專利名稱：視神經(jīng)炎的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及視神經(jīng)炎的治療。更具體地說，涉及IFN-p用于治 療方案中，以及在制備治療視神經(jīng)炎例如孤立病灶的脫髓鞘神經(jīng)炎患者的藥物中的 應(yīng)用。
背景技術(shù)：
視神經(jīng)炎是造成青年人視力喪失的常見原因，常常也是多發(fā)性硬化癥的首發(fā)表 現(xiàn)。己發(fā)現(xiàn)大約75%患有視神經(jīng)炎的患者在15年內(nèi)發(fā)展成臨床意義上的多發(fā)性硬 化癥(CDMS)。因此眼科醫(yī)生可能是第一個考慮診斷多發(fā)性硬化癥的人。多發(fā)性硬化癥(MS)是一種炎癥性自身免疫性疾病，以軸突脫髓鞘和損傷為特 征。相當(dāng)大一部分MS患者首先出現(xiàn)視神經(jīng)炎(ON) ， ON以視神經(jīng)的損害為特征。 臨床研究，特別是視神經(jīng)炎研究組(0NTT)的研究幫助闡明了視神經(jīng)炎的自然病史 和治療。這些研究表明，與口服氫化波尼松或安慰劑相比，采用靜脈內(nèi)甲基強的松 龍(IVMP)治療，視力恢復(fù)更快，但長期視覺靈敏度沒有差異(見例如Current 0pin Neurol. 1995 Feb;8(1) :72-6對0NTT方案和結(jié)果的描述)。采用IVMP治療的患 者，以后發(fā)展成臨床意義上的多發(fā)性硬化癥可推遲達(dá)2年。然而，3年內(nèi)臨床意 義上的多發(fā)性硬化癥(CDMS)的發(fā)病率，治療組和安慰劑組相比沒有差異。因此，視神經(jīng)炎當(dāng)前的治療方案還需要改進(jìn)。其它的臨床研究提出采用干擾素-卩(IFN-卩)來治療視神經(jīng)炎，或者治療臨床 意義上的多發(fā)性硬化癥的"危急患者"的"第一臨床事件"(1st clinical event)。例如，Balcer & Galetta(Semin Ophthalmol. 2002 Mar; 17(1) :4-10)提出對 有發(fā)展成臨床意義上的多發(fā)性硬化癥的高度危險的患者，其脫髓鞘視神經(jīng)炎的治 療，采用甲基強的松龍，靜脈給藥(i.v. ) (IVMP),接著口服(po)強的松和每周 肌注(i.m.) —次干擾素-(3 la30微克(racg),或每周一次22mcg，皮下(s. c.)。CHAMPS研究考察了早期使用30mcg干擾素-p i. m. /周減少第一臨床事件的 "危險患者"(MRI標(biāo)準(zhǔn)>2 T2-病灶)和"高?；颊?(〉9 T2-病灶，〉1釓陽 性病灶)轉(zhuǎn)化為CDMS的危險性。相似地，ETOMS研究考察了 22mcg干擾素-卩s. c./周，減少第一臨床事件 的危險患者(患者有〉4 T-2病灶或3病灶，其一在腦幕下或釓陽性)轉(zhuǎn)化為CDMS 的危險性。目前治療視神經(jīng)炎的藥物方案，沒有一個完全令人滿意。因此，本發(fā)明的目的 就是提供一種改進(jìn)的視神經(jīng)炎的治療方法。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種新的有益的治療0N患者，特別是患有脫髓鞘視神經(jīng)炎 (DON)患者的方法。本方法包括序貫或同時使用免疫抑制化合物諸如類固醇化 合物和干擾素-P蛋白。在發(fā)病早期積極使用IFN-b治療在這樣的治療方案中是 有益的。根據(jù)本發(fā)明的方法，特別適合和有益于早期ON患者的治療。特別地， 能從本發(fā)明的治療受益的早期0N患者治療時可能還處于亞臨床期，即只有在 診斷工具的幫助下才能發(fā)現(xiàn)。發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明是基于表明IFN-p對有早期ON表現(xiàn)，特別是早期DON表現(xiàn)的患者有益 的臨床試驗數(shù)據(jù)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)早期DON伴有與視神經(jīng)軸突損傷(axonal loss)相關(guān) 的結(jié)構(gòu)改變。這些結(jié)構(gòu)變化可以通過系列光學(xué)相干斷層成像術(shù)(sOCT)分析測定視網(wǎng) 膜神經(jīng)顯微層(RNFL)厚度進(jìn)行定性和定量。由于疾病進(jìn)展，ON和MS軸突退化導(dǎo)致 RNFL密度(厚度)隨時間減小，光學(xué)相干斷層成像術(shù)(0CT)可以用來評價0N和MS 傳入視覺系統(tǒng)的軸突損傷、存活和對治療的反應(yīng)情況。令人驚奇的是，在本發(fā)明中所觀察到的ON的早期變化，諸如臨床意義上眼睛尚 未受到影響的D0N患者的早期變化，通過在早期積極使用IFN-卩l(xiāng)a，配合根據(jù)免 疫抑制化合物包括類固醇藥物諸如0NTT方案的標(biāo)準(zhǔn)ON治療方案，都可以被阻止、 減輕禾口可獸腿轉(zhuǎn)(potentially reversed)。因此，本發(fā)明的一個方面，提供了一種治療視神經(jīng)炎患者的方法，包括序 貫或同時使用免疫抑制化合物和干擾素-p蛋白，其中干擾素-(i蛋白使用的單周累 積劑量大于12 MIU。優(yōu)選地，所治療的視神經(jīng)炎是脫髓鞘視神經(jīng)炎(DON)。在另一個優(yōu)選的實施方式中，接受根據(jù)本發(fā)明的治療方案的患者沒有臨床 意義上的多發(fā)性硬化癥(CDMS)。在一個優(yōu)選的實施方式中，ON可以是孤立表現(xiàn) (孤立的視神經(jīng)炎，"臨床孤立綜合征[CIS]")?；加蠴N的患者以后可能會或不會發(fā)展成CDMS。因此，在本發(fā)明范圍內(nèi)，0N，特別是D0N，可能伴有炎癥性中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙 (inflammatory CNS disorder),也可能不伴有炎癥性CNS障礙。這里的"炎癥性 CNS障礙"特別包括脫髓鞘性炎癥性CNS障礙，諸如MS、進(jìn)行性多病灶性白質(zhì)腦病 (PML)、急性播散性腦脊髓炎(ADEM)或其它相關(guān)疾病。在一個優(yōu)選的實施方式中，接受根據(jù)本發(fā)明的方案治療的患者，不是發(fā)展 成臨床意義上的多發(fā)性硬化癥(C薩S)的高危患者(例如根據(jù)MRI標(biāo)準(zhǔn)的定義)。 例如，在一個優(yōu)選的實施方式中，接受根據(jù)本發(fā)明的方案治療的患者，沒有3 個或以上，優(yōu)選沒有2個或以上的直徑大于3mm白質(zhì)病灶。更優(yōu)選，患者沒有任何 直徑大于3mni的白質(zhì)病灶。在一個優(yōu)選的實施方式中，接受根據(jù)本發(fā)明的方案治療的患者，發(fā)展成臨 床意義上的多發(fā)性硬化癥(CDMS)的危險，在初次診斷0N 10年后等于或低于 30、 28、 26、 24、 22，或者甚至20%。在另一個實施方式中，接受根據(jù)本發(fā)明的方案治療的患者發(fā)展成臨床意義 上的多發(fā)性硬化癥(C薩S)的危險很低，因為患者是男性和/或在初次診斷0N 時有視盤水腫、出血或滲出和/或患側(cè)眼睛無疼痛。在另一個實施方式中，接受根據(jù)本發(fā)明的方案治療的患者，在初次出現(xiàn)0N 時，有軸突損傷和/或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)損傷(retinal ganglion loss)的高度危 險。