專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸a片劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參的根。味苦、性微寒，丹參是最常用的藥材之一，用于治療心絞痛、高血壓、冠心病和中風(fēng)等心腦血管疾病，具有活血化瘀、養(yǎng)血安神、涼血排癰和排毒生肌的功效，是中藥活血化瘀的常用藥味。現(xiàn)有丹參制劑大部分都是丹參中提取的粗提物或直接用丹參飲片，體內(nèi)吸收代謝快，制劑難以保持口服給藥血藥濃度的穩(wěn)定性。丹酚酸Asalvianolic acid A是丹參有效成分之一，其結(jié)構(gòu)式為 杜冠華基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2000，20(5)10～14等人對(duì)丹酚酸A的活性進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對(duì)大鼠離體心肌缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用，因此在心血管方向有良好的療效。
丹酚酸A是自然界抗氧化活性較強(qiáng)的化合物，易于被氧化，高溫時(shí)更容易降解，因此，將丹參丹酚酸A開(kāi)發(fā)成臨床上可以應(yīng)用的中藥制劑是我們醫(yī)藥研究人員需待解決的難題。中國(guó)專(zhuān)利CN1397276A、CN1352985A中公開(kāi)了丹參丹酚酸A制備成片劑，但其只是公開(kāi)了簡(jiǎn)單的制備方法，而沒(méi)有對(duì)制劑進(jìn)行合理、科學(xué)的定量分析；在制劑加工過(guò)程中，加入了抗氧劑保護(hù)，但只是針對(duì)丹酚酸A的基本性質(zhì)進(jìn)行的簡(jiǎn)單疊加，并且加入的抗氧劑是根據(jù)制劑的總量進(jìn)行的變化，其比例在制劑過(guò)程中無(wú)法有定量的關(guān)系，并且其量的關(guān)系是從0.01％-95％，相差近10000倍，這在制劑過(guò)程中對(duì)輔料的選擇范圍過(guò)大，會(huì)對(duì)制備制劑過(guò)程產(chǎn)生很大的困難，而且該專(zhuān)利沒(méi)有針對(duì)制劑性質(zhì)進(jìn)行深入的研究，特別是在制備片劑中是否需要加入抗氧劑這一問(wèn)題沒(méi)有進(jìn)行深入的研究。為了制備一種穩(wěn)定性好、安全可靠的丹參丹酚酸A片劑，必須針對(duì)丹參丹酚酸A的物理、化學(xué)性質(zhì)和中藥片劑的制劑過(guò)程的特殊要求，進(jìn)行更深入的研究，得到安全可靠的制劑。
現(xiàn)有技術(shù)在中藥片劑質(zhì)量檢測(cè)中采用崩解時(shí)限的方法，但依靠崩解時(shí)限檢查作為所有片劑在體內(nèi)吸收的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)顯然是不夠完善的，因?yàn)樗幬锶芙夂笸ㄟ^(guò)崩解儀篩網(wǎng)粒徑常在1.6-2.0mm之間，而藥物需呈溶液狀態(tài)才能被機(jī)體吸收，其粒子大小以來(lái)計(jì)算，所以崩解僅僅是藥物溶出的最初階段，而后面的繼續(xù)分散和溶解過(guò)程，崩解時(shí)限檢查是無(wú)法控制的，且片劑的崩解還要受到處方設(shè)計(jì)，制劑制備，貯存過(guò)程及體內(nèi)許多復(fù)雜因素的影響，所以崩解時(shí)限檢查不能客觀反映藥物與賦形劑之間的關(guān)系和影響，而溶出度檢查卻包括了崩解及溶解過(guò)程，因此研究中藥片劑溶出度就有更重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，我們通過(guò)長(zhǎng)期的研究，制備成合格的丹參丹酚酸A片劑，對(duì)制劑進(jìn)行高效液相法分析得3個(gè)共有峰；記錄時(shí)間為90分鐘，以丹參丹酚酸A為參照物，其保留時(shí)間為1，2個(gè)雜質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.71、1.36；以丹參丹酚酸A為對(duì)照，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)，其含量為0.10-1.96％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.11-5.97％，確定其為丹參丹酚酸C，總雜質(zhì)的含量不大于10.0％。根據(jù)丹參丹酚酸A物理和化學(xué)性質(zhì)，在制備制劑中選擇填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑，特別是不加任何抗氧劑，通過(guò)其它藥用輔料對(duì)丹參丹酚酸的保護(hù)作用，使丹參丹酚酸A不能降解，以達(dá)到有效成分穩(wěn)定的目的；在潤(rùn)濕劑的選擇上，根據(jù)丹參丹酚酸A特有的性質(zhì)(少量水粘度特別大)和制劑制粒的過(guò)程，不使用常規(guī)潤(rùn)濕劑水和30％-70％乙醇，而是使用無(wú)水乙醇，制備成合格的片劑，進(jìn)行溶出度實(shí)驗(yàn)研究，在45分鐘時(shí)80％以上的有效成分可以溶出。藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明片劑治療和/或預(yù)防心血管疾病疾病方面具有很好的作用。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
丹參丹酚酸A制備方法丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5-9.0、30-80℃溫度、加熱1-6小時(shí)或調(diào)PH值至3.5-6.0、110-130℃溫度、0.05MPa-0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1-6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂柱層析分離，用水洗脫后，用洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液回收洗脫劑至盡；濃縮液用硅膠或葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，用洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液回收洗脫劑至盡；濃縮液調(diào)PH值至2-5，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；其制備方法中所述大孔樹(shù)脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
其制備方法中所述大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫。
其制備方法中硅膠柱層析采用氯仿∶甲醇∶甲酸＝5∶1∶0.1為洗脫溶劑。
