴的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的需求。此外，持續(xù)地降低HIV病毒載量可以將該病毒性傳播給健康人的風險降至最小19。根據(jù)免疫原的性質(zhì)，疫苗誘導的保護性免疫應(yīng)答可以完全不同。減毒活疫苗誘發(fā)體液和細胞免疫應(yīng)答，而滅活病毒疫苗和純化的合成蛋白質(zhì)更傾向于誘發(fā)體液(抗體)應(yīng)答。在一個旨在激發(fā)免疫系統(tǒng)的細胞免疫方面的多中心臨床試驗中，研究人員失望地發(fā)現(xiàn)，用含HIV基因的細菌DNA制備的實驗性疫苗免疫的205個志愿者中，只有20％具有顯著的HIV特異性細胞免疫應(yīng)答(盡管該DNA初始免疫(DNAprime)在小鼠實驗中確實表現(xiàn)良好)20。本申請發(fā)明人(以及其他人)最近發(fā)現(xiàn)其中保留了包膜蛋白gp120的構(gòu)象結(jié)構(gòu)的滅活的全HIV-1(例如在通過Aldrithiol-2[AT-2]處理病毒的情形)可被樹突細胞(DC，最有效的APC)加工和呈遞，用于體外誘導有效的HLA-I限制性CTL應(yīng)答21，22。幾項研究還證明滅活的全HIV-1體外負載的自體樹突細胞的過繼轉(zhuǎn)移能夠在hu-PBL-SCID小鼠中誘導保護性抗病毒免疫23，24。本申請發(fā)明人先前已證明在沒有任何其他抗病毒治療的情況下，由滅活的全猿猴免疫缺陷性病毒(SIV)株mac251(SIVmac251)負載的樹突細胞制備的治療性疫苗對已感染SIVmac251的中國恒河猴免疫兩個月后，可導致顯著的病毒抑制25。綜上所述，這些發(fā)現(xiàn)表明AT滅活的全病毒可用作有效的疫苗免疫原，在慢性HIV-1感染人群中誘發(fā)保護性HIV-1特異性CTL應(yīng)答。但是，HIV-1在全球范圍的廣泛的變異性表明將GMP級的滅活全病毒制品用作HIV-1的通用型治療性疫苗的觀念是行不通的。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種疫苗，其包含滅活的特定亞型的滅活的全HIV，任選地還包含佐劑。該疫苗可通過誘導抗用以制備該疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答治療慢性HIV感染個體。本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含疫苗和藥學上可接受的載體的，所述疫苗包含滅活的特定亞型的全HIV。本發(fā)明還提供滅活的特定亞型的全HIV在制備用于治療慢性HIV感染個體的藥物中的用途。所述藥物可通過誘導抗用以制備該疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答治療慢性HIV感染個體。本發(fā)明還提供一種治療慢性HIV感染個體的方法，包括給個體施用包含滅活的特定亞型的全HIV的疫苗，任選地還包括施用一種佐劑，以在該個體中誘導抗用以制備該疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答。在一個實施方式中，滅活的HIV被離體負載于抗原呈遞免疫細胞(APC)，然后將其施用給個體。圖1顯示本發(fā)明疫苗的細胞毒性T-淋巴細胞(CTL)的殺傷活性。圖2顯示用AT-2滅活的SIVmac251皮內(nèi)免疫對慢性SIVmac251感染的恒河猴的血漿病毒載量的影響。數(shù)據(jù)表示免疫前后每毫升血漿中SIVRNA拷貝數(shù)的幾何平均數(shù)。P值代表Wilcoxon檢驗對免疫前、和免疫后第3或第6個月的配對數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。發(fā)明詳述由于HIV基因組經(jīng)常發(fā)生突變，存在兩個主要的HIV群(HIV-1和HIV-2)和許多亞群。群和亞群間的主要區(qū)別在于病毒包膜。HIV-1被分入主要亞群(M)和第十局外亞群(10thoutliersubgroup)(O)，其中M亞群被分為9個亞型(分化單位)，命名為A到J28-29。