專利名稱：苦杏仁苷在制備促進(jìn)心腦胰及傷口血液循環(huán)的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有機(jī)有效成分的醫(yī)藥配制品的醫(yī)藥用途，具體是一種苦杏仁苷的制備方法和苦杏仁苷在制備促進(jìn)心腦胰及傷口血液循環(huán)的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
桃仁、苦杏仁均為中國(guó)藥典收錄的品種，資源豐富。
杏仁(苦杏仁)，屬薔薇科(Rosaceae)味苦，微溫，有小毒。具有止咳平喘，潤(rùn)腸通便的功能。治療劑量的本品經(jīng)口服后，其有效成分苦杏仁苷在體內(nèi)緩慢水解，逐漸生成微量氫氰酸，后者對(duì)呼吸中樞呈鎮(zhèn)靜作用，使呼吸運(yùn)動(dòng)趨于安靜而呈現(xiàn)鎮(zhèn)咳和平喘的作用。為常用的止咳、平喘中藥。其化學(xué)成分含苦杏仁苷(amygdalin)、脂肪油、苦杏仁酶(emulsin)、苦杏仁苷酶(amydgalase)、櫻葉酶(prunase)、雌酮、α-雌二醇、鏈甾醇等。
臨床上常將苦杏仁做成丸劑、片劑、糖漿劑等劑型應(yīng)用。
桃仁，屬薔薇科(Rosaceae)，味苦甘平。功能主治破血行瘀，潤(rùn)燥滑腸。治經(jīng)閉，熱病蓄血，風(fēng)痹，瘧疾，跌打損傷，瘀血腫痛，血燥便秘。其化學(xué)成分含苦杏仁苷(amygdalin)、苦杏仁酶(emulsin)、脂肪油等。
桃仁在中成藥制劑中也是常用的原料之一。
中國(guó)專利1319431公開(kāi)了一種“含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法機(jī)組和物和評(píng)價(jià)方法”，系通過(guò)紅外焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油增進(jìn)含苦杏仁苷枇杷種子等抗癌功效。在添加和增加含苦杏仁苷的經(jīng)處理過(guò)的產(chǎn)物的濃度條件下，通過(guò)紫外線照射二碳六烯酸在體系中增加過(guò)氧化物脂質(zhì)的形成。過(guò)氧化物脂質(zhì)形成得越多，評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)口服途徑中的抗癌功效越強(qiáng)。用此方法來(lái)評(píng)價(jià)含苦杏仁苷物質(zhì)的功效。
中國(guó)專利1365979公開(kāi)了一種“有效成分苦杏仁苷的提取分離及精制方法”系將苦杏仁壓榨去油，加3-6倍量的乙醇提取3次，減壓過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇，放置、析出苦杏仁苷，過(guò)濾得粗品；苦杏仁苷粗品經(jīng)乙醇溶解、過(guò)濾、冷藏、放置、析出白色簇狀結(jié)晶，減壓過(guò)濾，用少量乙醚與乙醇洗滌，得純度為99％以上的苦杏仁苷定量對(duì)照品。該發(fā)明解決了長(zhǎng)期以來(lái)苦杏仁苷以苦杏仁酶酶解或水解而使有效成分被破壞、療效降低的難題。對(duì)照品得純度高，具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決中藥桃仁中有效成分所具有的醫(yī)藥效果，而提供一種藥源更為廣泛的苦杏仁苷在制備促進(jìn)心腦胰及傷口血液循環(huán)的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用；同時(shí)還提供了一種苦杏仁苷的制備方法。
本發(fā)明原理桃仁、杏仁在功能主治方面雖有不同，但是其所含的化學(xué)成分有極大的共同性。在通過(guò)正交篩選確定桃仁明確的活血化瘀作用后，確定提取桃仁中的主要成分-苦杏仁苷，并進(jìn)行了定性分析苦杏仁苷及含量測(cè)定，由于苦杏仁苷也存在于苦杏仁中，而且苦杏仁作為藥用時(shí)已經(jīng)過(guò)壓油的工藝，因此提取處理更為方便，所以在苦杏仁苷的實(shí)驗(yàn)研究中，均使用從苦杏仁餅中提取苦杏仁苷。