其制備方法中所述葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，先用水、20-50％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50-95％乙醇溶液洗脫。
其制備方法中所述的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種。
制劑的制備原料藥為丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑50-200重量份、崩解劑1-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
原料藥為丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑150-200重量份、崩解劑4-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到以丹參丹酚酸A計(jì)單位劑量的片劑；填充劑為乳糖、淀粉、糊精、糖粉、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉、甘露醇、磷酸氫鈣、硫酸鈣中的一種；崩解劑為羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、羥丙纖維素、淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素中的一種；潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、聚乙二醇中的一種；單位劑量以丹參丹酚酸A計(jì)為5-1000mg；單位劑量小于5mg臨床應(yīng)用作用很小，單位劑量大于1000mg，臨床應(yīng)用有安全性的問(wèn)題；單位劑量以丹參丹酚酸A計(jì)為20-500mg。
丹參丹酚酸A片劑在45分鐘的溶出度大于80％。
丹參丹酚酸A片劑在制備治療和/或預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明在于提供一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，制劑進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)，含有2個(gè)雜質(zhì)峰，其中1個(gè)雜質(zhì)為丹參丹酚酸C，總雜質(zhì)含量不大于10.0％。
本發(fā)明在于提供一種不需要加入抗氧劑、潤(rùn)濕劑為無(wú)水乙醇制備的丹參丹酚酸A片劑。
本發(fā)明還在于提供一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑的制備方法。
二.檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)方法色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS預(yù)柱；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)286nm；理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例進(jìn)行洗脫。
丹參丹酚酸A對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取丹酚酸A對(duì)照品10mg到50ml容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度。
供試品溶液的配制精密稱(chēng)取樣品，經(jīng)過(guò)處理后定容到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄90分鐘的色譜圖，采用按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得按照本申請(qǐng)工藝方法得到丹參丹酚酸A片劑，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1表1丹參丹酚酸A片劑樣品測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)丹參丹酚酸A片劑中丹參丹酚酸A與雜質(zhì)在含量、保留時(shí)間的規(guī)律采用高效液相色譜法測(cè)定，得到3個(gè)共有峰，其中包含2個(gè)雜質(zhì)；記錄時(shí)間為90分鐘，以丹參丹酚酸A為參照物，其保留時(shí)間為1，2個(gè)雜質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.71、1.36；以丹參丹酚酸A為對(duì)照，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)，其含量為0.10-1.96％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.11-5.97％，確定其為丹參丹酚酸C，總雜質(zhì)的含量不大于10.0％。
三.丹參丹酚酸A結(jié)構(gòu)確證資料丹酚酸A(1HNMR，D-丙酮，ppm，Hz)6.83(1H，d，J＝8.7Hz，A-5)，7.21(1H，d，J＝8.4Hz，A-6)，8.06(1H，d，J＝15.8Hz，A-7)，6.33(1H，d，J＝15.8Hz，A-8)，6.82(1H，d，J＝2.4Hz，B-2)，6.71(1H，d，J＝8.0Hz，B-5)，6.62(1H，dd，J＝2.0、8.0Hz，B-6)，3.10(1H，dd，J＝4.2、14.3Hz，B-7α)，2.99(1H，dd，J＝8.7、14.3Hz，B-7β)，5.21(1H，dd，J＝4.2、8.7Hz，B-8)，7.13(1H，d，J＝2.0Hz，C-2)，6.85(1H，d，J＝8.4Hz，C-5)，6.93(1H，dd，J＝1.9、8.2Hz，C-6)，7.16(1H，d，J＝16.4Hz，C-7)，6.72(1H，d，J＝16.4Hz，C-8)。(13CNMR，D-丙酮，ppm，Hz)125.9(A-1)，130.9(A-2)，146.1(A-3)，147.4(A-4)，116.0(A-5)，121.7(A-6)，145.8(A-7)，116.1(A-8)，166.9(A-9)，129.1(B-1)，117.1(B-2)，144.7(B-3)，143.9(B-4)，114.8(B-5)，120.3(B-6)，37.5(B-7)，73.7(B-8)，171.1(B-9)，127.6(C-1)，119.8(C-2)，145.7(C-3)，146.4(C-4)，113.7(C-5)，120.2(C-6)，137.4(C-7)，116.2(C-8)。