初次出現(xiàn)ON時有軸突損傷和/或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)損傷的高度危險的患者，可 以是例如在采用靜脈推注類固醇藥物治療3-4周后，視覺功能沒有改善，禾口/ 或可能出現(xiàn)軸突損傷征象，比如根據(jù)0CT如系列光學(xué)相干斷層成像術(shù)(s0CT)或 掃描激光旋光測定法(SLP)測定RNFL厚度平均減少至少5%、 10%、 20%或甚至 30%。另外，可以理解，在初次出現(xiàn)0N時顯示軸突損傷大于5%、甚至10%或15%的患者，可以從接受本發(fā)明的方案治療中受益。在接受初始的免疫抑制藥物例 如類固醇藥物的治療前或治療后，這種軸突損傷可以通過侵入性或者非侵入性技術(shù)進(jìn)行測定。優(yōu)選釆用非侵入性的體內(nèi)生物標(biāo)記物對軸突損傷進(jìn)行測定。屬于在本發(fā)明意義上的"多發(fā)性硬化癥"可以定義為DSM-IV類(炎癥性中 樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙診斷和統(tǒng)計手冊，第四版，美國精神病學(xué)學(xué)會，華盛頓 D. C. ， 1994 ( Diagnosis and Statistical Manual of Inflammatory CNS Disorders, Fourth Edition, American Psychiatric Association, Washington D. C. ， 1994)。在另一個優(yōu)選的實施方式中，DON臨床表現(xiàn)在一側(cè)視神經(jīng)。"臨床表現(xiàn)" 是指患者至少有一個癥狀，比如可以主觀感受的一種生理器官功能的損害(例 如清晰視力下降)，或者生理器官功能的損害的量可以功能確定。至于視神經(jīng) 可以確定的生理器官功能包括例如視覺敏銳度、對比敏感度、顏色視覺和眼睛 的視野。在一個實施方式中，接受治療的ON患者是無臨床表現(xiàn)的。所謂0N無臨床表現(xiàn)，指患者的清晰視力沒有下降，但是，病態(tài)的過程，例如軸突損傷可以通過適宜的診斷方法諸如0CT、 SLP、視覺誘發(fā)電位(visual evoked potentials , VEPs)分析或圖形視網(wǎng)膜電圖(pattern electroretinogram, PERG) 記錄來確定病理過程。在另一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明接受治療的患者在治療開始時至少一只 眼睛的RNFL的減少不超過30微米，優(yōu)選不超過25、 20或15 micro。在另一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明接受治療的患者至少一只眼睛的RNFL 厚度減少至少10或5微米。在本發(fā)明的一個實施方式中，所用的干擾素-[5蛋白是干擾素-(3 la，比如 Avonex 或Rebif 。在本發(fā)明的另一個實施方式中，干擾素-(5蛋白是干擾素 —p lb，比如Betaferon 。在本發(fā)明另外一個實施方式中，干擾素-p蛋白是經(jīng)修飾的干擾素-(5蛋白， 比如長效形式的干擾素-P。具體地說，長效形式的干擾素-[3可以選自聚乙二醇 化的干擾素-(3 (pegylated interferon-beta)，或干擾素-(3-HAS-融合蛋白或 干擾素-f3-Fc-融合蛋白。在一個優(yōu)選的實施方式中，IFN融合到免疫球蛋白分子(Ig)的恒定區(qū)。 優(yōu)選地，IFN融合到重鏈區(qū)，比如人IgGl的CH2區(qū)和CH3區(qū)。根據(jù)本發(fā)明，其 它Ig分子的同種型(isoform)也適用于產(chǎn)生融合蛋白，比如同種型IgG2、 IgG:i 或IgG,，或其它類Ig，如IgM或IgA。融合蛋白可以是單體，也可以是多聚體， 異源多聚體或同源多聚體。在另一個優(yōu)選的實施方式中，功能衍生物包括發(fā)生在一個或多個側(cè)鏈氨基 酸殘基上的，附加在一個或多個功能基團的至少一個配基。優(yōu)選地，配基是聚 乙二醇(PEG)。 PEG化(pegylation)可以采用已知方法完成，例如W099/55377 描述的方法。在本發(fā)明的一個實施方式中，干擾素-(3的每次給藥劑量至少是44mcgs. c.。優(yōu)選地，每周至少給藥3次。在一個特別優(yōu)選的實施方式中，給予干擾素-卩 44mcg s. c. 3次/周。根據(jù)本發(fā)明，干擾素-p在類固醇治療結(jié)束后，不超過28天的間隔內(nèi)，或不超 過21天或14天,或甚至不超過7天的間隔內(nèi)，劑量調(diào)整為至少44mcg s. c. 3次/周。根據(jù)本發(fā)明使用的免疫抑制化合物可以選自例如具有抗增殖/抗腫瘤活性 免疫抑制劑如米托蒽醌，氨甲蝶呤、(硝基)咪唑硫嘌呤、環(huán)磷酰胺或類固醇類。 免疫抑制劑可以按照如下劑量范圍對人使用，例如環(huán)磷酰胺500-1500mg/m2 IV ;甲氨蝶呤可達(dá)20 mg po;米托蒽醌12mg/m2 IV或(硝基)咪唑硫嘌呤2 rag/kg p. o。在一個優(yōu)選的實施方式中，免疫抑制化合物是類固醇化合物。 根據(jù)本發(fā)明使用的類固醇化合物可以選自，例如甲基強的松龍、強的松或 地塞米松或類固醇分泌劑如ACTH。類固醇類在可以下劑量范圍內(nèi)對人使用甲基強 的松龍1-2-mg IV或24-48 rag p. o.;強的松1 mg/kg p. o.，或ACTH可達(dá)100 MIU。在一個優(yōu)選的實施方案中，類固醇化合物是甲基強的松龍。類固醇化合物和千擾素-p蛋白可以序貫給藥或者同時給藥。在本發(fā)明的一 個優(yōu)選的實施方式中，免疫抑制化合物比如類固醇類和干擾素-l3蛋白是序貫給 藥。優(yōu)選地，免疫抑制化合物治療在干擾素-(3蛋白給藥之前。根據(jù)本發(fā)明，類固醇化合物可以多個單獨劑量給藥。在一個優(yōu)選的實施方 案中，類固醇藥物以至少兩個單獨劑量給藥。在另一個優(yōu)選的實施方案中，類固醇化合物按照視神經(jīng)炎治療試驗(Optic Neuritis Treatment Trial, ONTT)方案給藥。(Beck RW， Optic Neuritis Study Group. The Optic Neuritis Treatment Trial. Arch Ophthalmol 1988; 106:1051-53)根據(jù)本發(fā)明的治療方案可以單獨使用或者與其它有效用于MS治療的化合 物合用。因此，在本發(fā)明的一個實施方案中，還給予患者另一個"MS化合物" (或"MS藥物")。本發(fā)明所用的"干擾素-P" ( IFN-p)，包括人纖維母細(xì)胞干擾素，可以 是天然的，如從天然來源純化出來的，或者通過DNA重組技術(shù)從原核細(xì)胞源(例 如Escherichia coli， E. coli)或真核宿主細(xì)胞比如酵母或哺乳動物細(xì)胞獲得的。哺乳動物細(xì)胞比如中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)，或者人細(xì)胞是優(yōu)選的生產(chǎn)重組干擾素-p的宿主。IFN-(3可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。在這里使 用的干擾素-(5,既包括天然的干擾素-卩也包括來源于原核細(xì)胞(如E. coli) 和真核細(xì)胞(如CH0)通過重組合成的干擾素-卩。