苦杏仁的主要有效成分為苦杏仁苷，苦杏仁苷易被同存于苦杏仁中異細(xì)胞的苦杏仁酶酶解，其化學(xué)性質(zhì)為易溶于熱乙醇，難溶于乙醇，故選用已壓榨除去絕大部分油的杏仁餅，采用乙醚進(jìn)一步脫脂，乙醇回流提取的方法，快速、簡(jiǎn)單地提制苦杏仁苷。
苦杏仁苷的制備方法壓榨去油后的苦杏仁1Kg加乙醚4000-5000ml分2次加熱回流脫脂，過(guò)濾備用；將藥渣揮盡乙醚后加95％乙醇回流提取三次，每次3000-5000ml，趁熱過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇至生藥量的1-2倍量體積，放置至室溫，再加入1/2量的乙醚，容器底層析出沾壁的油狀沉淀，轉(zhuǎn)出上清液，放置，析出結(jié)晶，抽濾，得苦杏仁苷粗品；將苦杏仁苷粗品加20-40倍乙醇溶解、過(guò)濾、放置、析出苦杏仁苷白色片狀結(jié)晶，減壓過(guò)濾，用100-200mL乙醇洗滌結(jié)晶，即得苦杏仁苷純品，收率4％以上，純度達(dá)90％以上。
所述的制備方法，其苦杏仁苷粗品可反復(fù)處理1-2次，但每次乙醇量須減半。
一種在制備促進(jìn)腦血液循環(huán)作用的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
一.苦杏仁苷對(duì)腦血液循環(huán)的作用。
1.治療因血粘稠度升高所致的腦缺血。苦杏仁苷靜脈輸入均可增加大鼠軟腦膜及腦實(shí)質(zhì)兩部位的循環(huán)血流，說(shuō)明兩部位的血管擴(kuò)張反應(yīng)具有同步性；作用顯現(xiàn)較晚，從靜脈注射后30分鐘開(kāi)始，作用逐步增加，直至60分鐘時(shí)與給藥前有明顯差異。為此，在造成血流降低之前給予苦杏仁苷，能拮抗葡聚糖的致病作用。
2.對(duì)腦微循環(huán)障礙的影響。用于如注射腎上腺素、垂體后葉素及中腦動(dòng)脈結(jié)扎的預(yù)防和治療。
一種在制備治療心力衰竭的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
苦杏仁干可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持大鼠離體心臟冠脈流量、心縮力及收縮頻率保持不變。應(yīng)用苦杏仁苷灌流可使離體心臟在較長(zhǎng)時(shí)間里維持心臟正常功能，對(duì)心臟功能衰竭有保護(hù)作用。
一種在制備治療急性胰腺炎的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
苦杏仁苷對(duì)胰腺血流及氧耗有較好的影響，能降低重型急性胰腺炎時(shí)白細(xì)胞滾動(dòng)及粘附數(shù)增加，能增加血液流速及壁切率；通過(guò)抑制白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度粘附，減少白細(xì)胞在組織內(nèi)的聚集，從而對(duì)胰外臟器起保護(hù)作用；對(duì)急性胰腺炎時(shí)大鼠血清NO的過(guò)渡升高有降低作用。
一種在制備促進(jìn)傷口愈合的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
改善皮下組織氧分壓，增加皮膚組織微循環(huán)血流，使傷口愈合加快，提高切口斷裂強(qiáng)度，有益于缺血皮膚切口的愈合。
這樣制備的苦杏仁苷產(chǎn)率高、純度高、制備方法簡(jiǎn)便。
如上制備的苦杏仁苷經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明具有預(yù)防和治療因血粘稠度升高所致的腦缺血，對(duì)心臟功能衰竭有保護(hù)作用，對(duì)急性胰腺炎的治療和促進(jìn)傷口愈合的作用，并具有顯著的效果。因此，本發(fā)明為醫(yī)學(xué)臨床提供了一種新的藥物制劑，并為該制劑提供了新的醫(yī)藥用途。