HIV基因組中出現(xiàn)的遺傳變異是突變、重組、插入和缺失的結(jié)果29。本發(fā)明的抗HIV、優(yōu)選地抗HIV-1亞型(例如亞型A、B、C或E)的疫苗顯示出對亞型匹配的病毒株具有高CTL殺傷活性，但只顯示出低的亞型間殺傷活性。盡管在個別情況中觀察到了亞型間殺傷活性，但與亞型匹配的病毒株相比，在亞型不匹配的病毒株中CTL殺傷效力差異很大(參見下面實施例1和圖1)。因此，本發(fā)明提供了由滅活的特定亞型的全HIV制品制備的抗HIV的亞型特異性治療性疫苗。本發(fā)明的疫苗可用于治療慢性HIV感染個體，其中所述疫苗誘導抗用以制備該疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答。本申請所用術(shù)語“疫苗”指被施用以產(chǎn)生或者人為增加對特殊疾病的免疫性的組合物。優(yōu)選地，用不是受治療個體自體的HIV亞型制備疫苗。事實上，發(fā)明人已證明，不是受治療個體自體的HIV亞型疫苗能夠出乎意料地顯著降低所述個體的病毒載量。根據(jù)本發(fā)明，可以治療任何HIV亞型的慢性感染，例如選自M群的A、B、C或E(和其他)亞型以及HIV-2群和HIVO亞群的HIV病毒的慢性感染。在一個實施方式中，本發(fā)明的組合物可包含幾種滅活的HIV亞型，例如兩種、三種、四種或更多種不同的滅活HIV亞型。在本申請中，“治療”慢性HIV感染個體意指預(yù)防、減輕或抑制HIV感染的癥狀；在施用疫苗后病毒載量(尤其是血漿病毒載量)降低；和/或在該個體中誘導抗HIV的CTL應(yīng)答。當然“治療”慢性HIV感染個體并不需要從個體中完全清除HIV。在本申請中，“慢性HIV感染個體”指可被診斷為被HIV感染的個體。在本申請中，“滅活的全HIV”指已滅活的、不再具有感染性的完整HIV顆粒。在實施本發(fā)明時，可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何合適的技術(shù)手段(例如紫外照射、加熱或化學處理(如甲醛、多聚甲醛、propiolactene或AT-2處理))滅活特定亞型的HIV。優(yōu)選地，通過化學處理滅活特定亞型的HIV，更優(yōu)選用AT-2處理進行滅活。出乎意料的是，這種AT-2滅活能夠維持HIV蛋白的構(gòu)象結(jié)構(gòu)并以非自體的HIV誘導切實有效的CTL應(yīng)答。亞型特異性的滅活的全病毒免疫原可用于抗原呈遞免疫細胞(例如成熟的或未成熟的樹突細胞(DC)或郎格漢斯細胞(LC))的離體負載(也稱“脈沖式處理(pulsing)”)，以制備基于APC的治療性疫苗；或者可用于直接皮內(nèi)注射到體內(nèi)以使LC在體內(nèi)負載以產(chǎn)生無細胞疫苗。在一個實施方式中，可采用本領(lǐng)域中的方法，例如通過將滅活的亞型特異性HIV直接(優(yōu)選不用針)遞送(例如通過皮內(nèi)注射器)至患者皮膚的方式施用本發(fā)明的無細胞疫苗。用于皮內(nèi)施用疫苗的無針裝置是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括例如US6,933,319和國際專利申請WO2004/101025中所描述的裝置，在此通過引用并入本申請。通過皮膚(皮內(nèi)施用)進行免疫是特別有益的，因為表皮中含有大量LC。已知LC是DC的未成熟形式，DC位于最接近皮膚最表層(角質(zhì)層)的區(qū)域。這些LC代表了一個占皮膚表面積25％的免疫細胞網(wǎng)絡(luò)26，并在慢性HIV/SIV感染的早期或無癥狀期保持功能完整性27。發(fā)明人已證明皮內(nèi)施用本發(fā)明的無細胞疫苗能夠顯著降低SIV病毒載量。在另一個實施方式中，可通過本領(lǐng)域中的方法，例如通過將用滅活的亞型特異性HIV負載的APC直接遞送(例如通過皮下注射器)給患者的方式施用本發(fā)明的基于APC的疫苗。在一個實施方式中，所述方法包括在施用本發(fā)明的組合物前，檢測待治療的患者所感染的HIV亞型的預(yù)步驟?？