專利名稱：一種由苦參、五味子和黃芪配伍組成的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種由苦參或其提取物、五味子或其提取物和黃芪或其提取物制成的用于治療肝炎類疾病的藥物組合物，及其制備方法和制劑，屬于醫(yī)藥技術領域。
2、背景技術中國是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)，約有8％～10％的人群為乙肝病毒攜帶者，約為1.3億人，占全球乙肝病毒攜帶者的1/3，其中約有3000萬人患慢性肝炎，平均年發(fā)病例數(shù)約140萬左右，每年因肝炎病死亡約30萬人。丙型肝炎病毒攜帶者0.38億人，加上其他類型的肝炎，患肝炎的總?cè)藬?shù)近2億人，估計每年因病毒性肝炎導致直接經(jīng)濟損失300億～500億人民幣。因此，研究開發(fā)安全有效的治療肝炎的藥物，成為迫切需要解決的問題。
苦參是常用臨床中藥之一，是豆科植物苦參SopHora flavescens Ait.的干燥根，又名枯骨、草槐、地槐等，具有清熱燥濕、殺蟲、止癢、安神之功效?，F(xiàn)代臨床藥理研究表明苦參有抗病原體、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抑制變態(tài)反應、鎮(zhèn)靜、利尿等作用。苦參具有抗肝損傷作用，實驗發(fā)現(xiàn)，苦參堿對巨噬細胞、肝枯否細胞分泌的IL-1，IL-6，TNF-a有明顯抑制作用，氧化苦參堿對大鼠貯脂細胞增殖和膠原合成有抑制作用。苦參堿和氧化苦參堿對肝細胞的保護作用，表現(xiàn)在丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶降低，肝臟病理變化明顯減輕，抑制了巨噬細胞釋放腫瘤壞死因子?？鄥A和氧化苦參堿的抗炎、免疫抑制、清除自由基、利尿和解毒等作用，是治療各種肝損害、自身免疫性疾病及變態(tài)反應性疾病的藥理學基礎。
五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實。五味子具有如下藥理作用它能增強大腦皮層興奮和抑制過程，使其相互平衡；明顯鎮(zhèn)靜作用，與戊巴比妥鈉、氯丙嗪等協(xié)同作用，拮抗興奮藥引起的驚厥，有安定藥的特點；調(diào)節(jié)免疫、穩(wěn)定肝臟細胞膜、保護細胞器、細胞核，促進病理修復、改善肝機能。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，是一種常用中藥，味甘、性溫，有補氣升陽、固表止汗、托毒排膿和生肌等功效。黃芪的主要藥理作用有抗衰老；清除自由基；黃芪多糖可顯著提高機體的免疫力；黃芪多糖可增強人體細胞的生理代謝作用，能顯著促進骨髓造血細胞DNA合成，加快有核細胞分裂過程，對體內(nèi)血糖水平有雙向調(diào)節(jié)作用；黃芪多糖在體外具有增強LAK細胞殺傷活性的作用，在體內(nèi)對荷黑色素瘤B16細胞的小鼠具有顯著增強IL-2/LAK抗腫瘤作用。
目前，利用苦參、五味子和黃芪的相互作用，配伍組方，用于制備治療肝炎的藥物，尚未見報道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療肝炎類疾病，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了一種新的藥物組合物及其制備方法和制劑。
按照重量組份計算，制成本發(fā)明藥物組合物所含藥效組分的原料藥的組成為苦參、五味子和黃芪，其重量份數(shù)為苦參400～6400份、五味子50～2000份、黃芪50～2000份；優(yōu)選為苦參800～3200份、五味子100～1000份、黃芪100～1000份，最佳為苦參1600份、五味子300份、黃芪400份。
上述藥物組合物中的原料藥可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。總提取物中主要的有效成分為苦參總堿(苦參堿和氧化苦參堿的總量)、五味子木質(zhì)素類、黃芪多糖或黃芪總皂苷。
苦參的提取制備苦參可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到苦參提取物，其主要有效成分為苦參總堿，溶劑優(yōu)選酸水或乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)提取法、樹脂法中的一種或幾種，也可參照文獻方法制備。
本發(fā)明提供了苦參的優(yōu)選提取制備工藝，具體如下取苦參藥材，粉碎成粗粉，用0.2％鹽酸滲漉至無生物堿反應為止，收集滲漉液，并通過已處理好的強酸型陽離子樹脂，交換完畢后，將樹脂用水洗至中性，干燥。用濃氨水堿化樹脂，裝入索氏提取器用氯仿連續(xù)回流提取至提取液無生物堿反應。氯仿提取液用無水硫酸鈉脫水，減壓回收氯仿，得稠膏狀物。通過本工藝制備的苦參提取物得率為2～5％，含總堿即苦參堿(C15H24N2O)和氧化苦參堿(C15H24N2O2)的總量不低于70％。
苦參提取物還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法1取苦參藥材，粉碎成粗粉，用95％乙醇浸泡五次，過濾浸出液，薄膜蒸發(fā)濃縮至相對密度為1.04～1.09，減壓蒸餾除盡乙醇，加2倍體積的2％鹽酸，充分攪拌，放置過夜，濾過，棄去沉淀物。濾液用乙醚洗滌，棄去乙醚液，濾液用氫氧化鈉堿化至pH9～10，加氯化鈉飽和，用氯仿萃取至無生物堿反應，減壓蒸餾得棕色稠膏狀物質(zhì)。通過本工藝制備的苦參提取物得率不低于1～6％，含總堿即苦參堿(C15H24N2O)和氧化苦參堿(C15H24N2O2)的總量不低于50％。
方法2取苦參藥材，粉碎成粗粉，加2倍量濃氨水，濕潤1小時，加氯仿浸泡4次，濾過，濾液減壓回收氯仿，加2倍體積的2％鹽酸，充分攪拌，放置過夜，濾過，棄去沉淀物。濾液用乙醚洗滌，棄去乙醚液，濾液用氫氧化鈉堿化至pH9～10，加氯化鈉飽和，用氯仿萃取至無生物堿反應，減壓蒸餾得棕色稠膏狀物質(zhì)。通過本工藝制備的苦參提取物得率不低于1～6％，含總堿即苦參堿(C15H24N2O)和氧化苦參堿(C15H24N2O2)的總量不低于60％。
五味子的提取制備五味子可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到五味子提取物，溶劑優(yōu)選水或醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、超臨界CO2萃取法、回流提取法或連續(xù)提取法。
