專利名稱：：一種牡丹葉總黃酮提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領域。涉及一種從牡丹藥材中新的藥用部位一一葉子中分離得到的有效部位，并提供其制備方法和醫(yī)藥用途。
背景技術：
：牡丹不僅是觀賞性植物，其還可以作為藥用。2005年版的《中華人民共和國藥典》收栽的牡丹皮(亦稱丹皮)作為法定的中藥材使用，為毛^科植物牡丹尸seo//aw/Tr"〃coMAndr.的干燥才艮皮，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抑菌、降壓等作用。牡丹皮作為牡丹的藥用部位，采收周期較長(3年)，同時取其根部，植林無法存活，因此從合理利用中藥材資源的角度出發(fā)，可考慮開發(fā)該藥材的其它部位作為新的藥用部位使用，例如有人研究牡丹葉的50y。煎劑，可用于治療痢疾；牡丹的花可提取芳香油，也可食用等。但是這些研究都不夠深入，對這些部位的化學成分及其藥理活性的研究還很少。因此有必要對其進行深入研究，明確其化學成分，提取其有效部位，發(fā)現(xiàn)新的醫(yī)藥用途，合理開發(fā)利用牡丹資源。
發(fā)明內容本發(fā)明要解決的技術問題之一是提供一種牡丹葉總黃酮提取物，其中的活性成分是來自于牡丹的葉子中提物得到的有效部位一一牡丹葉總黃酮。本發(fā)明要解決的另一個技術問題是提供用于抗炎的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法。本發(fā)明進一步提供了以上述牡丹葉總黃酮為主要活性成分用于抗炎的純中藥藥物制劑和相應的藥物劑型。為解決上述技術問題，本發(fā)明研究制定了如下技術方案。本發(fā)明所用的4土丹葉為毛萊一牛才直物4土丹戶se0/2/s■s^/TVW/comAndr.的千燥葉。本發(fā)明人經過多年的研究，用牡丹葉為原;H"，經過溶劑提取、大孔樹脂吸附、溶劑洗脫、洗脫液濃縮干燥，得到牡丹葉提取物，提取物中含牡丹葉總黃酮含量以芽菜素計為50%~95°/。以上。牡丹葉總黃酮提取物植物化學成分的研究結果表明，其中主要含有芽菜素、木樨草素、芹菜素-7-0-葡萄糖苷、木樨草素-7-0-葡萄糖苷等化合物。本發(fā)明比較優(yōu)選的實施方案，牡丹葉總黃酮是通過下述方法制備得到的(1)提取以牡丹葉為原料，用水或含水的乙醇提??；(2)濃縮濃縮提取液，至相對密度為1.20的浸膏，加水使浸膏溶解，離心，得上清液；(3)除雜上清液通過大孔吸附樹脂柱，依次用水、含水乙醇洗脫除雜；(4)解析再以乙醇或含水乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得牡丹葉總黃酮提取物。本發(fā)明所述的制備方法中提取過程中選用的乙醇濃度為X，0<X《95%，優(yōu)選為50%《X《95%;提取方法可以是滲漉提取或回流提取，乙醇與原料之間應保持比較大的比例，以保證提取完全，可以使用816倍藥材重量的溶劑提取2~3次。所述的吸附樹脂可以為苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中的任意一種或幾種為骨架材料的樹脂，具體可包括ZTC-1、DlOl、AB-8或,1型樹脂。優(yōu)選為ZTC-1樹脂。所述除雜過程中先用410倍于樹脂體積(V/W)的水，再用2~5倍樹脂體積(V/W)的含水乙醇，乙醇濃度為X，10%<X<30%,洗去柱內未被吸附的雜質，使用該方法能夠有效去除雜質。所述解析過程中所用的乙醇的濃度為X，40%<X《95%;優(yōu)選為40%<X《70%。并確定以4~12倍于樹脂體積(V/W)的含水乙醇洗脫，洗脫液濃縮干燥，得牡丹葉總黃酮提取物。在除雜及解吸過程中，可通過隨時檢測洗脫液中牡丹葉總黃酮的含量來監(jiān)控除雜或解析乙醇的用量，控制除雜或解析的時間。牡丹葉總黃酮的含量測定方法可通過本領域內公知的方法進行測定，本發(fā)明在此提供一套可行的高效液相色譜測定方法。具體如下1.對照品溶液的制備稱取芽菜素對照品約3mg,精密稱定，置于25mL量瓶中，加適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。