如果根據(jù)本方明使用的IFN-p 是非糖基化的(如E. coli生產(chǎn)的)，為了獲得和糖基化IFN-卩相當(dāng)?shù)纳飳W(xué) 和藥理學(xué)的效果，優(yōu)選給予更高的劑量IFN-(3。例如，為了獲得相當(dāng)?shù)男Ч?優(yōu)選給予大約高于糖基化IFN-p IO倍的非糖基化的IFN-(3。此處所用的"干擾 素-P"，還包括IFN-(5的衍生物、突變蛋白、類似物和片段，或IFN-(3的融合 蛋白。此處所用的"干擾素-卩(IFN-(3)"，還包括IFN-p的功能衍生物、突變 體、類似物、片段或融合蛋白。因此，此處所用的"干擾素(IFN)"和"干擾素-p (IFN-卩)"，旨在包括 人源的纖維母細(xì)胞干擾素，既包括從生物體液中分離出來的，也包括通過DNA 重組技術(shù)從原核或真核宿主細(xì)胞獲得的，還包括其鹽、功能衍生物、變異體、 類似物和活性片段。優(yōu)選地，在本發(fā)明范圍內(nèi)使用的IFN-(3是Avonex , 、 Betaseron ,或更 優(yōu)選地，是Rebif⑧。Rebif (干擾素-(3-la)是一個純化的166個氨基酸的糖基化蛋白，分子量 大概為22,500道爾頓。它是采用導(dǎo)入了人干擾素-(5的基因工程中國倉鼠卵巢細(xì) 胞，由重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的。Rebif⑧的氨基酸序列和來源于人干擾素-(3天然纖 維母細(xì)胞的相同。天然干擾素-(3和干擾素-P-la (Rebif^都是糖基化的，各自 含有一個N-連接復(fù)合糖配基。采用按照世界衛(wèi)生組織天然干擾素-p標(biāo)準(zhǔn)(第二版干擾素國際標(biāo)準(zhǔn)，人纖 維母細(xì)胞GB 23 902 531)校準(zhǔn)的參考標(biāo)準(zhǔn)，使用WISH細(xì)胞和水皰性口炎病毒， 通過采用體外細(xì)胞病變效應(yīng)生物檢測測定，1^1)1{ 的特異活性為每毫克干擾素 -P la為大約270百萬抗病毒國際單位(MIU)。IFN-(3的MIU和mcg轉(zhuǎn)換表MIU3121824mcg11446688目前用于MS的藥物包括疾病調(diào)節(jié)治療藥物(disease modifying treatment)，即改變MS病程，調(diào)節(jié)或抑制免疫系統(tǒng)。因此，本發(fā)明范圍內(nèi)的 MS化合物包括4種FDA批準(zhǔn)的RRMS免疫調(diào)節(jié)劑3個干擾素-13 (Betaseron , Berlex; Avonex , Biogen; Rebif , Serono)和格拉默醋酸鹽 (Glatiraarer acetate, axone , Amgen)。本發(fā)明范圍內(nèi)的MS化合物也包括FDA批準(zhǔn)用于惡化 型MS的免疫抑制藥物，米托蒽醌(Novantrone , Amgen)。適用于本發(fā)明的IFN-(3，可以從商業(yè)途徑獲得，例如1^131￡ (Serono), Avonex (Biogen)或Betaferon (Schering)。根據(jù)本發(fā)明也優(yōu)選使用人源 干擾素。此處所用的干擾素，還包括其鹽類、功能衍生物、變異體、類似物和 活性片段。Rebif (重組人干擾素-p)是最近開發(fā)的治療多發(fā)性硬化癥(MS)的干擾 素治療手段，代表著治療上巨大的進(jìn)步。Rebif 是干擾素(IFN)-p la，由哺 乳動物細(xì)胞系生產(chǎn)。已經(jīng)肯定，每周3次皮下給予干擾素-卩l(xiāng)a對于復(fù)發(fā)-緩解 多發(fā)性硬化癥(RRMS)的治療是有效的。長期來講，經(jīng)MRI檢測，干擾素-(3 la通 過減少復(fù)發(fā)次數(shù)和嚴(yán)重程度來減少疾病負(fù)荷和疾病活動，對于MS病程有積極作 用。根據(jù)本發(fā)明，IFN-(3在復(fù)發(fā)-緩解多發(fā)性硬化癥中的治療劑量取決于所用 IFN-p的類型。根據(jù)本發(fā)明，如果IFN是大腸桿菌生產(chǎn)的重組IFN-p lb，從商業(yè)途徑獲得 Betaseron牌的IFN，可以優(yōu)選皮下給藥方式，每兩天一次，每位患者使用劑量 大約為250-300 mcg或8-9. 6 MIU。根據(jù)本發(fā)明，如果IFN是中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的重組IFN-p la， 從商業(yè)途徑獲得Avouex牌的IFN，可以優(yōu)選肌肉給藥方式，每周一次，每位患 者使用劑量大約為30-33mcg或6-6. 6MIU。根據(jù)本發(fā)明，如果IFN是中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)生產(chǎn)的重組IFN-卩l(xiāng)a， 從商業(yè)途徑獲得Rebif牌的IFN，可以優(yōu)選皮下給藥方式，每周三次(TIW)，每 位患者使用劑量大約為22-44mcg或6 -12 MIU。優(yōu)選地，每次給藥選擇44 mcg 或12 MIU。根據(jù)本發(fā)明的IFN-(3蛋白可以包括IFN-(3的衍生物、變異體和突變蛋白。 此處所用的"功能衍生物"涵蓋IFN-p的衍生物、其變異體或突變蛋白和 融合蛋白，可以從發(fā)生在側(cè)鏈殘基的功能基團或N-末端或C-末端的基團，按照現(xiàn)有技術(shù)的方法制備。這些功能性衍生物，只要其保持了藥學(xué)上的可接受性 也包括在本發(fā)明，即它們沒有破壞該蛋白的活性，活性實質(zhì)上相似或優(yōu)于 IFN-卩，而且不會給含有它的組合物帶來毒性。這些衍生物可以，包括如聚乙二醇側(cè)鏈，這將會改善蛋白的其它特性例如 穩(wěn)定性、半衰期、生物利用度，人體耐受性或免疫原性。為了實現(xiàn)這個目的，IFN-p可以連接例如聚乙二醇(PEG)上。PEG化可以按照現(xiàn)有技術(shù)實施，例如 WO 92/13095所描述的技術(shù)。特別地，PEG-IFN可以根據(jù)WO 99/55377的指導(dǎo) 制備。因此，在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式中，干擾素-p的功能衍生物可以包含 至少一個連接在一個或多個功能基團上的配基,發(fā)生于一個或多個側(cè)鏈的氨基酸殘 基上。特別優(yōu)選的一個實施方式是配基為聚乙二醇(PEG)。根據(jù)本發(fā)明，IFN-p 也可以連接幾個PEG配基。其它衍生物包括羧基基團脂族酯、羧基基團與氨或與一級胺或二級胺反應(yīng) 的氨基化合物、由乙?；浠纬傻陌被釟埢坞x氨基基團的N-乙酰衍生物 (例如垸酰基或碳環(huán)芳?；鶊F)或游離羥基基團(如絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基)與?；浠纬傻膐-?；苌?。在本發(fā)明的范圍內(nèi)所使用的"變異體"或"突變蛋白"，指的是IFN-(3的 類似物，該類似物中，天然IFN-(3中的一個或多個氨基酸殘基為不同的氨基酸 殘基取代，或被去除，或一個或多個氨基酸殘基加入到天然IFN-(3序列中，與 野生型IFN-(3相比，不會太多地減弱產(chǎn)物的活性。這些突變蛋白可由己知的合 成技術(shù)和/或點突變技術(shù)或任何其它適宜的技術(shù)制備。根據(jù)本發(fā)明，"變異體"或"突變蛋白"還包括有核酸例如DNA或RNA編 碼的蛋白，該DNA或RNA能與例如US 4， 738， 931所公開的編碼IFN-(5的DNA或 RNA在嚴(yán)格條件下雜交。"