本發(fā)明提供了五味子的優(yōu)選提取制備工藝，具體如下取五味子藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每2小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，加乙醇使含醇量達60％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達80％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的五味子提取物中提取物得率為2～4％，五味子醇甲含量不低于10％，醚溶性浸出物含量不低于30％。
五味子還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法1取五味子藥材，粉碎成粗粉，加60％乙醇煎煮二次，每2小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達80％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的五味子提取物得率為1～5％，五味子醇甲含量不低于6％，醚溶性浸出物含量不低于20％。
方法2取五味子藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每2小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，加乙醇使含醇量達70％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達90％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的五味子提取物得率為1.5～5.5％，五味子醇甲含量不低于8％，醚溶性浸出物含量不低于25％。
黃芪的提取制備黃芪可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到黃芪提取物，提取溶劑優(yōu)選水或乙醇，黃芪的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法。
黃芪多糖和黃芪總皂苷均為治療肝炎的主要有效成分，下面分別提供二者的制備方法。
以多糖為主要有效成分的黃芪提取物(以下簡稱黃芪多糖)的優(yōu)選提取制備工藝取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。通過本工藝制備的黃芪多糖的得率為0.5～2％，多糖的含量不低于70％。
黃芪多糖還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法1取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達80％，靜置24小時，濾過，沉淀加水溶解，濾過，再加乙醇使含醇量達85％，靜置24小時，濾過，收集沉淀，真空干燥即得。通過本工藝制備的黃芪多糖得率為2～4％，多糖含量不低于40％。
方法2取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時，每次加水10倍量，提取液合并，過濾，濾液加乙醇使含醇量達85％，過濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的黃芪多糖得率為3～4％，多糖含量不低于35％。
以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物(以下簡稱黃芪總皂苷)的優(yōu)選提取制備工藝取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，其中黃芪甲苷含量不低于2.0％。
黃芪總皂苷還可由如下方法制備，但不僅限于下述方法方法1取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
方法2取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
本發(fā)明藥物組合物除可以用上述藥材投料制得外，還可由提取物代替藥材直接投料制成。根據(jù)苦參提取物相對于藥材的平均得率3.01％，五味子提取物相對于藥材的得率3.0％，黃芪多糖相對于藥材的得率1.2％，黃芪總皂苷相對于藥材的得率1.25％，分別計算，可以有以下兩種不同配比，其重量份數(shù)分別為配比1苦參提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黃芪多糖0.5～24份；優(yōu)選為苦參提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黃芪多糖1～12份；最優(yōu)為苦參提取物48份、五味子提取物9份、黃芪多糖5份。
配比2苦參提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黃芪總皂苷0.5～25份；優(yōu)選為苦參提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黃芪總皂苷1～12.5份；最優(yōu)為苦參提取物48份、五味子提取物9份、黃芪總皂苷5份。
上述配比中，苦參提取物的主要有效成分為總堿即苦參堿和氧化苦參堿的總量不低于50％，最好不低于70％；五味子提取物中五味子醇甲含量不低于6％，最好不低于10％，醚浸出物含量不低于20％，最好不低于30％；黃芪多糖中多糖含量不低于35％，最好不低于70％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中黃芪甲苷的含量不低于1％，最好不低于2％。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時可按照相應比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學篩選得到的，對于特殊病人，可以相應調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明進一步要求保護本發(fā)明藥物組合物在制備治療肝炎方面疾病的藥物中的應。本發(fā)明藥物組合物具有抗炎、保肝、調(diào)節(jié)免疫、促進病理修復、改善肝機能的作用，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各種類型的肝炎。