專利名稱：：用參桂膠囊治療心功能不全和心力衰竭的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物的新用途，特別是用中藥紅參，川芎，桂枝制備的藥物制劑治療心功能不全和心力衰竭。
背景技術(shù)：
：用中藥紅參，川芎，桂枝制備的藥物制劑如膠囊制劑已經(jīng)上市，稱為參桂膠囊，其功能主治是益氣通陽，活血化瘀。用于心陽不振，氣虛血瘀證。癥見胸部刺痛、固定不移、入夜更甚、遇冷加重，或畏寒喜暖，面色少華；冠心病、心絞痛見上述證候者。藥理作用研究表明參桂膠囊對(duì)冠脈結(jié)扎所致大鼠心肌梗塞和垂體后葉素所致大鼠心肌缺血有一定的保護(hù)作用；能增加犬冠脈流量，減慢心率，降低心肌耗氧量，降低外周阻力。參桂膠囊的制備方法如下原料紅參，川芎，桂枝以上三味，取紅參，粉碎成細(xì)粉，備用；剩余的紅參粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2000年版一部附錄I0)，用乙醇作溶劑進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，備用；川芎、桂枝加水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；蒸餾液濾過，濾液備用；藥渣與上述紅參藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濃縮，放冷，加乙醇，放置，濾過，濾液與紅參滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，加紅參細(xì)粉，拌勻，干燥，粉碎成細(xì)粉。揮發(fā)油用剩余的紅參細(xì)粉吸附，混勻，再與上述細(xì)粉混勻，加入適量的淀粉，混勻，裝入膠囊，制成粒，即得。心功能不全又稱心力衰竭，是指心臟的功能減退，不能有效地推動(dòng)血液周行全身以滿足機(jī)體組織代謝的現(xiàn)象。是心血管疾病常見的并發(fā)癥，也是心血管疾病常見的死亡原因。此時(shí)靜脈系統(tǒng)回流受阻，臟器淤血，而動(dòng)脈系統(tǒng)血液灌注不足。根據(jù)最先發(fā)生的部位，可分為左心衰竭和右心衰竭。最后都可發(fā)展為全心衰竭。本病屬于中醫(yī)學(xué)“心痹”、“水腫”、“怔忡”、“喘證”、“痰飲”的范疇。1.左心衰竭(1)呼吸困難，為左心衰竭最早出現(xiàn)和最重要的癥狀。最初僅發(fā)生于重體力勞動(dòng)時(shí)，稱勞力性呼吸困難，隨著病情的發(fā)展，可出現(xiàn)陣發(fā)性夜間呼吸困難?；颊叱Ｔ谝归g熟睡時(shí)，突然憋醒，被迫坐起，可伴有陣咳，咯泡沫狀痰或呈喘息狀態(tài)。(2)咳嗽和咯血，因肺泡及支氣管黏膜淤血而引起，常于運(yùn)動(dòng)后或夜間加重。(3)紫紺、倦怠和乏力，為心排血量降低的結(jié)果?；颊叱嗽行难芗膊〉捏w征之外，常有心尖搏動(dòng)向左移位，搏動(dòng)范圍彌散。心濁音畀擴(kuò)大。心事增快，心尖部可聞及舒張期奔馬律。兩肺底可聽到濕羅音。嚴(yán)重心力衰竭時(shí)，可出現(xiàn)交替脈。2.右心衰竭(1)頸靜脈怒張為右心衰竭的早期表現(xiàn)。(2)肝臟腫大伴壓痛肝頸靜脈回流征(+)。由于肝淤血引起，晚期可并發(fā)心源性肝硬化，出現(xiàn)黃疽，腹水和肝功能損害。(3)水腫以下肢可凹性水腫為明顯。晚期可有全身水腫。(4)各臟器淤血的表現(xiàn)腎淤血致尿量減少；消化道淤血可引起食欲不振、消化不良、惡心、嘔吐等。3，全心衰竭左、右心衰竭的臨床表現(xiàn)同時(shí)存在?，F(xiàn)有中藥能夠治療心功能不全和心力衰竭不多，而且大多療效不佳，本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有產(chǎn)品參桂膠囊或由其配方制備成的其他劑型具有良好的治療和預(yù)防心功能不全和心力衰竭的作用，為此，本發(fā)明提供用紅參，川芎，桂枝制備一種治療和預(yù)防心功能不全和心力衰竭的藥物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種中藥制劑，該制劑由中藥紅參，川芎，桂枝經(jīng)過加工制備而成。本發(fā)明還提供用本發(fā)明的中藥制劑制備一種治療心功能不全和心力衰竭的藥物。本發(fā)明的中藥制劑其配方組成如下紅參1-1000g川芎1-1000g桂枝1-1000g優(yōu)選的是紅參200-400g川芎250-750g桂枝100-300g最優(yōu)選的是紅參300g川芎500g桂枝200g以上組成中，重量是以生藥計(jì)算的，以上組成可制成藥物制劑1000劑，所述1000劑指，制成的成品藥物制劑，如制成膠囊制劑1000粒，片劑1000片，顆粒劑1000克，口服液1000ml等。以上組成，若以克為單位，可制成1000次服用劑量的制劑，如作為片劑，制成1000片，每次服用劑量可以是1-100片，共可服用1-1000次。如作為顆粒劑，制成1-1000袋，每次服用1-100袋，共可服用1-1000次。以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減少，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以公斤為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以毫克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間的生藥材重量配比的比例不變。以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，如重癥或輕癥，肥胖或瘦小的病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的量的配比，增加或減少不超過100％，藥效不變。