專(zhuān)利名稱(chēng)::臺(tái)階式插管的制作方法和977,以及安裝在輪軸975和977上以繞形成大約120°角的軸線轉(zhuǎn)動(dòng)的滾輪979和981。軌道942和944安裝在壁946上,且使顯示器20a和滑行組件955和971可大體接納于其間。更具體地說(shuō),當(dāng)輪子979和981接納在溝槽949中時(shí),上輪963和965之間的間隔與軌道942對(duì)準(zhǔn)。可以構(gòu)想其他的顯示器安裝配置以在軌道上支承顯示器20a在第一和第二空間之間移動(dòng)。請(qǐng)?jiān)俅螀⒓訄D45,在第一位置,顯示器20a位于歡迎空間938內(nèi),并可用于在與會(huì)者到達(dá)以出席空間940內(nèi)的會(huì)議時(shí)歡迎與會(huì)者并可提供有關(guān)所要進(jìn)行的會(huì)議的信息。在與會(huì)者已到達(dá)并在空間940內(nèi)的會(huì)議開(kāi)始之前,顯示器20a可沿著軌道942和944移動(dòng)穿過(guò)開(kāi)口934并進(jìn)入會(huì)議空間940,如圖45中虛線所示并標(biāo)示為20a'?,F(xiàn)請(qǐng)參見(jiàn)圖47和48,圖中示出了另一實(shí)施例,其中顯示屏安裝在支承結(jié)構(gòu)上以?xún)蓚€(gè)不同空間之間移動(dòng)以供在這兩個(gè)獨(dú)立空間中使用。這里,顯示器20a不是如上相對(duì)圖45和46所述地安裝在軌道上以在兩個(gè)空間之間移動(dòng),而是安裝在門(mén)960的內(nèi)側(cè)表面上。門(mén)960鉸接地安裝在由分隔壁952所形成的開(kāi)口954內(nèi)以在圖47所示的打開(kāi)位置和圖48所示的關(guān)閉位置之間轉(zhuǎn)動(dòng),所述分隔壁952將歡迎空間960與會(huì)議空間964分隔開(kāi)。這里,當(dāng)門(mén)960處于圖47所示的打開(kāi)位置時(shí),在與會(huì)者到達(dá)以出席會(huì)議時(shí),同樣可經(jīng)由顯示器20a來(lái)歡迎與會(huì)者,并可向與會(huì)者提供有關(guān)所要召開(kāi)的會(huì)議的信息。一旦所有的與會(huì)者已到達(dá)以出席會(huì)議,門(mén)960可以如圖48所示地關(guān)閉,并可經(jīng)由顯示器20a在會(huì)議空間964內(nèi)呈現(xiàn)信息?,F(xiàn)請(qǐng)參見(jiàn)圖49至52,圖中示出了用于顯示器的支承結(jié)構(gòu)使顯示器能在兩個(gè)不同的空間中使用的再一實(shí)施例970。這里,壁972將第一空間974與第二空間976分開(kāi),且在第一空間974和第二空間976之間形成開(kāi)口978。開(kāi)口978的尺寸構(gòu)造成接納顯示器20a,以使當(dāng)顯示器20a沿墻972對(duì)齊時(shí),基本上封住開(kāi)口978。請(qǐng)具體參見(jiàn)圖52,在本實(shí)施例中,立柱980和982從包括顯示器20a的一部分的殼體的上端和下端向上和向下延伸,并接納在由安裝在開(kāi)口978中的框架構(gòu)件999所形成的樞轉(zhuǎn)孔993和997或凹進(jìn)部?jī)?nèi)。當(dāng)這樣地安裝時(shí),顯示器地送遞小體積材料的插管設(shè)計(jì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明通過(guò)提供減小或消除被送遞材料的回流和/或損失的插管設(shè)計(jì)解決了這些和其他問(wèn)題。在一個(gè)方面中,本發(fā)明涉及用于將試劑送遞到動(dòng)物中的目標(biāo)組織的插管。在一些實(shí)施方式中目標(biāo)組織是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(例如腦)。在一些實(shí)施方式中試劑是生物活性劑。在一個(gè)實(shí)施方式中,插管包括外部臺(tái)階設(shè)計(jì)(extemalstepdesign),其中與待送遞的材料接觸的插管的直徑在沿其長(zhǎng)度的限定點(diǎn)逐步減小。在一個(gè)方面中,本發(fā)明包括臺(tái)階式插管,所述臺(tái)階式插管具有外徑,遠(yuǎn)端,近端,和在近端和遠(yuǎn)端之間延伸的管腔,所述臺(tái)階式插管包括兩個(gè)或以上的同軸布置的管段(segment),每個(gè)管段具有限定插管的外徑的外徑,其中管段的外徑是不同的。在某些實(shí)施方式中,外徑具有臺(tái)階配置(stepconfiguration),而與材料接觸的內(nèi)表面并不具有臺(tái)階配置。在這里所述的任一實(shí)施方式中,直徑的減小可以沿著由近到遠(yuǎn)的方向(即,在插管的近端的臺(tái)階具有最大直徑,在遠(yuǎn)端的臺(tái)階具有最小直徑)。沿著外徑可以有任何數(shù)量的臺(tái)階,例如l、2、3、4、5、6、7、8、9、IO甚至更多。在這里所述的任一實(shí)施方式中,從臺(tái)階到臺(tái)階的臺(tái)階直徑可以增加相同的量(即,相鄰臺(tái)階之間的直徑差一致)。備選地,在這里所述的任一實(shí)施方式中,臺(tái)階的直徑差可以沿著插管的長(zhǎng)度從臺(tái)階到臺(tái)階變化。另外,這里所述的任一實(shí)施方式中,臺(tái)階之間的距離可以是相同的或者它可以變化。在一個(gè)實(shí)施方式中,插管具有下面在例1中和參考圖3A和/或3B所述的結(jié)構(gòu)和尺寸。這里所述的插管可以由任何材料制造,包括金屬,金屬合金,聚合物或它們的組合。在某些實(shí)施方式中,插管包括不銹鋼外表,所述不銹鋼外表帶有接觸待送遞產(chǎn)品的非不銹鋼表面。例如,插管的管腔的表面(其與待送遞的材料接觸)可以由不銹鋼上的聚合物涂層組成。備選地,插管進(jìn)一步可以包括延伸通過(guò)插管的管腔的一個(gè)或多個(gè)管,例如包在插管的不銹鋼外套筒中的熔融石英管,使得在使用中產(chǎn)品接觸熔融石英管的內(nèi)表面而不是不銹鋼。如上所述,與待送遞的材料接觸的表面可以具有或不具有臺(tái)階配置。在又一實(shí)施方式中,如圖3A和3B中所示的插管從下述材料被構(gòu)造。在這里所述的任一插管中,插管可以包括兩種或以上的材料。在某些實(shí)施方式中,不銹鋼插管?chē)@熔融石英管,其中待送遞的材料所接觸的表面是硅石英。在其他實(shí)施方式中,不銹鋼外表圍繞熔融石英內(nèi)表面,其中待送遞的材料所接觸的表面是熔融石英。在優(yōu)選的實(shí)施方式中插管具有如例1中所述和圖3A和3B中所示的結(jié)構(gòu),尺寸并且由例1中所述和圖3A和3B中所示的材料制造。在另一方面中,本發(fā)明包括插管組件(cannulaassembly),所述插管組件包括這里所述的任一插管和包括將通過(guò)插管送遞的一種或多種材料的儲(chǔ)器,所述儲(chǔ)器可操作地連接到插管的管腔。所述一種或多種材料(例如可能是治療配方)在這里也被稱(chēng)為"一種或多種產(chǎn)品"。在某些實(shí)施方式中,儲(chǔ)器包括注射器。進(jìn)一步地,在這里所述的任一系統(tǒng)或組件中,插管和/或儲(chǔ)器可以可操作地聯(lián)接到一個(gè)或多個(gè)泵(例如注射器泵)。在某些實(shí)施方式中,插管通過(guò)延伸通過(guò)插管的管腔的管可操作地聯(lián)接到一個(gè)或多個(gè)泵。在某些實(shí)施方式中,這里所述的系統(tǒng)進(jìn)一步包括立體定向架(stereotacticframe)(例如參見(jiàn)圖5)。這些系統(tǒng)所送遞的材料可以包括一種或多種生物活性劑(例如AAV載體,蛋白,藥物等),染料,示蹤劑,標(biāo)記物,造影劑或它們的組合。此外,所述系統(tǒng)可以用于送遞到身體的任何部分,最優(yōu)選地送遞到動(dòng)物的腦。在一個(gè)實(shí)施方式中,本發(fā)明提供了一種具有減小的滯留體積的插管。在另一方面中,本發(fā)明包括將一種或多種材料送遞到受試對(duì)象中的目標(biāo)區(qū)域的方法,所述方法包括以下步驟將這里所述的插管或插管組件定位在受試對(duì)象的目標(biāo)區(qū)域中;和將一種或多種材料通過(guò)插管送遞到目標(biāo)區(qū)域。在某些實(shí)施方式中,目標(biāo)區(qū)域在中樞神經(jīng)系統(tǒng)例如腦中。鑒于這里的公開(kāi),本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將容易想到本發(fā)明的這些和其他實(shí)施方式。圖1是包括這里所述的臺(tái)階式插管2的典型系統(tǒng)的總視圖。也顯示了通過(guò)FEPVI級(jí)管3內(nèi)部的熔融石英管1,3聯(lián)接到插管2的注射器4,和注射器泵5。注射器泵5通過(guò)路厄(Luer)壓縮接頭6連接到管3。圖2是包括這里所述的典型臺(tái)階式插管10的另一典型系統(tǒng)的側(cè)視圖。也顯示了注射器泵16和注射器15,所述注射器通過(guò)延伸通過(guò)FEP(特氟綸)管13的管腔和插管10的熔融石英管12在路厄(Luer)壓縮接頭14聯(lián)接到插管10。圖3A描繪了顯示包含在這里所述的典型注射針子組件(sub-assembly)(INSA)的組裝中的典型步驟的側(cè)視圖。圖3B-1至3B-6是描繪包含在這里所述的典型注射針組件(INA)的組裝中的各種步驟的側(cè)視圖。圖4描繪了帶有附連注射器的典型Medfusion2010i注射器泵的總視圖。圖5是這里所述的典型插管的總視圖,所述插管附連到用于將產(chǎn)品投遞到人類(lèi)受試對(duì)象的立體定向框架。