嚴(yán)格條件"指雜交和之后的洗滌條件，本技術(shù)領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員稱之為"嚴(yán)格"的條件。見Ausubel et al. ， Current Protocols in Molecular Biology, supra, Interscience, N. Y. ， § § 6.3, 6.4 (1987， 1992)。不限于以下例子，嚴(yán)格條件包括洗滌條件比計算的雜交Tm低12-20°C， 在例如2XSCC和0. 5% SDS中5分鐘，2XSCC和0. 1% SDS中15分鐘；0. IX SCC和0. 5Q/。 SDS中37°C 30-60分鐘，0. 1 XSCC和0. 5% SDS中68°C 30-60分 鐘。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解嚴(yán)格條件還依賴于DNA序列的長度、寡核苷酸 (例如10-40個堿基)或混合寡核苷酸探針的長度。如果使用混合探針，優(yōu)選使用氯化四甲銨(TMAC)代替SSC。見Ausubel, s叩ra。一致性(identity)反映兩個或多個多肽序列或者兩個或多個多核苷酸序 列之間的關(guān)系，通過比較序列確定。通常， 一致性指兩個多肽序列或者兩個核 苷酸序列，在比較的長度上，核苷和核苷或氨基酸和氨基酸分別嚴(yán)格一致。對于并非嚴(yán)格一致的序列，可以確定"％—致"。通常，將要比較的兩個 序列比對出二者最大的相關(guān)性。這可能包括一個或兩個序列的插入"缺口"， 以增加聯(lián)配度。A %—致可以是將比較的所有序列的全長進(jìn)行比對(也稱全長 比對)，全長比對特別適合于長度相同或非常相似的序列或者短序列；A %— 致可以對較短的確定長度進(jìn)行比對(也稱局部比對)，局部比對更適合于長度 不等的序列或者短序列。兩個或多個序列一致或同源性的比對方法在本技術(shù)領(lǐng)域是已知的。因此， 可以使用例如Wisconsin Sequence Analysis Package, version 9. 1 (Devereux J et al., 1984)所提供的程序，例如BESTFIT和GAP程序，來確定兩個多核 苷酸的％—致性，和兩個多肽的％同源性。BESTFIT采用Smith & Waterman (1981) 的"局部同源性(local homology)"算法找到兩個相似序列間最單一的區(qū)域。 其它確定序列間一致性和/或相似度的程序在本技術(shù)領(lǐng)域也是已知的，例如 BLAST程序族(Altschul S F等，1990， Altschul S F等，1997，可以通過 NCBI主頁找到www. ncbi. nlm. nih. gov)禾卩FASTA (Pearson W R, 1990)。這樣的變異體或突變蛋白含有的一系列氨基酸足以和IFN-P的氨基酸結(jié)合, 以便具有和IFN-(3足夠相似的活性。評價任意的變異體或突變蛋白是否具有和 IFN-卩相似的活性的功能檢測方法是，例如，測定干擾素對WISH細(xì)胞中水皰性 口炎病毒(vesicular stomatitis virus)細(xì)胞病變效應(yīng)活性的方法，例如， 參見Youcefi等，1985。因此，通過常規(guī)實驗就可以確定給任意給定的一種突 變蛋白是否具有與IFN-p基本相同的活性。在優(yōu)選方案中，任何這樣的變異體或者突變蛋白和IFN-p的序列，例如US 4,738,931公開的序列，可以有至少40%的一致性或同源性。更優(yōu)選，有至少 50%、 60%、 70%或80%，或更優(yōu)選，有至少90%的一致性或同源性。根據(jù)本發(fā)明的指導(dǎo)，本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員不需要大量實驗就可以常 規(guī)獲得根據(jù)本發(fā)明可以使用的IFN-(3突變蛋白，或其編碼核酸，包括有限組的 多肽或多核苷酸替代的基本一致的序列。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的突變蛋白的改變是所謂的"保守性取代"("conservative substitution" ) 。 IFN-P多肽的保守性氨基酸取代可以包 括一個組內(nèi)的同義氨基酸，在該組成員氨基酸的取代將會保留該分子的生物學(xué) 功能(Grantham, 1974)。顯然，在不改變功能的條件下，上述序列中氨基酸 的插入和去除可能也屬于上述的改變，特別是如果插入和去除只涉及幾個氨基 酸，例如，在30以下，優(yōu)選10以下，并且不不去除或替代對于功能構(gòu)象非常 關(guān)鍵的氨基酸，如半胱氨酸殘基。由這種去除和/或插入產(chǎn)生的蛋白和突變蛋 白包括在本發(fā)明的范圍。優(yōu)選地，同義氨基酸組定義如表I，更優(yōu)選地，同義氨基酸組定義如表n; 最優(yōu)選地，同義氨基酸組定義如表ni。表I優(yōu)選的同義氨基酸組氨基酸同義組SerSer，Thr，Gly，AsnArgArg,Gln，Lys，Glu，HisLeulie'Phe，Tyr，Met,Val,LeuProGly，Ala'Thr，ProThrPro,Ser,Ala,Gly，His,Gln，ThrAlaGly，Thr，Pro,AlaValMet,Tyr，Phe,Ile，Leu,GlyAla，Thr，Pro,Ssr,GlylieMet,Tyr,Phe,Val，Leu,IlePheTrp,Met,Tyr，Ile,Val,PheTyrTrp,Met,Phe,lie,Val,Leu,TyrCysSsr，Thr，CysHisGlu,Lys,Gln，Thr，Arg，HisGinGlu,Lys，Asn，His,Thr,Arg,GlnAsnGln，Asp,Ssr,AsnLysGlu,Gln,His,Arg,LysAspGlu,Asn，AspGluAsp,Lys，Asn,Gln，His,Arg，GluMet TrpPhe, lie, Val, Leu, Met Trp表II更優(yōu)選的同義氨基酸組氨基酸同義組SerSerArgHis,Lys，ArgLeuLeu，Ile，Phe,MetProAla,ProThrThrAlaPro,AlavaiVal，Met,lieGlyGlylielie,Met,Phe，Val，PheMet,Tyr，lie,Leu，Tyr、 Phe，TyrCysCys，SerHisHis,Gin,ArgGinGlu，Gin,HisAsnAsp，AsnLysLys，ArgAspAsp,AsnGluGlu,GinMetMet,Phe，Ile,Val,TrpTrp表m最優(yōu)選的同義氨基酸組氨基酸 同義組Ser SerArg Leu Pro Thr Ala Val Gly lie Phe Tyr Cys His Gin Asn Lys Asp Glu Met TrpArgLeu, lie, MetProThrAlaValGlylie, Met, LeuPheTyrCys， SerHisGinAsnLysAspGluMet, lie, Leu Met可以用于本發(fā)明獲得的IFN-p突變蛋白的氨基酸取代包括任何已知的方法 步驟，例如美國專利4, 959， 314， 4， 588， 585和4， 737， 462和Mark等公開的方 法步驟；5,116,943 Koths等，4， 965， 195Namen等;4,879,111 Chong等;和 5, 017， 691 Lee等；和US專利No. 4， 904， 584公開的賴氨酸取代蛋白(Shaw等)。最近，有人描述了一種特殊類型的干擾素突變體。該所謂的"復(fù)合干擾素" (consensus interferon)是非天然產(chǎn)生的IFN突變體(US 6, 013, 253)。"