四.丹參丹酚酸C結(jié)構(gòu)確證資料丹參丹酚酸C(1HNMR，CD3OD，ppm，Hz)6.87(d，J＝8.2，A-5)，7.35(d，J＝8.3，A-6)，7.91(d，J＝16.0，A-7)，6.45(d，J＝16.0，A-8)，6.79(d，J＝1.7，B-2)，6.72(d，J＝9.4，B-5)，6.65(d，J＝8.1，1.7，B-6)，3.13(dd，J＝14.3，4.2，B-7α)，3.06(dd，J＝14.3，8.2，B-7β)，5.24(dd，J＝8.1，4.3，B-8)，7.38(d，J＝1.9，C-2)，6.72(d，J＝9.4，C-5)，7.36(dd，J＝8.2，2.1，C-6)，7.19(s，C-8)。(13CNMR，CD3OD，ppm，Hz)123.7(A-1)，132.7(A-2)，146.1(A-3)，148.0(A-4)，111.8(A-5)，118.8(A-6)，145.2(A-7)，116.7(A-8)，168.7(A-9)，129.4(B-1)，117.7(B-2)，145.3(B-3)，144.1(B-4)，116.3(B-5)，121.9(B-6)，38.0(B-7)，74.8(B-8)，173.8(B-9)，119.6(C-1)，114.9(C-2)，146.0(C-3)，146.7(C-4)，113.4(C-5)，126.3(C-6)，159.4(C-7)，99.3(C-8)。
五.以溶出率為指標(biāo)進(jìn)行處方優(yōu)選實(shí)驗(yàn)填充劑小于40重量份時(shí)制粒很困難，大于200重量份時(shí)，片子太大同時(shí)浪費(fèi)輔料；崩解劑小于1重量份時(shí)，溶解度不符合要求，大于6重量份時(shí)浪費(fèi)輔料，因此在丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑40-200重量份、崩解劑1-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份范圍內(nèi)進(jìn)行優(yōu)選實(shí)驗(yàn)。
方案1丹參丹酚酸A40重量份、填充劑40重量份、崩解劑1重量份、潤(rùn)滑劑1重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20重量份；方案2丹參丹酚酸A40重量份、填充劑45重量份、崩解劑2重量份、潤(rùn)滑劑2重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25重量份；方案3丹參丹酚酸A40重量份、填充劑50重量份、崩解劑1重量份、潤(rùn)滑劑1重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20重量份；方案4丹參丹酚酸A40重量份、填充劑100重量份、崩解劑1重量份、潤(rùn)滑劑2重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25重量份；方案5丹參丹酚酸A40重量份、填充劑200重量份、崩解劑1重量份、潤(rùn)滑劑1重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20重量份；方案6丹參丹酚酸A50重量份、填充劑40重量份、崩解劑3重量份、潤(rùn)滑劑2重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25重量份；方案7丹參丹酚酸A50重量份、填充劑40重量份、崩解劑6重量份、潤(rùn)滑劑3重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇28重量份；方案8丹參丹酚酸A50重量份、填充劑50重量份、崩解劑1重量份、潤(rùn)滑劑1重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20重量份；方案9丹參丹酚酸A50重量份、填充劑100重量份、崩解劑4重量份、潤(rùn)滑劑2重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25重量份；方案10丹參丹酚酸A50重量份、填充劑200重量份、崩解劑6重量份、潤(rùn)滑劑3重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇30重量份；方案11丹參丹酚酸A60重量份、填充劑40重量份、崩解劑6重量份、潤(rùn)滑劑4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇30重量份；
方案12丹參丹酚酸A60重量份、填充劑50重量份、崩解劑1重量份、潤(rùn)滑劑1重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20重量份；。
方案13丹參丹酚酸A60重量份、填充劑120重量份、崩解劑2重量份、潤(rùn)滑劑3重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇28重量份；方案14丹參丹酚酸A60重量份、填充劑200重量份、崩解劑6重量份、潤(rùn)滑劑4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇30重量份。
實(shí)驗(yàn)方法按照上述實(shí)驗(yàn)方案制備片劑，得到的片劑按照《中華人民共和國(guó)藥典二部》(2005年版)附錄溶出度實(shí)驗(yàn)方法(第一法)測(cè)定不同方案片劑的溶出度(45分鐘取樣測(cè)定)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2表2不同方案片劑的溶出度實(shí)驗(yàn)研究

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)研究，我們確定當(dāng)?shù)⒌し铀酇在40-60重量份時(shí)，填充劑應(yīng)該大于50重量份、崩解劑應(yīng)該大于1重量份時(shí)，溶出度可以達(dá)到80％以上，藥典規(guī)定45分鐘溶出度應(yīng)該大于70％，因此，我們確定制劑原料藥為丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑50-200重量份、崩解劑1-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份；優(yōu)選制劑處方為丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑150-200重量份、崩解劑4-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份五.藥用輔料選擇抗氧劑的實(shí)驗(yàn)本領(lǐng)域的技術(shù)人員查閱文獻(xiàn)可以得知丹參丹酚酸A是自然界抗氧化活性較強(qiáng)的化合物，易于被氧化，因此認(rèn)為應(yīng)該在片劑制備中應(yīng)該加入一定量的抗氧劑，我們經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在片劑中不加入抗氧劑，也能很好的保持有效成分丹參丹酚酸A的含量。