以上組成中的單味中藥，如君藥、臣藥和佐藥，也可以被適當(dāng)?shù)木哂邢嗤幮缘闹兴幪鎿Q，替換后的中藥制劑其藥物作用不變。本發(fā)明的中藥制劑，是通過將上述配方組成的中藥原料經(jīng)過提取或其他方式加工，制成藥物活性物質(zhì)，隨后，以該物質(zhì)為原料，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成的。所述活性物質(zhì)可以通過分別提取中藥原料得到，也可以通過共同提取中藥原料得到，也可以通過其他方式得到，如通過粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過篩、滲漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、層析等方法得到、這些活性物質(zhì)可以是浸膏形式的物質(zhì)，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根據(jù)制劑的不同需要決定制成不同的濃度。本發(fā)明的中藥制劑中的藥物活性物質(zhì)，其在制劑中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物制劑，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋等。本發(fā)明的中藥制劑可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑。本發(fā)明的制劑，優(yōu)選的是口服劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、膏劑等。最優(yōu)選的是膠囊劑，即本發(fā)明所述參桂膠囊。本發(fā)明的中藥制劑，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉?？赏ㄟ^混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的那些組合物中?？诜后w制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑，或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。對(duì)于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù)載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì)溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。本發(fā)明的中藥制劑，在制備成藥劑時(shí)可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的制劑在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服二-四次，每次1-20劑，如1-20袋或?；蚱?。本發(fā)明的中藥制劑可以通過以下方法制備。取紅參，粉碎成細(xì)粉，備用；剩余的紅參粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2000年版一部附錄I0)，用乙醇作溶劑進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，備用；川芎、桂枝加水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；蒸餾液濾過，濾液備用；藥渣與上述紅參藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濃縮，放冷，加乙醇，放置，濾過，濾液與紅參滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，加紅參細(xì)粉，拌勻，干燥，粉碎成細(xì)粉。揮發(fā)油用剩余的紅參細(xì)粉吸附，混勻，再與上述細(xì)粉混勻，即得本發(fā)明的藥物活性物質(zhì)。將該藥物活性物質(zhì)與藥物可接受的載體混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，可制備成本發(fā)明的藥物制劑。本發(fā)明的藥物制劑，特別適合并應(yīng)用于治療和預(yù)防心功能不全和心力衰竭，為此，本發(fā)明提供用本發(fā)明的藥物制劑制備一種治療和預(yù)防心功能不全和心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的應(yīng)用是通過對(duì)本發(fā)明的藥物，特別是參桂膠囊進(jìn)行了新的藥效研究后意外發(fā)現(xiàn)的，而且與現(xiàn)有技術(shù)相比取得了意想不到的結(jié)果，以下為實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)。(一)參桂膠囊對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死后心功能影響的研究1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠(180-220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)京動(dòng)許字，2000-013-058。