圖1為本發(fā)明樣品色譜2為對(duì)照品色譜3為生理鹽水對(duì)大鼠軟腦膜(上)及腦實(shí)質(zhì)(下)微循環(huán)的影響。
圖4為苦杏仁苷對(duì)大鼠軟腦膜(上)及腦實(shí)質(zhì)(下)微循環(huán)的影響。
圖5為高分子葡聚糖引起的大鼠軟腦膜(上)及腦實(shí)質(zhì)(下)微循環(huán)變化。
圖6為苦杏仁苷對(duì)高分子葡聚糖引起的大鼠軟腦膜(上)及腦實(shí)質(zhì)(下)微循環(huán)障礙的預(yù)防作用。
圖7a為YHI+苦杏仁苷對(duì)胰組織微循環(huán)變化。
圖7b為生理鹽水對(duì)胰組織微循環(huán)變化。
具體實(shí)施例方式
直接取杏仁餅1Kg，適當(dāng)粉碎后過(guò)20目篩，加乙醚4000mL，分2次加熱回流脫脂，過(guò)濾，將藥渣揮盡乙醚后加95％乙醇回流提取三次，每次5000mL，趁熱過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇至1500mL，稍放置至室溫，再加入1/2量的乙醚，放置，容器底層析出沾壁的油狀物質(zhì)，將上清液轉(zhuǎn)出，繼續(xù)放置，析出結(jié)晶，抽濾，得苦杏仁苷粗品61g。將苦杏仁苷粗品加1200mL乙醇加熱溶解、過(guò)濾、放置、析出苦杏仁苷白色片狀結(jié)晶，減壓過(guò)濾，用少量乙醇洗滌結(jié)晶，用200mL乙醇洗滌2次，得苦杏仁苷純品41g，純度達(dá)90％以上。
藥物劑型注射用粉制劑。
注射用苦杏仁苷粉制劑的推薦臨床使用劑量為2ml/kg/h，輸液劑量與一次注入劑量的換算方法待定。
一.苦杏仁苷定性及定量檢測(cè)1.薄層色譜取苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)820-9401)，用甲醇配制成1mL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本發(fā)明提制的苦杏仁苷，同樣用甲醇配制成1mL含2mg的溶液，作為供試品溶液。分別吸取上述兩種溶液10uL，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板(煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所)上，展開(kāi)劑為水飽和氯仿∶甲醇(2∶1)，展開(kāi)、取出、晾干，置紫外燈(UV254)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的暗斑點(diǎn)。
2.HPLC法測(cè)定苦杏仁苷含量色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為含0.1％磷酸的水∶甲醇(80∶20)；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速為0.9mL/min，理論塔板數(shù)按苦杏仁苷計(jì)算應(yīng)不低于5000。
取苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)820-9401)，用甲醇配制成1mL含約0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取本發(fā)明制得苦杏仁苷用甲醇配制成1mL含約0.2mg的溶液，作為供試品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按上述色譜條件，分別進(jìn)樣4ul、8ul、10ul、12ul、16ul，得出面積積分值，以u(píng)g為橫坐標(biāo)，面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，為一直線，線性方程為Y＝8.893e-007X+1.686e-002，R＝0.9999按外標(biāo)法測(cè)定供試品，進(jìn)樣10ul，對(duì)照品與供試品的液相色譜圖保留時(shí)間一致?？嘈尤受蘸繛?8.4％。
采用高效液相法的歸一化法進(jìn)行純度檢查，與上述所測(cè)含量基本一致。標(biāo)準(zhǔn)品含量為97.70％，本發(fā)明提制的苦杏仁苷含量為99.18％。
二.苦杏仁苷的藥理作用(一)促進(jìn)腦血液循環(huán)，治療因血液粘度升高所致的腦缺血。
1.對(duì)腦微循環(huán)的影響目的為測(cè)定苦杏仁苷靜脈輸入對(duì)大鼠軟腦膜及腦實(shí)質(zhì)微循環(huán)的影響。
方法健康II級(jí)Wistar大鼠40只，分為4組，每組10只。實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠以10％烏拉坦腹腔注射麻醉(1ml/100g體重)，頭頂部矢壯縫兩側(cè)顱骨鉆孔后穿破硬腦膜，分別置入激光多普勒微循環(huán)電極，測(cè)定軟腦膜及腦實(shí)質(zhì)血流。血流穩(wěn)定后于各組分別靜脈輸入生理鹽水(對(duì)照組)和低、中、高劑量苦杏仁苷(1.5％、3％及6％，2ml/h)。觀察兩部位微循環(huán)血流變化1小時(shí)。
結(jié)果生理鹽水無(wú)影響，三劑量苦杏仁苷均可增加兩部位血流，以高劑量作用最明顯。
結(jié)論苦杏仁苷靜脈輸入可增加大鼠軟腦膜及腦實(shí)質(zhì)微循環(huán)血流。(表1、2)表1苦杏仁苷等對(duì)大鼠軟腦膜微循環(huán)血流(PU)的影響(x±s)