實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A40克、填充劑150克、崩解劑4克、潤(rùn)滑劑1克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇30克，抗氧劑40克；方案2丹參丹酚酸A60克、填充劑200克、崩解劑6克、潤(rùn)滑劑4克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇30克，抗氧劑30克；方案3丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑2克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25克，抗氧劑12.5克；方案4丹參丹酚酸A45克、填充劑160克、崩解劑4.5克、潤(rùn)滑劑3克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇22克，抗氧劑9克；方案5丹參丹酚酸A55克、填充劑190克、崩解劑5.5克、潤(rùn)滑劑2.5克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇28克，抗氧劑5克；方案6丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑3.5克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25克，抗氧劑0克；
實(shí)驗(yàn)方法按照上述實(shí)驗(yàn)方案原料藥處方進(jìn)行制備片劑，制備合格后按照上述分析實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行檢測(cè)分析，得到丹參丹酚酸A含量；將片劑在常溫下放置3個(gè)月，再進(jìn)行檢測(cè)，得到丹參丹酚酸A含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3表3不同方案丹參丹酚酸A含量變化

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，在制劑過(guò)程中加入抗氧劑和不加入抗氧劑對(duì)丹參丹酚酸A的含量沒(méi)有影響，從制劑制備過(guò)程和經(jīng)濟(jì)角度考慮，我們確定在制劑處方中不加入任何抗氧劑。
六.潤(rùn)濕劑選擇實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案方案1丹參丹酚酸A40克、填充劑150克、崩解劑4克、潤(rùn)滑劑1克、潤(rùn)濕劑水30克；方案2丹參丹酚酸A60克、填充劑200克、崩解劑6克、潤(rùn)滑劑4克、潤(rùn)濕劑30％乙醇30克；方案3丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑2克、潤(rùn)濕劑40％乙醇25克；方案4丹參丹酚酸A45克、填充劑160克、崩解劑4.5克、潤(rùn)滑劑3克、潤(rùn)濕劑50％乙醇22克；方案5丹參丹酚酸A55克、填充劑190克、崩解劑5.5克、潤(rùn)滑劑3克、潤(rùn)濕劑60％乙醇28克；
方案6丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑3克、潤(rùn)濕劑70％乙醇25克；方案7丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑2克、潤(rùn)濕劑80％乙醇25克；方案8丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑3克、潤(rùn)濕劑90％乙醇25克；方案9丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑2克、潤(rùn)濕劑95％乙醇25克；方案10丹參丹酚酸A50克、填充劑180克、崩解劑5克、潤(rùn)滑劑3克、潤(rùn)濕劑100％乙醇25克；實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照上述實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行制劑制備，在制粒過(guò)程中，方案1-方案8根本制不出顆粒，所有原料粘結(jié)在一起；方案9雖能夠制備出顆粒，但其顆粒大小等指標(biāo)不合格；方案10可以制備出合格的顆粒。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，原料藥中潤(rùn)濕劑應(yīng)該確定為無(wú)水乙醇。
七.溶出度實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法按照本申請(qǐng)工藝制備得到片劑，按照《中華人民共和國(guó)藥典二部》(2005年版)溶出度實(shí)驗(yàn)方法(第一法)進(jìn)行檢測(cè)分析(分析方法按照本申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法進(jìn)行)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4表4本申請(qǐng)片劑溶出度

實(shí)驗(yàn)結(jié)論本申請(qǐng)制劑處方是在優(yōu)選實(shí)驗(yàn)下確定的，通過(guò)本申請(qǐng)?zhí)幏街苽涞母鹘M制劑進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)表明在45分鐘的溶出度大于80％，充分說(shuō)明本申請(qǐng)制劑處方具有科學(xué)意義。
八.藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)11.對(duì)麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠108只，體重240-260g，隨機(jī)分組空白對(duì)照組、復(fù)方丹參滴丸組、本申請(qǐng)丹參丹酚酸片劑組。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)飼養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行試驗(yàn)，動(dòng)物稱(chēng)重，20％烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按10～12ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸∶呼比為1∶1。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測(cè)正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開(kāi)皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長(zhǎng)，打開(kāi)胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開(kāi)3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無(wú)創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為1～1.5mm，寬2～3mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應(yīng)藥液，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無(wú)改變者淘汰)。結(jié)扎后1 0min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開(kāi)結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機(jī)，動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分別記錄心電圖。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱(chēng)重，計(jì)算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。