圖6是這里所述的另一典型插管的總視圖。圖7的畫(huà)面A-D描繪了在用于例2所述的實(shí)驗(yàn)中的猴子的全(組織)包埋的腦截面中芳香左旋氨基酸脫羧酶(AADC)的免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果。顯示了輸注后5.5周時(shí)通過(guò)輸注部位的腦冠狀截面。畫(huà)面A,B,C禾[lD代表在例2中分析的四個(gè)不同猴腦[MR15102M(A),MR15109M(B),R23700M(C)和R211101M(D)]。所有左腦半球接受變速輸注,所有右腦半球接受非變速輸注。黑箭頭指示殼核區(qū)域。圖8的畫(huà)面A和B描繪了在輸注后5.5周時(shí)用于例2所述的實(shí)驗(yàn)中的猴腦的殼核內(nèi)AADC的免疫組織化學(xué)染色的高倍放大圖像。在圖8A中顯示了來(lái)自接受變速輸注的腦半球的典型截面,在圖8B中顯示了來(lái)自接受非變速輸注的腦半球的典型截面。標(biāo)度條代表100pm。圖9的畫(huà)面A和B用5倍放大描繪了在用于例2的實(shí)驗(yàn)中的代表動(dòng)物R211101M的殼核內(nèi)的蘇木精和伊紅(H&E)染色截面。動(dòng)物R211101M在右腦半球(圖9A)中使用非變速輸注程序和在左腦半球(圖9B)中使用變速輸注程序接受AAV-hAADC-2的雙側(cè)CED。圖像示出了鄰近插管軌跡的區(qū)域,并且在中尾殼核水平被拍攝。標(biāo)度條代表?xiàng)?im。具體實(shí)施方式本發(fā)明涉及用于將材料(例如包括潛在治療劑的配方)送遞到動(dòng)物的目標(biāo)組織例如腦的新式插管。這里所述的插管大大減小或消除了送遞期間的材料回流。這樣的材料在這里通常被稱(chēng)為"產(chǎn)品"。更具體而言,本發(fā)明允許產(chǎn)品送遞到受試對(duì)象的腦中的明確限定的位置,并且沿著針跡的產(chǎn)品回流最小,滯留體積最小,在插管的內(nèi)表面的產(chǎn)品損失最小。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中,插管具有臺(tái)階設(shè)計(jì),其中插管的直徑在沿其長(zhǎng)度的限定點(diǎn)逐步減小(從近側(cè)到遠(yuǎn)側(cè)區(qū)域)。因而,在優(yōu)選的實(shí)施方式中,最小的插管直徑在插管的最遠(yuǎn)側(cè)部分。如上所述,該臺(tái)階設(shè)計(jì)減小了沿著針跡的產(chǎn)品回流。在一個(gè)實(shí)施方式中插管的外表面包括外徑不同的五個(gè)管段,形成四個(gè)臺(tái)階,在另一實(shí)施方式中它具有下述的結(jié)構(gòu)和尺寸。如圖3A和3B所示的實(shí)施方式中那樣,插管的表面可以是平滑的。圖1顯示了包括帶有不銹鋼外表的臺(tái)階式插管2的典型系統(tǒng)的總視圖。熔融石英管1,3延伸通過(guò)插管2的管腔并且通過(guò)注射器4上的針座和/或鈍頭針6將插管2聯(lián)接到注射器4。注射器4也附連到計(jì)算機(jī)化注射器泵5。插管包括用于減小或消除待送遞的材料回流的裝置,例如延伸通過(guò)臺(tái)階式插管的管腔并且與待送遞的材料接觸的管(例如熔融石英)。圖1中描繪的典型實(shí)施方式顯示了總共具有四個(gè)"臺(tái)階"的插管2。顯而易見(jiàn)的是最靠近插管的遠(yuǎn)端的臺(tái)階是首先進(jìn)入目標(biāo)組織的那些臺(tái)階,因此進(jìn)入目標(biāo)組織(例如腦)的臺(tái)階數(shù)量將取決于達(dá)到受試動(dòng)物中的所述目標(biāo)所需的穿透深度。關(guān)于送遞到腦,考慮到正被處理的動(dòng)物的大小和正作為目標(biāo)的腦內(nèi)的位置,操作者可以容易地確定合適的穿透深度。如圖1所示,沿著插管的長(zhǎng)度,插管2的外徑以從近端到遠(yuǎn)端的方向在每一個(gè)臺(tái)階處減少。如此處使用的,近端指臨近從其施予產(chǎn)品的注射器4的點(diǎn),而遠(yuǎn)端指臨近產(chǎn)品遞送的最后末點(diǎn)的點(diǎn)(例如目標(biāo)組織)。圖1描繪了一個(gè)典型的實(shí)施方式,其中鄰接最近側(cè)臺(tái)階的兩個(gè)最近側(cè)管段具有近似相同的長(zhǎng)度,而四個(gè)最遠(yuǎn)側(cè)管段具有彼此之間和與兩個(gè)最近側(cè)管段之間不同的長(zhǎng)度。因而,將顯而易見(jiàn)臺(tái)階之間的一些、所有管段可以具有與其他管段相同的長(zhǎng)度或者沒(méi)有管段與其他管段的長(zhǎng)度相同。在下表中顯示了可以用于插管和/或包括插管的系統(tǒng)的各種部件的材料的非限定性例子部件(參考圖1)部分來(lái)源組分產(chǎn)品接觸在插管的遠(yuǎn)乂而的官1在尖端的熔融石英Polymicro硅石英和聚酰亞胺涂層是;僅僅在硅部分插管223G-15G的鋼管Ranfac不銹鋼否將插管2連接到注射器4的管3*熔融石英管Polymicro硅石英和聚酰亞胺涂層是;僅僅在硅部分注射器4注射器BDUSPVII級(jí)聚丙烯是泵5泵Medfusion多種材料否路厄接頭6路厄針座/鈍頭針(來(lái)自23Gxl附)BD(USPVII級(jí)聚丙烯)和不銹鋼是接頭**膠接接頭Locktight氰基丙烯酸酯是承FEPVI級(jí)管內(nèi)的熔融石英。FEP管并不具有產(chǎn)品接觸**1和2之間;2禾Q3之間;3禾口6之間圖2顯示了類(lèi)似于圖1中所示的典型系統(tǒng)的總視圖。圖2中所示的實(shí)施方式包括帶有熔融石英管12的臺(tái)階式不銹鋼插管10,所述熔融石英管穿過(guò)不銹鋼插管的管腔并且延伸超出插管的遠(yuǎn)端10。在圖2中也顯示了覆蓋熔融石英管12的管(FEP)13,以及路厄壓縮接頭14和在熔融石英管12和FEP管13之間的1英寸的不銹鋼(23ga)。路厄壓縮接頭14連接到注射器15,所述注射器轉(zhuǎn)而連接到泵16。在下表中闡述了可以用于制造例如圖2中所示的實(shí)施方式的典型材料和這些材料的典型商業(yè)來(lái)源<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>如圖所示,在某些實(shí)施方式中,管延伸通過(guò)插管的管腔并且待送遞的一種或多種產(chǎn)品通過(guò)該管被送遞。在包含管的實(shí)施方式中,管可以與插管的遠(yuǎn)端齊平。備選地,在優(yōu)選的實(shí)施方式中,管從插管的遠(yuǎn)端延伸。在這樣的實(shí)施方式中,管的延伸量取決于應(yīng)用而變化。通常,管將從插管延伸大約1mm至大約1cm(或者它們之間的任何長(zhǎng)度),更優(yōu)選地大約1mm至大約50mm(或者它們之間的任何長(zhǎng)度),甚至更優(yōu)選地大約lmm至大約25mm(或者它們之間的任何長(zhǎng)度,包括但不限于lmm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、llmm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm、21mm、22mm、23mm、24mm或25mm)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中,管延伸超出其遠(yuǎn)端大約10mm。如圖中所示,延伸通過(guò)插管的管可以在一個(gè)或多個(gè)區(qū)域中具有一個(gè)以上的涂層或圍繞材料,例如用以保護(hù)管免于與待送遞的產(chǎn)品接觸。因而,在某些實(shí)施方式中,管(例如FEP(特氟綸)管)保護(hù)延伸超出不銹鋼插管的近端的熔融石英管部分。熔融石英管可以通過(guò)任何合適的裝置連接到注射器,包括但不限于路厄壓縮接頭,并且注射器由注射器泵(人工的,電子的和/或計(jì)算機(jī)化的)驅(qū)動(dòng)。顯而易見(jiàn)的是注射器的尺寸可以由操作者選擇以送遞合適量的一種或多種產(chǎn)品。因而,可以使用lmL,2.5mL,5mL,甚至更大的注射器。在某些實(shí)施方式中,路厄壓縮接頭包括在熔融石英(內(nèi))管和FEP(外)管之間的1英寸不銹鋼23G間隔物??蛇x的間隔物在路厄壓縮接頭提供機(jī)械剛性并且當(dāng)使用Loctit浐粘合劑將套圈粘合就位時(shí)幫助密封內(nèi)外管之間的間隙。該間隙必須被填充以當(dāng)產(chǎn)品正被投遞到受試對(duì)象時(shí)防止其進(jìn)入內(nèi)外管之間的空間。優(yōu)選地,間隔物的近端僅僅代表這里所述的系統(tǒng)和插管的不銹鋼產(chǎn)品接觸表面。需要吋通過(guò)應(yīng)用Loctit^粘合劑或其他涂層以覆蓋間隔物的另外暴露端可以消除該極小的不銹鋼產(chǎn)品接觸表面,從而提供絕對(duì)不與產(chǎn)品接觸的不銹鋼系統(tǒng)。備選地間隔物可以由不同材料組成。圖3A描繪了制造這里所述的臺(tái)階式插管的選定典型步驟。也參見(jiàn)例1。特別地,減小回流的臺(tái)階設(shè)計(jì)插管可以以箭頭所示的順序(從頂部到底部)進(jìn)行組裝,即通過(guò)加入直徑遞增的部件(20,22,24,26,28,30)。因而,如例1中所述,各種長(zhǎng)度的管段接合在一起以形成臺(tái)階設(shè)計(jì)。當(dāng)插管由兩個(gè)或以上的構(gòu)件制造時(shí),接頭應(yīng)當(dāng)不允許材料從插管泄漏到目標(biāo)組織中,反之亦然(從目標(biāo)組織泄漏到插管中)。因此,接頭優(yōu)選被密封。可以用各種方式密封接頭,包括但不限于焊接(例如激光焊接),粘合劑,密封劑,加熱(例如對(duì)于熱塑聚合物)和它們的組合。