藥理實驗表明，本發(fā)明藥物組合物對醋氨酚所致小鼠肝損傷具有顯著保護作用，可顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和過氧化脂質(zhì)(LPO)的活性；對D-氨基半乳糖所致的小鼠急性肝損傷具有顯著保護作用，可顯著降低谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，增加血清蛋白(ALB)的數(shù)量，縮短凝血時間(CT)；對四氯化碳(CCl4)所致的小鼠急性肝損傷具有顯著保護作用，可顯著降低肝指數(shù)；對CCl4所致的大鼠肝纖維化具有顯著保護作用，可顯著降低ALT、AST的活性，顯著降低透明質(zhì)酸(HA)和層粘蛋白(LN)的含量；對鴨乙肝病毒具有顯著抑制作用，且停藥后無明顯反跳；可顯著降低小鼠慢性酒精肝血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平。
本發(fā)明藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學上可接受的制劑，優(yōu)選口服制劑或注射劑，以口服或腸胃外給藥等方式施用于需要這種治療的患者。
用于腸胃外給藥時，可將其制成注射劑，注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，包括注射液、注射用無菌粉末和注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，其標示裝量可以為0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，一般不小于100ml的供靜脈滴注用的大體積注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，無菌粉末可以用溶媒結晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
用于口服給藥時，可將其制成常規(guī)的固體制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑和口服溶液劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑；片劑以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑；膠囊劑依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑；顆粒劑可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法制成的球狀或類球狀固體制劑；丸劑包括滴丸、糖丸、小丸等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。
本發(fā)明藥物組合物的制劑可采用現(xiàn)有制藥領域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時候可以添加各種藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學領域常規(guī)的滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。
本發(fā)明藥物組合物在制成注射劑時，所用溶劑可以是水性溶劑和非水性溶劑，也可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。水性溶劑最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；非水性溶劑常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸+醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸+枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉+碳酸鈉等；常用的增容劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的抗氧劑包括亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑包括苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇等。
本發(fā)明藥物組合物在制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預膠化淀粉、甘露醇等；粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明的藥物組合物具有以下優(yōu)點(1)本發(fā)明提供了一種新的用于治療肝炎的藥物組合物，滿足了臨床需要。
(2)對本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進行了摸索研究，通過對本發(fā)明藥物組合物對醋氨酚所致小鼠急性肝損傷的保護作用、對小鼠四氯化碳中毒所致急性肝損傷的研究，篩選出具有顯著療效的重量份范圍。
(3)首次通過藥效學實驗研究證明本發(fā)明的藥物組合物對醋氨酚、D-氨基半乳糖、四氯化碳所致的小鼠急性肝損傷有保護作用，可抗四氯化碳所致的大鼠肝纖維化，可以抑制鴨乙肝病毒的繁殖，對小鼠慢性酒精肝損傷具有保護作用，三藥具有協(xié)同增效作用，療效顯著，是本領域普通技術人員所意想不到的。
(4)苦參具有良好的抗肝炎作用，五味子和黃芪作輔助藥可顯著提高抗肝炎活性，合并用藥療效確切，且減小了相對用藥劑量，具有廣泛的應用前景。
以下通過實驗例來進一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實驗例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學實驗。
苦參、五味子和黃芪藥材的組合物以下簡稱KWH組合物，苦參提取物、五味子提取物和黃芪多糖的組合物以下簡稱KWH組合物I，苦參提取物、五味子提取物和黃芪總皂苷的組合物以下簡稱KWH組合物II。實驗例中所用的苦參提取物取自實施例1，五味子提取物取自實施例2，黃芪多糖取自實施例3，黃芪總皂苷取自實施例4。
實驗例1 KWH組合物對醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響實驗動物ICR小鼠，體重18～25g，雌雄各半。