2.供試品溶液的制備取牡丹葉總黃酮制備過程中的各段洗脫物約lg,精密稱定，置于100mL圓底燒瓶中，力。80乙醇60mL,加熱回流約1小時，濾過，殘渣重復操作兩次，合并濾液，蒸干，殘渣用水定量轉移至25mL量瓶中，再加水稀釋至刻度，超聲并振搖使均勻后，立即精密吸取3mL上已經預處理的D-101大孔吸附樹脂柱(0.8x30cm，裝20cm，用150mL水洗至無醇)，過柱反復吸附5次后，用50mL10%乙醇洗脫，再用80。/。乙醇50mL洗脫，收集80°/。乙醇洗脫液，蒸干，殘渣用曱醇定量轉移至lOmL量瓶中，即得供試品溶液。3.測定法分別取供試品溶液與對照品溶液各約4mL,分別在350mn波長處測定吸光度，隨行空白溶液對照，照外標一點法計算總黃酮含量。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明開發(fā)了牡丹新的藥用部位，即牡丹葉，并以其為原料，首次提取分離得到了牡丹葉總黃酮提取物。由于采用了中藥現(xiàn)代化技術中的樹脂技術，工藝簡單，去除了大量雜質，活性成分的含量較高。在此基礎上，本發(fā)明還研究提出了一種抗炎的純中藥藥物制劑，該中藥藥物以上述牡丹葉總黃酮提取物為有效活性成分，并包括了藥劑學上可接受的輔料組分。根據本發(fā)明的技術方案，該中藥制劑劑型可以是口服制劑或注射用制劑，其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑、滴丸等。注射劑型為注射液或粉針劑。所用輔料包括淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、異丙醇、土溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環(huán)糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂酸鹽和明膠等常規(guī)輔料，制劑的后期制備工藝及設備均屬制藥領域的常規(guī)技術，本發(fā)明對此不作限定，故在此不予詳述。本發(fā)明所述的牡丹葉總黃酮提取物及其藥物制劑有較好的抗炎效果。為了便于理解含有牡丹葉總黃酮提取物的藥物組合物的治療效果，本發(fā)明人主要采用二曱苯所致的小鼠耳腫脹炎癥模型進行了抗炎藥效學試驗，試驗中采用了不同劑量的牡丹葉總黃酮提取物(由實施例1方法制備)灌胃給藥，以同一部位同等面積下的小鼠耳片重量為觀察指標，研究牡丹葉總黃酮提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹程度的影響，具體試驗如下試驗例1牡丹葉總黃酮提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響選取60只ICR小鼠，隨機分為模型組、陽性藥(阿司匹林200mg/kg)組、牡丹葉總黃酮提取物小(10mg/kg)、中(50mg/kg)、大(100mg/kg)劑量組，每組12只。各組動物均采取灌胃途徑給藥，給藥容積0.2mL/10g，對照組給予等體積的蒸餾水，l次/天，連續(xù)7天。于第7天藥后lh用5mg/mL的戊巴比妥鈉以0.35ml/只給小鼠腹腔注射庥醉。用100%的二甲笨涂于小鼠右耳O.02mL/只致炎(正反面分別為0.OlmL)，左耳不^:任何處理。致炎45min后處死小鼠用8mm打孔器將小鼠左右耳取下相同部位和相同面積的耳片并稱重，用右耳片重量減去左耳片重量即為腫脹度(mg)。各組數(shù)據以均數(shù)±標準差表示，按照組間t檢驗的方法進行統(tǒng)計學分析處理。實驗結果如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與模型組比較*尸<0.05**尸<0.01***尸<0.001;右耳片重量與左耳片重量比較"尸O.Ol由表l可見，各組小鼠給予二甲苯后右耳片與左耳片比較，重量明顯增加，經統(tǒng)計學處理都有顯著性的差異，證明模型成功。