顯而易見(jiàn)的是,密封的性質(zhì)將取決于用于制造插管的材料,例如焊接可以用于不銹鋼插管,而加熱可以用于熱塑聚合物。這里所述的臺(tái)階設(shè)計(jì)插管也可以形成單一整體構(gòu)件,例如通過(guò)如這里所述注射模塑臺(tái)階式插管。圖3B1-6描繪了這里所述的典型臺(tái)階式插管的組裝。如例1中所述,通過(guò)去除針套32和通過(guò)插管35插入內(nèi)管部件40直到它從插管的末端延伸來(lái)制備圖3A中所示的臺(tái)階式插管35(圖3B-1)。任何材料可以用于內(nèi)管部件40,包括但不限于熔融石英管。作為管的備選,顯而易見(jiàn)的是鋼制插管35的內(nèi)部可以涂有與待送遞的產(chǎn)品接觸的一種或多種材料,由此減小送遞期間到鋼制插管的產(chǎn)品損失。涂布不銹鋼材料的各種技術(shù)是已知的并且可以被使用。任選地,可以將粘合劑放置在管40上使得管被固定到針頭??梢允褂萌魏魏线m的粘合劑,例如Loctit^粘合齊!j。優(yōu)選地,粘合劑的粘結(jié)強(qiáng)度至少大約為41bs,更優(yōu)選地至少大約為51bs。在圖3B所示的實(shí)施方式中,針套32可以被放回并且預(yù)先被截長(zhǎng)度的管31(例如FEP管)在通過(guò)插管35的熔融石英管40上延伸(圖3B-2)。外管31的長(zhǎng)度可以由標(biāo)示確定并且在長(zhǎng)度上可以從IO英寸變化到5碼(或者它們之間的任何值)。因而,在某些實(shí)施方式中,外管覆蓋內(nèi)管的全長(zhǎng)并且可以延伸超過(guò)內(nèi)管。備選地,在其他實(shí)施方式中,外管31并不在內(nèi)管40的長(zhǎng)度上完全延伸(圖3B-2)。任何合適的粘合劑可以用于將外管31固定到組件,例如在外管31的末端。粘合劑的粘結(jié)強(qiáng)度優(yōu)選地至少大約為5lbs。如圖3B-3中所示,一個(gè)或多個(gè)間隔部件47可以插入到內(nèi)和/或外管40、31上。間隔物47可以由任何材料制造,包括金屬,金屬合金,聚合物和它們的組合。在某些實(shí)施方式中,間隔物47包括不銹鋼。間隔物47可以具有任何長(zhǎng)度,盡管它優(yōu)選地延伸并不超過(guò)針頭。任選地,可以包括一個(gè)部件以幫助密封組件的部件,例如一段長(zhǎng)度的PVC收縮管49。對(duì)于間隔和PVC管部件的典型尺寸參見(jiàn)例1。隨后,組件可以安裝在允許它方便地聯(lián)接到產(chǎn)品送遞儲(chǔ)器的一個(gè)或多個(gè)部件。例如,如圖3B-4中所示,適當(dāng)尺寸的陰路厄壓縮接頭50在一段長(zhǎng)度的外管31上滑動(dòng)并且將套圈51放置在外管31上,優(yōu)選地使得它與外管31的末端齊平??梢匀芜x地將粘合劑應(yīng)用到一個(gè)或多個(gè)部件(例如在將套圈安裝到所述末端上之前和/或在密封內(nèi)管、間隔物、外管和套圈之間的接頭之前應(yīng)用到外管的所述末端的外部)。例如通過(guò)在管上劃線并且折斷或截?cái)嗨桶惭b在路厄壓縮接頭50內(nèi)部的套圈51,可以去除從套圈51延伸的內(nèi)管40的長(zhǎng)度(圖3B-5)。可以加熱收縮管49以密封接頭。最后,可以將陽(yáng)路厄壓縮接頭55組裝和安裝到陰路厄壓縮接頭50和套圈51上。如上所述,這里所述的臺(tái)階式插管可以由生理可接受的各種材料制造,包括但不限于金屬,金屬合金,聚合物,有機(jī)纖維,無(wú)機(jī)纖維和/或它們的組合。在優(yōu)選的實(shí)施方式中,插管包括不銹鋼(例如316SS或304SS)。任選地,產(chǎn)品接觸表面(例如管或涂層)可以延伸通過(guò)插管的管腔。各種材料也可以用于任選的產(chǎn)品接觸表面,包括但不限于金屬,金屬合金,聚合物,有機(jī)纖維,無(wú)機(jī)纖維和/或它們的組合。優(yōu)選地,產(chǎn)品接觸表面不是不銹鋼。在這樣的實(shí)施方式中,外插管必須仍然由與目標(biāo)組織可生理相容的材料制造,但是由于沒(méi)有產(chǎn)品接觸,因此它不需要與生物活性劑或產(chǎn)品配方相容。類(lèi)似地,與管材料是否與生物活性劑或產(chǎn)品配方相容無(wú)關(guān),在這樣的實(shí)施方式中圖中所示的FEP(特氟綸)管可以用其他管替換。因而,在一個(gè)實(shí)施方式中,插管的產(chǎn)品接觸表面包括或由熔融石英組成(例如硅石英和聚酰亞胺涂層)(Polymicro,Phoenix,Arizona)。與其中所述產(chǎn)品暴露于不銹鋼的現(xiàn)有技術(shù)的插管相比熔融石英用于產(chǎn)品接觸表面大大減小了產(chǎn)品損失。的確,盡管59±14。%的腺伴隨病毒載體從用產(chǎn)品預(yù)沖洗的現(xiàn)有技術(shù)的注射設(shè)備回收(recovery),但是即使在沒(méi)有預(yù)沖洗的情況下也有101±6%從包括本發(fā)明的插管的設(shè)備回收。參見(jiàn)例2。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到除了熔融石英之外的材料可以用在本發(fā)明的插管中,只要這樣的材料具有所述生物活性劑的低表面相關(guān)損失的性質(zhì)。由其他材料制造的管可以用于替換熔融石英管,或者備選地插管的管腔可以涂有一種物質(zhì)以獲得實(shí)質(zhì)相同的結(jié)果。將使用的任選材料可以取決于生物活性劑的性質(zhì)而變化,并且可以由實(shí)驗(yàn)決定。由于表面積與體積的比率增加,因此使用具有小內(nèi)徑(ID)的管例如ID為100pm的熔融石英管可以期望減小而不是增加樣本的回收?;蛟S令人驚奇的是,使用小ID熔融石英管并不導(dǎo)致被送遞產(chǎn)品例如AAV載體的巨大損失。不想受到理論限制,當(dāng)使用更小的ID管保持給定送遞速度(單位時(shí)間送遞的產(chǎn)品體積)恒定時(shí)導(dǎo)致的線性流率增加可以解釋所述結(jié)果。另外,AAV似乎對(duì)于熔融石英的表面具有很小的親合力,這可以解釋低損失。用于例1中的熔融石英管的小ID具有減小系統(tǒng)的滯留體積的附加優(yōu)點(diǎn)。例如,ID為lOOjim的熔融石英管的四英尺長(zhǎng)的管段具有小于的管腔體積。這樣的小體積減小了樣本消耗并且由于送遞系統(tǒng)的滯留體積而顯著減小了樣本的浪費(fèi)。當(dāng)生物活性劑難以獲得和/或價(jià)格昂貴時(shí),例如許多重組蛋白或基因治療載體,產(chǎn)品浪費(fèi)的減少是特別有用的。圖4描繪了可以與這里所述的插管組合使用的典型注射器泵的總視圖。在圖4中顯示了注射器鞍座60,注射器夾62,注射器夾槽(保持器)64,離合杠桿66,注射器驅(qū)動(dòng)器68,注射器柱塞保持器70,液晶顯示器72和通/斷開(kāi)關(guān)74。在帶有這里所述的插管的系統(tǒng)中有用的注射器泵在商業(yè)上可獲得,例如名稱(chēng)為Medfbsion2010KMedex,Inc.,Carlsbad,California)。圖5描繪了包括這里所述的附連到立體定向架72的插管70的系統(tǒng)的總視圖。插管70也可以附連到注射器泵,例如通過(guò)管74。立體定向架在商業(yè)上可獲得,例如Lexell立體定向架(RanfacCorp.,Avon,Mass.)。在這里所述的任一系統(tǒng)中,產(chǎn)品接觸部分可以包括硅石英(插管中的熔融石英管),USPVII級(jí)聚丙烯(注射器和路厄針座),氰基丙烯酸酯(膠接接頭),和不銹鋼(23G間隔物)。典型地,這里所述的系統(tǒng)能夠?qū)a(chǎn)品送遞到腦并且與使用先前所述的系統(tǒng)相比遠(yuǎn)遠(yuǎn)更少地暴露于不銹鋼,其中產(chǎn)品沿著插管全長(zhǎng)的一些或全部與不銹鋼接觸。如本發(fā)明的設(shè)備和系統(tǒng)中所提供的產(chǎn)品暴露于不銹鋼的減少減小了損失。例如,如圖1的系統(tǒng)中所配置的圖3B-6中所示的插管具有幾乎全部包括熔融石英管和USPVII級(jí)聚丙烯注射器的產(chǎn)品接觸表面。僅有的其他接觸表面是熔融石英管的近端和注射器的路厄針座之間的膠接接頭,在所述位置產(chǎn)品接觸氰基丙烯酸酯膠粘劑和不銹鋼間隔物的近端的橫截面表面。在該系統(tǒng)中很少暴露于鋼。本發(fā)明的插管也可以組合臺(tái)階設(shè)計(jì)和內(nèi)部熔融石英產(chǎn)品接觸表面以提供回流減少、試劑的表面相關(guān)損失減少和滯留體積減小的改進(jìn)插管。本發(fā)明的插管可以使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)進(jìn)行消毒,例如通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)環(huán)氧乙烷。已消毒插管可以任選地被單獨(dú)包裝在Tyvd^袋中??梢允褂帽景l(fā)明的插管進(jìn)行送遞的試劑包括可以在目標(biāo)組織中具有預(yù)期作用的任何材料。例如,治療藥物,蛋白,質(zhì)粒或基因治療載體可以被送遞到受試對(duì)象的腦中。也可以加入非治療劑,例如用于成像、診斷或研究目的的染料,示蹤劑,造影劑和標(biāo)記物。例如,描述了逆轉(zhuǎn)錄病毒基因治療系統(tǒng)。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No.5,219,740;Miller禾口Rosman函rec—腦(1989)7:980:990;Miller,A.D.,if聰awG膨T77er卿(1990)l:5-14;Scarpa等人,腸/ogy(簡(jiǎn))180:849-852;Burns等人,/Voc.jVa".Jcac/.Sc〖'.