專利名稱：一種芍藥葉總苷提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域。涉及一種從中藥材新的藥用部位中分離的有效部位，并提供其制備方法和醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：
白芍和赤芍均為中醫(yī)臨床常用的中藥，且為2005年版《中國藥典》收載的法定藥材，具有清熱涼血、平肝止痛的功效。在早期醫(yī)籍中，赤芍、白芍不分，統(tǒng)稱為“芍藥”，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》“芍藥味苦平，主邪氣腹痛，除血痹，破堅(jiān)積，寒熱疝瘕，止痛，利小便，益氣”。目前對(duì)芍藥的研究已經(jīng)很深入，包括其化學(xué)成分、有效部位、提取工藝、藥理活性等。
根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，芍藥中主要含有單萜和三萜及其苷類化合物，黃酮和揮發(fā)油類化合物等。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，芍藥具有抗動(dòng)脈糊樣硬化、治療肝炎、對(duì)缺血性損傷的保護(hù)作用等藥理活性，有很好的藥用價(jià)值。芍藥的藥用部位為該藥材的干燥根及根莖，藥材采收周期較長，對(duì)植株破壞嚴(yán)重，考慮開發(fā)藥材的葉子作為新的藥用部位，研究其化學(xué)成分，明確有效部位及其醫(yī)藥用途，這對(duì)于充分、合理利用芍藥藥材資源將具有深遠(yuǎn)意義。而且未見有關(guān)芍藥葉化學(xué)成分及其藥理活性的研究報(bào)道，也未見到有關(guān)從芍藥葉中提取分離有效部位的文獻(xiàn)報(bào)道。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題之一是提供一種芍藥葉總苷提取物，其中的活性成分是來自于芍藥新的藥用部位--葉子中的苷類化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了以上述芍藥葉總苷提取物為活性成分，用于治療糖尿病、冠心病、肝炎的中藥組合物及其制劑。
本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供用于治療糖尿病、冠心病、肝炎的芍藥葉總苷提取物的制備方法。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明研究制定了如下技術(shù)方案。
本發(fā)明所用的芍藥葉為毛茛科植物白芍Paeonia lactiflora Pall.或赤芍Paeonia obovata Maxim.的干燥葉。本發(fā)明人經(jīng)過多年的研究，用芍藥葉為原料，經(jīng)過溶劑提取、大孔樹脂吸附、溶劑洗脫、洗脫液濃縮干燥，得到芍藥葉提取物，其中含有芍藥葉總苷重量百分比為50％～95％。該提取物中主要含有芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、苯甲酰羥基芍藥苷等。其中芍藥苷的重量百分比為30％～95％。
本發(fā)明比較優(yōu)選的實(shí)施方案，芍藥葉總苷是通過下述方法制備得到的 (1)提取以芍藥葉為原料，用水或含水的乙醇提取； (2)濃縮濃縮提取液，至相對(duì)密度為1.20的浸膏，加水使浸膏溶解，離心，得上清液； (3)除雜上清液通過大孔吸附樹脂柱，依次用水、含水乙醇除雜； (4)解析以乙醇或含水乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得芍藥葉總苷提取物。
本發(fā)明所述的制備方法中提取過程中選用的乙醇濃度為X，0＜X≤95％，優(yōu)選為60％≤X≤95％；提取方法可以是滲漉提取或回流提取，乙醇與原料之間應(yīng)保持比較大的比例，以保證提取完全，可以使用8～16倍藥材重量的溶劑提取2～3次。
所述的吸附樹脂可以為苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中的任意一種或幾種為骨架材料的樹脂，具體可包括ZTC-1、D101、AB-8或DM301型樹脂。優(yōu)選為ZTC-1樹脂。
所述除雜過程中先用4～10倍于樹脂體積(V/W)的水，再用2～5倍樹脂體積(V/W)的含水乙醇，乙醇濃度為X，5％≤X＜20％。洗去柱內(nèi)未被吸附的雜質(zhì)，使用該方法能夠有效地去除雜質(zhì)。
所述制備方法中解析過程中所用的乙醇濃度為X，20％≤X≤95％；優(yōu)選為20％≤X≤40％。并確定以4～12倍于樹脂體積(V/W)的含水乙醇洗脫，洗脫液濃縮干燥，得芍藥葉總苷提取物。
在除雜及解析的過程中，可通過隨時(shí)檢測(cè)洗脫液中芍藥葉總苷的含量來監(jiān)控除雜或解析過程中乙醇的用量，控制除雜或解析的時(shí)間。芍藥葉總苷的含量測(cè)定方法可通過本領(lǐng)域內(nèi)公知的方法進(jìn)行測(cè)定，本發(fā)明在此提供一套可行的高效液相色譜測(cè)定方法。具體如下 1.色譜條件色譜柱RP-C18柱(250×4.6mm，0.5μm)；流動(dòng)相乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液(17∶83)；流速1.0ml/min；波長230nm；靈敏度1.000AUFS。
2.對(duì)照品溶液的制備精密稱取苯甲酸對(duì)照品8.5mg，置于100ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.085mg/ml)。再精密吸取1ml上述溶液置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(8.5μg/ml)。