表5丹酚酸A片劑對(duì)結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響(

)

注與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01；與陽(yáng)性復(fù)方丹參滴丸組比較#P＜0.05實(shí)驗(yàn)2對(duì)結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支所致大鼠心肌缺血/再灌注模型血清中SOD活性、MDA含量的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6表6對(duì)結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支所致大鼠心肌缺血/再灌注模型血清中SOD活性、MDA含量的影響

注與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01；與陽(yáng)性復(fù)方丹參滴丸組比較#P＜0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)論本申請(qǐng)制劑服用劑量確定為5-1000mg，優(yōu)選服用劑量為20-500mg，通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明本申請(qǐng)制劑具有很好的藥理作用。


1.圖1橫坐標(biāo)單位是時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)單位是電壓(mv)；圖1是丹參丹酚酸A標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。
2.圖2橫坐標(biāo)單位是時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)單位是電壓(mv)；圖2是丹參丹酚酸A片劑的高效液相色譜圖。
3.圖3橫坐標(biāo)單位是時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)單位是電壓(mv)；圖3是丹參丹酚酸C標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較區(qū)別特征在于1.現(xiàn)有技術(shù)在制劑研究中，對(duì)丹參丹酚酸A有效成分含量進(jìn)行了限定，對(duì)制劑中的雜質(zhì)未進(jìn)行任何研究，而本發(fā)明在保證有效成分含量的基礎(chǔ)上，制劑中的雜質(zhì)進(jìn)行充分的研究，發(fā)現(xiàn)了雜質(zhì)與有效成分在含量、保留時(shí)間的規(guī)律，并進(jìn)行了限定；同時(shí)初步確定了一個(gè)雜質(zhì)是丹參丹酚酸F或其同分異構(gòu)體，一個(gè)雜質(zhì)確定為丹參丹酚酸C。
2.現(xiàn)有技術(shù)中根據(jù)丹參丹酚酸A的性質(zhì)，在制劑處方中加入了一定量的抗氧劑，而本發(fā)明在制劑研究中發(fā)現(xiàn)，制劑處方中不加入抗氧劑也可以很好的阻止丹參丹酚酸A的降解；現(xiàn)有技術(shù)使用的潤(rùn)濕劑為水或者30％-70％乙醇，而我們?cè)谘芯堪l(fā)現(xiàn)潤(rùn)濕劑的選擇在制劑過(guò)程中非常重要，實(shí)驗(yàn)確定無(wú)水乙醇可以作為制劑制備的潤(rùn)濕劑。
3.現(xiàn)有中藥片劑質(zhì)量檢測(cè)中一般采用崩解時(shí)限分析，我們科研人員采用溶出度實(shí)驗(yàn)確定了本申請(qǐng)制劑處方具有科學(xué)意義，本申請(qǐng)片劑的溶出度在45分鐘時(shí)可以達(dá)到80％以上，有很好的生物利用度。
六.制備實(shí)施例實(shí)施例1丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至5.0，120℃溫度，0.10MPa壓強(qiáng)，加熱4小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35％乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用75％乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A20克、填充劑淀粉25克、崩解劑羧甲基淀粉鈉0.5克、潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂0.5克，潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇10克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑4000片；單位劑量為5mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.10％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.11％，總雜質(zhì)的含量1.2％；溶出度經(jīng)測(cè)定為83.2％。
實(shí)施例2丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至9.0、80℃溫度、加熱6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-400A大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、50％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用95％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A40克、填充劑糊精150克、崩解劑羥丙基淀粉4克、潤(rùn)滑劑滑石粉1克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑2000片；單位劑量20mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為1.96％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為5.97％，總雜質(zhì)的含量10.0％；溶出度經(jīng)測(cè)定為85.0％。