供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水，自制；苦參組苦參顆粒劑，自制；五味子組五味子顆粒劑，自制；
黃芪組黃芪顆粒劑，自制；KWH顆粒劑不同配比組，配比見表1，自制。
實驗方法取小鼠230只，隨機分成23組，每組10只?？瞻讓φ战M和模型組每日灌胃給與生理鹽水，給藥組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10d?？瞻讓φ战M在末次給藥6h后給與生理鹽水，模型組和給藥組在末給藥6h后給與醋氨酚300mg/kg，16h后斷頭，取血液、肝臟，進行生化指標血清ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)和肝組織LPO(過氧化脂質(zhì))的測試。
表1 KWH組合物對醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響(X±SD，n＝10)
注與空白對照組比，&&p＜0.01；與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參組比，#p＜0.05，##p＜0.01；與五味子組比，△p＜0.05，△△p＜0.01；與黃芪組比，☆p＜0.05，☆☆p＜0.01。
實驗結果和結論結果見表1。與空白對照組相比，模型組的ALT和LPO的活性顯著升高，差異顯著(p＜0.01)，說明造模可靠。與模型組相比，苦參組、五味子組、黃芪組和KWH組合物不同配比組ALT和LPO的活性顯著降低(p＜0.05，p＜0.01)，說明各藥均對醋氨酚所致小鼠肝損傷有保護作用。其中KWH組合物各配比組療效更好(p＜0.01)，均優(yōu)于單用苦參、五味子、黃芪，說明苦參、五味子和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用，其中以苦參800～3200份、五味子100～1000份、黃芪100～1000份內(nèi)效果更好，苦參1600份、五味子300份、黃芪400份時效果最好。
實驗例2 KWH對四氯化碳中毒所致急性肝損傷小鼠肝指數(shù)的影響受試動物健康昆明種小鼠，體重18～2g。
供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組CCl4注射液，自制；苦參組苦參膠囊，自制；KWH膠囊劑不同配比組配比見表5，自制。
實驗方法取小鼠160只，隨機分為16組，分別為空白對照組、模型組、苦參組、KWH不同配比組，每組10只。各給藥組均用生理鹽水配置成混懸液后灌胃給藥?？瞻讓φ战M灌胃0.9％生理鹽水10ml/kg，其余各組動物均腹腔注射CCl410ml/kg，禁食過夜?？瞻讓φ战M給相應體積的生理鹽水，給藥組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天，于最后一次給藥后，斷頭處死動物，取肝臟，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重。
表2 KWH對四氯化碳中毒所致急性肝損傷小鼠肝指數(shù)的影響(X±SD，n＝10)
注與空白對照組比，**p＜0.01；與模型組比，#p＜0.05，##p＜0.01；與苦參組比，&p＜0.05，&&p＜0.01。
實驗結果和結論結果見表2。與空白對照組比較，模型組的肝指數(shù)極顯著增大(p＜0.01)，說明造模成功。與模型組比較，各給藥組的肝指數(shù)有顯著差異(p＜0.05，p＜0.01)，說明上述藥物對于四氯化碳所致肝損傷均有保護作用。與苦參組比，KWH各配比組的作用均優(yōu)于單用苦參(p＜0.05，p＜0.01)，說明苦參、五味子和黃芪三藥合用有協(xié)同增效作用，且在苦參8～32份、五味子1～10份、黃芪1～10份范圍內(nèi)效果較好，苦參16份、五味子3份、黃芪4份時效果最好。
實驗例3 KWH組合物對醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響實驗動物ICR小鼠，體重18～25g，雌雄各半。
供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參提取物組苦參提取物注射液，自制；五味子提取物組五味子提取物注射液，自制；黃芪多糖組黃芪多糖注射液，自制；黃芪總皂苷組黃芪總皂苷注射液，自制；組合物I不同配比組組合物I注射液(苦參提取物+五味子提取物+黃芪多糖)不同配比，自制(制備方法參見實施例8)；組合物II不同配比組組合物II注射液(苦參提取物+五味子提取物+黃芪總皂苷)不同配比，自制(制備方法參見實施例8)。
實驗方法實驗方法同實驗例1。取小鼠180只，隨機分成18組，每組10只。
表3 KWH組合物對醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響(X±SD，n＝10)
注與空白對照組比，◇◇p＜0.01；與模型組比，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參總堿組比，#p＜0.05，##p＜0.01；與五味子組比，△p＜0.05，△△p＜0.01；與黃芪多糖組比，☆p＜0.05，☆☆p＜0.01；與黃芪總皂苷組比，&p＜0.05，&&p＜0.01。
實驗結果和結論結果見表3。與空白對照組相比，模型組ALT和LPO的活性顯著升高，差異顯著(p＜0.01)，說明造模可靠。與模型組相比，苦參總堿組、五味子組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組和KWH組合物I和KWH組合物II各配比組ALT和LPO的活性明顯降低(p＜0.05，p＜0.01)，說明各藥均對醋氨酚所致小鼠肝損傷有保護作用。其中KWH組合物I和KWH組合物II各配比組療效更好(p＜0.01)，均優(yōu)于單用苦參總堿、五味子、黃芪多糖或黃芪總皂苷，說明苦參、五味子和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實驗例4 KWH組合物對D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的保護作用供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參提取物組苦參提取物注射液，自制；KWH組合物I低、中、高劑量組組合物I注射液，苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例9)；KWH組合物II低、中、高劑量組組合物II注射液，苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例9)。