3.供試品溶液的制備將分段收集的洗脫液干燥得供試品，取供試品約20mg，精密稱定，至10mL量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)10分鐘使溶解，取出，放至室溫，用5％氫氧化鈉溶液定至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL，至10mL具塞試管中，沸水浴水解2小時(shí)，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，用稀鹽酸調(diào)pH＝6，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22um)濾過，取續(xù)濾液，即得。
4、測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明開發(fā)了芍藥新的藥用部位，即芍藥葉，并以其為原料，首次提取分離得到了它的有效部位，即芍藥葉總苷提取物。由于采用了中藥現(xiàn)代化技術(shù)中的樹脂技術(shù)，去除了大量雜質(zhì)，活性成分的含量較高。而且提取芍藥葉總苷提取物較提取芍藥苷單體成本低，工藝簡單，更適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還研究提出了一種以上述芍藥葉總苷提取物為有效活性成分并可用于治療糖尿病、冠心病、肝炎的中藥組合物，該中藥組合物可以是芍藥葉總苷提取物和其他藥物組成；也可以是芍藥葉總苷提取物和其他藥物及藥用輔料組成；還可以是芍藥葉總苷提取物和藥用輔料組成。
根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，該中藥組合物可以是口服制劑或注射用制劑，其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑、滴丸等。注射劑型為注射液或凍干粉針劑。所用輔料包括淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、異丙醇、土溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環(huán)糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂酸鹽和明膠等常規(guī)輔料，制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對(duì)此不作限定，故在此不予詳述。
通過研究觀察，本發(fā)明所述的芍藥葉總苷提取物對(duì)糖尿病、冠心病、肝炎有較好的治療效果，且與芍藥苷的治療效果相當(dāng)。為了便于理解該提取物的治療效果，本發(fā)明人采用實(shí)施例1方法制備的芍藥葉總苷提取物(總苷含量為75％)及芍藥苷單體(含量＞92％)進(jìn)行了如下藥效學(xué)試驗(yàn) 試驗(yàn)例1芍藥葉總苷提取物對(duì)冠脈結(jié)扎致大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死的治療作用 Wistar大鼠144只，體重260～280g，雌雄兼用。隨機(jī)分為9組，每組16只，分別為假手術(shù)組、模型組、陽性藥組(鹽酸地爾硫卓3mg/kg)、芍藥苷小劑量(30mg/kg)組、芍藥苷中劑量(60mg/kg)組、芍藥苷大劑量(120mg/kg)組、芍藥葉總苷提取物小劑量(30mg/kg)組、芍藥葉總苷提取物中劑量(60mg/kg)組、芍藥葉總苷提取物大劑量(120mg/kg)組。腹腔注射烏拉坦(1000mg/kg)麻醉，分離十二指腸，各組分別記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)ECG1min。胸部常規(guī)消毒，左鎖骨中線第四肋間開胸，暴露心臟，距左冠狀動(dòng)脈前降支根部約2mm處結(jié)扎，送回心臟，關(guān)閉胸腔。記錄II導(dǎo)心電圖，以T波高聳伴有ST段抬高為結(jié)扎成功的標(biāo)志。結(jié)扎冠脈15min后記錄ECG，作為給藥前值，然后經(jīng)十二指腸給藥一次，劑量同前。結(jié)扎后5h，腹主動(dòng)脈取血，留血清，以備測(cè)心肌四酶等指標(biāo)。然后處死大鼠，將心臟橫切成5片置于0.1％的NBT(用pH 7.4～7.8的0.2mol/L Tris液配制)溶液中，37℃水浴3～5min，洗去多余的染料，梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)被NBT染為紫藍(lán)色，并照相，用圖形分析軟件比較心肌梗死面積占全心面積的百分比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，表2，表3 表1芍藥葉總苷提取物和芍藥苷對(duì)冠脈結(jié)扎致大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死T波變化絕對(duì)值的影響(x±s，單位mV，n＝16)
注與假手術(shù)組比較，▲P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05 由上表可見，冠脈結(jié)扎后，與假手術(shù)組比較，模型組在結(jié)扎后給藥前、給藥后15min、2h各點(diǎn)均顯著升高T波變化絕對(duì)值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有顯著性(P＜0.05)；與模型組比較，陽性藥在15min，2h降低T波變化絕對(duì)值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有顯著性(P＜0.05)；芍藥苷小劑量組和芍藥葉總苷提取物小劑量組在15min降低T波變化絕對(duì)值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有顯著性(P＜0.05)；與模型組比較，芍藥苷中劑量組和芍藥葉總苷提取物中劑量組在15min、2h均顯著降低T波變化絕對(duì)值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有顯著性(P＜0.05)；與模型組比較，芍藥苷大劑量組和芍藥葉總苷提取物大劑量組在15min、2h均顯著降低T波變化絕對(duì)值，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有顯著性(P＜0.05)。