1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物參桂膠囊由(加拿大)上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號(hào)20030801，規(guī)格0.3g/粒。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物模型建立與分組大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(于分支起點(diǎn)處約1-2mm)造成AMI模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組即①正常對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；②模型對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；③假手術(shù)組10只常規(guī)飼養(yǎng)；④陽性藥開搏通對(duì)照組10只，5mg/Kg/d開搏通溶液；⑤參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/Kg/d；⑥參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/kg/d；⑦參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/Kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2血液動(dòng)力學(xué)及心功能的測定連續(xù)灌胃8周后，大鼠腹腔注射20％氨基甲酸乙酯溶液(0.07ml/kg)進(jìn)行麻醉，分離右頸總動(dòng)脈，插入充滿37℃肝素生理鹽水溶液的導(dǎo)管，用NIHONKOHOENRM06018型多導(dǎo)生理記錄儀描記動(dòng)脈收縮壓(SBP)及舒張壓(DBP)。將導(dǎo)管進(jìn)一步插入左心室，記錄左室收縮末壓(LVESP)和左室舒張末壓(LVEDP)，觀察左室心臟功能的改變。1.2.3左室重量及心臟指數(shù)的測定多導(dǎo)生理記錄儀描記各項(xiàng)參數(shù)完畢，立即開胸取出心臟稱重。用電子天平稱心臟重量及左心室重量，并計(jì)算心臟指數(shù)(體重與心臟重量之比，mg/g)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有計(jì)量資料以均數(shù)！標(biāo)準(zhǔn)差表示，用PHS軟件進(jìn)行F檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1參桂膠囊對(duì)大鼠左室重量及與心臟指數(shù)的影響手術(shù)前及手術(shù)后8周后各組大鼠體重均無明顯差別(P＞0.05)，模型組大鼠左室重量及心臟指數(shù)(心臟重mg/體重g)大于假手術(shù)組(P＜0.01)；參桂膠囊大、中劑量組及開搏通組左室重量和心臟指數(shù)較模型組明顯減小(P＜0.05和P＜0.01)。結(jié)果見表1。表1.參桂膠囊對(duì)大鼠左室重量及與心臟指數(shù)的影響<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="772">組別劑量體重(g)左室重量(g)心臟指數(shù)(mg/g)空白對(duì)照組假手術(shù)組模型組參桂膠囊組開搏通組10ml/Kg10ml/Kg10ml/Kg30g生藥/Kg15g生藥/Kg7.5g生藥/Kg5mg/Kg338.42±17.71333.23±14.55330.90±16.08345.57±13.66346.69±20.52331.71±19.23349.19±20.310.81±0.11**0.82±0.09**1.14±0.200.86±0.15**0.91±0.10*1.03±0.120.84±0.13**2.80±0.21**2.81±0.19**3.00±0.222.80±0.17**2.90±0.22*3.01±0.252.49±0.23**</table></tables>注與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.012.2參桂膠囊對(duì)AMI大鼠左室功能的影響與模型組相比較，參桂膠囊大、中劑量組和開搏通組LVEDP明顯降低(P＜0.05和P＜0.01)；參桂膠囊大劑量組和開搏通組LVESP和模型組相比亦有顯著增加(P＜0.01)，參桂膠囊各組+dp/dtMax與模型組相對(duì)比較均有增加(P＜0.01，P＜0.05)。結(jié)果見表3。表2.參桂膠囊對(duì)大鼠左室心功能的影響(x±s)<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="843">組別劑量SBPKpaDBPKpaLVESPKpaLVEDPKpa+dp/dtMaxKpa/s空白對(duì)照組假手術(shù)組模型組參桂膠囊組開搏通組10ml/Kg10ml/Kg10ml/Kg30g生藥/Kg15g生藥/Kg7.5g生藥/Kg5mg/Kg17.84±2.4118.09±4.02*15.79±1.9318.10±1.3717.19±1.8516.53±2.5615.66±2.849.99±2.09*10.25±1.34*9.09±1.469.59±1.6410.19±1.8910.01±1.538.89±1.3619.11±1.60*18.08±1.58*14.09±1.3617.29±1.72*15.90±1.49l5.87±1.7816.55±1.73*0.30±0.19**0.39±0.28**1.24±0.570.60±0.47**0.86±0.54*1.09±0.520.46±0.31**559.76±69.69*556.28±60.75*311.10±45.97509.78±73.45**459.36±54.09**422.52±47.52*469.54±45.38**</table></tables>注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.013.