實(shí)施例3丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至3.5，110℃溫度，0.05MPa壓強(qiáng)，加熱1小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、10％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、20％乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用95％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2，經(jīng)乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A50克、填充劑糖粉180克、崩解劑羥丙纖維素5克、潤(rùn)滑劑微粉硅膠3克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇25克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑1000片；單位劑量50mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.35％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為1.22％，總雜質(zhì)的含量2.21％；溶出度經(jīng)測(cè)定為84.7％。
實(shí)施例4丹參丹酚酸A提取純化丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5，30℃溫度，加熱1小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-400大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、10％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用硅膠，洗脫劑采用氯仿∶甲醇∶甲酸＝5∶1∶0.1為洗脫溶劑洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A60克、填充劑微晶纖維素200克、崩解劑淀粉6克、潤(rùn)滑劑、聚乙二醇4克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇30克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑1000片；單位劑量60mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.87％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為4.30％，總雜質(zhì)的含量7.38％；溶出度經(jīng)測(cè)定為84.2％。
實(shí)施例5丹參丹酚酸A提取純化丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0，130℃溫度，0.17MPa壓強(qiáng)，加熱6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液HPD-100A大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20，先用水、20％乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用95％乙醇溶液洗脫；收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A450克、填充劑預(yù)膠化淀粉1700克、崩解劑交聯(lián)聚維酮55克、潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂30克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇230克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑10000片；單位劑量450mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為1.82％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.42％，總雜質(zhì)的含量3.04％；溶出度經(jīng)測(cè)定為87.0％。
實(shí)施例6丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至5.0、120℃溫度、0.10MPa壓強(qiáng)，加熱3.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用45％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35％乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用85％乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；洗脫液調(diào)PH值至3，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A1000克、填充劑甘露醇3600克、崩解劑交聯(lián)羧甲基纖維素鈉100克、潤(rùn)滑劑滑石粉60克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇500克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑20000片；單位劑量1000mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為1.45％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為5.24％，總雜質(zhì)的含量7.8％；溶出度經(jīng)測(cè)定為84.1％。
實(shí)施例7丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、115℃溫度、0.09MPa壓強(qiáng)，加熱2小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)D101大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、25％乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用65％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A90克、填充劑乳糖320克、崩解劑微晶纖維素9克、潤(rùn)滑劑微粉硅膠4克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇42克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑2000片；單位劑量90mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.28％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為2.58％，總雜質(zhì)的含量不大于3.57％；溶出度經(jīng)測(cè)定為85.0％。