表2芍藥葉總苷提取物和芍藥苷對(duì)冠脈結(jié)扎致大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死心肌酶的影響(x±s，n＝16)
與假手術(shù)組比較，▲P＜0.05或▲▲▲P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05或**P＜0.01或***P＜0.001 AST谷丙轉(zhuǎn)氨酶 CK-MB肌酸磷酸激酶(CK)的同工酶 CK肌酸磷酸激酶 LDH乳酸脫氫酶 血清心肌四酶可以反映心肌細(xì)胞的受損程度，其中CK-MB是肌酸磷酸激酶(CK)的同工酶，只存在心肌細(xì)胞，當(dāng)心肌細(xì)胞受損傷時(shí)，CK-MB漏出，使其在血清中的活性增高，血清CK-MB活性越高，反映心肌損傷越重。由上表可見，冠脈結(jié)扎后，與假手術(shù)組比較，模型組能顯著升高AST、CK-MB、CK、LDH值，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.001)；與模型組比較，陽性藥、芍藥苷及芍藥葉總苷提取物小、中、大各劑量組均能顯著降低AST、CK、LDH，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)。而與模型組比較，芍藥苷及芍藥葉總苷提取物大劑量組對(duì)CK-MB顯著降低，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。
表3芍藥葉總苷提取物和芍藥苷對(duì)冠脈結(jié)扎致大鼠心肌梗死面積及梗死區(qū)占全心面積％的影響(x±s，n＝16)

注與模型組比較，*P＜0.05或**P＜0.01或***P＜0.001 由上表可見，冠脈結(jié)扎后，與模型組比較，陽性藥組能顯著降低梗死面積，梗死區(qū)實(shí)測(cè)值和所占全心面積百分率差異具有顯著性(P＜0.05)。與模型組比較，芍藥苷及芍藥葉總苷提取物小、中、大劑量各組能顯著降低梗死面積，梗死區(qū)實(shí)測(cè)值和所占全心面積百分率差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)。
綜上所述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芍藥葉總苷提取物和芍藥苷對(duì)冠脈結(jié)扎所致大鼠心肌梗死面積的影響與對(duì)血漿AST、CK、LDH、心電圖T波變化絕對(duì)值的影響結(jié)果一致，能明顯縮小心肌梗死面積，減少AST、CK、LDH的釋放，降低心電圖T波變化絕對(duì)值，對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死具有較好的治療作用；既芍藥葉總苷提取物和其中的芍藥苷均具有明顯的抗心肌缺血活性。
試驗(yàn)例2芍藥葉總苷提取物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的影響 取昆明種小鼠72只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組聯(lián)苯雙酯(200mg/kg)、芍藥葉總苷提取物小劑量組(50mg/kg)、芍藥葉總苷提取物中劑量組(100mg/kg)、芍藥葉總苷提取物大劑量組(200mg/kg)、芍藥苷小劑量組(50mg/kg)、芍藥苷中劑量組(100mg/kg)、芍藥苷大劑量組(200mg/kg)，共9組，每組12只。各給藥組均按0.2ml/10g灌胃給藥，空白對(duì)照組與模型對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，每日1次，共8日，并于第7日給藥1.5h后除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射0.12％四氯化碳花生油溶液0.1ml/10g造成小鼠急性肝損傷模型(造模后動(dòng)物禁食不禁水16h)，造模后16h各組動(dòng)物再灌胃給藥1次。于末次給藥1.5h后摘眼球取血測(cè)血清ALT、AST。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。
表4芍藥葉總苷提取物及芍藥苷對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷血清ALT、AST的影響(x±s)
