專利名稱：雪膽甲素的制備方法和在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用成份雪膽甲素的制備方法，以及在制備治療癌癥的藥物中的新應(yīng)用。
背景技術(shù)：
雪膽素為一種混合物，由雪膽甲素和雪膽乙素組成。最早由陳維新等人從園果雪膽植物(Hemsleya amalils Diels)的根部分離得到(化學(xué)學(xué)報(bào)，1975，33(1)，5)，雪膽甲素鑒定為19--失碳--9β-甲基-10à-3à-氫-2β，3à，16à，20，25-五羥基Δ5羊毛甾烯-11，20-雙酮-25-乙酸酯(IIa)即葫蘆素F(Ic)的23.24-cc雙氫-25-乙酸酯，乙素鑒定為葫蘆素F(Ic)的23，24-雙氫化合物，為二種新的化合物，并研制雪膽素片劑，于1974年已收載于云南省藥品藥品標(biāo)準(zhǔn)，用于治療菌痢腸炎、氣管炎、急性扁桃腺炎。
為了尋找提取雪膽素的植物資源，一些學(xué)者先后對本屬植物進(jìn)行了資源化學(xué)的研究，先后從羅鍋底(Hemsleya maerosperma c.y.wu)，長果雪膽(H，dolichocarp W.J.cheng)峨眉雪膽(H，emiensil L.T.Sent)分離出雪膽甲素，乙素，其提取方法與陳氏的提取方法類同，均用乙醇提取生藥，提取浸膏在水中用醋酸乙酯提取，提出物上硅膠柱，用氯仿∶丙酮∶醋酸乙酯三種不同比例的混合溶劑洗脫，洗脫液回收得粗品，再用乙醇重結(jié)晶，可分別得到甲素、乙素(參考文獻(xiàn)Rui-Lin-Nie etal.planta Medica 1984322施亞琴等云南動植物研究。1990。12(4)，460；中草藥1995，26(12)，619)。
中國專利申請CN01102620.0公開了一種“納米雪膽素制劑藥物及其制備方法”，是以納米雪膽素為原料，按比例配制，制成新的藥物制劑，其顆粒細(xì)度達(dá)1200-1500目，粒徑為0.1-200nm，其中絕大部分粒徑小于100nm，并具有新的物性。采用微波萃取、減壓濃縮、超音速射流技術(shù)噴霧干燥等步驟制成。中國專利申請CN03159197.3公開了一種“雪膽素滴丸及其制備方法”，其特征在于將1重量份經(jīng)超微粉碎的雪膽素細(xì)粉加入至1～10重量份熔融的基質(zhì)中，充分混勻，滴制法在冷卻劑中冷凝成丸，除冷卻劑，干燥，即得。中國專利申請CN02134164.8公開了一種“雪膽素類衍生物及其制備方法和作為抗菌劑的應(yīng)用”，提供一種與現(xiàn)有技術(shù)不同的雪膽素衍生物，其制備方法，以該化合物為有效成分的抗菌劑。
目前，尚未發(fā)現(xiàn)雪膽甲素在抗癌的藥物中應(yīng)用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種雪膽甲素的制備方法。
本發(fā)明的另一目的是提供雪膽甲素在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的雪膽甲素的制備方法由以下步驟組成一、取雪膽屬植物塊根，粉碎，用18-26重量倍的丙酮為溶劑，采用滲漉法提取，提取液在60-75℃水浴鍋中回收，即得浸膏；二、將提出的浸膏拌入1-2重量倍的硅膠，烘干，上硅膠柱，用氯仿∶甲醇進(jìn)行梯度洗脫，其中甲醇體積濃度為2-10％，回收洗脫液，得粗品；三、用甲醇或乙醇對粗品在水浴中加熱溶解，濾過，置室溫，重結(jié)晶，得凌柱狀結(jié)晶，即純度為98％以上的雪膽甲素。
步驟一中所述的雪膽屬植物為羅鍋底、長果雪膽、峨眉雪膽等。步驟二中先用純氯仿洗脫雜質(zhì)，再用氯仿∶甲醇梯度洗脫；步驟三中所得雪膽甲素經(jīng)高效液相(HPLC)分析純度在98％以上，熔點(diǎn)226-228℃，經(jīng)紫外光譜、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜四譜分析，確認(rèn)為雪膽甲素。其結(jié)構(gòu)式為 本發(fā)明涉及雪膽甲素在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及雪膽甲素在制備治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及雪膽甲素在制備治療胃癌的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及雪膽甲素在制備治療喉癌的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及雪膽甲素在制備治療白血病的藥物中的應(yīng)用。
藥效學(xué)試驗(yàn)資料雪膽甲素單體成份經(jīng)藥理體內(nèi)外抗癌試驗(yàn)，確認(rèn)本品體外對人體實(shí)體癌細(xì)胞具有抑制或殺滅作用，對人體肺癌細(xì)胞A549生長的Ic50(μg/ml)為1.50，與順鉑的Ic50 1.60基本相同，小鼠體內(nèi)抗癌試驗(yàn)與制劑類型，及給藥途徑相關(guān)，相比之下，口服給藥比注射給藥稍差，其乳劑靜脈注射對肺癌抑制率最高可達(dá)59％。
抗癌試驗(yàn)1、體外篩選試驗(yàn)，采用抗癌物質(zhì)活性的改良MTT法進(jìn)行。
癌細(xì)胞株HL60 人白血病細(xì)胞株A549 人肺癌細(xì)胞株SGC-7901 人胃癌細(xì)胞株Bel-7402 人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721 人肝癌細(xì)胞株HEP-2 人喉癌細(xì)胞株GLC-15 人肺癌細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)結(jié)果對7株人腫瘤細(xì)胞生長的IC50(μg/ml) 從上表可見，在本實(shí)驗(yàn)條件下，雪膽甲素對人體腫瘤細(xì)胞顯示出較為明顯的殺滅作用，但對不同組織來源的腫瘤細(xì)胞具有較明顯的差異，提示雪膽甲素對不同腫瘤細(xì)胞具有相對選擇性。
2、體內(nèi)試驗(yàn)采用昆明小鼠分別接種H22肝癌與小鼠Lewis肺癌，采用三種制劑混懸劑、乳劑、凍干制劑三種給藥途徑，灌胃，腹腔注射，靜脈注射，劑量分高、中、低三個治療劑量，與陽性對照比較，計(jì)算抗腫瘤抑制率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下面各表表1 雪膽甲素混懸劑灌胃給藥對小鼠H22肝癌的療效試驗(yàn)