結(jié)論3.1參桂膠囊對(duì)心肌梗死范圍的影響參桂膠囊大、中劑量組及開搏通組左室重量和心臟指數(shù)較模型組明顯減小，表明參桂膠囊有較好的抑制AMI大鼠心肌代償性肥厚增生的作用。3.2參桂膠囊對(duì)血液動(dòng)力學(xué)的影響LVEDP、LVESP和+dp/dtMax是反映心臟收縮和舒張功能的敏感參數(shù)，是判斷AMI后患者預(yù)后的重要指標(biāo)。結(jié)果表明，參桂膠囊和開博通皆有一定的降低AMI大鼠LVEDP和升高LVESP、+dp/dtMax的作用。說明參桂膠囊可干預(yù)AMI大鼠心室重構(gòu)的病理過程，防止AMI后心室的進(jìn)一步擴(kuò)大和心力衰竭的發(fā)生。(二)參桂膠囊對(duì)心肌梗死后心功能不全大鼠ET、AngII的影響的研究1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠(180~220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)京動(dòng)許字，2000-013-058。1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物參桂膠囊由(加拿大)上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號(hào)20030801，規(guī)格0.3g/粒。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物模型建立與分組大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(于分支起點(diǎn)處約1-2mm)造成AMI模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，ST段弓背抬高示AMI形成。造模成功后，大鼠隨機(jī)分為7組即①正常對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；②模型對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；③假手術(shù)組10只常規(guī)飼養(yǎng)；④陽性藥開搏通對(duì)照組10只，5mg/Kg/d開搏通溶液；⑤參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/Kg/d；⑥參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/Kg/d；⑦參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/Kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周1.2.2內(nèi)皮素(ET)、AngII的測量經(jīng)右總頸動(dòng)脈取血，用放射免疫法檢測ET、AngII含量，試劑藥盒由中國人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有計(jì)量資料以均數(shù)！標(biāo)準(zhǔn)差表示，用PHS軟件進(jìn)行F檢驗(yàn)。2.結(jié)果2.1參桂膠囊對(duì)AMI大鼠血漿ET、AngII含量的影響手術(shù)后8周，模型組大鼠血漿ET、AngII含量明顯上升，與空白對(duì)照組和假手術(shù)組比較差異顯著(P＜0.01)，參桂膠囊大、中劑量組和開搏通組血漿ET含量皆較模型組明顯減少(P＜0.01)。參桂膠囊大劑量組和開搏通組血漿AngII含量亦較模型組明顯減少(P＜0.05和P＜0.01)。結(jié)果見表3表3.參桂膠囊對(duì)大鼠ET、AngII的影響注與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.013.結(jié)論本項(xiàng)研究通過結(jié)扎Wistar大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支復(fù)制心功能不全模型，觀察了參桂膠囊對(duì)AMI后心功能不全大鼠血清ET、AngII的影響，實(shí)驗(yàn)表明，AMI后大鼠循環(huán)AngII、ET水平上升，參桂膠囊可明顯降低血清ET、AngII水平，說明改藥能夠減弱循環(huán)及局部RAS對(duì)AMI后VR的刺激作用；降低循環(huán)中ET含量，減少其促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大的作用；增加ANP的表達(dá)從而抑制心室重構(gòu)的發(fā)展。(三)參桂膠囊對(duì)心肌梗死后心功能不全大鼠心肌細(xì)胞膜Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性及膜脂質(zhì)過氧化作用的影響1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠(180-220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)京動(dòng)許字，2000-013-058。