注與空白對(duì)照組比較，▲▲▲P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001. 由表4結(jié)果可知，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，血清ALT值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；聯(lián)苯雙酯組與模型對(duì)照組比較，血清ALT值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；芍藥葉總苷提取物小劑量組與模型對(duì)照組比較，血清ALT值有降低趨勢(shì)，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥葉總苷提取物中、大劑量組與模型對(duì)照組比較，血清ALT值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.001)；芍藥苷小劑量組與模型對(duì)照組比較，血清ALT值有所降低，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥苷中、大劑量組與模型對(duì)照組比較，血清ALT值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)。
模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，血清AST值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；聯(lián)苯雙酯組與模型對(duì)照組比較，血清AST值有降低趨勢(shì)，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥葉總苷提取物小劑量組與模型對(duì)照組比較，血清AST值無明顯變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥葉總苷提取物中劑量組與模型對(duì)照組比較，血清AST值有降低趨勢(shì)，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥葉總苷提取物大劑量組與模型對(duì)照組比較，AST值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)；芍藥苷小、中劑量組與模型對(duì)照組比較，血清AST值無明顯變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥苷大劑量組與模型對(duì)照組比較，AST值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)。
試驗(yàn)例3芍藥葉總苷提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)高血糖小鼠的影響 選用健康ICR小鼠108只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、降糖靈組、芍藥葉總苷提取物小、中、大劑量組、芍藥苷小、中、大劑量組。尾靜脈注射四氧嘧啶(65mg/kg)造成化學(xué)性糖尿病小鼠模型，分別用芍藥葉總苷提取物小劑量組(50mg/kg)、芍藥葉總苷提取物中劑量組(100mg/kg)、芍藥葉總苷提取物大劑量組(200mg/kg)、芍藥苷小劑量組(50mg/kg)、芍藥苷中劑量組(100mg/kg)、芍藥苷大劑量組(200mg/kg)灌胃，以降糖靈為陽性對(duì)照，每天1次，連續(xù)14天，于給藥第7天、第14天取血，以血糖值為指標(biāo)研究芍藥葉總苷及芍藥苷的降糖作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。
表5芍藥葉總苷對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)的糖尿病小鼠藥后7天、14天血糖值的影響(x±s)
注與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與空白對(duì)照組比較，▲▲▲P＜0.001。
由上表可見，給藥前模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，血糖值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；各給藥組與模型對(duì)照組比較，血糖值均無明顯變化，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)。
給藥第7天，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，血糖值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；降糖靈組與模型對(duì)照組比較，血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.01)；芍藥葉總苷提取物小劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值有所降低，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥葉總苷提取物中、大劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值明顯降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)；芍藥苷小、中劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值有所降低，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥苷大劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值明顯降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)。降糖率為陽性藥22.19％；芍藥葉總苷提取物小劑量9.66％、芍藥葉總苷提取物中劑量13.42％、芍藥葉總苷提取物大劑量組15.21％；芍藥苷小劑量3.12％、芍藥苷中劑量12.63％、芍藥苷大劑量組14.91％。