實(shí)施例8丹參丹酚酸A提取純化丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至8.5、75℃溫度、加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用55％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑正丁醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A42克、填充劑甘露醇89克、崩解劑羥丙基淀粉2.0克、潤(rùn)滑劑聚乙二醇1.5克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑1000片；單位劑量42mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.14％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為5.81％，總雜質(zhì)的含量不大于7.2％；溶出度經(jīng)測(cè)定為85.0％。
實(shí)施例9丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至8.0、35℃溫度、加熱2小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)1400大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用55％乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A49克、填充劑磷酸氫鈣140克、崩解劑淀粉3.5克、潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂2克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇24克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑1000片；單位劑量49mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.19％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為3.42％，總雜質(zhì)的含量不大于4.52％；溶出度經(jīng)測(cè)定為84.8％。
實(shí)施例10丹參丹酚酸A提取純化丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、125℃溫度、0.15MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)1300-I大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90％乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A500克、填充劑硫酸鈣1850克、崩解劑羧甲基淀粉鈉55克、潤(rùn)滑劑聚乙二醇35克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇280克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑10000片；單位劑量500mg；制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為1.87％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.21％，總雜質(zhì)的含量不大于3.24％；溶出度經(jīng)測(cè)定為84.8％。
實(shí)施例11丹參丹酚酸A提取純化丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、125℃溫度、0.06MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用60％濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、45％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55％乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；原料藥為丹參丹酚酸A58克、填充劑乳糖197克、崩解劑羥丙纖維素5.9克、潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂3.8克、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇29克(潤(rùn)濕劑的重量是按照無(wú)水乙醇的密度和體積計(jì)算得到的即m＝v*ρ)。
取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到單位劑量的片劑1000片；單位劑量58mg。制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，以丹參丹酚酸A為參照物，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)含量為0.58％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為3.47％，總雜質(zhì)的含量不大于5.68％；溶出度經(jīng)測(cè)定為87.2％。
注本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。
權(quán)利要求
1.一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，原料藥包括丹參丹酚酸A和藥用輔料，其特征在于制劑采用高效液相色譜法測(cè)定，得3個(gè)共有峰；記錄時(shí)間為90分鐘，以丹參丹酚酸A為參照物，其保留時(shí)間為1，2個(gè)雜質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.71、1.36；以丹參丹酚酸A為對(duì)照，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)，其含量為0.10-1.96％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.11-5.97％，總雜質(zhì)的含量不大于10.0％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中高效液相色譜圖中相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)為丹參丹酚酸C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中高效液相色譜法測(cè)定方法為色