與給藥前比較*p＜0.05 ()動(dòng)物數(shù)表2苦杏仁苷等對(duì)大鼠腦實(shí)質(zhì)微循環(huán)血流(PU)的影響(x±s)

與給藥前比較*p＜0.05 ()動(dòng)物數(shù)
2.對(duì)腦微循環(huán)障礙的影響目的研究苦杏仁苷對(duì)高分子葡聚糖引起的大鼠腦微循環(huán)障礙的保護(hù)作用。
方法應(yīng)用10％葡聚糖尾靜脈注射(9ml/kg)引起大鼠腦微循環(huán)障礙，與此同時(shí)(治療組)或前30min(預(yù)防組)尾靜脈輸入苦杏仁苷，觀察其對(duì)腦微循環(huán)障礙的治療與預(yù)防作用。腦血流變化應(yīng)用激光多普勒血流儀(LDF，瑞典，5001系列)進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果高分子葡聚糖使大鼠腦微循環(huán)明顯降低，苦杏仁苷未表現(xiàn)明顯治療作用，但有顯著的預(yù)防作用。
結(jié)論苦杏仁苷對(duì)高分子葡聚糖引起的大鼠腦微循環(huán)障礙有明顯的預(yù)防作用。(表3、4；圖5、6)表3苦杏仁苷對(duì)腦微循環(huán)障礙大鼠軟腦膜微循環(huán)血流(PU)變化(x±s)

與給藥前比較*p＜0.05；**p＜0.01()動(dòng)物數(shù)表4苦杏仁苷對(duì)腦微循環(huán)障礙大鼠腦實(shí)質(zhì)微循環(huán)血流(PU)變化(x±s)

與給藥前比較*p＜0.05；**p＜0.01()動(dòng)物數(shù)(二).治療心力衰竭目的觀察了苦杏仁苷對(duì)大鼠離體心臟心縮力、冠脈流量及收縮頻率的影響。
方法應(yīng)用改良的Langendorff離體心臟灌流法。穩(wěn)定期后，以含苦杏仁苷的灌流液進(jìn)行灌流，觀察預(yù)定指標(biāo)變化。
結(jié)果對(duì)照組(離體心臟灌流液)由于離體灌流標(biāo)本的條件限制對(duì)照組10分鐘后即見(jiàn)冠脈流量下降，苦杏仁苷給藥組(應(yīng)用含苦杏仁苷的灌流液灌流)至實(shí)驗(yàn)?zāi)┢?50、60分鐘)冠脈流量才開(kāi)始下降。若與赤芍提取液合用則可在60分鐘觀察期內(nèi)維持冠脈流量不變；苦杏仁苷對(duì)心臟收縮頻率及收縮力基本無(wú)影響。
結(jié)論隨灌流時(shí)間的延續(xù)，心臟冠脈流量逐漸降低，給予苦杏仁苷可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持大鼠離體心臟冠脈流量、心縮力及收縮頻率保持不變。(表5)表5苦杏仁苷等對(duì)大鼠離體灌流心臟冠脈流量的影響

注*與給藥前比較P＜0.05**與給藥前比較P＜0.01(三).治療急性胰腺炎1.對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性急性胰腺炎的保護(hù)作用應(yīng)用家兔重型急性胰腺炎(SAP)模型證明，抑酶注射液(YHI)及苦杏仁苷合并靜脈注射(1g/kg，溶于10mL生理鹽水中給予)，有增加家兔存活時(shí)間、和五天存活率的趨勢(shì)(對(duì)照組33.3％；治療組83.3％)。藥物使動(dòng)物血清淀粉酶明顯下降(表6)。胰組織微循環(huán)明顯改善(圖7)，并使SAP嚴(yán)重性指標(biāo)IL-6明顯低于對(duì)照組(表7)。病理檢查結(jié)果也顯示白細(xì)胞浸潤(rùn)、脂肪壞死、出血等指標(biāo)均較對(duì)照組為輕(表8)。實(shí)驗(yàn)提示，YHI與苦杏仁苷聯(lián)合應(yīng)用對(duì)家兔SAP有保護(hù)作用。
表6抑酶注射液(YHI)及苦杏仁苷對(duì)重癥急性胰腺炎家兔血清淀粉酶(U/L)的影響(x±s)

**與SAP前比較P＜0.01；*與AP前比較P＜0.02；()動(dòng)物數(shù)〔〕存活數(shù)表7YHI及苦杏仁苷對(duì)SAP家兔血清IL-6水平的影響(x±s)

白細(xì)胞介素-6單位U/mL〔〕動(dòng)物數(shù)*與對(duì)照組比較P＜0.05表8抑酶注射液(YHI)及苦杏仁苷對(duì)重癥急性胰腺炎家兔病理變化的影響