實驗動物ICR小鼠，體重20～25g，雌雄各半。
實驗方法取小鼠90只，隨機分為9組，分別為空白對照組、模型組、苦參提取物組、KWH組合物I注射液低、中、高劑量組和KWH組合物II注射液低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)10d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)10d?？瞻讓φ战M在最后一次尾靜脈注射1h后腹腔注射生理鹽水，其余各組動物均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖500mg/kg。24h后處死動物取血，離心，取血清，全自動生化分析儀檢測。處死前動物斷尾取血玻片法測定動物凝血時間。檢測指標為天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血清白蛋白(ALB)、凝血時間(CT)。
表4 組合物對D-氨基半乳糖致急性肝損傷小鼠血清和凝血時間的影響(X±SD，n＝10)
注與空白對照組比較，◇◇p＜0.01，◇◇◇p＜0.001；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參總堿組比較，#p＜0.05，##p＜0.01實驗結果和結論結果見表4。與空白對照組相比，模型組天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性顯著升高(p＜0.001)，血清白蛋白(ALB)數(shù)量顯著減少(p＜0.01)，凝血時間(CT)閑顯著延長(p＜0.001)，說明造模可靠。與模型組相比，苦參總堿組、KWH組合物各劑量組天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性明顯降低(p＜0.05，p＜0.01)，血清白蛋白(ALB)數(shù)量明顯增加(p＜0.01)，凝血時間(CT)閑明顯縮短(p＜0.001)，說明各藥均有保肝作用，對D-氨基半乳糖所致小鼠肝損傷有保護作用。KWH組合物I和KWH組合物II各劑量組療效均優(yōu)于單用苦參總堿，說明苦參、五味子和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。其中KWH組合物I和KWH組合物II中、高劑量保護作用更明顯(p＜0.01)。
實驗例 5組合物抗鴨乙肝病毒作用實驗動物市售1日齡北京鴨。
病毒DHBV(乙型肝炎病毒)陽性血清，復旦大學醫(yī)學院微生物學教研室。
供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參提取物組苦參提取物注射液，自制；五味子提取物組五味子提取物注射液，自制；陽性對照組注射用阿昔洛韋，石藥集團中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司；KWH組合物I高、中、低劑量組組合物I注射液，相當于苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例9，處方1)；KWH組合物II高、中、低劑量組組合物II注射液，相當于苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例9，處方2)。
實驗方法北京鴨經(jīng)足靜脈注射0.2mlDHBV陽性血清，7d后取血，分離血清，-20℃保存待檢。篩選出感染成功的陽性鴨60只，隨機分為10組，每組6只，分別為空白對照組、陽性對照組、苦參提取物組、五味子提取物組、組合物I注射液高、中、低劑量組和組合物II注射液高、中、低劑量組?？瞻讓φ战M每日靜脈注射生理鹽水20ml/kg，每日2次，連續(xù)14d；給藥組注射給藥，每日2次，連續(xù)14d。陽性藥物作為治療對照組，以ACV按100mg/kg給藥，2次/d，給藥2周。分別用于藥前(1d)、用藥第7天(T7)，用藥第14天(T14)和停藥后第7天(P7)。自鴨腿脛靜脈取血，分離血清，-20℃保存待檢。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以雜交斑點吸光度值(A)作為標本DHB-DNA水平值。
實驗結果和結論結果見表5。陽性對照(阿昔洛韋)組在給藥后第7天和第14天，與給藥前及與空白對照組比較，差異有顯著性(p＜0.01)，但停藥后又顯著升高，與給藥前比較差異無顯著性(p＞0.05)。不同劑量組合物I和組合物II均對DHBV有抑制作用，且停藥后無反跳，其中高、中劑量組抑制作用更為明顯。組合物I和組合物II各給藥組療效均優(yōu)于單用苦參提取物或五味子提取物，說明苦參、五味子和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
表5 組合物對DHBV-DNA的抑制作用(X±SD，n＝6)
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與給藥前相比#p＜0.05，##p＜0.01。
實驗例6 KWH組合物抗大鼠肝纖維化作用供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參總堿組苦參總堿注射液，自制；KWH組合物I低、中、高劑量組KWH組合物I注射液，苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例8，處方1)；KWH組合物II低、中、高劑量組KWH組合物II注射液，苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例8，處方2)。
實驗動物Wistar大鼠，體重180～230g，雄性。