阿司匹林組與模型組比較，右耳片重量及腫脹度明顯降低，經統(tǒng)計學處理差異具有顯著性(代O.05);牡丹葉總黃酮提取物各劑量組與模型組比較，右耳片重量及耳腫脹度均有減輕，經統(tǒng)計學處理差異均具有顯著性(代O.05或代O.001)。二甲苯具有較強的致炎作用，涂抹在小鼠的耳廓可引起耳部皮膚毛細血管擴張，血管通透性增高，繼而引起耳腫脹，通過觀察藥物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的程度的影響，可以反映藥物的抗炎效果。本次研究結果提示，牡丹葉總黃酮具有4支好的4元炎藥理作用。具體實施例方式以下通過實施例詳細說明本發(fā)明技術方案的實施，但不應以此限定本發(fā)明的實施范圍。實施例1:牡丹葉總黃酮提取物的優(yōu)選制備方法取牡丹葉藥材粉末，用14倍藥材量50%乙醇加熱回流提取3次，每次1小時。過濾，將乙醇提取液60。C減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對密度1.20(25。C測定)的浸膏，加5倍于藥材重量的水(60°C)使浸膏溶解，離心，上清液通過ZTC-l樹脂柱，以4倍于樹脂體積(V/W)的水及5倍樹脂體積(V/W)的30%乙醇，洗去柱內未被吸附的雜質，然后以6倍于樹脂體積(V/W)的40%乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得牡丹葉總黃酮提取物，其中牡丹葉總黃酮的含量為55%。實施例2:牡丹葉總黃酮提取物的優(yōu)選制備方法取牡丹葉藥材粉末，用8倍藥材量95%乙醇加熱回流提取2次，每次1小時。過濾，將乙醇提取液60。C減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對密度1.20(25T測定)的浸膏，力。IO倍于藥材重量的水(60°C)使浸膏溶解，離心，上清液通過D101樹脂柱，以6倍于樹脂體積(V/W)的水及2.5倍樹脂體積(V/W)的10%乙醇，洗去柱內未被吸附的雜質，然后以10倍于樹脂體積(V/W)的70%乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得牡丹葉總黃酮提取物，其中牡丹葉總黃酮的含量為60%。實施例3:牡丹葉總黃酮提取物的優(yōu)選制備方法取牡丹葉藥材粉末，用10倍藥材量70%乙醇，滲漉提取。將乙醇提取液6(TC減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對密度1.20(25°0測定)的浸膏，力p8倍于藥材重量的水(60°C)使浸膏溶解，離心，上清液通過DM301樹脂柱，以10倍于樹脂體積(V/W)的水及2倍樹脂體積(V/W)的20%乙醇，洗去柱內未被吸附的雜質，然后以4倍于樹脂體積(V/W)的60%乙醇解析，收集洗脫液，減壓濃縮，真空千燥，得牡丹葉總黃酮提取物，其中牡丹葉總黃酮的含量為90%。實施例4:牡丹葉總黃酮提取物的優(yōu)選制備方法取牡丹葉藥材粉末，用16倍藥材量熱水，滲漉提取。將提取液濃縮至IO倍藥材量，離心，上清液通過AB-8樹脂柱，以8倍于樹脂體積(V/W)的水及2.5倍樹脂體積(V/W)的30%乙醇，洗去柱內未被吸附的雜質，然后以8倍于樹脂體積(V/W)的95%乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得牡丹葉總黃酮提取物，其中牡丹葉總黃酮的含量為75%。實施例5:牡丹葉總黃酮的優(yōu)選劑型膠嚢劑取實施例1方法制備的牡丹葉總黃酮提取物100g,6(TC干燥，研磨粉碎，過80目篩，加過80目篩的藥用淀粉98g及硬脂酸鎂2g，混合均勻，用85%乙醇適量制成軟材，過30目篩制顆粒，烘千，使水分小于5%,過40目篩整粒，分裝于3號膠嚢中。每粒膠囊含牡丹葉總黃酮提取物0.lg,用鋁塑復合包裝，即得。實施例6:牡丹葉總黃酮的優(yōu)選劑型片劑取實施例1方法制備的牡丹葉總黃酮提取物30g,加入淀粉30g，微晶纖維素10g，以10%淀粉漿適量用12目篩制粒，在55。C以下干燥，干粒加入硬脂酸鎂，整粒，混勻，壓片，即得。