苦杏仁苷是經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)證明對(duì)腸血流及氧耗作用最強(qiáng)的藥物，后經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)對(duì)胰腺血流及氧耗亦有較好的影響。本實(shí)驗(yàn)用抑酶注射液與苦杏仁苷合用治療家兔急性重型胰腺炎，獲得滿意的結(jié)果，這和它們抑制胰酶，改善胰腺血液循環(huán)有關(guān)。(表8)2.機(jī)制分析(1)對(duì)白細(xì)胞粘附的影響①苦杏仁苷對(duì)大鼠活體微循環(huán)的影響目的觀察苦杏仁苷對(duì)大鼠腸系膜活體微循環(huán)的影響。
方法大鼠麻醉后開(kāi)腹，找出近結(jié)腸部空腸系膜鋪于特制的保溫鼠版上，進(jìn)行顯微鏡觀察。將觀察到的毛細(xì)血管后靜脈微循環(huán)記錄于錄像帶留作分析?？嘈尤受瘴察o脈注射(2ml/kg)，重型急性胰腺炎(SAP)應(yīng)用胰管注射?；撬徕c法引起。
結(jié)果SAP使微循環(huán)各項(xiàng)指標(biāo)(白細(xì)胞滾動(dòng)數(shù)、粘附數(shù)、平均血流速度、和壁切率)明顯惡化，于AP造模時(shí)給予苦杏仁苷可防止微循環(huán)障礙結(jié)論苦杏仁苷可降低大鼠SAP時(shí)的白細(xì)胞滾動(dòng)及粘附數(shù)增加，能增加血液流速及壁切率。(表9)表9苦杏仁苷對(duì)SAP大鼠腸系膜活體微循環(huán)的影響(x±s)

注僅AP后0min及10min壁切與AP前比較，P＜0.05，()動(dòng)物數(shù)②苦杏仁苷對(duì)急性重型胰腺炎(SAP)大鼠胰腺、肺白細(xì)胞聚集的影響目的對(duì)實(shí)驗(yàn)性SAP大鼠胰腺、肺的白細(xì)胞聚集進(jìn)行定量研究。
方法SAP造模方法同①，造模前經(jīng)頸靜脈注入99mTc標(biāo)記的白細(xì)胞，記錄SAP后胰腺、肺的放射性，測(cè)量各臟器髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性，進(jìn)行白細(xì)胞聚集定量，并觀察組織病理改變。
結(jié)果SAP大鼠3小時(shí)時(shí)胰腺、肺白細(xì)胞聚集明顯增加，并逐漸增多?？嘈尤受漳苊黠@抵制白細(xì)胞在胰腺、肺的聚集。
結(jié)論苦杏仁苷通過(guò)抑制白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞粘附，減少白細(xì)胞在組織的聚集，從而對(duì)胰外臟器起保護(hù)作用。(表10)表10SAP大鼠肺組織放射量變化(％ID/G)

與SAP組、SAP+丹參組相比*P＜0.05，**P＜0.01，③苦杏仁苷對(duì)SAP大鼠CD11b/CD18表達(dá)的影響目的研究苦杏仁苷對(duì)SAP大鼠CD11b/CD18表達(dá)的影響。以探討其調(diào)節(jié)白細(xì)胞募集的機(jī)理。
方法將大鼠隨機(jī)分為模型組、治療組。治療組在引發(fā)SAP后經(jīng)頸靜脈輸入苦杏仁苷0.1ml/100g，治療后1、3、6及24小時(shí)處死動(dòng)物，取肺及胰腺組織標(biāo)本，免疫組化法測(cè)定CD118/CD18表達(dá)。
結(jié)果各組胰腺組織中均未測(cè)出活性，于模型組動(dòng)物見(jiàn)SAP后3小時(shí)肺表達(dá)增加，治療組動(dòng)物治療后1小時(shí)見(jiàn)肺CD11b表達(dá)明顯下降，3、6、12小時(shí)進(jìn)一步降低。
結(jié)論苦杏仁苷可使SAP大鼠升高的肺CD11b/CD18表達(dá)明顯降低。推論認(rèn)為其調(diào)節(jié)白細(xì)胞在組織中的募集至少與粘附分子CD11b/CD18表達(dá)有關(guān)(表11、12)。
表11各組動(dòng)物肺組織CD11b表達(dá)(陽(yáng)性細(xì)胞/視野)