復(fù)合干擾素"也可以根據(jù)本發(fā)明制備。本文所述的IFN-p "功能衍生物"("functional derivatives")包括 發(fā)生在側(cè)鏈殘基或N-末端或C-末端基團的功能基團制備的衍生物，可以按照 現(xiàn)有技術(shù)的方法制備。只要其保持了藥學(xué)上的可接受性也包括在本發(fā)明，即它 們沒有破壞該蛋白的生物學(xué)活性，即和相應(yīng)受體結(jié)合的和激發(fā)受體信號的能力，而且不會給含有它的組合物帶來毒性。衍生物可以有化學(xué)基如糖或磷酸殘 基，只要該衍生物保留了該蛋白的生物活性并且保持藥學(xué)可接受性。舉例來講，衍生物可以包括羧基基團脂族酯、羧基基團與氨或與一級胺或 二級胺反應(yīng)的氨基化合物、由乙?；纬傻腘-乙酰衍生物或由乙?；纬傻陌?基酸殘基游離氨基基團(例如垸?；蛱辑h(huán)芳?；鶊F)或游離羥基基團(如絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基)與酰基配基形成的o-?；苌铩＿@些衍生物還可以包括，例如聚乙二醇側(cè)鏈，這會掩蓋抗原位點并延長分子在體液內(nèi)的存留。 特別重要的是因為衍化或與配位劑(coraplexing agent)結(jié)合而緩釋的蛋白。根據(jù)本發(fā)明可以使用的例子如PEG化的蛋白，或者經(jīng)過基因工程處理在體內(nèi)表現(xiàn)出長效活性的蛋白。TO 99/55377描述了一種PEG化的蛋白，根據(jù)本發(fā)明認(rèn)為包括在干擾素-(3的定義中。根據(jù)本發(fā)明，IFN-p的鹽類也可以用來治療視神經(jīng)炎。此處"鹽類"一詞既指上述蛋白的羧基基團的鹽類，也指氨基基團加成鹽(acid addition)類或其類似物。羧基基團的鹽類可以通過現(xiàn)有技術(shù)的方法形成，包括無 機鹽類，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、銨鹽、鐵鹽、或鋅鹽以及類似鹽類，以及和有機 堿例如胺類如三乙醇胺、精氨酸或賴氨酸，吡啶、普魯卡因以及類似物質(zhì)形成的鹽 類。加成鹽類包括，例如與礦物酸如鹽酸、硫酸形成的鹽類，和與有機酸如乙酸或 草酸形成的鹽類。當(dāng)然，任何鹽類都必須保留IFN-p的生物學(xué)活性，該活性可以采用 例如前述的生物測定方法測定。"融合蛋白" 一詞是指含有融合到另一個蛋白上的IFN-(5或其變異體、突變蛋 白或片段的多肽，該多肽例如在體液內(nèi)具有更長的存留時間。因此，IFN-(3可 能被融合到其它蛋白、多肽或類似物質(zhì)，如免疫球蛋白或其片段。因此，在另一個實施方式中，IFN-p包括免疫球蛋白融合體，即IFN-(3是融 合蛋白，含有全部或部分IFN-(3融合到全部或部分免疫球蛋白上。制備這種免 疫球蛋白融合蛋白的方法是本技術(shù)領(lǐng)域熟知的，比如以W0 01/03737描述的方 法為例。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員將會理解，本發(fā)明的融合蛋白產(chǎn)物保留有IFN-p 的生物活性。融合可以是直接的，也可以是通過一段短的連接肽(linker)， 該連接肽長度可以是1-3個氨基酸殘基或更長，例如13個氨基酸殘基長度。 例如，所述的連接肽可以是序列為E-F-M (Glu-Phe-Met)三肽，含有 Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gin-Phe-Met的13-氨基酸連接 肽，或者富含Gly-Ser的連接肽，該連接肽被引入到IFN-P序列和來源于免疫球蛋白序列的序列之間。該融合蛋白產(chǎn)物的性能有了提高，例如較長的體液存 留時間(半衰期)，較高的特異性活性，較高的表達(dá)水平或融合蛋白更易于純 化。在本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選的實施方式中，IFN-(3融合到Ig分子的恒定區(qū)，通常稱之為免疫球蛋白的Fc片斷。優(yōu)選地，融合于其重鏈區(qū)，如人IgGl的CH2區(qū)和 CH3區(qū)。其它Ig分子的異構(gòu)體也適合于產(chǎn)生本發(fā)明的融合蛋白，如IgG2或IgG, 或其它Ig類如gM或IgA的異構(gòu)體。融合蛋白可以是單體或多聚體，同源多聚體或 異源多聚體。制備免疫球蛋白融合蛋白的方法是本技術(shù)領(lǐng)域已知的，例如，EP526 452或US 5, 155, 027的記載。EP 227 110、US 5， 541， 087、W0 97/24137或W0 00/23472 描述了含有IFN-p配基的Ig融合蛋白。根據(jù)本發(fā)明的"片段"指IFN-卩亞組，E卩，保留了預(yù)想的可測定(例如可 以用前述的生物測定方法)的生物活性的短肽。片段很容易制備，可以通過去 除分子任何一段的氨基酸并測定所得物作為受體競爭物的特性進(jìn)行。從多肽的 N-末端或C-末端一次地去除一個氨基酸的蛋白酶是已知的。因此，保留預(yù)想的 生物學(xué)活性的片段可以按照常規(guī)實驗測定，如按照Youcefi等，1985描述的方 法。本發(fā)明提供了制備上述的衍生物的重組方法，這些衍生物還可以通過常規(guī)的蛋 白合成方法制備，這是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的。具有IFN-p的活性的IFN-(5，或其變異體/突變蛋白，功能衍生物，活性片 段或融合蛋白，優(yōu)選全身給藥，優(yōu)選皮下給藥或肌肉給藥。皮內(nèi)給藥、經(jīng)皮給 藥(如緩釋制劑)、靜脈給藥、口服給藥、顱內(nèi)給藥、硬膜外給藥、局部給藥、 直腸給藥和鼻腔給藥也都包含于本發(fā)明。任何其它的治療有效的給藥途徑也可以使用，例如經(jīng)過上皮或內(nèi)皮組織吸 收，或基因治療，基因治療時給予患者編碼IFN-(3的DNA分子(例如通過載體)， 使得IFN-(3在體內(nèi)表達(dá)并分泌。IFN-(5可以制成藥物組合物，即與其它藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或類似物一 起制成藥物組合物。"藥學(xué)可接受的"的定義是指包括任何載體，該載體不影響活性成分的生 物學(xué)活性的效力，并且對接受藥物者沒有毒性。例如，對于注射用藥，活性蛋 白可以在載體如鹽、右旋糖、血清白蛋白和林格氏液(Ringer's solution) 中制成單劑量的注射劑。治療(〃treat〃或"treating"此處指改善、緩和癥狀，暫時或永久性消除 癥狀產(chǎn)生原因，或者預(yù)防或延緩指定疾病或狀態(tài)癥狀的出現(xiàn)。此處所用的"治療" ("treatment") —詞也包括"預(yù)防疾病"詞義，也就是，例如延緩疾病癥狀 的發(fā)生到醫(yī)學(xué)上明顯的程度。治療疾病是指，例如減少疾病伴隨癥狀，或改善疾病 癥狀復(fù)發(fā)。給患者所使用的劑量，單劑量或者多劑量，可能有所不同，與多種因素有 關(guān)，包括IFN-卩的藥代動力學(xué)特征、給藥方式、患者狀態(tài)和特點(性別、年齡、 體重、健康和身高)，癥狀嚴(yán)重程度、當(dāng)前的治療方式、治療的頻率。對確定 給藥劑量的調(diào)整和使用可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員確定。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的劑量和給藥方式選自以下組內(nèi)12 MIU (44 meg) IFN-卩3 次/周；12 MIU (44 mcg)/天；24 MIU (88 mcg) 3次/周；或24 MIU (88 mcg)/ 天。