(1993)90:8033-8037和Boris-Lawrie和Temin,Cwk(9;/".Deve/o;(1993)3:102-109。也描述了許多腺病毒載體。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.6,048,551,6,306,652,Parks,R丄,Clin.Genet.(2000)58:1-11;Tsai等人,Curr.Opin.Mol.Ther.(2000)2:515-523。另外,各種腺伴隨病毒(AAV)載體系統(tǒng)已被開(kāi)發(fā)用于基因送遞。AAV載體可以使用本領(lǐng)域中公知的技術(shù)容易地被構(gòu)造。例如參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.5,173,414和5,139,941;國(guó)際公開(kāi)Nos.W092/01070(公開(kāi)于1992年1月23日)和WO93/03769(公開(kāi)于1993年3月4日);Lebkowski等人,Afo/ec.Ce〃.Ao/.(1988)8:3988-3996;Vincent等人,Kacc/"es90(1990)(ColdSpringHarborLaboratoryPress);Carter,B.J.,Cw/re/^Qp/w'ow/"(1992)3:533-539;Muzyczka,N.,Cwre"/r—cs/"Mt'craZ/。/.朋(i/w扁朋/.(1992)158:97-129;Kotin,R.M.,i/w應(yīng)wGeweT7zer,(1994)5:793-謝;Shelling禾QSmith,G麼T7zer,(1994)1:165-169和Zhou等人,J(1994)179:1867-1875。本發(fā)明的插管可以用作向CNS投藥的常規(guī)增強(qiáng)送遞(CED)系統(tǒng)的一部分。例如,其全部公開(kāi)內(nèi)容被結(jié)合于此以作參考的美國(guó)專(zhuān)利No.6,309,634描述了基因治療的方法,其中試劑通過(guò)CED被送遞到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的區(qū)域。使用CED,重組體載體可以被送遞到在CNS的大面積上的許多細(xì)胞。而且,被送遞載體在CNS細(xì)胞(例如神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)中有效地表達(dá)轉(zhuǎn)基因。本發(fā)明的插管可以與送遞重組體載體的任何常規(guī)增強(qiáng)送遞設(shè)備一同使用。在一個(gè)實(shí)施方式中,所述設(shè)備是滲透泵或輸注泵。滲透和輸注泵兩者都可以在商業(yè)上從各種供應(yīng)商獲得,例如Alzet公司(Cuperino,California),Hamilton公司或Alza有限公司(PaloAlto,California)。本發(fā)明的插管也可以用于直接注射或其他不是CED的輸注方法。產(chǎn)品可以以各種流速被送遞到目標(biāo)組織,包括但不限于0.2,0.5,0.7,1.0,1.5,2.0,3.0,5.0,10,15或20(il/min。參考圖1A和2A中所示的實(shí)施方式,由于在這樣高的流速下過(guò)大的反壓,因此使用ID為100|im的四英尺熔融石英管難以獲得10-20|_il/min以上的流速。然而這并不代表在相對(duì)較低流速下優(yōu)選執(zhí)行的常規(guī)增強(qiáng)送遞方法的嚴(yán)重限制。由于泵缺少足夠慢的設(shè)置,因此使用圖1A和2A中所示的系統(tǒng)難以獲得低于0.2^/min的流速,但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員將能夠使用不同的泵和/或注射器配置獲得這樣低的送遞速度。在整個(gè)送遞過(guò)程中流速可以增加、減小或保持穩(wěn)定,因此當(dāng)產(chǎn)品被送遞到目標(biāo)組織時(shí)產(chǎn)品的壓力可以增加、減小或保持穩(wěn)定。在優(yōu)選的實(shí)施方式中,在整個(gè)送遞過(guò)程中流速可以保持基本恒定,而不是"斜線上升"到穩(wěn)定水平。典型地,重組體載體通過(guò)CED設(shè)備如下被送遞。將本發(fā)明的改進(jìn)插管插入到選定受試對(duì)象的CNS組織中。立體定向圖和定位設(shè)備例如可以從ASIInstruments,Warren,MI獲得。也可以通過(guò)使用由CT和/或MRI成像獲得的解剖圖進(jìn)行定位以幫助將注射設(shè)備引導(dǎo)到選定目標(biāo)。例2-5公開(kāi)了使用本發(fā)明的插管將編碼hAADC的基因送遞到人、大鼠和非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的腦。hAADC基因的送遞在帕金森氏癥(PD)的治療中可能是有幫助的。PD的部分特征在于黑質(zhì)中的多巴胺能神經(jīng)元逐漸損失和殼核中的多巴胺嚴(yán)重減少(Hor,^evWcz^975^Ato7Tmf.Dn^^6w化i饑Mo"o^Ser.(3):13-21)。AADC是多巴胺生物合成途徑中的一種酶,其將左旋多巴轉(zhuǎn)換成多巴胺。以前的研究表明編碼人類(lèi)AADC的cDNA轉(zhuǎn)移到大鼠或非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物殼核可以減少PD的動(dòng)物模型中的有效左旋多巴劑量,由此將紋狀體多巴胺獲得到正常水平(Bankiewicz等人(2000)五x/.7Vewra/.,164(1):2-14;Sanchez-Pernaute等人(2001)Mo/.J7^r.,4(4):324-30)。在人類(lèi)PD患者中,期望該治療降低左旋多巴要求和延長(zhǎng)觀察到藥物的有益臨床效果的持續(xù)時(shí)間。例2與附表和附圖一起提供了使用本發(fā)明的插管(臨床設(shè)備B)將基因送遞到靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的腦的實(shí)驗(yàn)方案(protocol)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將編碼hAADC(AAV-hAADC-2)的rAAV病毒體輸注到四只正常恒河猴的殼核中并且通過(guò)免疫組織化學(xué)確定AADC表達(dá)的分布。檢驗(yàn)兩個(gè)輸注實(shí)驗(yàn)方案變速程序(從0.2pL/min逐步慢速增加到lpL/min),和在l^L/min的恒定速度下的非變速輸注。在輸注后5.5周的初步端點(diǎn)進(jìn)行輸注程序的安全評(píng)價(jià)和轉(zhuǎn)基因表達(dá)的評(píng)估。載體輸注后的臨床觀察表明在研究期間沒(méi)有行為異常。用變速或非變速輸注程序未觀察到總體病癥的差異。組織病理學(xué)在兩個(gè)組中是相當(dāng)?shù)模瑑H僅發(fā)現(xiàn)響應(yīng)插管放置和載體輸注沿著針跡出現(xiàn)輕微局部炎性組織反應(yīng)。另外,AADC免疫組織化學(xué)證明載體分布于整個(gè)殼核,用兩種輸注程序在免疫染色的體積中沒(méi)有明顯差異。對(duì)抗AAV2載體的血清抗體水平在輸注后出現(xiàn)微小增加。以下例子僅僅被提供用來(lái)舉例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式,而不是限定或限制本發(fā)明。例l組裝和包裝程序A.典型插管#1如下生產(chǎn)一種典型的臺(tái)階式插管(例如如圖3A和3B中所示)。將不銹鋼管段截成一定長(zhǎng)度并且使用LasagNd:YAG或NeodiniumYAG(釔鋁石榴石)激光器(一種波長(zhǎng)范圍在454nm的紫外激光器)進(jìn)行焊接。檢驗(yàn)23G和19G管段之間的焊接無(wú)滲漏并且檢驗(yàn)所有焊接接頭耐受IOlbs的最小牽引力。23G和19G管段之間的焊接應(yīng)當(dāng)是無(wú)滲漏的以防止可能向上回流到針頭外部的任何產(chǎn)品滲漏到插管的管腔中。由于相同的原因,熔融石英管的暴露遠(yuǎn)端和插管的鋼管部分之間的膠接接頭應(yīng)當(dāng)是液密的。當(dāng)激光步驟完成之后鈍化和用超聲清潔針頭。將熔融石英管截?cái)嗖⑶矣们杌┧狨ツz粘劑組裝到不銹鋼插管。將BD針座附連到管的遠(yuǎn)端以完成組裝。在包裝之前,將塑料針套放置在插管的近端上以保護(hù)尖端,然后將整個(gè)組件包裝在預(yù)先標(biāo)記的丁7^乂@袋中進(jìn)行消毒。通過(guò)在管的芯管段20(9.67英寸長(zhǎng),23RW截?cái)啵?.0250/0.0255OD,0.0125/0.0140ID,0.006壁厚)上滑動(dòng)不銹鋼管的連續(xù)管段組裝注射針子組件(INSA)。參見(jiàn)圖3A。用英寸提供涉及內(nèi)徑(ID),外徑(OD)和管壁厚("壁厚")的所有尺寸,并且成對(duì)值X/Y代表最小和最大允許誤差?,F(xiàn)在參考圖3A,將管段22(8.28英寸長(zhǎng),19RW截?cái)啵?.0415/0.0425OD,0.0255/0.0285ID,0.0075壁厚)放置在芯管段20上以留下0.390英寸(10mm)延伸超出管段22的遠(yuǎn)端的芯管段。將管段24(6.31英寸長(zhǎng),17RW截?cái)啵?.0575/0.05850D,0.0405/0.0435ID,0.008壁厚)放置在管段20和22上以留下1.970英寸的延伸超出管段24的遠(yuǎn)端的管段22。將管段26(6.31英寸長(zhǎng),15RW截?cái)啵?.0715/0.0725OD,0.0595/0.0615ID,0.006壁厚)放置在管段20、22、24上以留下1.970英寸的延伸超出管段26的遠(yuǎn)端的管段22。