**與SAP組、SAP+丹參組相比P＜0.01；★與前一時(shí)間段相比P＜0.05；★★與前一時(shí)間段相比P＜0.01；※與SAP組、SAP+丹參組相比P＜0.05；※※與SAP組、SAP+丹參組相比P＜0.01。
表12各組動(dòng)物肺組織CD18表達(dá)(陽(yáng)性細(xì)胞/視野)

同上④苦杏仁苷對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮與白細(xì)胞粘附率的影響目的觀察苦杏仁苷對(duì)細(xì)胞因子誘發(fā)的體外培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮與白細(xì)胞粘附的影響。
結(jié)果表明肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞與含腫瘤因子及IL-1β培養(yǎng)基共同孵育后，可顯著增加白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的相互粘附作用。在培養(yǎng)基中加入苦杏仁苷或苦杏仁苷含藥血清后，粘附率明顯下降。
結(jié)論抑制白細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞的過(guò)度粘附是苦杏仁苷重要的作用機(jī)理之一。(表13)表13大鼠肺微血管內(nèi)皮與白細(xì)胞粘附率

*與正常對(duì)照組相比P＜0.05**與正常對(duì)照組相比P＜0.01△△與相應(yīng)模型組相比P＜0.01▲▲與苦杏仁苷組相比P＜0.01(2)對(duì)血清一氧化氮的影響目的NO是重要的血管活性因子，但其過(guò)度升高也對(duì)血運(yùn)不利。本實(shí)驗(yàn)于急性胰腺炎大鼠觀察了苦杏仁苷對(duì)血清一氧化氮(NO)濃度的影響。
方法應(yīng)用膽管內(nèi)逆行注射?；撬徕c的方法引起大鼠急性胰腺炎，收集血標(biāo)本并用NO測(cè)定試劑盒測(cè)定治療前后血清NO濃度。
結(jié)果苦杏仁苷能使之明顯降低。
結(jié)論苦杏仁苷急性胰腺炎時(shí)大鼠血清NO的過(guò)度升高有降低作用。(表14)表14苦杏仁苷對(duì)急性胰腺炎大鼠血清NO濃度的影響(x±s，μmol/L)

注與胰腺炎前比較，*p＜0.05，**p＜0.01(四)促進(jìn)傷口愈合缺血是傷口愈合過(guò)程中的重要不利影響因素，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兔耳缺血皮膚切口模型對(duì)苦杏仁苷對(duì)傷口愈合的作用進(jìn)行了研究。
模型及方法家兔12只，麻醉后將一側(cè)兔耳脫毛，按WU氏法制作一側(cè)耳部缺血模型。再于該耳側(cè)面作一5cm、垂直的、深至軟骨的外科缺口，用5#絲線縫合。術(shù)后3、5、7、10、14及28天分別測(cè)定緊鄰切口邊緣的皮膚微循環(huán)(激光多普勒血流計(jì)法)及皮下組織氧分壓(組織測(cè)氧計(jì)法)，于第28天取切口皮膚，仔細(xì)切去脂肪，應(yīng)用三段8mm寬的皮片以簡(jiǎn)易法測(cè)定組織段列強(qiáng)度。
結(jié)果實(shí)驗(yàn)證明苦杏仁苷可改善皮下組織氧分壓，增加皮膚組織微循環(huán)血流，使切口愈合加快，提高切口斷列強(qiáng)度。
1.一般情況，缺血兔耳對(duì)照組至12天仍未恢復(fù)皮膚正常顏色，而苦杏仁苷組于第10天皮膚由紫轉(zhuǎn)微紅色。
2.皮下組織氧分壓(PO2)致缺血后對(duì)照組明顯降低，10天時(shí)稍有恢復(fù)。14-28天仍低于操作前，治療組于第7天開(kāi)始恢復(fù)，至10天時(shí)基本恢復(fù)正常。(表15)
3.微循環(huán)檢查兩組致缺血模型后均見(jiàn)皮膚微循環(huán)明顯降低，對(duì)照組至術(shù)后10天仍未恢復(fù)，而治療組則于術(shù)后10天明顯恢復(fù)，至14天時(shí)基本恢復(fù)正常。(表16)4.切口斷裂強(qiáng)度第28天時(shí)治療組切口斷裂強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組。(表17)結(jié)論苦杏仁苷有益于缺血皮膚切口的愈合。
表15皮膚組織氧分壓(PO2)變化(x±s)