給藥第14天，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，血糖值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；降糖靈組與模型對(duì)照組比較，血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；芍藥葉總苷提取物小、中、大劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001)；芍藥苷小劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值有所降低，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異未見顯著性(P＞0.05)；芍藥苷中、大劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值明顯降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05、P＜0.01)。降糖率為陽性藥32.17％；芍藥葉總苷提取物小劑量17.03％、芍藥葉總苷提取物中劑量23.58％、芍藥葉總苷提取物大劑量29.14％；芍藥苷小劑量8.85％、芍藥苷中劑量16.47％、芍藥苷大劑量21.57％。

具體實(shí)施例方式 以下通過實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)施，但不應(yīng)以此限定本發(fā)明的實(shí)施范圍。
實(shí)施例1芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選制備方法 取芍藥葉藥材粉末，用14倍藥材量60％乙醇加熱回流提取3次，每次1小時(shí)。過濾，將乙醇提取液60℃減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對(duì)密度1.20(25℃測(cè)定)的浸膏，加5倍于藥材重量的水(60℃)使浸膏溶解，離心，上清液通過ZTC-1樹脂柱，以4倍于樹脂體積(V/W)的水及5倍樹脂體積(V/W)的5％乙醇，洗去柱內(nèi)未被吸附的雜質(zhì)，然后以6倍于樹脂體積(V/W)的40％乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得芍藥葉總苷提取物，其中芍藥葉總苷的含量75％，芍藥苷的含量為45％。
實(shí)施例2芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選制備方法 取芍藥葉藥材粉末，用8倍藥材量95％乙醇加熱回流提取2次，每次1小時(shí)。過濾，將乙醇提取液60℃減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對(duì)密度1.20(25℃測(cè)定)的浸膏，加10倍于藥材重量的水(60℃)使浸膏溶解，離心，上清液通過D101樹脂柱，以6倍于樹脂體積(V/W)的水及2.5倍樹脂體積(V/W)的10％乙醇，洗去柱內(nèi)未被吸附的雜質(zhì)，然后以10倍于樹脂體積(V/W)的20％乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得芍藥葉總苷提取物，其中芍藥葉總苷的含量為80％，芍藥苷的含量為55％。
實(shí)施例3芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選制備方法 取芍藥葉藥材粉末，用10倍藥材量75％乙醇，滲漉提取。將乙醇提取液60℃減壓回收乙醇，將提取液濃縮至相對(duì)密度1.20(25℃測(cè)定)的浸膏，加8倍于藥材重量的水(60℃)使浸膏溶解，離心，上清液通過DM301樹脂柱，以10倍于樹脂體積(V/W)的水及2倍樹脂體積(V/W)的15％乙醇，洗去柱內(nèi)未被吸附的雜質(zhì)，然后以4倍于樹脂體積(V/W)的60％乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得芍藥葉總苷提取物，其中芍藥葉總苷的含量為55％，芍藥苷的含量為30％。
實(shí)施例4芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選制備方法 取芍藥葉藥材粉末，用16倍藥材量熱水，滲漉提取。將提取液濃縮至10倍藥材量，離心，上清液通過AB-8樹脂柱，以8倍于樹脂體積(V/W)的水及2.5倍樹脂體積(V/W)的10％乙醇，洗去柱內(nèi)未被吸附的雜質(zhì)，然后以8倍于樹脂體積(V/W)的30％乙醇解析。收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得芍藥葉總苷提取物，其中芍藥葉總苷的含量為88％，芍藥苷的含量為70％。
實(shí)施例5芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選劑型膠囊劑 取實(shí)施例1方法制備的芍藥葉總苷提取物100g，60℃干燥，研磨粉碎，過80目篩，加過80目篩的藥用淀粉98g及硬脂酸鎂2g，混合均勻，用85％乙醇適量制成軟材，過30目篩制顆粒，烘干，使水分小于5％，過40目曬整粒，分裝于3號(hào)膠囊中。每粒膠囊含芍藥葉總苷提取物0.1g，用鋁塑復(fù)合包裝，即得。
實(shí)施例6芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選劑型片劑 取實(shí)施例1方法制備的芍藥葉總苷提取物30g，加入淀粉30g，微晶纖維素10g，以10％淀粉漿適量用12目篩制粒，在55℃以下干燥，干粒加入硬脂酸鎂，整粒，混勻，壓片，即得。