1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物參桂膠囊由(加拿大)上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號(hào)20030801，規(guī)格0.3g/粒。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物模型建立與分組大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(于分支起點(diǎn)處約1-2mm)造成AMI模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組即①正常對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；②模型對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；③假手術(shù)組10只常規(guī)飼養(yǎng)；④陽性藥開搏通對(duì)照組10只，5mg/Kg/d開搏通溶液；⑤參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/Kg/d；⑥參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/Kg/d；⑦參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/Kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2取材20％氨基甲酸乙酯麻醉大鼠，仰臥固定，0.9％鹽水心臟灌流至流出液肉眼為清液，迅速截取心臟鹽水沖洗，迅速截取左室游離壁和心尖部，放入凍存管內(nèi)，置入液氮內(nèi)保存，備用。1.2.3心肌線粒體制備稱取大鼠左心室心肌0.5g，用Tris-HCl緩沖液(20mmol·L-1，PH＝7.0)制成10％的組織勻漿，低溫高速離心10min(8000g·min-1)。取上清液再離心15min(14000g·min-1)，粗線粒體沉淀，重復(fù)超速離心2次，得到較純線粒體沉淀。以Lowrry法進(jìn)行蛋白定量。1.2.4心肌線粒體ATP酶活性的測定取少量線粒體沉淀用于測定Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性，按試劑盒說明進(jìn)行。1.2.5心肌線粒體鈉、鈣、鎂含量測定取少量線粒體沉淀用硝酸消化后，用原子吸收分光光度儀測定其鈉、鈣、鎂含量。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有計(jì)量資料以均數(shù)！標(biāo)準(zhǔn)差表示，用PHS軟件進(jìn)行F檢驗(yàn)。2.結(jié)果2.1參桂膠囊對(duì)心功能不全大鼠心肌細(xì)胞膜Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性及膜MDA含量的影響，見表4。表4.各組大鼠心肌細(xì)胞膜Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性及膜MDA含量注與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.012.2參桂膠囊對(duì)心功能不全大鼠心肌線粒體Ca2+Na+Mg2+含量的影響，見表5。表5各組大鼠心肌線粒體Ca2+、Na+、Mg2+含量注與模型組相比，*P＜0.05，++P＜0.013.結(jié)論參桂膠囊能顯著提高線粒體膜Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性，降低心肌線粒體內(nèi)鈣含量，降低膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。參桂膠囊是通過提高Ca2+-Mg2+ATPase活性，維持線粒體結(jié)構(gòu)和功能完整性來發(fā)揮抗心肌缺血損傷的作用，從而改善心功能不全大鼠的心臟功能。(四)參桂膠囊對(duì)心肌梗死后心功能不全大鼠心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠(180-220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)京動(dòng)許字，2000-013-058。1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物參桂膠囊由(加拿大)上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號(hào)20030801，規(guī)格0.3g/粒。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物模型建立與分組大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(于分支起點(diǎn)處約1-2mm)造成AMI模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組即①正常對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；②模型對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；③假手術(shù)組10只常規(guī)飼養(yǎng)；④陽性藥開搏通對(duì)照組10只，5mg/Kg/d開搏通溶液；⑤參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/Kg/d；⑥參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/Kg/d；⑦參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/Kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2取材動(dòng)物處死后，分別切取部分心尖組織置于4％多聚甲醛液中固定，48小時(shí)后，乙醇逐級(jí)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，供光鏡觀察及細(xì)胞凋亡檢測。