與陰性對照組比較***P＜0.01。本實(shí)驗(yàn)具有顯著性差異。
表2 雪膽甲素混懸劑腹腔給藥對小鼠H22肝癌接腫療效試驗(yàn)

與陰性對照組相比***P＜0.01。
表3 雪膽甲素乳劑對小鼠H22肝癌靜脈給藥試驗(yàn)療效表

與陰性對照組相比***P＜0.01。
表4 雪膽甲素乳劑對小鼠Lewis肺癌靜脈給藥試驗(yàn)療效表

與陰性對照組相比***P＜0.01。
表5 雪膽甲素凍干劑對小鼠H22肝癌靜脈給藥試驗(yàn)療效表

表6 雪膽甲素凍干劑對小鼠Lewis肺癌(皮下接種)療效預(yù)試

***P值＜0.01與陰性對照組相比。
結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)證明，雪膽甲素對各種癌癥，包括肝癌，肺癌，胃癌，喉癌，白血病等具有顯著的抑制或殺滅作用，其作用強(qiáng)度與劑型、給藥途徑和劑量有關(guān)。


圖1為高效液相法分析圖譜。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取云南巧家縣地區(qū)羅鍋底5kg，粉碎成中粉，盛入滲流容器中，在15-25℃，加24倍量丙酮浸泡48小時(shí)后，按中國藥典滲漉法進(jìn)行滲漉，回收滲漉液，提取物拌入等量的硅膠，50-70℃干燥，上硅膠柱，用氯仿∶甲醇為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集在3-5％甲醇濃度的洗脫液，回收后即可得到粗品，用甲醇多次重結(jié)晶，得凌柱晶，熔點(diǎn)226-228℃，HPLC分析純度98.98％。見圖1，經(jīng)紫外、紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜四譜分析，確認(rèn)為雪膽甲素。
以上述雪膽甲素為單體成分，按照常規(guī)工藝制成混懸劑、乳劑、凍干制劑、納米凍干劑、片劑、丸劑、滴丸、膠囊劑、控釋劑、微囊劑、片劑、脂質(zhì)體等劑型。用于肝癌、肺癌、胃癌、喉癌以及白血病的治療。
權(quán)利要求
1.一種雪膽甲素的制備方法，其特征在于由以下步驟組成一、取雪膽屬植物塊根，粉碎，用18-26重量倍的丙酮為溶劑，采用滲漉法提取，提取液在60-75℃水浴鍋中回收，即得浸膏；二、將提出的浸膏拌入1-2重量倍的硅膠，烘干，上硅膠柱，用氯仿∶甲醇進(jìn)行梯度洗脫，其中甲醇體積濃度為2-10％，回收洗脫液，得粗品；三、用甲醇或乙醇對粗品在水浴中加熱溶解，濾過，置室溫，重結(jié)晶，得凌柱狀結(jié)晶，即純度為98％以上的雪膽甲素。
2.如權(quán)利要求1所述的雪膽甲素的制備方法，其特征在于所述的雪膽屬植物為羅鍋底、長果雪膽、峨眉雪膽。
3.如權(quán)利要求1所述的雪膽甲素的制備方法，其特征在于所述的步驟二中先用純氯仿洗脫雜質(zhì)，再用氯仿∶甲醇梯度洗脫。
4.權(quán)利要求1所述的雪膽甲素在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述的雪膽甲素在制備治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1所述的雪膽甲素在制備治療胃癌的藥物中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1所述的雪膽甲素在制備治療喉癌的藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1所述的雪膽甲素在制備治療白血病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥用成份雪膽甲素的制備方法，以及在制備治療癌癥的藥物中的新應(yīng)用。本發(fā)明所述方法由以下步驟組成一、取雪膽屬植物塊根，粉碎，用18－26重量倍的丙酮為溶劑，采用滲漉法提取，提取液在60－75℃水浴鍋中回收，即得浸膏；二、將提出的浸膏拌入1－2重量倍的硅膠，烘干，上硅膠柱，用氯仿∶甲醇進(jìn)行梯度洗脫，其中甲醇體積濃度為2－10％，回收洗脫液，得粗品；三、用甲醇或乙醇對粗品在水浴中加熱溶解，濾過，置室溫，重結(jié)晶，得凌柱狀結(jié)晶，即純度為98％以上的雪膽甲素。本發(fā)明涉及雪膽甲素在制備治療肝癌、肺癌、胃癌、喉癌以及白血病的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P35/00GK101074255SQ20061001090
公開日2007年11月21日 申請日期2006年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月19日
發(fā)明者張人偉, 程惠佳, 樊獻(xiàn)俄 申請人:樊獻(xiàn)俄