將管段28(6.31英寸長(zhǎng),0.086/0.087OD,0.0735/0.0750ID,0.006壁厚)放置在管段20、22、24、26上以留下1.970英寸的延伸超出管段28的遠(yuǎn)端的管段22。將管段30(1.58英寸長(zhǎng),O,磨O.llOOD,0.0880/0.0895ID,0.010壁厚)放置在管段20、22、24、26、28上以留下7.090英寸的延伸超出管段30的遠(yuǎn)端的管段20。所有部件用激光焊接就位。使管段20和22之間的遠(yuǎn)側(cè)焊縫100%氣密,并且檢驗(yàn)管段1的內(nèi)部以保證沒(méi)有阻塞(例如使用0.012英寸直徑的絲線或套位針(gagepin))。所有的焊接接頭必須耐受10磅的最小牽引力。一旦被組裝,如下鈍化和用超聲清潔INSA:用Oakite鋁清潔10分鐘,用去離子水噴射清洗7分鐘,在酒精中用超聲清洗,風(fēng)干。將針套32(9.0英寸長(zhǎng),0.156OD,0.104/0.108ID,0.025壁厚)放置在組裝管段20、22、24、26、28、30上以留下0.8英寸的延伸超出組裝管段的近端的管段30。如下檢查INSAs無(wú)酸和清潔溶液的痕跡去除針套32,浸泡在酒精浴中,放回針套32,通過(guò)針套7的遠(yuǎn)端吹風(fēng),檢査管段20的近端的液體流出物,重復(fù)直到所有流出物看上去是清潔的。檢査INSA的遠(yuǎn)端以保證它是直的。圖3B示出了如這里所述的典型注射針組件的組裝。如圖3B-1中所示,如上所述從INSA35去除針套32,通過(guò)INSA35的23G芯管15擰入一段長(zhǎng)度的熔融石英管40,從近端開(kāi)始,直到延伸超出INSA35的遠(yuǎn)端大約2英寸。將Loctit^粘合劑(Loctite⑧Prism⑧4011粘合劑,低粘度)應(yīng)用到暴露的熔融石英管40,然后縮回熔融石英管直到大約1英寸保留在INSA的遠(yuǎn)端之外,同時(shí)旋轉(zhuǎn)INSA以均勻地分布粘合劑。粘合劑粘結(jié)的粘結(jié)強(qiáng)度至少為5磅。修剪暴露熔融石英管使得保留0.3卯英寸(10mm)從INSA的遠(yuǎn)端延伸,并且放回針套32。準(zhǔn)備48英寸長(zhǎng)的FEP(特氟綸)管(1A60D,0.030ID)31,兩端浸入Loctit^引物(Loctite7701引物)中并且風(fēng)干。通過(guò)FEP管擰入熔融石英管40的近端。將Loctit^粘合劑應(yīng)用到INSA的近端。在INSA的針端上快速地推動(dòng)FEP管31的遠(yuǎn)端。粘合劑粘結(jié)的粘結(jié)強(qiáng)度至少為4磅。如圖3B-3中所示,將23G不銹鋼間隔物47(1英寸長(zhǎng),23RW)放置在熔融石英管40上。將Loctit浐粘合劑應(yīng)用到熔融石英管40的外部和間隔物47的外部,并且將間隔物47插入到FEP管31的近端直到近端齊平。在FEP管31的近端上滑動(dòng)0.5英寸長(zhǎng)的PVC收縮管49的管段((U25ID)。如圖3B-4中所示,然后在FEP管31的近端上滑動(dòng)1/16陰路厄壓縮接頭50并且在FEP管31的近端之上大約1英寸放置套圈51。將Loctit^粘合劑應(yīng)用到FEP管31的外部并且推動(dòng)套圈51以將套圈的近端放置成與FEP管31的近端齊平。應(yīng)用Loctite⑧粘合劑以密封熔融石英管40,間隔物47,F(xiàn)EP管31和套圈51之間的接頭。劃線和折斷延伸超出套圈51的近側(cè)剩余熔融石英管40。如圖3B-5中所示,將套圈51妥貼地安置在路厄壓縮接頭50中(3磅的最小牽引力),然后在INSA35的近端和FEP管31之間的接頭上熱收縮熱收縮管49。檢驗(yàn)組件的漏氣,并且將陽(yáng)路厄帽55加入到壓縮接頭50。(圖3B-6)。組裝的INA然后可以被包裝和密封到帶有標(biāo)簽的Tyvd^袋(4x23英寸)中,并且放置在標(biāo)記盒中進(jìn)行存儲(chǔ)和運(yùn)輸。盡管管31由特氟綸FEP制造,本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可以使用任何合適的管材料,或者管可以完全被省略。FEP管31作為熔融石英管40的保護(hù)裝置被包括,用于幫助保證系統(tǒng)的操作者可見(jiàn)很薄的熔融石英管。這些功能都不是必要的。另外,由于FEP管并不接觸材料,因此可以不考慮生物相容性而使用其他材料的管。如這里所述生產(chǎn)的成品插管包括五層不銹鋼管,其長(zhǎng)度超過(guò)6.31英寸(例如所述長(zhǎng)度包括管元件28),內(nèi)徑為0.0125-0.0140英寸,外徑為0.086-0.087英寸。該插管沿著該管段具有相當(dāng)大的剛性,這防止當(dāng)插管插入到目標(biāo)組織(例如腦)中時(shí)撓曲。另外,第六層鋼管30在1.58英寸的管段上為插管增加了更大的強(qiáng)度,這防止當(dāng)插管在使用期間安裝到立體定向架中時(shí)被壓碎或變形,如圖5中所示。B.典型插管#2類(lèi)似于例1A中所述的插管生產(chǎn)另一種插管。如圖6中所示,插管80由在臺(tái)階設(shè)計(jì)中通過(guò)激光焊接熔融在一起的四層304外科鋼組成,終止于30號(hào)管。鋼插管(首尾大約24.6cm,包括針尖)與lOOpm內(nèi)徑的熔融石英82成直線,所述熔融石英也通過(guò)延伸超出鋼lcm形成送遞設(shè)備的尖端。覆蓋有特氟綸管84的大約1.2米(122cm)的附加熔融石英82連接到路厄針座86。熔融石英和特氟綸管之間的1英寸的30號(hào)鋼間隔物88用醫(yī)用級(jí)氰基丙烯酸酯膠粘劑密封和附連到路厄針座。例2將編碼AADC的重組體病毒載體送遞到靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的腦如下制備編碼人類(lèi)AADC(AAV-hAADC-2)的重組體AAV載體并且將其送遞到恒河猴的殼核。重組體載體生產(chǎn)通過(guò)三重轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方案生成重組體AAV2(Matsushita等人(1998)rAw,5(7):938-45)。簡(jiǎn)單地說(shuō),當(dāng)來(lái)自HEK293工作細(xì)胞庫(kù)的細(xì)胞通過(guò)在包含10%胎牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM的一次性培養(yǎng)器具中的一系列擴(kuò)張之后,細(xì)胞與三種質(zhì)粒(pAAV-hAADC-2,pHLP19和pladno5)共轉(zhuǎn)染。rAAV-hAADC-2載體克隆與前述相同(Sanftner等人(2004)Mo/.T7ze。9(3):403-9)。在美國(guó)專(zhuān)利Nos.5,139,941;5,622,856;6,001,650和6,004,797中更完整地描述了質(zhì)粒pHLP19和pladeno5,上述專(zhuān)利的全部公開(kāi)內(nèi)容被結(jié)合于此以作參考。在合適的轉(zhuǎn)染時(shí)間之后,用無(wú)血清培養(yǎng)基替換包含轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)基并且進(jìn)一步培育細(xì)胞以允許載體生產(chǎn)。細(xì)胞被采集,通過(guò)離心分離被濃縮,并且通過(guò)冷凍/解凍法被溶解以釋放AAV-hAADC-2載體。當(dāng)離心分離以去除細(xì)胞碎片之后,溶解物用Benzonas^氯化鈣進(jìn)行處理,并且用聚乙二醇進(jìn)行沉淀。通過(guò)在氯化銫中進(jìn)行兩輪等密度梯度超速離心純化載體。濃縮AAV-hAADC-2,并且用包含5%山梨醇的無(wú)菌緩沖鹽水(PBS)進(jìn)行透析。加入Poloxamer188(0.001%),材料進(jìn)行消毒過(guò)濾(0.22pm),并且在-70。C冷凍存儲(chǔ)。通過(guò)SDS-PAGE評(píng)估載體純度。用在該研究中的純化rAAV2載體通過(guò)SDS-PAGE凝膠的銀染色僅僅顯示了VP1,VP2,和VP3。滴定度由載體基因組的實(shí)時(shí)Q-PCR分析確定。手術(shù)程序在手術(shù)前在每個(gè)猴子上執(zhí)行磁共振成像(MRI)以識(shí)別立體定位坐標(biāo)(stereotaxiccoordinates)(基于殼核的解剖結(jié)構(gòu))。在每個(gè)腦半球中以?xún)蓚€(gè)部位作為目標(biāo),一個(gè)部位居中于前殼核(rostralputamen)中,另一個(gè)部位在尾殼核中。成年恒河猴(n二4)用氯胺酮(Ketaset,10mg/kg,肌內(nèi)注射)禾卩Valium(0.5mg/kg,靜脈注射)進(jìn)行固定,進(jìn)行插管并且供手術(shù)備用。以2mL/kg/hr的速度靜脈送遞等滲流體。引入5^v/v異氟烷(Aerane,OmedaPPD,Inc.,Liberty,NewJersey)的麻醉劑,然后在手術(shù)期間保持在r^-3^v/v。將動(dòng)物的頭放置在MRI相容立體定向架中。在程序期間用循環(huán)水毯保持核心溫度,同時(shí)連續(xù)監(jiān)視心電圖,心率,氧飽和度和體溫。在顱骨中用牙鉆制造鉆孔以暴露恰好在目標(biāo)部位之上的硬膜區(qū)域。通過(guò)CED輸注AAV-hAADC-2(Lieberman等人(1995),82(6):1021隱9;Bankiewicz等人(2000)£平臉"ra/.,164(1):2-14)。