1.2.3凋亡及凋亡相關(guān)基因檢測按照德國ROCHE-B.M原位末端標(biāo)記檢測細(xì)胞凋亡試劑盒說明書進(jìn)行，Cat.No.1684817；Bcl-2及Fas基因表達(dá)按美國SantaCruz公司試劑盒說明進(jìn)行。3.結(jié)論1.參桂膠囊能夠抑制心功能不全心肌細(xì)胞凋亡；2.參桂膠囊對(duì)心功能不全心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)具有調(diào)控作用，即下調(diào)Fas蛋白表達(dá)，上調(diào)Bcl-2基因表達(dá)。說明，參桂膠囊能夠抑制心功能不全心肌細(xì)胞凋亡，這是其改善心功能不全的又一機(jī)制之一。(五)參桂膠囊對(duì)心肌梗死后心功能不全大鼠心肌缺血區(qū)能量物質(zhì)及乳酸含量的影響1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠(180-220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)京動(dòng)許字，2000-013-058。1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物參桂膠囊由(加拿大)上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號(hào)20030801，規(guī)格0.3g/粒。1.1.3LD測定試劑盒，南京建成生物工程研究所。ATP、ADP、AMP標(biāo)準(zhǔn)品由Sigma公司提供。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物模型建立與分組大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(于分支起點(diǎn)處約1-2mm)造成AMI模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組即①正常對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；②模型對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；③假手術(shù)組10只常規(guī)飼養(yǎng)；④陽性藥開搏通對(duì)照組10只，5mg/Kg/d開搏通溶液；⑤參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/Kg/d；⑥參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/Kg/d；⑦參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/Kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2指標(biāo)測定取出大鼠心臟，置冰生理鹽水中清洗殘血，取腫脹發(fā)紺的左心室缺血心肌組織約100mg，準(zhǔn)確稱重，用冰0.4mol·L-1HClO4制成10％勻漿，超聲粉碎(振幅16～20μm，30s)，4℃離心(2795×g，20min)，精確吸取上清液0.2mL置于0.5mL離心管中，加入3mol·L-1K2CO30.1mL中和，旋渦振蕩，3000×g離心3min。能量代謝取上清液20μL進(jìn)樣，進(jìn)行高效液相色譜分析。LD含量取上清液按試劑盒說明操作，以分光光度計(jì)測吸收值，并按公式計(jì)算。2.結(jié)果2.1參桂膠囊對(duì)心功能不全大鼠心肌細(xì)胞能量代謝的影響，見表6。表6.各組大鼠心肌細(xì)胞ATP、ADP、AMP、TNA及EC含量<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="842">組別n劑量(μmol·g-1)ATPADPAMPTNAEC空白對(duì)照組假手術(shù)組模型組參桂膠囊組開搏通組1087777810ml/Kg10ml/Kg10ml/Kg30g生藥/Kg15g生藥/Kg7.5g生藥/Kg5mg/Kg4.03±0.09**3.92±0.02#1.12±0.022.03±0.19*1.93±0.11*1.88±0.11*1.99±0.09*2.50±0.08**2.43±0.03#1.13±0.031.50±0.10*1.45±0.09*1.45±0.08*1.50±0.08*2.18±0.04**2.16±0.11#0.46±0.110.78±0.05*0.71±0.05*0.68±0.04*0.81±0.06*8.71±0.21**8.55±0.14#2.71±0.143.66±0.11*3.51±0.13*3.47±0.12*3.71±0.11*0.61±0.05**0.59±0.03#0.26±0.030.33±0.04*0.31±0.04*0.31±0.04*0.31±0.05*</table></tables>注與模型組比*P＞0.05，**P＜0.01；與正常組比#P＞0.052.2參桂膠囊對(duì)心功能不全大鼠心肌組織乳酸(LD)代謝的影響，見表7。表7.