實施例7:牡丹葉總黃酮的優(yōu)選劑型注射劑取實施例3方法制備的牡丹葉總黃酮提取物100g，加入氯化鈉8g，溶于適量注射用水中，攪拌溶解，添加注射用水至1000ml,攪拌均勻，過濾，濾液分裝于西林瓶中，按凍干粉針工藝凍干，制成凍干粉針。權利要求1.一種牡丹葉總黃酮提取物，其特征在于它含有牡丹葉總黃酮重量百分比為50％～95％。2.根據權利要求1所述的牡丹葉總黃酮提取物，其特征在于該提取物中主要含有芹菜素、木樨草素、芹菜素-7-0-葡萄糖苷、木樨草素-7-0-葡萄糖苷。3.根據權利要求1或2所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于(1)提取以牡丹葉為原料，用水或含水的乙醇提取；(2)濃縮濃縮提取液，至相對密度為1.20的浸膏，加水使浸膏溶解，離心，得上清液；(3)除雜上清液通過大孔吸附樹脂柱，依次用水、含水乙醇洗脫除雜；(4)解析再以乙醇或含水乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮千燥，得牡丹葉總黃酮提取物。4.根據權利要求3所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于提取為滲漉提取或回流提取。5.根據權利要求3所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于提取過程中所用乙醇的濃度為X,0<X《95%。6.根據權利要求3所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于提取過程中所用的乙醇的濃度為X,50%《X《95%。7.根據權利要求3所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于所述的樹脂為苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中的任意一種或幾種為骨架材料的的樹脂。8.根據權利要求7所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于所采用的吸附樹脂可以是ZTC-1、DlOl、AB-8或DM301型樹脂。9.根據權利要求3所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于除雜過程中所用的乙醇濃度為X,10%《X《30%。10.根據權利要求3所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于解析過程中所用的乙醇濃度為X,40%《X《95%。11.根據權利要求10所述的牡丹葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于解析過程中所用的乙醇的濃度為X,40%《X《70%。12.—種牡丹葉總黃酮提取物的中藥制劑，其特征在于它是由權利要求1~11任一權利要求所述的牡丹葉總黃酮提取物和藥劑學上可以接受的輔料制成的。13.根據權利要求12所述的中藥制劑，其特征在于可以以口服制劑或注射制劑形式存在。14.根據權利要求13所述的中藥制劑，其特征在于所述的口服制劑為膠嚢劑、軟膠嚢劑、顆粒劑、口服液、片劑、滴丸。15.根據權利要求13所述的中藥制劑，其特征在于所述的注射制劑為粉針劑或注射液。16.權利要求1~15任一權利要求所述的牡丹葉總黃酮提取物或者中藥制劑在制備抗炎藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明提供了一種從牡丹葉新的藥用部位中分離純化的牡丹葉總黃酮提取物和其制備方法。具體涉及該牡丹葉總黃酮提取物中總黃酮的含量為50％～95％。本發(fā)明提供的制備方法采用了中藥現(xiàn)代化技術中的樹脂技術，工藝簡單，去除了大量雜質，活性成分的含量高。本發(fā)明同時還公開了牡丹葉總黃酮提取物在制備抗炎藥物中的應用。文檔編號A61K36/71GK101204429SQ20061016766公開日2008年6月25日申請日期2006年12月21日優(yōu)先權日2006年12月21日發(fā)明者周亞偉申請人:周亞偉