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)286nm；理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘；0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例進(jìn)行洗脫；對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取丹酚酸A對(duì)照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱(chēng)取樣品，經(jīng)過(guò)處理后定容到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中原料藥為丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑50-200重量份、崩解劑1-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中原料藥為丹參丹酚酸A40-60重量份、填充劑150-200重量份、崩解劑4-6重量份、潤(rùn)滑劑1-4重量份、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇20-30重量份。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中填充劑為乳糖、淀粉、糊精、糖粉、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉、甘露醇、磷酸氫鈣、硫酸鈣中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中崩解劑為羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、羥丙纖維素、淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其中潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、聚乙二醇中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4、5任意一項(xiàng)所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法為丹參丹酚酸A制備方法丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至7.5-9.0、30-80℃溫度、加熱1-6小時(shí)或調(diào)PH值至3.5-6.0、110-130℃溫度、0.05MPa-0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1-6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂柱層析分離，用水洗脫后，用洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液回收洗脫劑至盡；濃縮液用硅膠或葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，用洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液回收洗脫劑至盡；濃縮液調(diào)PH值至2-5，經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得丹參丹酚酸A；制劑制備原料藥為丹參丹酚酸A、填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇；取丹參丹酚酸A與填充劑、崩解劑混合均勻，加無(wú)水乙醇溶液制成軟材，過(guò)18目篩選顆粒，60℃干燥40分鐘，整粒，加入潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，得到以丹參丹酚酸A計(jì)的單位劑量的片劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中所述大孔樹(shù)脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心腦血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中所述大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中硅膠柱層析采用氯仿∶甲醇∶甲酸＝5∶1∶0.1為洗脫溶劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中所述葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，先用水、20-50％乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50-95％乙醇溶液洗脫。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中所述的有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種。
15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中單位劑量為5-1000mg。
16.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑，其制備方法中單位劑量為20-500mg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療心血管疾病的丹參丹酚酸A片劑及其制備方法，其特征在于片劑采用高效液相色譜法測(cè)定，得3個(gè)共有峰，以丹參丹酚酸A為參照物，其保留時(shí)間為1，2個(gè)雜質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.71、1.36；以丹參丹酚酸A為對(duì)照，相對(duì)保留時(shí)間為0.71的雜質(zhì)，其含量為0.10－1.96％，相對(duì)保留時(shí)間為1.36的雜質(zhì)含量為0.11－5.97％，確定為丹參丹酚酸C，總雜質(zhì)的含量不大于8％；片劑原料藥包括丹參丹酚酸A、填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑無(wú)水乙醇，45分鐘溶出度大于80％，不用加入抗氧劑可以防止制劑原料丹參丹酚酸A含量降低和降解，使制劑安全、穩(wěn)定；藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明各組制劑具有很好的藥理作用。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1994288SQ200610156179
公開(kāi)日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月30日
發(fā)明者李志剛, 顧群, 金志剛, 米長(zhǎng)江, 渠守峰, 栗艷彬, 郭曉鵬 申請(qǐng)人:北京本草天源藥物研究院