每個(gè)猴子總共接收在四個(gè)部位上散布的3xl0"vg的200nL(每個(gè)部位50pL,每個(gè)腦半球兩個(gè)部位)。手動(dòng)地將輸注插管引導(dǎo)到每個(gè)腦半球中的殼核,并且動(dòng)物接收AAV-hAADC-2(1.5x10'2vg/mL)的雙側(cè)輸注(即順序輸注到兩個(gè)腦半球中的前和尾部位),在腦左半球的輸注速度為0.2pL/min(10min),0.5(iL/min(10min),0.8(iL/min(10min)禾卩l(xiāng)jiL/min(35min),在腦右半球的恒定速度為1^L/min(50min)。每個(gè)動(dòng)物的實(shí)際立體定位坐標(biāo)為MR15101M前殼核AP:18,ML:士10.5,DV:20,尾殼核AP:15,ML:±13,DV:20,R211101M前殼核AP:24,ML:±12.5,DV:20,尾殼核AP:21,ML:士13.5,DV:20,MR15109M前殼核AP:12,ML:土13,DV:20,尾殼核AP:15,ML:±12,DV:20,R23700M前殼核AP:21,ML:士13.5,DV:21,尾殼核AP:24,ML:士12.5,DV:20。在輸注之后大約10分鐘,去除插管,閉合傷口部位,并且監(jiān)視猴子從麻醉恢復(fù)然后返回到它的居住籠子中以進(jìn)行繼續(xù)觀察。組織學(xué)和免疫組織化學(xué)為了組織學(xué)研究,通過(guò)心內(nèi)鹽水輸注之后用10%的中性緩沖福爾馬林(NBF)灌注動(dòng)物。然后取出腦并且在腦模具中切片成冠狀切塊(coronalblocks)(8-10mm)。通過(guò)浸入到10X的NBF固定劑中固定收集的腦切塊。在固定后2-3天將組織切塊轉(zhuǎn)移到上升濃度的PBS/蔗糖溶液(10、20和30%)中3-5天時(shí)間以上。在異戊垸浴中冷凍腦,在干冰上冷卻并且在恒冷器上連續(xù)切割成40pm厚的冠狀切片。每個(gè)第十個(gè)切片用蘇木精和伊紅(H&E)溶液(RichardAllenScientific,Kalamazoo,MI)染色供組織病理分析。在自由浮動(dòng)切片上用AADC特異的一抗(Chemicon,Temecula,CA,1:1,500)執(zhí)行免疫組織化學(xué)。在3%的過(guò)氧化氫中孵育切片30分鐘以猝滅內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。當(dāng)用10%的正常山羊血清阻滯非特異性結(jié)合之后,在室溫下在一抗中孵育切片過(guò)夜,然后在室溫下使用生物素化抗兔IgG抗體(VectorLaboratories,Burlingame,CA,1:300)和抗生蛋白鏈菌素共軛辣根過(guò)氧化物酶(VectorLaboratories,1:300)各1小時(shí)。用3-3,-二氨基聯(lián)苯胺(DAB,VectorLaboratories)和過(guò)氧化氫顯示復(fù)合物。將切片固定至USuperfrostPlus⑧玻片上(BrainResearchLaboratories,Newton,MA),干燥,在上升乙醇系列中脫水,在二甲苯中清潔,用Cytoseal-XYL(Richard-AllenScientific,Kalamazoo,MI)固定。hAADC免疫染色的前-后分布由公式(nx10x40pm)確定,其中n是帶有hAADC陽(yáng)性細(xì)胞的切片的數(shù)目,404m是切片的厚度,并且檢査每個(gè)第十個(gè)切片。在系列切片(每個(gè)第十個(gè))中評(píng)估分布的體積,在配備攝像機(jī)和Stereoinvestigator體視軟件的Zeiss顯微鏡(Microbrightfidd,Williston,VT)上在63X的放大倍數(shù)下使用基于光學(xué)分餾器—光學(xué)剝離器設(shè)計(jì)的立體方法染色AADC。每組的CEE〈5X。結(jié)果被報(bào)告為平均值士SD。史蒂頓特t檢驗(yàn)用于測(cè)量統(tǒng)計(jì)意義。實(shí)時(shí)定量PCR用在該研究中的載體AAV-hAADC-2包含人類(lèi)AADC目標(biāo)cDNA。實(shí)時(shí)Q-PCR引物和探針與AADC基因的外顯子2和3退火,從而生成在載體序列中不存在的內(nèi)含子,由此最小化基因組DNA的擴(kuò)增。用包含插入載體的線性化質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)時(shí)Q-PCR并且如先前所述量化載體基因組(Sommer等人(2003)Mo/.77zw,7(l):122-8)。中和AAV抗體滴定在基于細(xì)胞的測(cè)定中體外確定血清或血漿的中和抗體(NAb)滴定度。在將混合物加入到96孔板中的即將融合的HEK-293細(xì)胞之前在37。C用試驗(yàn)血清孵育編碼(3-半乳糖苷酶報(bào)告基因(AAV2-LacZ)的限定數(shù)目的AAV2載體顆粒lh。對(duì)照(100%)AAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)被定義為當(dāng)存在初次接受試驗(yàn)的小鼠血清(NMS)的情況下用AAV2-LacZ轉(zhuǎn)導(dǎo)之后24h在培養(yǎng)中測(cè)量的(3-半乳糖苷酶活性。進(jìn)行NMS中試驗(yàn)血清的半對(duì)數(shù)系列稀釋以確定導(dǎo)致(3-半乳糖苷酶表達(dá)的50%或更高抑制的試驗(yàn)血清的最高稀釋。每個(gè)稀釋系列重復(fù)三次檢驗(yàn)。在每次測(cè)定中操作被完善定義的AAV2中和滴定度的參考血漿并且陰性對(duì)照(僅僅NMS)用于確定測(cè)定背景。NAb的滴定度被定義為保持50%抑制水平的兩種稀釋?zhuān)?:100-1:316。橋接ELISA用AAV2顆粒包被滴定板(96孔),然后用試驗(yàn)樣本(血清或血漿)孵育。沖洗板,然后用生物素化AAV2顆粒進(jìn)行孵育,然后用HRP共軛抗生蛋白鏈菌素進(jìn)行檢測(cè)。生物素化AAV2顆粒僅僅可以由在兩個(gè)AAV2顆粒之間形成橋接的多價(jià)抗體俘獲。該測(cè)定中很低的非特異背景信號(hào)允許檢驗(yàn)試驗(yàn)顆粒的不稀釋或低稀釋?zhuān)⑶覝y(cè)定具有比經(jīng)典ELISA更高的靈敏度,其中試驗(yàn)樣本中的一抗由酶聯(lián)二抗檢測(cè)。橋接測(cè)定允許不同物種和種類(lèi)的抗體之間的直接滴定比較。用識(shí)別AAV2的已知數(shù)量的純化單克隆的小鼠抗體"A20"使測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化(Grimm等人,1998)。該測(cè)定的量化限度大約為15ng/mL抗AAV2抗體。NAb滴定度為1:100的人樣本包含l-10pg/mL的A20等效抗體。通過(guò)該測(cè)定受到重復(fù)試驗(yàn)的65個(gè)人樣本的平均中間測(cè)定變率為23%。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)重組體AAV2載體有效地轉(zhuǎn)導(dǎo)腦組織,但是當(dāng)存在高中和抗體(NAb)滴定度01:1200)的情況下轉(zhuǎn)導(dǎo)水平顯著下降(Sanftner等人(2004)iWo/.77^:,9(3):403-9)。所以,選擇NAb滴定度^1:100的四只公恒河猴用于AAV2輸注(表1)。在送遞AAV2之前執(zhí)行MRI掃描以確定用于載體投遞的立體定向坐標(biāo)。在每個(gè)腦半球中(3.0xl0"vg/腦)用50|il1.5xl0"vg的AAV-hAADC-2輸液(7.5x10g/部位)雙側(cè)車(chē)俞注動(dòng)物。0.2}aL/min(10min),0.5|iL/min(10min),0.8(iL/min(10min)和l|iL/min(35min)的上升輸注速度(變速)用于腦左半球,而50minlpL/min的恒定速度用于腦右半球。監(jiān)視動(dòng)物5.5周,時(shí)間間隔滿足hAADC表達(dá)變得相對(duì)穩(wěn)定。初步端點(diǎn)包括由免疫組織化學(xué)確定的AADC表達(dá)和由臨床觀察和組織病理學(xué)確定的安全評(píng)估。另外,檢驗(yàn)在基線和在研究結(jié)束時(shí)收集的血清樣本是否存在抗AAV的中和和全抗體。表l抗AAV血清抗體(NAB)滴定度和橋接ELISA數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>輸注設(shè)備發(fā)展和載體回收供人使用的一種原型(prototype)輸注設(shè)備("臨床設(shè)備A",或CDA)由25cm的不銹鋼插管組成,所述插管被制造成安裝標(biāo)準(zhǔn)Leksdf立體定向架。CDA插管由四層臺(tái)階式醫(yī)用級(jí)不銹鋼管組成以提供剛性和最小化內(nèi)部滯留體積。鋼制CDA插管通過(guò)1.2米的Teflor^管連接到注射器。在高達(dá)lpL/min的流速進(jìn)行載體回收研究表明90%的載體產(chǎn)品吸附到設(shè)備(表2),盡管0.01%的泊洛沙姆(Poloxamer)188作為表面活性劑包括在產(chǎn)品配方中。用載體沖洗設(shè)備1小時(shí)提高了隨后的回收,但是載體損失仍然接近40%。載體吸收的進(jìn)一步檢驗(yàn)包括檢驗(yàn)臺(tái)階式不銹鋼插管,其中產(chǎn)品在2^L/min流速下接觸不同管材料。(例子1A和1B)。對(duì)于包括與AAV載體接觸的熔融石英,Tygon,和硅樹(shù)脂管的插管,觀察到優(yōu)質(zhì)的載體回收。諸如鋼,特氟綸(PTFE和FEP)和聚酰亞胺這樣的其他材料結(jié)合相當(dāng)數(shù)量的載體。