各組大鼠心肌組織LD含量<tablesid="table7"num="007"><tablewidth="777">組別n劑量LD含量(mmol·g-1prot)空白對(duì)照組假手術(shù)組模型組參桂膠囊組開搏通組1087777810m1/Kg10ml/Kg10ml/Kg30g生約/Kg15g生藥/Kg7.5g生藥/Kg5mg/Kg0.128±0.025**0.133±0.027**##0.844±0.0510.281±0.035*#0.307±0.039*#0.389±0.039*#0.292±0.031*#</table></tables>注與模型組比*P＜0.05，**P＜0.01；與正常組比#P＜0.05；##P＞0.053.結(jié)論本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，參桂膠囊不僅能夠明顯改善心功能不全心肌組織能量代謝，而且能夠降低心肌組織乳酸含量，因此，參桂膠囊具有防治心功能不全的作用。(六)參桂膠囊對(duì)心肌梗死后心功能不全大鼠心肌損傷影響的研究1.材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠(180-220g)70只，雄性。由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)京動(dòng)許字，2000-013-058。1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物參桂膠囊由(加拿大)上海玉丹藥業(yè)公司提供，產(chǎn)品批號(hào)20030801，規(guī)格0.3g/粒。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物模型建立與分組大鼠乙醚麻醉，然后經(jīng)左邊第四肋間剪開皮膚，鈍性分離肌肉組織，打開胸腔，剪開心包膜，擠壓出心臟，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間穿線，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(于分支起點(diǎn)處約1-2mm)造成AMI模型，然后迅速將心臟放回胸腔，隨即縫合胸腔及皮膚。假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈外，其余操作與AMI模型組動(dòng)物相同。術(shù)后給予青霉素4萬單位，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢導(dǎo)聯(lián)II導(dǎo)(紙速50/s)心電圖，ST段弓背抬高示AMI形成。造摸成功后，大鼠隨機(jī)分為7組即①正常對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；②模型對(duì)照組10只，常規(guī)飼養(yǎng)；③假手術(shù)組10只常規(guī)飼養(yǎng)；④陽性藥開搏通對(duì)照組10只，5mg/Kg/d開搏通溶液；⑤參桂膠囊大劑量組10只，參桂膠囊1.8g/Kg/d；⑥參桂膠囊中劑量組10只，參桂膠囊0.9g/Kg/d；⑦參桂膠囊小劑量組10只，參桂膠囊0.45g/Kg/d。術(shù)后第二天，開始灌胃給藥，連續(xù)8周。1.2.2光鏡觀察石蠟切片厚度5um，二甲苯脫蠟，常規(guī)HE染色，樹脂封片。2.結(jié)論參桂膠囊能夠抑制心功能不全心肌損傷具有一定防治作用，其中中、高劑量較為明顯。以上實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的參桂膠囊，具有良好的治療心功能不全和心力衰竭作用。具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1參桂膠囊藥物活性物質(zhì)的制備配方紅參300g，川芎500g，桂枝200g取紅參，粉碎成細(xì)粉，備用；剩余的紅參粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2000年版一部附錄I0)，用乙醇作溶劑進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，備用；川芎、桂枝加水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；蒸餾液濾過，濾液備用；藥渣與上述紅參藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濃縮，放冷，加乙醇，放置，濾過，濾液與紅參滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，加紅參細(xì)粉，拌勻，干燥，粉碎成細(xì)粉。揮發(fā)油用剩余的紅參細(xì)粉吸附，混勻，再與上述細(xì)粉混勻，即得本發(fā)明的參桂膠囊藥物活性物質(zhì)。實(shí)施例2膠囊劑(參桂膠囊)的制備，實(shí)施例1的藥物活性物質(zhì)加入適量的淀粉，混勻，制成粒，裝入1000粒膠囊，即得。實(shí)施例3片劑的制備，實(shí)施例1的藥物活性物質(zhì)加入適量的淀粉，混勻，制成粒，壓片成1000片，即得。實(shí)施例4顆粒劑的制備，實(shí)施例1的藥物活性物質(zhì)加入適量的淀粉，蔗糖，混勻，制成1000g，包裝成2g/袋，即得。實(shí)施例5膠囊劑的應(yīng)用患者心功能不全病人10人，用法用量口服，一次4粒，一日3次。結(jié)果有效。實(shí)施例6膠囊劑的應(yīng)用患者心力衰竭病人10人，用法用量口服，一次4粒，一日3次。結(jié)果有效。實(shí)施例7片劑的應(yīng)用患者心力衰竭病人10人，用法用量口服，一次4片，一日3次。