實驗方法取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作為對照組。肝纖維化模型組應用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，誘導肝纖維化模型。取肝纖維化模型大鼠80只，隨機分為8組，分別為模型組、苦參提取物組、KWH組合物I注射液低、中、高劑量組和KWH組合物II注射液低、中、高劑量組，每組10只。除對照組外，其余各組繼續(xù)以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次。苦參總堿組、KWH組合物I注射液低、中、高劑量組和KWH組合物II注射液低、中、高劑量組同時灌胃給藥相應藥物，劑量見下表。繼續(xù)給藥2周。10周后宰殺大鼠，無菌操作取血2ml，分離血清，-20℃保存，用放射免疫法檢測肝纖維化指標透明質(zhì)酸(HA)和層粘蛋白(LN)；用生化法檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，采用全自動生化分析儀進行檢測。
表6 KWH組合物對CCl4所致肝纖維化大鼠的血清學指標的影響(X±SD，n＝10)
注與空白對照組比較，◇◇p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參總堿組比較，#p＜0.05。
實驗結果和結論結果見表6。與空白對照組比較，模型組大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有顯著性差異，說明模型穩(wěn)定可靠。硫普羅寧、KWH組合物I和KWH組合物II治療后肝纖維化大鼠血清ALT和AST均低于模型組，差異具有顯著性(p＜0.05或p＜0.01)，提示苦參、KWH組合物I和KWH組合物II有降酶和保護肝功能的作用；苦參總堿組、KWH組合物I和KWH組合物II治療后血清HA和LN水平均顯著低于模型組，差異具有顯著性(p＜0.05或p＜0.01)，提示苦參、KWH組合物I和KWH組合物II均可改善肝纖維化血清學指標，具有抗肝纖維化的作用。其中，KWH組合物I和KWH組合物II組療效優(yōu)于苦參總堿組，提示苦參、五味子和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實驗例7 KWH組合物對小鼠慢性酒精性肝損傷的保護作用動物健康小鼠，100只，體重20～25g，雌雄兼用，隨機分為10組，每組10只。
供試品氯化鈉注射液(正常對照組)250ml∶2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司；苦參提取物組苦參提取物片劑KWH組合物I低、中、高劑量組KWH組合物I片劑，苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例5，處方1)；KWH組合物II低、中、高劑量組KWH組合物II片劑，苦參+五味子+黃芪1600+300+400，自制(制備方法參見實施例5，處方2)。
實驗方法健康小鼠10只，灌胃給予蒸餾水12ml/kg，每天1次，共5周，作為正常對照組。其余小鼠，灌胃給予50％乙醇12ml/kg，每天1次，共5周；隨后隨機分為9組，分別為模型組和各給藥組。此后，各組按表1-4腹腔注射給藥，每日1次，共8周。末次給藥24h后，下腔靜脈采血，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平；同時，取肝組織作常規(guī)病理組織學檢查。
表7 黃芪、丹參、苦參素聯(lián)合用藥對小鼠慢性酒精性肝損傷的影響(X±SD，n＝10)
注與正常對照組相比較，##p＜0.01；與模型組相比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參提取物組比較，&p＜0.05，&p＜0.01。
實驗結果和結論結果見表7。與正常對照組相比較，模型組的血清ALT、AST、TG水平均顯著升高(p＜0.01)，病理組織學檢查發(fā)現(xiàn)肝組織明顯受損，肝細胞脂肪性病變、空泡變性、凋亡等，說明造模成功。與模型組相比較，各給藥組對小鼠慢性酒精性肝損傷均具有保護作用，能降低血清血清ALT、AST、TG水平，減輕肝組織病變(p＜0.05，p＜0.01)。與苦參提取物組比，KWH組合物I和II的低劑量組優(yōu)于苦參(p＜0.05)，中、高劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，說明苦參提取物、五味子提取物和黃芪提取物合并用藥有協(xié)同增效作用。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實施例5～11中所用的苦參提取物取自實施例1，五味子提取物取自實施例2，黃芪多糖取自實施例3，黃芪總皂苷取自實施例4。
實施例1 苦參提取物的制備(以苦參總堿為主要有效成分)取苦參藥材，粉碎成粗粉，用0.2％鹽酸滲漉至無生物堿反應為止，過濾滲漉液，并通過陽離子樹脂，交換完畢后，將樹脂洗至中性，干燥。用濃氨水堿化樹脂，裝入索氏提取器用氯仿連續(xù)回流提取至提取液無生物堿反應。氯仿提取液用無水硫酸鈉脫水，減壓回收氯仿，得稠膏狀物。
苦參提取物鑒別實驗(1)取本品約10mg，加1％鹽酸溶液10ml使溶解，濾過，濾液分置三支試管中，一管中加碘化鉍鉀實驗生成紅棕色沉淀；一管中加碘化汞鉀試液，生成黃白色沉淀；另一管中加碘化鉀碘實驗，生成棕褐色沉淀。
(2)取本品適量，加乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作為供試品溶液。另取苦參藥材粉末0.5g，加氯仿25ml，濃氨試液0.3ml，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇0.5ml使溶解，作為對照藥材溶液。再取苦參堿和氧化苦參堿對照品適量，分別加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述四種溶液各2ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試夜(50∶6∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的兩個斑點。
苦參提取物含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇-3％磷酸溶液(75∶10∶1 5)為流動相；檢測波長為220nm。理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計算應不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，分別加乙腈-無水乙醇(80∶20)溶解，制成每1ml含苦參堿0.05mg，氧化苦參堿0.15mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)30分鐘，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5ml，通過中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內(nèi)徑1cm)，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)各20ml洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取上述對照品溶液各5μl與供試品溶液5～10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述工藝制得三批樣品，提取物得率和含量見表6。由結果可知，苦參提取物得率為2～5％，含量不低于70％。