刹捎帽绢I(lǐng)域公知的方法實施這種檢測，如通過分析所述患者的血液樣品中存在的HIV對HIV序列的特定區(qū)域進行基因分型。優(yōu)選地，在該HIV亞型檢測步驟之后，施用本發(fā)明的基于APC的疫苗或無細胞疫苗，所述疫苗包含與感染待治療的患者的HIV亞型相同的HIV亞型。在另一個實施方式中，用滅活的特定亞型的HIV負載的APC治療個體。首先用滅活的HIV離體負載APC，然后采用任何合適的技術(shù)將負載的APC施用給患者。優(yōu)選地，負載的APC通過皮下、皮內(nèi)或者肌內(nèi)方式注射給該個體，優(yōu)選采用皮下注射。更優(yōu)選地，通過之前從待治療的個體采集PBMC以分離單核細胞(CD14+)而獲得APC，然后依次用未成熟的和成熟的樹突細胞中已知的細胞因子進行轉(zhuǎn)化。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，例如實施例1中描述的方法。與細菌產(chǎn)物不同，滅活的全HIV單用不能有效誘導DC的成熟25，不能使這些細胞向它們在其中行使免疫刺激功能的引流淋巴結(jié)有效遷移。因此，優(yōu)選將一類稱作佐劑的有效分子與滅活的全HIV組合以激發(fā)最佳的免疫細胞(例如LC)的成熟，從而產(chǎn)生抗HIV-1的有效的細胞免疫應(yīng)答。術(shù)語“佐劑”指加入疫苗以增強免疫應(yīng)答的物質(zhì)。合適的佐劑包括完全弗氏佐劑、不完全弗氏佐劑、皂苷、礦物膠如氫氧化鋁、表面活性物質(zhì)如溶血卵磷脂、多聚醇、聚陰離子、肽、油或碳氫化合物乳液、鑰孔血藍蛋白、二硝基酚、常規(guī)細菌產(chǎn)物(如霍亂毒素、熱不穩(wěn)定腸毒素、減毒或滅活的BCG(卡介苗(bacilleCalmette-Guerin))和短小棒狀桿菌，或BCG衍生蛋白)、生化分子(如TNF-α、IL-1-β、IL-6、PGE2，或CD40L)、或含CpG基序的寡脫氧核苷酸。適合在疫苗組合物中使用的材料的例子已公開，例如在Osol，A.，ed.，Remington′sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCo.，Easton，Pa.(1980)，第1324-1341頁公開的材料，該文獻通過引用以其全文并入本申請。樹突細胞在單核細胞的分化調(diào)節(jié)中，更尤其是在調(diào)節(jié)CD4-Th1模式(profile)相對于CD4-Th2模式的分化中，起關(guān)鍵作用。優(yōu)選地，本發(fā)明的無細胞疫苗組合物包含能夠刺激樹突細胞以抑制CD4-Th2模式中的細胞分化的佐劑，這種模式通常在慢性感染中被誘導；同時還能夠刺激樹突細胞以激活CD4-Th1模式中的細胞分化。這種佐劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，其包括細菌產(chǎn)物(例如，一些BCG衍生蛋白，如Ag85B)或化合物(如具有抗COX活性的化合物，尤其是具有抗COX2活性的化合物(例如VIOX、CELEBREX或RIBAVERIN))。本發(fā)明的疫苗可配制成用于治療慢性HIV感染個體的藥物組合物(也稱為“藥物”)。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選是無菌的且不含致熱原，還包括藥學上可接受的載體。合適的藥學上可接受的載體包括水、鹽溶液(例如生理鹽水)、粘度調(diào)節(jié)劑和其他常規(guī)的制備人用藥物組合物所使用的藥物賦形劑和/或添加劑。合適的藥物賦形劑包括穩(wěn)定劑、抗氧化劑、等滲調(diào)節(jié)劑、緩沖液和pH調(diào)節(jié)劑。合適的添加劑包括生理相容性緩沖液(例如鹽酸氨丁三醇等)，螯合劑(例如DTPA、DTPA-雙酰胺等)或螯合鈣復(fù)合物(例如鈣DTPA、CaNaDTPA-雙酰胺等)，或者可選地，添加鈣或鈉鹽(例如氯化鈣、抗壞血酸鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣等)。制備本發(fā)明的藥物組合物是本領(lǐng)域公知的，例如在Remington′sPharmaceuticalScience，17thed.