*與治療前比較P＜0.05表16兔耳皮膚微循環(huán)血流變化(x±s)

*與治療前比較P＜0.05表17皮膚切口斷裂強(qiáng)度(x±s)

*與對(duì)照組比較P＜0.05本發(fā)明制備的苦杏仁苷，經(jīng)天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所病理生理研究室、天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所藥物研究室所作的毒性試驗(yàn)報(bào)告如下。
一.苦杏仁苷急性毒性試驗(yàn)
1.實(shí)驗(yàn)方法預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，最大濃度苦杏仁苷一般無(wú)致死性，故采用最大濃度、最大容積給藥法。并證明苦杏仁苷最大溶解度為19％。
取健康昆明種小鼠20只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)日每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射19％苦杏仁苷0.5ml，連續(xù)觀察七天。
藥物由本所藥物研究室制備，臨用前用生理鹽水配制。
2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果給藥后即刻未見(jiàn)動(dòng)物有呼吸困難、抽搐、大小便失禁等急性中毒癥狀，動(dòng)物毛光滑、活動(dòng)自如，有探究反射。七天觀察過(guò)程中動(dòng)物食欲良好，能自然進(jìn)食、進(jìn)水，未見(jiàn)嘔吐、腹瀉現(xiàn)象，七天末動(dòng)物體重增加(給藥前平均27.05±1.克，給藥后平均30.9±1.91克)。七天全部觀察過(guò)程中無(wú)任何動(dòng)物死亡。
3.結(jié)論小鼠對(duì)苦杏仁苷的最大耐受劑量為19％，0.5ml。按小鼠平均體重為25克/只計(jì)算，總給予藥量為3.8g/kg，一次給予(約5秒內(nèi)注射完畢)。臨床推薦用量為3％、2ml/kg/h，即2.7×10-3ml/kg/5sec，也就是8.3×10-5g/kg。因此本次實(shí)驗(yàn)所得小鼠最大耐受量相當(dāng)臨床推薦用量的45783.13倍。(以上為粗略計(jì)算，未將連續(xù)輸入藥物的蓄積作用估計(jì)在內(nèi)。
二.苦杏仁苷長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(一)動(dòng)物和材料1.動(dòng)物健康wistar大鼠(清潔級(jí))80只，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院四所，體重250克左右。試驗(yàn)共分4組，每組20只，雌雄各半。試驗(yàn)前觀察一周，記錄食量及體重。
2.試驗(yàn)藥物苦杏仁苷，白色粉末，由本所藥物研究室制備，試驗(yàn)前以生理鹽水配成溶液。
(二)試驗(yàn)方法1.試驗(yàn)分組試驗(yàn)共分四組，即空白組9(不加處理)、對(duì)照組(生理鹽水組)、高劑量組(9％苦杏仁苷)、低劑量組(3％苦杏仁苷)。
2.給藥方法后三組動(dòng)物每天分別經(jīng)腹腔注射生理鹽水、苦杏仁苷各1ml，連續(xù)兩周。
3.觀察指標(biāo)每天觀察飲食、二便、毛發(fā)及活動(dòng)情況。隔日測(cè)量體重。試驗(yàn)?zāi)⒋笫髷囝^處死，取血標(biāo)本測(cè)定肝、腎功能和血象變化，并取心、肝、脾、肺、腎、睪丸及卵巢組織標(biāo)本進(jìn)行病理組織檢查，稱重計(jì)算臟器系數(shù)。
(三)試驗(yàn)結(jié)果1.血象給藥后14天大鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血紅蛋白(HGB)、細(xì)胞比積(HCT)、平均細(xì)胞容積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)及平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)與空白組比較均無(wú)明顯差別，唯血小板計(jì)數(shù)(PLT)有變化，低劑量組明顯升高(827±89.8vs 670±174×109/μl，p＝0.01)，但生理鹽水組也比空白組升高(805.4±88.92vs 670±174×109/μl，p＝0.038)，因此可能為偶然變化。(表18、19)2.肝功能腹腔內(nèi)連續(xù)注射苦杏仁苷兩周對(duì)大鼠肝功能無(wú)毒性作用，試驗(yàn)?zāi)└鹘M可見(jiàn)谷-丙轉(zhuǎn)氨酶降低，包括生理鹽水組(p＜0.05)、總蛋白及白蛋白升高。總膽紅素?zé)o變化。(表20)3.腎功能腹腔內(nèi)連續(xù)注射苦杏仁苷兩周對(duì)大鼠腎功能無(wú)任何毒性作用，血尿素氮及肌酸酐與空白組動(dòng)物比較無(wú)明顯差別。(表21)4.體重苦杏仁苷腹腔注射兩周后大鼠體重明顯增加，生理鹽水組動(dòng)物體重也增加，唯對(duì)照組不明顯，但也有增加趨勢(shì)。(表22)5.臟器重量和臟器系數(shù)各組間的各臟器系數(shù)無(wú)明顯差別。(表23)表21.苦杏仁苷長(zhǎng)期注射對(duì)大鼠腎功能的影響