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>僅僅在低流速下觀察到大量載體損失。例如,在特氟綸管中,載體損失與線性流速成反比。在1^1/min的速度下?lián)p失百分之九十的載體(4mm/min通過(guò)1.2米的管),而在100pL/min以上的流速下在相同的管中可以獲得可接受的載體回收(>80%)。為了最大化線性流速和消除載體與特氟綸和鋼表面的所有接觸,臨床設(shè)備的整個(gè)芯部順內(nèi)徑為100pm的熔融石英排列(line)(例子1B,圖6)。在該設(shè)備中("臨床設(shè)備B",或CDB),鋼插管?chē)@熔融石英以提供剛性,并且熔融石英延伸超出鋼插管的尖端10mm(圖6)??拷樇獾膬蓚€(gè)外部臺(tái)階被包括以最小化沿著針跡的潛在回流。1.2米的附加熔融石英將CDB插管連接到路厄針座并且僅僅由特氟綸管覆蓋以提供保護(hù)。CDB按照cGMP制造和組裝并且最終由環(huán)氧乙烷氣體消毒。用臨床前和臨床設(shè)備通過(guò)模仿輸注評(píng)價(jià)載體的定量回收。對(duì)于臨床前設(shè)備,將400|iL的載體溶液從遠(yuǎn)端抽吸到一段長(zhǎng)度的特氟綸管中,然后將特氟綸管耦合到7cm的插管,所述插管由被一件4cm的27號(hào)(27-gauge)鋼管?chē)@的熔融石英組成。當(dāng)在lOOpL/min的速度下充注插管之后,在收集載體供回收測(cè)定之前進(jìn)行附加的20pL沖洗。用可編程注射泵在從0.2到1.(VL/min的流速下(變速程序)從兩個(gè)設(shè)備收集四個(gè)樣本。如表2中所示,在這些條件下從臨床前設(shè)備的平均載體回收為63±16%(士SD)。對(duì)于臨床設(shè)備,將AAV-hAADC-2載體稀釋到5xlO"vg/mL,裝載到注射器中并且附連到設(shè)備。在充注之后,在8pL/min的速度下用500pL的載體溶液沖洗臨床設(shè)備A(62.5min),而在4pL/min的速度下用50pL的載體溶液沖洗臨床設(shè)備B(12.5min)。在從0.2到LOpL/min的流速下從每種設(shè)備的三個(gè)組收集兩個(gè)50pL的順序等分試樣。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(Q-PCR)確定每個(gè)樣本中的載體濃度。在一小時(shí)的延長(zhǎng)沖洗之后臨床設(shè)備A的回收僅僅為60±15%,而臨床設(shè)備B觀察到載體的完全回收(101±6%)。通過(guò)確定傳染滴定度確認(rèn)載體樣本從臨床設(shè)備B回收的能力(參見(jiàn)Zhen等人(2004)/7wm.772a,15(7):709-715)。未觀察到比活度(感染單位/vg)的顯著減小。體內(nèi)hAADC表達(dá)的免疫組織化學(xué)和量化在AAV-hAADC-2輸注后5.5周在每個(gè)腦半球上執(zhí)行hAADC表達(dá)的免疫組織化學(xué)分析以確定在用臨床設(shè)備B進(jìn)行變速和非變速輸注之后載體分布是否不同。所有猴子在殼核內(nèi)呈現(xiàn)hAADC表達(dá)。用明視場(chǎng)顯微鏡檢查系列切片的hAADC陽(yáng)性細(xì)胞。確定所有動(dòng)物的hAADC轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞的分布體積和前-后(A-P)散布。圖7在通過(guò)輸注部位的橫截面中顯示了hAADC轉(zhuǎn)基因的免疫組織化學(xué)染色。圖像是來(lái)自動(dòng)物MR15102M(A),MR15109M(B),R23700M(C)和R211101M(D)的整體切片。從尾部視角定向切片,腦右半球在圖像的右側(cè),腦左半球在圖像的左側(cè)。在所有動(dòng)物中,將轉(zhuǎn)基因表達(dá)定位到殼核。如圖7B中所示除了與輸注軌跡成直線的區(qū)域之外在皮層區(qū)域中未檢測(cè)到hAADC表達(dá)。在左右腦半球的比較中發(fā)現(xiàn)AADC陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量或hAADC染色強(qiáng)度無(wú)差異。來(lái)自接收變速輸注的腦左半球(圖8A)和接收非變速輸注的腦右半球(圖8B)的代表動(dòng)物中的殼核的輸注部位的高倍放大圖像示出了中間脊神經(jīng)元(spinyneurons)中的hAADC轉(zhuǎn)基因表達(dá)。在所有的(8/8)輸注腦半球中可以看到hAADC表達(dá)免疫組織化學(xué)染色。用變速(腦左半球)或非變速(腦右半球)輸注程序投遞AAV-hAADC-2導(dǎo)致AAV-hAADC-2的良好表達(dá)和類(lèi)似分布的殼核覆蓋。用抗hAADC抗體染色的系列切片中hAADC分布的估計(jì)體積的量化用Stereoinvestigator體視軟件(Microbrightfield,Williston,VT)執(zhí)行。獨(dú)立地確定四個(gè)AAV處理非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的每個(gè)腦半球的前-后(A-P)分布,從前到尾分布的一維測(cè)量,和hAADC免疫染色的體積(表3)。左或右腦半球的平均A-P分布和平均體積均基于四個(gè)腦半球。腦左半球(變速送遞)的平均A-P分布為9,600|im±2,422|im(SD)并且平均體積為238mm3±121mm3。腦右半球(非變速送遞)的平均A-P分布為9,606pm士2,037(im并且平均體積為284mm3±55mm3。通過(guò)不成對(duì)史蒂頓特t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在變速或非變速之間平均體積或平均A-P分布沒(méi)有顯著差異(對(duì)于A-P分布比較P^0.9973,對(duì)于散布體積比較P二0.5187)。非變速輸注并不導(dǎo)致沿著插管軌跡的載體回流或轉(zhuǎn)基因衍生hAADC分布的減小。回流的缺乏可能部分是由于插管的多臺(tái)階式設(shè)計(jì)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>組織病理學(xué)在所有動(dòng)物上執(zhí)行H&E染色的系列切片的組織病理分析以確定插管放置和用變速或非變速送遞進(jìn)行AAV-hAADC-2輸注的效果。圖9在5X的放大倍數(shù)下顯示了來(lái)自代表動(dòng)物R211101M的殼核中的H&E染色的切片。動(dòng)物R211101M通過(guò)腦右半球(畫(huà)面A)中的非變速輸注程序和腦左半球(畫(huà)面B)中的變速輸注程序接收AAV-hAADC-2的雙側(cè)CED。圖像示出了鄰近在中間尾殼核層(level)的插管軌跡的區(qū)域。無(wú)視治療條件,所有H&E染色的切片由神經(jīng)病理學(xué)家(neuropathologist)(PathologyAssociatesInc.)復(fù)查。用輕度血管周套袖(perivascularcuffing)在殼核中看到一些單核細(xì)胞滲濾。兩個(gè)殼核都包含少許滲濾血管和輕度血管周滲濾。左右腦半球的組織病理外觀是類(lèi)似的,在輸注部位有輕微的炎性組織反應(yīng)。中和抗體的發(fā)展在輸注載體之前和在尸檢時(shí)收集的血清樣本中確定抗體(NAb)和全抗體對(duì)AAV衣殼的滴定度。通過(guò)雙側(cè)輸注AAV-hAADC-2之后所有動(dòng)物中的橋接ELISA檢測(cè)抗AAV抗體水平的輕微上升(表l)。在表l中顯示了兩個(gè)NAb測(cè)定的結(jié)果。用抗AAV2小鼠單克隆抗體使橋接ELISA標(biāo)準(zhǔn)化。顯示了處理后樣本的兩個(gè)結(jié)果的平均值并且顯示了處理前樣本的單一結(jié)果。在處理前具有最高血清中和抗體滴定度(1:10-1:100)的動(dòng)物(R23700M)在處理后第42天抗體增加到1:31-1:316。與其他動(dòng)物相比該動(dòng)物具有類(lèi)似的hAADC轉(zhuǎn)基因分布,因而沒(méi)有與更高滴定度相關(guān)聯(lián)的載體散布的明顯抑制。臨床觀察每天評(píng)價(jià)猴子的臨床體征,食物消耗,和體重。手術(shù)后的每日臨床觀察表明動(dòng)物很好地忍受CED程序而且并不顯示行為變化。沒(méi)有AAV-hAADC-2處理相關(guān)的臨床體征或體重變化。在處理后期間進(jìn)行的觀察類(lèi)似于在經(jīng)歷類(lèi)似手術(shù)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室恒河猴中通常觀察到的那些現(xiàn)象。結(jié)果檢驗(yàn)本發(fā)明的插管的實(shí)施方式以評(píng)估其將rAAV載體有效送遞到靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物腦的能力,靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的腦可以用作送遞治療rAAV載體以治療人類(lèi)患者中的帕金森氏癥的模型。被設(shè)計(jì)成檢驗(yàn)載體送遞的模擬輸注證實(shí)可以用這里所述的插管送遞實(shí)質(zhì)100%的預(yù)期劑量,優(yōu)選地避免了載體與特氟綸或鋼表面接觸。通過(guò)變速(輸注速度分段增加)和非變速(恒定速度)輸注程序的比較執(zhí)行AAV-hAADC-2立體定向投遞到四個(gè)非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的殼核中。