，MackPublishingCompany，Easton，Pa.(1985)中所有描述的，其完整公開內(nèi)容通過引用并入本申請。一種可以通過細胞免疫應(yīng)答主動療法減輕慢性HIV感染個體癥狀的典型方案包括施用有效量的上述疫苗組合物，可以單次使用，或者以增強的或加強免疫(booster)劑量重復(fù)使用，治療周期持續(xù)一周至約24個月。根據(jù)本發(fā)明，疫苗組合物的“有效量”是指足以獲得所需生物學效應(yīng)(在本申請中指抗HIV的細胞或體液免疫應(yīng)答中的至少一種，優(yōu)選細胞免疫應(yīng)答)的量。當然，有效劑量將取決于受者的年齡、性別、健康狀況和體重，同期治療的方式，如果還有就是治療頻率以及所需的療效。下面提供的有效劑量的范圍不是用于限定本發(fā)明，而是代表了優(yōu)選的劑量范圍。但是，最優(yōu)選的劑量要因個體而定，這是本領(lǐng)域技術(shù)能夠理解并確定的。例如，參見以下文獻，Berkow(1987)，Goodman(1990)，Avery(1987)，Ebadi，Pharmacology，Little，BrownandCo.，Boston，Mass.(1985)，和Katsung(1992)，這些文獻及其所引用的文獻通過引用完整地并入本申請。一般來說，用于成人的劑量范圍是每劑約106至1014個滅活的全HIV顆粒，優(yōu)選108至1012個。無論使用什么劑量，其都應(yīng)該是如通過已知方法以及本申請所描述的方法所確定的安全和有效的劑量。本發(fā)明將通過以下限制性的實施例進行闡述。實施例實施例1方法病毒和細胞樣品通過來自感染HIV-1亞型A(n＝10)、B(n＝10)、C(n＝10)或E(n＝10)的患者的去除CD8的外周血單個核細胞(PBMC)培養(yǎng)物獲得HIV-1株。然后如文獻21中所述，通過AT-2(Sigma，StLouis，Missouri)滅活這些HIV-1亞型(A、B、C或E)株，文獻21通過引用以其整體并入本申請。在GMP條件下采用標準的7天培養(yǎng)25從每位患者制備衍生自單核細胞的DC。簡而言之，在存在0.5％臨床用人血清白蛋白(LFB，LesUlis，F(xiàn)rance)的條件下，以106個細胞/cm2的密度將新采集的PBMC進行塑料粘附。在5％CO2、37℃的條件下溫育2小時后，用無菌PBS緩沖液漂洗掉未粘附的細胞。然后，在含有添加了2000U/mlGM-CSF(Schering-Plough，Brinny，Ireland)和50ng/ml臨床級IL-4(CellGenix)的臨床級CellGroDC培養(yǎng)基的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)被粘附的細胞5天。在第5天，于37℃將DC暴露于AT-2滅活的自體病毒(109個病毒顆粒/ml)2小時。洗滌兩次除去未結(jié)合的滅活病毒后，將細胞在添加了臨床級細胞因子IL-1β(10ng/ml)(CellGenix)、IL-6(100ng/ml)(CellGenix)和TNF-α(50ng/ml)(CellGenix)的完全培養(yǎng)基中再培養(yǎng)2天。在第7天，通過流式細胞儀進行DC的質(zhì)量控制(QC)25，該文獻通過引用以其整體并入本申請。然后用上述文獻21中所描述的共培養(yǎng)方案，將經(jīng)QC證明的活DC擴增自體病毒特異性CTL。細胞毒性檢測用AT-HIV-1(109/ml)脈沖式處理DC90min，然后用CFSE(MolecularProbes，PoortGebouw，TheNetherlands)(10nM)標記15min，洗滌兩次。未脈沖式處理的DC用CFSE標記作為特異性對照。在存在CFSE-標記的亞型匹配的或不匹配的AT-2-HIV-1脈沖式處理的樹突細胞(DC)的條件下，將HIV-1亞型株特異性CTL以E∶T比例10∶1置于MicroTubes-Bulk(Bio-Rad，Hercules，CA)中，于37℃溫育4小時。溫育結(jié)束時，每管加入10μl碘化丙啶(PI，Sigma)(20μg/ml)。