這些劑量優(yōu)選皮下注射給藥。還優(yōu)選每周一次肌肉注射IFN-p 100 mcg (約27 MIU)。每天的劑量也可以分成幾次使用，或者采用能維持預(yù)想效果的緩釋形式。第二 次或之后給患者使用的劑量，和首次或之前使用的劑量，可以相同、更少或更多。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的一個實施方式，IFN-(3可以和另一種可用于治療MS 的藥物(MS藥物)聯(lián)合使用進(jìn)行治療。這些藥物可以和重組IFN-[5同時使用、分 別使用或序貫使用。例如，目前用于MS的藥物(MS藥物)可以是調(diào)解治療，即調(diào) 解MS的病程，調(diào)解或抑制免疫系統(tǒng)。因此，包含在本發(fā)明內(nèi)容中的MS藥物包括醋 酸格拉默(Glatiramer acetate GA， Copaxone , Amgen)和FDA批準(zhǔn)的用于惡化 型MS的免疫抑制藥物米托蒽醌(Novantrone^ Amgen)。另外，根據(jù)本發(fā)明，正在 研發(fā)的治療MS的藥物也可以使用，諸如鞘氨醇-1-磷酸(Sl P)受體拮抗劑、經(jīng)改 造的多肽配體、免疫抑制劑、腺苷脫氨酶抑制劑、IV免疫球蛋白G、 T細(xì)胞表面標(biāo) 志的單克隆抗體、TH2刺激細(xì)胞因子(TH2 promoting cytokines)、抑制TH1刺 激細(xì)胞因子(TH1 promoting cytokines)表達(dá)的化合物、解痙劑、谷氨酸AMPA 受體拮抗劑、VCAM-1表達(dá)抑制劑或其配體拮抗劑、抗巨噬細(xì)胞移動抑制因子、組 織蛋白酶S抑制劑和mT0R抑制劑。因此，本發(fā)明含義范圍內(nèi)的MS藥物包括-解痙劑，包括巴氯芬(baclofen)、安定(diaz印am)、吡拉西坦(piracetam) 和丹曲洛林(dantrolene)。例如，解痙劑可以在以下劑量范圍內(nèi)給人類使用巴 氯芬可用到100 rag po，安定可用到20 mg po，吡拉西坦可用到24 mg po，丹曲 洛林可用到100 mg po，拉莫三嗪(lamotrigine) 口服可用到100 mg/天，利魯唑(ril腦le)可用至lj 100 mg po，替扎尼定 (tizanidine)可用到12 mg po，氯 壓定(clonidine)可用到0.1 mg po, (3-受體阻滯藥(如心得安propanolol)可 用至U 160 mg po，賽庚捉(cyproheptadine)可用至ij 8 mg po，奧芬另卩君(orphenadrine) 可用到100 mg po和大麻素類(如屈大麻酚dronabinol)可用到5 mg po。-腺苷脫氨酶抑制劑，如克拉屈濱(cladribine)。例如ADA抑制劑諸如克拉 屈濱對人使用的范圍可達(dá)0.07 rag/kg/天。-經(jīng)改造的多肽配體，諸如格拉默(glatiramer)，如醋酸鹽形式的格拉默。 格拉默可以給人類使用的范圍可以達(dá)到20mg sc，或可以達(dá)到50mg po。-谷氨酸AMPA受體拮抗劑，舉例來說2， 3-二羥基-6-硝基-7-胺磺?；郊?法) 喹喔啉、〔1,2, 3, 4,-四氫-7-嗎啉基-2, 3-二氧代-6-(三氟甲基)喹喔啉-l-基] 甲基磷酸、1- (4-氨苯基)-4-甲基-7, 8-亞甲基-二氧-5H-2， 3-苯并二氮，或 (-)l-(4-氨苯基)-4-甲基-7，8-亞甲基-二氧-4， 5-二氫-3-甲基氨基甲酰-2, 3_苯 并二氮。-組織蛋白S抑制劑。組織蛋白S抑制劑例如W0 03/20721公開的化合物，可 以給人類使用的范圍為0. 1-100 mg/kg/天。—免疫球蛋白G (例如以下文獻(xiàn)Neurology, 1998， May 50 (5): 1273-81公 開的)。例如，免疫球蛋白G可以給人類使用的范圍可以達(dá)到400 mg/kg IV。-各種T細(xì)胞表面標(biāo)志的單克隆抗體，例如那他珠單抗 (natalizumab) (Antegren , Tysabri )或阿倉單抗(alemtuzumab)。例女口， T細(xì)胞表面標(biāo)志的單克隆抗體可以給人類使用的劑量在以下范圍那他珠單抗靜注可 達(dá)3mg/kg，阿侖單抗可達(dá)可達(dá)30 mg sc或IV。—TH2刺激細(xì)胞因子，例如IL-4、 IL-10或抑制TH1刺激細(xì)胞因子如磷酸二酯 酶抑制劑如己酮可可堿(pentoxifylline)、拉莫三嗪、利魯唑、替扎尼定、氯壓 定、P-受體阻滯藥、塞庚啶(cyproh印tadine)、奧芬那君或大麻素類的表達(dá)的 化合物。TH2刺激細(xì)胞因子可以給人類使用的劑量在以下范圍，例如IL-4可達(dá) 311g/kg sc， IL-10可達(dá)20p. g/kg sc。抑制TH1刺激細(xì)胞因子表達(dá)的化合物如磷 酸二酯酶抑制劑比如己酮可可堿(pentoxifylline)可以給人類使用的劑量范圍可 達(dá)4 mg po。-VC認(rèn)-1表達(dá)抑制劑或其配體拮抗劑，比如a4 I整聯(lián)蛋白VLA-4拮抗劑 和/或a -4-(3-7整聯(lián)蛋白如那他珠單抗(ANTEGREN)。-SlP-受體拮抗劑，比如EP627406A1公開的(如其中的式I化合物)，20EP0778263A1公開的(如其中的式III化合物)，W002/18395公開的(如其中 的式IVa或IVb化合物〉，W002/076995公開的(如其中的式III化合物)(如 其中的式V化合物)，JP2002316985公開的(如其中的式VIII化合物)， W003/2914公開的(如其中的式IX化合物)S1P受體拮抗劑。上述化合物的適宜劑量和給藥途徑很容易從上述文獻(xiàn)中得到?！猰Tor抑制劑。例如，mTor inhibitors抑制劑如雷帕霉素(rapamycin) 或其衍生物如40-0-(2-羥乙基)-雷帕霉素可以給人類使用的范圍為0.1-25 mg/kg/天。-抗巨噬細(xì)胞移動抑制因子(Anti-MIF)。—抗炎藥物，比如US-5540938公開的抗炎化合物如氨吡啶(Fa即ridine); W0 01/45698所述的抗炎化合物如辛伐他汀(Simvastatin) ; W0 9967230所 述的抗炎化合物如CDP323; WO-2004043965所述的抗炎化合物如MLN3897; W0 03070711所述的抗炎化合物；W0 01/47920所述的抗炎化合物如；W0 03/068230 所述的抗炎化合物如吡非尼酮(Deskar Pirfenidone) ; W0 9848802所述的 抗炎化合物如Xaliprodene; W0 0228866所述的抗炎化合物如Tensirolimus; W0 99/55678所述的抗炎化合物如Laquinimod; EP-727, 406所述的抗炎化合 物；W0 2004/028251和WO 2004/028251所述的抗炎化合物如Fingolimod; W0-02080897所述的抗炎化合物如Teriflunomide。具有基本技術(shù)的內(nèi)科醫(yī)生、臨床醫(yī)生或獸醫(yī)，根據(jù)減輕、對抗或者阻止病 程的需要，很容易確定有效量的單一活性成分的用量?；钚猿煞值臐舛犬a(chǎn)生藥 效而沒有副作用的最佳范圍，需要基于活性成分達(dá)到靶位點的動力學(xué)的方案。至此本發(fā)明已經(jīng)得到全面描述，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解，不需要過度 實驗，在很寬的等效參數(shù)、濃度和條件范圍內(nèi)可以實施本發(fā)明，而不會偏離本發(fā)明 的精神和范圍。