表8 苦參提取物的得率和含量
實施例2 五味子提取物的制備取五味子藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮2次，每2小時，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，加乙醇使含醇量達60％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達80％，冷藏放置24小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
五味子提取物的鑒別取本品粉末1g，加三氯甲烷20ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點子同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
五味子提取物的含量測定五味子醇甲的含量測定照高效液相色譜法(附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13∶7)為流動相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計算應不低于2000。
對照品溶液的制備取五味子醇甲對照品15mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含五味子醇甲0.3mg)。
供試品溶液的制備取本品粉末約0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇約20ml，超聲處理(功率250W，頻率44kHz)20分鐘，取出，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
醚溶性浸出物的含量測定照揮發(fā)性醚浸出物測定法(附錄X)測定。
取本品粉末(過四號篩)4g，置五氧化二磷干燥器中干燥12小時，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流8小時，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，放置，揮去乙醚，殘渣置五氧化二磷干燥器中干燥18小時，精密稱定，緩緩加熱至105℃，并于105℃干燥至恒重。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量。計算醚浸出物含量。
根據(jù)上述工藝，制得三批樣品，得率和含量見表7。由結果可知，通過本工藝制備的五味子提取物，得率2～4％，其中五味子醇甲的含量不低于10％，醚溶性浸出物含量不低于30％。
表9 五味子提取物的得率和含量
實施例3 以多糖為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪多糖的制備黃芪多糖制備工藝取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
黃芪多糖的含量測定標準溶液的制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標準曲線繪制精密量取標準溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對照，在490nm波長處測定吸收值，計算回歸方程。
測定方法取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標準曲線繪制項下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測定吸收值，依回歸方程計算多糖的含量。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，得率和含量見表8。由結果可以看出，通過本工藝制備的黃芪提取物中黃芪多糖的含量不低于50％，提取物得率為0.5～2％。
表10 黃芪多糖的得率和含量
實施例4 以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物即黃芪總皂苷的制備黃芪總皂苷制備工藝取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
黃芪總皂苷鑒別實驗鑒別實驗一取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點。
鑒別實驗二取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振搖提取，分取乙酸乙脂液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙脂1ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點。
黃芪總皂苷含量測定總皂苷的含量測定對照品溶液的制備精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷0.1mg)。
供試品溶液的制備取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法精密量取對照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長處測定吸光度，計算，即得。
黃芪甲苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(32∶68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計算不低于4000。
對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點對數(shù)方程計算，即得。