在FACSCalibur(BDImmunocytometrySystem，SanJose，CA)上分析靶細胞溶解。在扣除未脈沖式處理DC的非特異性CFSE/PI染色后，通過計算CFSE/PI染色DC的百分比測定病毒特異性細胞溶解活性。統(tǒng)計學分析通過Mann-Whitney檢驗比較HIV-1亞型匹配的和亞型不匹配的細胞殺傷活性之間的非配對數(shù)據(jù)。結(jié)果本發(fā)明的對HIV-1亞型A、B、C或E具有特異性的疫苗在體外對亞型匹配的病毒株(n＝10)顯示出高CTL殺傷活性(28-37％)，但僅觀察到低亞型間殺傷活性(5-17％)(P＜0.001)。盡管在個別情況中觀察到了亞型間殺傷活性，但與亞型匹配的病毒株(標準差/平均值＜20％)(P＜0.001)相比，在亞型不匹配的病毒株中CTL殺傷效率差異很大(標準差/平均值＞50％)(圖1)。這些發(fā)現(xiàn)表明藥用HIV-1亞型特異性治療性疫苗可通過GMP級的滅活全病毒制品而制得。實施例2鑒定慢性HIV感染個體，并測定感染個體的HIV亞型。在用本發(fā)明的疫苗進行治療之前先測定每一個體的血漿病毒載量。獲得與感染個體的HIV亞型具有相同亞型的HIV，按照上述實施例1所述的方法進行培養(yǎng)并用AT-2進行滅活。通過無針皮內(nèi)遞送方式將滅活HIV亞型施用給一組慢性感染個體，然后測量血漿病毒載量?？梢灶A(yù)期一旦施用本發(fā)明的疫苗，所述慢性感染個體的血漿病毒載量將顯著降低。給另一組慢性感染者施用樹突細胞，所述樹突細胞按上述實施例1所述用AT-2滅活的HIV進行負載。給個體施用HIV負載的樹突細胞?？梢灶A(yù)期一旦施用負載過的樹突細胞，所述慢性感染個體的血漿病毒載量將顯著降低。實施例3將40只血漿病毒載量＞1000拷貝/ml的慢性(＞1年)SIVmac251感染的恒河猴隨機分組，或接受自動注射槍(AKRADERMOJET，Pau，F(xiàn)rance)每月一次皮內(nèi)注射(背部25cm2)SIVacLA2.1(2.5ml含1010AT-2滅活的SIVmac251的0.9％NaCl溶液)5個月(100μl/cm2/注射)(n＝20)；或接受每月一次皮內(nèi)注射安慰劑(單獨的2.5ml的0.9％NaCl溶液)，共5個月(n＝20)。之后每個月直至第6個月，自基線收集血漿樣品，并保存于-80℃直至使用。最后，通過定量RT-PCR分析(MUPROVAMA)測定血漿SIVRNA載量。結(jié)果根據(jù)本發(fā)明的SIV亞型特異性的無細胞疫苗在第3個月(P＝0.037)和第6個月(P＝0.013)誘導血液病毒載量降低近30％(圖2)。這些發(fā)現(xiàn)表明藥用的亞型特異的SIV治療性疫苗可通過GMP級滅活的全病毒制品而制得。實施例4將140只血漿病毒載量＞1000拷貝/ml的慢性(＞1年)SIVmac251感染的恒河猴隨機分組，或接受自動注射槍(AKRADERMOJET，Pau，F(xiàn)rance)每月一次皮內(nèi)注射(背部25cm2)SIVacLA2.1(2.5ml含1010AT-2滅活的SIVmac251的0.9％NaCl溶液)和不同的佐劑(105UFC減毒或熱滅活BCG、BCG衍生的重組Ag85B)5個月(100μl/cm2/注射)，同時每天口服或不口服200mgCELEBREX4周(每組n＝20)；或接受每月一次皮內(nèi)注射安慰劑(單獨的2.5ml的0.9％NaCl溶液)，共5個月(n＝20)。之后每個月直至第6個月，自基線收集血漿樣品，并保存于-80℃直至使用。最后，通過定量RT-PCR分析(MUPROVAMA)測定血漿SIVRNA載量。參考文獻1.Stover，J.etal.CanwereversetheHIV/AIDSpandemicwithanexpandedresponse？Lancet360，73-7(2002).2.Cohen，J.HIV/AIDS.Vaccineresultslosesignificanceunderscrutiny.Science299，1495(2003).3.Srivastava，I.K.，Ulmer，J.B.