雖然結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進(jìn)行了描述，然而可以理解還可以有進(jìn)一步的 改進(jìn)?？傊?，本發(fā)明旨在涵蓋根據(jù)本發(fā)明的原理作出的任何變化、應(yīng)用或修改，包 括超出本發(fā)明公開范圍，但屬于本技術(shù)領(lǐng)域已知或慣例的和本發(fā)明相關(guān)的內(nèi)容或者 可能適用前述的實質(zhì)性特征的內(nèi)容，都認(rèn)為落入后附權(quán)利要求的范圍。本文所引用的全部參考文獻(xiàn)，包括期刊文章或摘要，在美國或其他國家公開或 未公開的專利申請，授權(quán)的美國或其他國家專利或其它參考文獻(xiàn)，包括所引用的文 獻(xiàn)中出現(xiàn)的所有數(shù)據(jù)、表格、圖片和文字全部并入本文作為參考。另外，本文所引用的全部參考文獻(xiàn)全部內(nèi)容并入本文作為參考。對己知方法步驟、常規(guī)方法步驟、已知方法或常規(guī)方法的引用，不是以任何方式承認(rèn)相關(guān)技術(shù)已經(jīng)公開、教導(dǎo)或提示本發(fā)明的任何方面、描述或?qū)嵤┓绞?。前面?b>具體實施方式
的描述充分揭示了本發(fā)明的一般本質(zhì)，他人能夠應(yīng)用本技術(shù)領(lǐng)域的知識(包括本文所引用的參考文獻(xiàn)的內(nèi)容)，不需要大量實驗，很容易地 對這些具體實施方式
進(jìn)行改動和/或修改，而不會偏離本發(fā)明的整體思想。因此，認(rèn) 為這些改動和/或修改基于本文的指引，從而包含在所公開的具體實時方式等效范圍 的內(nèi)容?？梢岳斫?，本文所用的措辭和術(shù)語，都是為了描述而不是限制本發(fā)明，因 此，本說明書的術(shù)語或措辭，技術(shù)人員都根據(jù)本文的教育和指導(dǎo)，結(jié)合本技術(shù)領(lǐng)域 普通技術(shù)人員的知識來理解。實施例1:采用光學(xué)相干斷層掃描儀(0CT)評價皮下注射干擾素-[3-la對視神經(jīng)炎軸突 存活的影響目的采用光學(xué)相干斷層掃描儀(OCT)評價皮下注射干擾素-卩-la(Rebif) 對脫髓鞘視神經(jīng)炎并多發(fā)性硬化癥(MS)軸突損傷/存活的影響。此處提供一個 研究案例。方法患者進(jìn)行常規(guī)神經(jīng)-眼科檢査，包括視覺靈敏度、瞳孔傳入缺陷、 眼內(nèi)壓和顏色視功能檢查。MRI評價腦和脊髓的病灶負(fù)荷。為了分析的目的， 每只眼睛分成12個區(qū)域，OCT檢查在基線、第3、 6、 9、和12個月時進(jìn)行。結(jié)果 一位右眼單側(cè)患有ON的35歲白種男性患者，根據(jù)視神經(jīng)炎治療試 驗方案(Optic Neuritis Treatment Trial protocol)，靜脈使用大劑量甲 基強的松龍治療?；颊邿o癥狀4年余，而后顯示左眼0N， MRI顯示大面積大腦 病灶。OCT顯示右眼脂F(xiàn)L厚度明顯降低，和左眼脂F(xiàn)L輕度損傷。該患者被診 斷為緩解/復(fù)發(fā)MS，采用甲基強的松龍治療，之后給予Rebif 44mcg sc，每周 3次。視覺檢測有改善，小面積信號強度下降，顯示MRI病灶已被消除。序列 OCT分析表明持續(xù)的右眼軸突損傷但RNFL厚度在左眼的一個亞區(qū)有緩慢增加。 Rebif治療耐受良好，患者在最近24個月沒有復(fù)發(fā)，也沒有新的MRI病灶證據(jù)。結(jié)論OCT是一種可靠的非侵入性的軸突損傷/存活的定量測定方法。我們 對0N患者的初步觀察提示，即便健側(cè)沒有臨床癥狀，健康眼睛的RFNL厚度也 會隨著時間減小。從該病例得到的證據(jù)顯示，0N的亞臨床0CT變化可以被在早期使用IFN-卩-la的積極治療所阻止，并且有潛在的逆轉(zhuǎn)作用。早期診斷和使 用IFN-(3積極治療可以改善長期臨床結(jié)果。實施例2:高劑量、高頻次干擾素治療的體內(nèi)神經(jīng)保護(hù)作用系列光學(xué)相千斷層掃描術(shù)對多發(fā)性硬化癥和視神經(jīng)炎的研究目的光學(xué)相干斷層掃描儀(OCT)檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(RNFL)厚度。 本研究采用系列OCT對緩解/復(fù)發(fā)多發(fā)性硬化癥(RRMS)和視神經(jīng)炎(ON)進(jìn)行研 究，評價隨高劑量、高頻次皮下注射干擾素-卩-la (Rebif)所伴隨的軸突變化。方法本試驗為前瞻性的、開放性驗證試驗，入組患者(N二18)包括單側(cè)罹 患ON的RRMS患者，如果試驗開始時視神經(jīng)水腫或正在使用其它DMTs的患者 被排除在外。根據(jù)視神經(jīng)炎治療試驗方案(Optic Neuritis Treatment Trial protocol)，采用靜脈推注甲基強的松龍(MP)對患者進(jìn)行治療，隨后立即給 予Rebif 22 mcg每周三次并在2周內(nèi)調(diào)整成Rebif 44mcg每周三次。在基線、 第3、 6、 9和12個月用Stratus OCT測量每只眼睛12亞區(qū)域的RNFL厚度。 采用配對t-檢驗分別比較從基線到每個時間點患側(cè)和健側(cè)眼的變化。對每側(cè)眼 睛的MRI數(shù)據(jù)和0CT類型相關(guān)性進(jìn)行比較。對每側(cè)眼睛的反應(yīng)(比基線增加〉4。/。) 按區(qū)域和區(qū)域反應(yīng)數(shù)目進(jìn)行分析。結(jié)果我們對0N患者的初步觀察顯示，患者除了患側(cè)眼睛軸突迅速損傷， 甚至無臨床癥狀的健側(cè)眼睛可能也有亞臨床的軸突損傷。雖然臨床患側(cè)眼睛的 RNFL厚度在3個月時有5個區(qū)域明顯降低，訪問終點(到12個月)有6個區(qū) 域明顯降低，但是臨床健側(cè)眼睛在3個月和訪問終點都沒有顯著變化。結(jié)論我們的結(jié)果顯示使用MP和Rebif治療能維持檢測眼睛的RNFL厚 度，因此可以提供神經(jīng)保護(hù)作用。我們的數(shù)據(jù)表明使用OCT早期診斷ON和 MS，可以使早期積極治療得以實現(xiàn)，從而可以延緩、阻止和/或潛在地逆轉(zhuǎn)ON 亞臨床OCT改變，可以改善長期預(yù)后。
權(quán)利要求
1.一種治療視神經(jīng)炎患者的方法，包括序貫或同時給予免疫抑制化合物和干擾素-β蛋白，其中干擾素-β蛋白單周給藥劑量累積超過12MIU。