hAADC的表達(dá)可由免疫組織化學(xué)檢測(cè)并且廣泛地分布在殼核中。轉(zhuǎn)基因衍生hAADC的體積的體視量化證明在接收兩個(gè)輸注程序的腦半球中具有類(lèi)似分布。此外,恒定流速并不導(dǎo)致沿著針跡的過(guò)度載體沉淀。組織病理分析表明位于插管插入軌跡的區(qū)域的僅僅輕微的炎性反應(yīng),不建議安全關(guān)注。在左右殼核(即變速和非變速輸注)之間細(xì)胞滲濾或發(fā)炎的程度沒(méi)有明顯差異。在手術(shù)和殼核內(nèi)輸注之后未在任何動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)異常臨床觀察。除了設(shè)備和輸注參數(shù)之外,將AAV媒介基因有效送遞到任何部分的另一重要考慮是抗AAV抗體產(chǎn)生的潛在中和。在人類(lèi)中存在范圍很廣的預(yù)先存在的AAV中和抗體滴定度(Blacklow等人(1968)J.Ato/.Q^cer/"",40(2):319-27),其具有不利地影響基因治療技術(shù)的功效的可能性。任何AAV媒介基因治療方法必須預(yù)見(jiàn)到這樣的障礙。例如,在利用SCID小鼠的模型系統(tǒng)中,其中可以在各種水平建立人類(lèi)AAV2中和抗體滴定度,觀察到在靜脈內(nèi)投遞之后滴定度<1:10顯著影響AAV因子IX的肝轉(zhuǎn)導(dǎo)(Scallan等人(2004)^men'c朋5bcZe(yo/777erap_y,Minneapolis,畫(huà),Abstract#753S286)。由于CNS的免疫優(yōu)先狀態(tài),因此假設(shè)AAV2送遞到殼核不太受到循環(huán)抗體中和。實(shí)際上,在用AAV2進(jìn)行系統(tǒng)預(yù)免疫然后進(jìn)行紋狀體內(nèi)輸注的大鼠中進(jìn)行的研究證實(shí)僅僅當(dāng)Nab滴定度超過(guò)1:1200時(shí)才明顯觀察到來(lái)自中和的保護(hù)和轉(zhuǎn)導(dǎo)減少(Sanftner等人(2004)Mo/,772",9(3):403-9)。這里所述的實(shí)驗(yàn)利用預(yù)先存在的NAb滴定度范圍從1:1到1:100的動(dòng)物以便排除作為混淆變量的中和抗體,并且這些滴定度對(duì)殼核中的hAADC表達(dá)沒(méi)有顯著影響。而且,輸注后滴定度在載體投遞后僅僅稍微上升,由此用當(dāng)前的設(shè)備和輸注條件確認(rèn)良好靶向和極小破壞的基因送遞。這些結(jié)果也暗示了AAV2的重復(fù)紋狀體內(nèi)輸注到人類(lèi)患者中是可行的??偠灾?,AAV-hAADC-2通過(guò)本發(fā)明的輸注設(shè)備(臨床設(shè)備B)非變速輸注到猴子殼核是很有耐受性的。轉(zhuǎn)基因(hAADC)表達(dá)和在殼核中的分布與更復(fù)雜和耗時(shí)的變速上升流動(dòng)條件是相當(dāng)?shù)摹<僭O(shè)神經(jīng)變性疾病和其他CNS病癥的基因治療是擴(kuò)展領(lǐng)域(Tinsley和Eriksson(2004)ActaNeurol.Scand.,109(1):1-8),本結(jié)果暗示了臨床設(shè)備B的設(shè)計(jì)代表該領(lǐng)域的方法學(xué)的重要進(jìn)步。本發(fā)明的設(shè)備和輸注參數(shù)可能應(yīng)用于AAV2紋狀體送遞到PD患者中,并且也應(yīng)用于靶向不同解剖部位,送遞各種治療藥物或基因治療劑,并且處理各種CNS臨床指標(biāo)。例子想要用于舉例說(shuō)明本發(fā)明而不是通過(guò)它們的細(xì)節(jié)限制本發(fā)明的權(quán)利要求的范圍。盡管描述了本發(fā)明的優(yōu)選例舉實(shí)施方式,本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是可以在其中進(jìn)行各種變化和改進(jìn)而不脫離本發(fā)明,并且想要在后附權(quán)利要求中涵蓋落入本發(fā)明的實(shí)際精神和范圍內(nèi)的所有這樣的變化和修改。這里引用的所有出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)出版物被全文結(jié)合于此以作參考。權(quán)利要求1.一種臺(tái)階式插管,其具有外徑,遠(yuǎn)端,近端和在近端和遠(yuǎn)端之間延伸的管腔,所述臺(tái)階式插管包括兩個(gè)或以上的同軸布置的管段,每個(gè)管段具有限定該插管的外徑的外徑,其中該管段的外徑是不同的。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的臺(tái)階式插管,其包括兩個(gè),三個(gè),四個(gè),五個(gè)或六個(gè)同軸布置的管段。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的臺(tái)階式插管,其中該管段的外徑從該插管的近端到遠(yuǎn)端減小。4.根據(jù)權(quán)利要求l-3任何之一所述的臺(tái)階式插管,其中該插管的內(nèi)徑是恒定的。5.根據(jù)權(quán)利要求l-4任何之一所述的臺(tái)階式插管,其進(jìn)一步包括延伸通過(guò)該插管的管腔的一個(gè)或以上的管狀部件。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的臺(tái)階式插管,其中至少一個(gè)管狀部件包括熔融石英管。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的臺(tái)階式插管,其進(jìn)一步包括圍繞該熔融石英管布置的FEP管。8.根據(jù)權(quán)利要求l-7任何之一所述的臺(tái)階式插管,其中一個(gè)或以上的管段包括不銹鋼。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的臺(tái)階式插管,其中該一個(gè)或以上的不銹鋼管段的管腔涂有一種或多種聚合物。10.根據(jù)權(quán)利要求l-9任何之一所述的臺(tái)階式插管,其包括五個(gè)不銹鋼管段。11.一種插管組件,其包括根據(jù)權(quán)利要求l-10任何之一所述的插管;和包括將通過(guò)該插管送遞的一種或多種材料的儲(chǔ)器,所述儲(chǔ)器可操作地連接到該插管的管腔。12.根據(jù)權(quán)利要求ll所述的插管組件,其中該儲(chǔ)器包括注射器。13.根據(jù)權(quán)利要求11和12所述的插管組件,其進(jìn)一步包括可操作地聯(lián)接到該注射器的泵。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的插管組件,其中該泵是可編程的。15.根據(jù)權(quán)利要求11-14任何之一所述的插管組件,其中該儲(chǔ)器可操作地聯(lián)接到延伸通過(guò)該插管的管腔的管。16.將一種或多種材料送遞到受試對(duì)象的目標(biāo)區(qū)域的方法,所述方法包括以下步驟將根據(jù)權(quán)利要求l-10任何之一所述的插管或根據(jù)權(quán)利要求11_15之一所述的插管組件定位在受試對(duì)象的目標(biāo)區(qū)域中;和將一種或多種材料通過(guò)該插管送遞到目標(biāo)區(qū)域。17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法,其中該目標(biāo)區(qū)域在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法,其中該目標(biāo)區(qū)域在腦中。19.根據(jù)權(quán)利要求16-18任何之一所述的方法,其中該材料選自下列組成的組生物活性劑、染料、示蹤劑、標(biāo)記物、造影劑或它們的組合。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法,其中該生物活性劑是AAV載體。21.—種臺(tái)階式插管,其具有外徑,遠(yuǎn)端,近端,和在近端和遠(yuǎn)端之間延伸的管腔,所述臺(tái)階式插管包括兩個(gè)或以上的同軸布置的管段,每個(gè)管段具有限定該插管的外徑的外徑,其中該管段的外徑是不同的;禾口延伸通過(guò)該插管的管腔的一個(gè)或以上的管狀部件。22.—種臺(tái)階式插管,其具有外徑,遠(yuǎn)端,近端和在近端和遠(yuǎn)端之間延伸的管腔,所述臺(tái)階式插管包括兩個(gè)或以上的同軸布置的管段,每個(gè)管段具有限定插管的外徑的外徑,其中該管段的外徑是不同的;和延伸通過(guò)該插管的管腔的一個(gè)或以上的管狀部件,其中至少一個(gè)管狀部件包括熔融石英。23.根據(jù)權(quán)利要求l所述的臺(tái)階式插管,其進(jìn)一步包括布置在所述管腔中的裝置,其用于減小通過(guò)所述插管送遞到目標(biāo)區(qū)域的材料的損失。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的臺(tái)階式插管,其中所述裝置包括熔融石英。全文摘要在這里描述了具有臺(tái)階式外部的插管。也描述了制造和使用這些插管的方法,例如將一種或多種材料送遞到動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。文檔編號(hào)A61M25/06GK101123919SQ200580040404公開(kāi)日2008年2月13日申請(qǐng)日期2005年10月5日優(yōu)先權(quán)日2004年10月5日發(fā)明者J·M·薩默,K·班克維茨申請(qǐng)人:建新公司;加利福尼亞大學(xué)董事會(huì)