&Barnett，S.W.NeutralizingantibodyresponsestoHIVroleinprotectiveimmunityandchallengesforvaccinedesign.ExpertRevVaccines3Suppl1，S33-52(200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IV感染個體。24.權(quán)利要求14-17中任一項的藥物，其中滅活的全HIV通過抗原呈遞免疫細胞(APC)呈遞。25.權(quán)利要求24的藥物，其中所述APC選自郎格漢斯細胞(LC)、成熟和未成熟的樹突細胞(DC)。26.權(quán)利要求24或25的藥物，其通過皮下施用用于治療慢性HIV感染個體。27.一種治療慢性HIV感染個體的方法，包括給所述個體施用包含滅活的特定亞型的全HIV的疫苗，其中在所述個體中誘導抗用以制備該疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答。28.權(quán)利要求27的方法，還包括給所述個體施用佐劑。29.權(quán)利要求27或28的方法，其中所述佐劑刺激樹突細胞的成熟。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述樹突細胞是郎格漢斯細胞。31.權(quán)利要求27的藥物，其中佐劑能夠刺激樹突細胞以抑制CD4-Th2模式中的細胞分化。32.權(quán)利要求27的組合物，其中佐劑能夠刺激樹突細胞以激活CD4-Th1模式中的細胞分化。33.權(quán)利要求27-32中任一項的方法，其中滅活的特定亞型的全HIV選自M群亞型、HIV-2群和HIVO亞群。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述M群亞型是A、B、C或E。35.權(quán)利要求27-34中任一項的方法，其中滅活的特定亞型的全HIV已通過化學處理滅活。36.權(quán)利要求35的方法，其中滅活的全HIV已通過Aldrithiol-2(AT-2)處理滅活。37.權(quán)利要求27-36中任一項的方法，其中滅活的全HIV通過皮內(nèi)遞送方式施用。38.權(quán)利要求27-37中任一項的方法，其中通過直接的無針遞送方式進行皮內(nèi)遞送。39.權(quán)利要求27-38中任一項的方法，其中滅活的特定亞型的全HIV不是受治療的慢性HIV感染個體自體的。40.權(quán)利要求27-39中任一項的方法，包括測定感染待治療個體的HIV亞型的預(yù)步驟。41.權(quán)利要求40的方法，其中施用的滅活的HIV與感染待治療個體的HIV具有相同的亞型。42.一種治療慢性HIV感染個體的方法，包括1)用滅活的特定亞型的全HIV離體負載抗原呈遞細胞；和2)給所述個體施用負載的抗原呈遞細胞，從而誘導抗用以制備疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答。43.權(quán)利要求42的方法，其中所述抗原呈遞細胞是樹突細胞。44.權(quán)利要求42或43的方法，其中滅活的特定亞型的全HIV選自M群亞型、HIV-2群和HIVO亞群。45.權(quán)利要求44的方法，其中所述M群亞型是A、B、C或E。46.權(quán)利要求41-45中任一項的方法，其中滅活的全HIV通過皮下遞送方式施用。47.權(quán)利要求41-46中任一項的方法，包括測定感染待治療個體的HIV亞型的預(yù)步驟。48.權(quán)利要求41-47中任一項的方法，其中所施用的滅活的HIV與感染待治療個體的HIV具有相同亞型。全文摘要將滅活的特定亞型的全HIV用于制備疫苗和含有該疫苗的藥物組合物。該疫苗可通過誘導抗用以制備該疫苗的相同HIV亞型的保護性細胞免疫應(yīng)答治療慢性HIV感染個體。文檔編號A61K39/21GK101056977SQ200580033781公開日2007年10月17日申請日期2005年10月4日優(yōu)先權(quán)日2004年10月4日發(fā)明者J·安德里厄,L·魏-盧申請人:拜歐瓦克西姆有限公司