實(shí)施例7芍藥葉總苷提取物的優(yōu)選劑型凍干粉針劑 取實(shí)施例4方法制備的芍藥葉總苷提取物100g，加適量注射用水，攪拌溶解后，超濾，得到無熱源的澄清液，加注射用水至1000ml，分裝為1000支，按凍干粉針制備工藝凍干，制成凍干粉針劑。
權(quán)利要求
1.一種芍藥葉總苷提取物，其特征在于含有芍藥葉總苷的重量百分比為50％～95％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芍藥葉總苷提取物，其特征在于該提取物中主要含有芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、苯甲酰羥基芍藥苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的芍藥葉總苷提取物，其特征在于含有芍藥苷的重量百分比為30％～95％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3任一權(quán)利要求所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于
(1)提取以芍藥葉為原料，用水或含水的乙醇提?。?br> (2)濃縮濃縮提取液，至相對(duì)密度為1.20的浸膏，加水使浸膏溶解，離心，得上清液；
(3)除雜上清液通過大孔吸附樹脂柱，依次用水、含水乙醇除雜；
(4)解析以乙醇或含水乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得芍藥葉總苷提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于提取為滲漉提取或回流提取。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于提取所用的乙醇的濃度為X，0＜X≤95％。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于提取所用的乙醇的濃度為X，60％≤X≤95％。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于所述的樹脂為苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中的任意一種或幾種為骨架材料的的樹脂。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于所采用的吸附樹脂可以是ZTC-1、D101、AB-8或DM 301型樹脂。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于除雜所用的乙醇的濃度為X，5％≤X＜20％。
11.根據(jù)權(quán)利要求4所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于解析過程中所用的乙醇的濃度為X，20％≤X≤95％。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的芍藥葉總苷提取物的制備方法，其特征在于解析過程中所用的乙醇的濃度為X，20％≤X≤40％。
13.含有權(quán)利要求1～12任一權(quán)利要求所述的芍藥葉總苷提取物的藥物組合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可以是芍藥葉總苷提取物和其他藥物組成。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可以是芍藥葉總苷提取物和其他藥物及藥用輔料組成。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可以是芍藥葉總苷提取物和藥用輔料組成。
17.根據(jù)權(quán)利要求13～16任一權(quán)利要求所述的藥物組合物，其特征在于可以以口服制劑或注射制劑形式存在。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物組合物，其特征在于所述的口服制劑為膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑、滴丸。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物組合物，其特征在于所述的注射制劑為粉針劑或注射液。
20.權(quán)利要求1～19任一權(quán)利要求所述的芍藥葉總苷提取物或者藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
21.權(quán)利要求1～19任一權(quán)利要求所述的芍藥葉總苷提取物或者藥物組合物在制備治療冠心病藥物中的應(yīng)用。
22.權(quán)利要求1～19任一權(quán)利要求所述的芍藥葉總苷提取物或者藥物組合物在制備治療肝炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從芍藥葉新的藥用部位中分離純化的芍藥葉總苷提取物及其制備方法。該提取物中芍藥葉總苷的含量為50％～95％，其中芍藥苷的含量為30％～95％。本發(fā)明提供的制備方法是采用中藥現(xiàn)代化技術(shù)中的樹脂技術(shù)，工藝簡單，去除了大量雜質(zhì)，活性成分的含量較高。本發(fā)明同時(shí)還公開了芍藥葉總苷提取物在制備治療糖尿病、冠心病、肝炎藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101204430SQ20061016766
公開日2008年6月25日 申請(qǐng)日期2006年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月21日
發(fā)明者周亞偉 申請(qǐng)人:周亞偉