注Urea尿素；Cr肌酸酐表22.苦杏仁苷長(zhǎng)期注射對(duì)大鼠體重的影響(克)

P值試驗(yàn)前后比較表18苦杏仁苷長(zhǎng)期注射對(duì)大鼠血象的影響

注RBC紅細(xì)胞計(jì)數(shù)；WBC白細(xì)胞計(jì)數(shù)；HGB血紅蛋白；PLT血小板表19苦杏仁苷長(zhǎng)期注射對(duì)大鼠血象的影響

注HCT血球比積；MCV平均細(xì)胞容積；MCH平均紅細(xì)胞血紅蛋白量；MCHC平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度表20苦杏仁苷長(zhǎng)期注射對(duì)大鼠肝功能的影響

注ALT丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；TP總蛋白；ALB白蛋白；T-BIL總-膽紅素表23苦杏仁苷長(zhǎng)期注射對(duì)大鼠心臟系數(shù)的影響(x±s)

6.病理組織檢查結(jié)果空白組、生理鹽水組及苦杏仁苷低和高劑量組動(dòng)物之心、肝、脾、腎和生殖腺(睪丸或卵巢)均無(wú)任何病理改變。肺泡內(nèi)出血(可能系斷頸處死時(shí)吸入的結(jié)果)、輕度間質(zhì)細(xì)胞增生、肺泡間隔增寬、組織實(shí)變等在各組均不同程度地存在，因此認(rèn)為是動(dòng)物本身的問(wèn)題，不是苦杏仁苷的慢性毒性作用。
四.結(jié)論苦杏仁苷連續(xù)腹腔注射，1ml/d.(3％或9％)，共2周，對(duì)大鼠未產(chǎn)生慢性毒性作用*。
*苦杏仁苷推薦臨床使用劑量為2ml/kg/h(目前仍為實(shí)驗(yàn)用劑量，進(jìn)行臨床試驗(yàn)治療時(shí)還須進(jìn)一步推敲)本次使用慢性毒性試驗(yàn)的劑量為1ml一次注入，因此劑量可能偏大。肺病理檢查所見(jiàn)輕微異?；蛟S與此有關(guān)。輸液劑量與一次注入劑量的換算方法尚不十分明確。慢性毒性試驗(yàn)所應(yīng)用的劑量由于可能偏大，所得試驗(yàn)結(jié)果(無(wú)毒性作用)因而更可靠。
權(quán)利要求
1.苦杏仁苷在制備促進(jìn)腦血液循環(huán)作用的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
2.苦杏仁苷在制備治療心力衰竭的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
3.苦杏仁苷在制備治療急性胰腺炎的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
4.苦杏仁苷在制備促進(jìn)傷口愈合的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種苦杏仁苷在制備促進(jìn)心腦胰及傷口血液循環(huán)的苦杏仁苷制劑中的應(yīng)用，屬于含有機(jī)有效成分的醫(yī)藥配制品的醫(yī)藥用途。本發(fā)明提供了一種使用苦杏仁苷預(yù)防和治療因血粘稠度升高所致的腦缺血；對(duì)心臟功能衰竭有保護(hù)作用；用于治療急性胰腺炎；增加皮膚組織微循環(huán)血流，促進(jìn)傷口愈合的苦杏仁苷注射用粉制劑的醫(yī)藥用途，并具有顯著的效果。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1989973SQ20061017029
公開(kāi)日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2003年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月24日
發(fā)明者吳咸中, 伍孝先, 趙連根, 王興民, 劉俊紅, 陳玉玲, 劉大全, 李棣華, 崔乃強(qiáng) 申請(qǐng)人:天津市南開(kāi)醫(yī)院