表11 黃芪總皂苷和黃芪甲苷的得率及含量
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，得率和含量見表9。由結果可以看出，通過本工藝制備的黃芪總皂苷得率0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，黃芪甲苷含量不低于2.0％。
實施例5 本發(fā)明藥物組合物片劑的制備處方1
處方2
處方3
處方4
處方5
處方6
制備工藝原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂、羧甲淀粉鈉整粒，半產(chǎn)品檢驗后確定片重，壓片、包裝得成品。
實施例6 本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備處方1
處方2
處方3
處方4
處方5
處方6
制備工藝原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂整粒，半產(chǎn)品檢驗后確定裝量，裝膠囊、包裝得成品。
實施例7 本發(fā)明藥物組合物顆粒劑的制備處方1
處方2
處方3
處方4
制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實施例8 本發(fā)明藥物組合物水針劑的制備處方1
處方2
處方3
處方4
制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實施例9 本發(fā)明藥物組合物粉針劑的制備處方1
處方2
制備工藝原輔料用無菌注射用水配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌裝、凍干、壓塞、軋蓋、包裝制成成品。
實施例10 本發(fā)明藥物組合物氯化鈉輸液的制備處方1
處方2
制備工藝制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實施例11 本發(fā)明藥物組合物葡萄糖輸液的制備處方1
處方1
制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌裝、加塞、軋蓋、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
權利要求
1.一種用于肝炎的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，制成它所含藥效組分的原料藥的組成為苦參400～6400份、五味子50～2000份、黃芪50～2000份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，制成它所含藥效組分的原料藥的組成為苦參800～3200份、五味子100～1000份、黃芪100～1000份。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，制成它所含藥效組分的原料藥的組成為苦參1600份、五味子300份、黃芪400份。
4.如權利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，其中的原料藥可以用適宜的溶劑和方法制備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑，總提取物中所含的主要有效成分為苦參總堿、五味子木質(zhì)素類、黃芪多糖或黃芪總皂苷，主要有效成分的總含量不低于50％。
5.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成還可以為苦參提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黃芪多糖0.5～24份；或者為苦參提取物12～193份、五味子提取物1.5～60份、黃芪總皂苷0.5～25份。
6.如權利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成還可以為苦參提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黃芪多糖1～12份；或者為苦參提取物24～96份、五味子提取物3～30份、黃芪總皂苷1～12.5份。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成還可以為苦參提取物48份、五味子提取物9份、黃芪多糖5份；或者為苦參提取物48份、五味子提取物9份、黃芪總皂苷5份。
8.如權利要求5～7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的苦參提取物的主要有效成分總堿的含量不低于50％；五味子提取物中，五味子醇甲含量不低于6％，醚浸出物含量不低于20％；黃芪多糖中多糖含量不低于35％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，其中黃芪甲苷的含量不低于1％。
9.如權利要求1～3、5～7所述的任一藥物組合物，其特征在于，該組合物可以與藥學上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。
10.如權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述的臨床上或藥學上可接受的劑型為注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，公開了一種用于肝炎的藥物組合物以及含有該藥物組合物的制劑及其制備方法和用途，制成它所含藥效組分的原料藥的組成為苦參、五味子和黃芪，或者為苦參提取物、五味子提取物和黃芪提取物。其重量配比范圍為苦參4～64份、五味子0.5～20份、黃芪0.5～20份，或者為苦參提取物120～1920份、五味子提取物15～600份、黃芪多糖6～240份，或者為苦參提取物120～1920份、五味子提取物15～600份、黃芪總皂苷6～240份。該藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型，優(yōu)選口服制劑或注射劑。該藥物組合物具有抗肝炎作用，可用于制備治療甲肝、乙肝、丙肝等各種類型的肝炎的藥物。
文檔編號A61P1/00GK1969957SQ20061014918
公開日2007年5月30日 申請日期2006年11月21日 優(yōu)先權日2005年11月22日
發(fā)明者黃振華 申請人:黃振華