2. 干擾素-(3蛋白在制備治療視神經(jīng)炎患者的藥物中的應(yīng)用，包括序貫或 同時給予免疫抑制化合物和干擾素-P蛋白，其中干擾素-p蛋白的單周累積 劑量大于12 MIU。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1至2的任一權(quán)利要求的方法，其中單周累積劑量等于 或大于16 MIU，等于或大于20 MIU，等于或大于24 MIU，等于或大于28 MIU， 等于或大于32 MIU，等于或大于36 MIU，或者等于或大于40 MIU。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3的任一權(quán)利要求的方法，其中的視神經(jīng)炎是脫髓 鞘視神經(jīng)炎。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4的任一權(quán)利要求的方法，其中患者沒有臨床意義 上的多發(fā)性硬化癥。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5的任一權(quán)利要求的方法，其中患者根據(jù)MRI標(biāo)準(zhǔn) 不是發(fā)展成臨床意義上的多發(fā)性硬化癥的高危患者。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6的任一權(quán)利要求的方法，其中患者沒有3個或以 上，優(yōu)選沒有2個或以上的直徑大于3腿的白質(zhì)病灶。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7的任一權(quán)利要求的方法，其中患者沒有直徑大于 3mm的白質(zhì)病灶。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8的任一權(quán)利要求的方法，其中患者沒有腦室周的 或卵圓形的白質(zhì)病灶。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1至9的任一權(quán)利要求的方法，其中0N只在一側(cè)視神 經(jīng)有臨床表現(xiàn)。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1至10的任一權(quán)利要求的方法，其中0N沒有臨床表現(xiàn)。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1至11的任一權(quán)利要求的方法，其中0N是分離的臨床 癥狀。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1至12的任一權(quán)利要求的方法，其中在治療開始時患者 至少一側(cè)眼睛RNFL厚度的減少不超過30微米，優(yōu)選不超過25、 20、 15或 10微米。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1至13的任一權(quán)利要求的方法，其中患者至少一側(cè)眼睛RNFL厚度減少至少IO、 7. 5或5微米。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1至14的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-P是干擾 素-(3 la。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1至15的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-(3是干擾 素-(3 lb.
17. 根據(jù)權(quán)利要求1至16的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-p蛋白經(jīng) 皮下給藥。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1至17的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-(3蛋白經(jīng) 肌肉給藥。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1至18的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-P是經(jīng)修 飾的干擾素-(3。
20. 根據(jù)權(quán)利要求1至19的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-(3是長效 干擾素-(3。
21. 根據(jù)權(quán)利要求1至20的任一權(quán)利要求的方法，其中長效干擾素-P選 自聚乙二醇化的干擾素-p或干擾素-l3-Fc-融合蛋白。
22. 根據(jù)權(quán)利要求1至21的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-p的每次 皮下給藥劑量至少為44mcg。
23. 根據(jù)權(quán)利要求1至22的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-(3每周至 少給藥3次。
24. 根據(jù)權(quán)利要求1至23的任一權(quán)利要求的方法，其中干擾素-(5每次皮 下給藥為44mcg，每周3次。
25. 根據(jù)權(quán)利要求1至24的任一權(quán)利要求的方法，其中在免疫抑制化合物 治療結(jié)束后不超過28天的間隔內(nèi)，優(yōu)選不超過21天的間隔內(nèi)，干擾素-(3的每 次皮下給藥劑量調(diào)整為至少44mcg，每周3次。
26. 根據(jù)權(quán)利要求1至25的任一權(quán)利要求的方法，其中免疫抑制化合物是 類固醇化合物。
27. 根據(jù)權(quán)利要求1至26的任一權(quán)利要求的方法，其中類固醇化合物選自 甲基強的松龍、強的松或地塞米松或類固醇分泌劑如ACTH。
28. 根據(jù)權(quán)利要求1至27的任一權(quán)利要求的方法，其中類固醇化合物是甲 基強的松龍。
29. 根據(jù)權(quán)利要求1至28的任一權(quán)利要求的方法，其中給藥方式是序貫給藥。
30. 根據(jù)權(quán)利要求1至29的任一權(quán)利要求的方法，其中免疫抑制化合物先 于干擾素"f蛋白給藥。
31. 根據(jù)權(quán)利要求1至30的任一權(quán)利要求的方法，其中免疫抑制化合物至 少以兩個單身的劑量給予。
32. 根據(jù)權(quán)利要求1至31的任一權(quán)利要求的方法，其中免疫抑制化合物是 類固醇化合物。
33. 根據(jù)權(quán)利要求1至32的任一權(quán)利要求的方法，其中類固醇化合物根據(jù) 視神經(jīng)炎治療試驗方案給藥。
34. 根據(jù)權(quán)利要求1至33的任一權(quán)利要求的方法，其中還序貫或同時給予 另外一種MS化合物。
35. 根據(jù)權(quán)利要求1至34的任一權(quán)利要求的方法，其中另外一種MS化合 物選自鞘氨醇-l-磷酸(Sl P)受體拮抗劑、經(jīng)修飾的多肽配體、免疫抑制 劑、腺苷脫氨酶抑制劑、IV免疫球蛋白G、 T細(xì)胞表面標(biāo)志的單克隆抗體、 TH2刺激細(xì)胞因子、抑制TH1刺激細(xì)胞因子表達(dá)的化合物、解痙劑、谷氨 酸AMPA受體拮抗劑、VCAM-1表達(dá)抑制劑或其配體拮抗劑、抗巨噬細(xì)胞移 動抑制因子、組織蛋白酶S抑制劑和mT0R抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了治療脫髓鞘視神經(jīng)炎(DON)患者的方法，包括序貫或同時使用免疫抑制化合物諸如類固醇化合物和干擾素-β蛋白。早期積極使用IFN-β治療在這樣的治療方案中是有益的，例如干擾素-β蛋白每周用量累積劑量大于12MIU。根據(jù)本發(fā)明的方法，特別適合和有益于早期DON患者的治療。特別地，能從本發(fā)明的治療受益的早期DON患者可能處于亞臨床期。
文檔編號A61K31/56GK101282740SQ200680037201
公開日2008年10月8日 申請日期2006年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月1日
發(fā)明者R·塞戈特 申請人:阿雷斯貿(mào)易股份有限公司