結(jié)果有效。實(shí)施例8片劑的應(yīng)用患者心功能不全病人10人，用法用量口服，一次4片，一日3次。結(jié)果有效。實(shí)施例9藥物活性物質(zhì)的制備配方紅參200g，川芎250g，桂枝100g取紅參，粉碎成細(xì)粉，備用；剩余的紅參粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2000年版一部附錄I0)，用乙醇作溶劑進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，備用；川芎、桂枝加水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；蒸餾液濾過，濾液備用；藥渣與上述紅參藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濃縮，放冷，加乙醇，放置，濾過，濾液與紅參滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，加紅參細(xì)粉，拌勻，干燥，粉碎成細(xì)粉。揮發(fā)油用剩余的紅參細(xì)粉吸附，混勻，再與上述細(xì)粉混勻，即得本發(fā)明的藥物活性物質(zhì)。實(shí)施例9藥物活性物質(zhì)的制備配方紅參400g，川芎750g，桂枝300g取紅參，粉碎成細(xì)粉，備用；剩余的紅參粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2000年版一部附錄I0)，用乙醇作溶劑進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，備用；川芎、桂枝加水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；蒸餾液濾過，濾液備用；藥渣與上述紅參藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濃縮，放冷，加乙醇，放置，濾過，濾液與紅參滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，加紅參細(xì)粉，拌勻，干燥，粉碎成細(xì)粉。揮發(fā)油用剩余的紅參細(xì)粉吸附，混勻，再與上述細(xì)粉混勻，即得本發(fā)明的藥物活性物質(zhì)。權(quán)利要求1.以中藥紅參，川芎，桂枝為原料制成的中藥制劑組合物在制備治療和預(yù)防心功能不全和心力衰竭的藥物中的應(yīng)用，所述中藥制劑其配方組成為紅參1-1000g，川芎1-1000g，桂枝1-1000g。2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥制劑其配方組成為紅參200-400g，川芎250-750g，桂枝100-300g。3.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥制劑其配方組成為紅參300g，川芎500g，桂枝200g。4.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，是任何一種藥物制劑形式。5.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物制劑形式選自膠囊劑、片劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑。6.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物制劑形式為膠囊劑。7.權(quán)利要求6的應(yīng)用，其特征在于，所述膠囊劑，其用法用量為，口服，一次2-4粒，一日2-4次。8.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物制劑形式其中含有用紅參，川芎，桂枝經(jīng)過加工制備的藥物活性物質(zhì)和藥物可接受的載體。9.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂。10.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物活性物質(zhì)制備方法如下取紅參，粉碎成細(xì)粉，備用；剩余的紅參粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用乙醇作溶劑進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，備用；川芎、桂枝加水蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用；蒸餾液濾過，濾液備用；藥渣與上述紅參藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液合并，濃縮，放冷，加乙醇，放置，濾過，濾液與紅參滲漉液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，加紅參細(xì)粉，拌勻，干燥，粉碎成細(xì)粉，揮發(fā)油用剩余的紅參細(xì)粉吸附，混勻，再與上述細(xì)粉混勻，即得本發(fā)明的藥物活性物質(zhì)。全文摘要本發(fā)明涉及一種藥物的新用途，特別是用中藥紅參，川芎，桂枝制備的藥物制劑——參桂膠囊治療心功能不全和心力衰竭，所述參桂膠囊，其配方組成為紅參300g，川芎500g，桂枝200g。文檔編號(hào)A61K9/00GK1961924SQ20061013856公開日2007年5月16日申請(qǐng)日期2006年11月9日優(yōu)先權(quán)日2006年11月9日發(fā)明者李湘,王朝陽申請(qǐng)人:上海玉丹藥業(yè)有限公司