專利名稱：不含凝血酶的生物粘合劑及其作為藥劑的應(yīng)用的制作方法
不^^凝血酶的生物粘^w;5L其作為藥劑的應(yīng)用
4^發(fā)明涉及一種基于纖維蛋白原的生物粘合劑，含有激活的因子VIL^
鈣離子源.
"生物*^劑"是指一種可以連接組織成分c^、骨、^^種器官)的 組分，同時(shí)使受損傷的組織止血，因此可以加強(qiáng)或完善因縫合形成的對(duì)這 些組織的連接，
血液凝結(jié)通過^fi^^的M步壤而實(shí)現(xiàn)，包括將血液中的各種酶原 和輔助因子原在蛋白酶的作用下轉(zhuǎn)化為激活狀態(tài).這一連續(xù)的B步驟，
或稱^j6l瀑布，通過導(dǎo)致ajfe酶原轉(zhuǎn)化為^iL酶的兩種凝血系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)， 即外源性^izit徑和內(nèi)源性fefiLit徑，
外源性凝iL^:徑包括存在于血液中的因子vn的介入.然而，后者需激
活(因子VIIa)以啟動(dòng)這種^ifiL科.因子VHa具有較低的酶活性，直到其與
組織損傷后斧故的褲脂特性的組織因子復(fù)合后活性才較高.如上復(fù)合的vna
在鉤離子參與的情況下，將因子X(FX)轉(zhuǎn)化為因子Xa(FXa).因子Xa接 著將妙酶原轉(zhuǎn)化為觸酶，妙酶可激活因子V(因子Va).觸酶還可 以激活因子雨(因子Yffla). M在鉀離子、組織因子和因子Va的情況下， a^SHt用于纖維蛋白原，將其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。在因子Yffla的參與下， 得以形成具有固態(tài)、可粘著的篩孔狀網(wǎng)絡(luò)的纖維蛋白凝塊，所述纖維蛋白 網(wǎng)給故當(dāng)作支架，在固化的痠痕組織的形成ita中被^f、緩慢地吸收。 至少在瘙痕組織形成的過程中，這種交聯(lián)的纖維蛋白不可溶解，也不會(huì)為 纖絲所攻擊.
內(nèi)源性^afiLit徑也涉及因子Vna(兩a).該途徑包括一個(gè)^^^，通 過因子Xn(FXn)導(dǎo)致了^iL酶的激活，因子Xn激活因子XI(因子XIa-FXIa)， 因子XIa ^"在磷脂組織閎子(FT)的情況下激活因子K(因子Ka-FKa). 周子Ka^^在因子Vffla、組織因子和鉀離子的情況下，參與因子X向因子 Xa的激活，這一過程然后導(dǎo)致^ifiL酶原向凝血酶的轉(zhuǎn)化.應(yīng)當(dāng)注意，因
子Xa或^iL酶的存在使得因子vn可以M活(因子vna),
由此可見，在內(nèi)源性^jM/L制中，因子XHa具有突出的作用，導(dǎo)致了
血凝塊的形成.其被應(yīng)用于治療血支病A，該病具有一種循環(huán)抑制物，即 一種限制或lfijt因子雨(FVffl)激活的特異性抗體.因子VEa具有這樣的優(yōu)點(diǎn) 在存在組織損傷導(dǎo)致出血后M的組織因子的情況下，即使缺乏因子Vffl和 K，它也可以在局部發(fā)揮作用.
然而，^前述的機(jī)理，在出血性的組織損傷是由外傷、創(chuàng)傷、外科 手術(shù)導(dǎo)致的情況下，特別是為了通過形成纖維蛋白血凝塊以阻止出血，需 要利用縫合進(jìn)行組織修"復(fù).可以證明，特別是在大型外科手術(shù)中有必要增 強(qiáng)對(duì)損傷組織的jhjk.
例如，可^到專利申請(qǐng)W0 93/06855,其中描述了一種不含有^jfiL酶和 凝血因子的jtjfiL組合物，其包括有引入至可生物相容的栽體中的因子VEa， 所1^&*作為一個(gè)^^應(yīng)用于出血性損傷，以^t^強(qiáng)jhjfii和纖維蛋白血 凝塊的形成.
然而，除了受損傷組織的jtifc外，無論是否縫合，都應(yīng)該加速、加強(qiáng) 甚至完善涉^織連接處的組織愈合的自然#，以避免損傷惡化^^速 愈合過程.通過局部應(yīng)用生物粘合劑，很有可能實(shí)現(xiàn)上述目的。
生物粘合劑由多種使血液凝結(jié)的循環(huán)因子(特別是纖維蛋白原血漿蛋
白和因子X m)的混^組成.其進(jìn)一步需要提供外源性^ifiL酶---種將
纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為可溶解的纖維蛋白所必需的酶，所述可溶解的纖維蛋白
通過因子xni產(chǎn)生交聯(lián).還需要其它的組分來實(shí)現(xiàn)纖維蛋白原的凝結(jié)，特
別濕J轉(zhuǎn)離子，例如氯化鈣，可能還需#肽酶，因?yàn)槠渚哂锌估w溶特性. 這類生物粘合劑在多個(gè)出版物和專利文獻(xiàn)中都有詳細(xì)描述，例如
EP 0305243， FR 2448900和FR 2448901，還描述了它們?cè)诙喾N臨床情況中 的應(yīng)用("Fibrinkleber"， Proceedings of the Heidelberg Congress, 1976， Ed. Schattauer),
在等待通過生物體細(xì)胞的自然再生而i^f固化的過程中，為了加強(qiáng)其 M性能，生物粘^W也可以用于將不同特性的生物材料傲原、藻酸鹽、 聚乳酌與生物組織ii行粘結(jié)，例如Ait^J爽，
商業(yè)上可應(yīng)用的生物粘合劑實(shí)踐中表現(xiàn)為至少包括上述四種組分的干
粉劑的藥盒，其中可以被觸酶凝結(jié)的蛋白(即纖維蛋白原和因子xm)應(yīng) 該與凝血酶隔離，因?yàn)樗鼈冊(cè)谝后w中重溶并';a^后會(huì)發(fā)生結(jié)合，這一結(jié)合
會(huì)在非常短(大約為幾秒鐘)的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生纖維蛋白凝固.這也是生物*^ 劑藥盒至少需要提供兩種組分的原因，所述兩種組分包括 一方面為基于
纖維蛋白原和因子xm的第一份額，另一方面為基于^JL酶的另一^^額， 通過將上述兩個(gè)份額重溶并混合(例如通過注射器和針頭)，然后應(yīng)用于將 j^^合的組織上，所述生物轱^w可實(shí)現(xiàn)其上述功能，
然而，上述重鉢';s^相對(duì)復(fù)雜，而且可能會(huì)導(dǎo)致出錯(cuò)，特別是在急 診情況時(shí)；考慮到有其它組分參與的情況下， 一旦纖維蛋白原與^ifc酶在 液體環(huán)境中接觸，幾乎在同時(shí)就^成纖維蛋白，因此只能在應(yīng)用于傷口 或手術(shù)區(qū)域前，恰好完成纖維蛋白原和凝血酶的混合。另外，當(dāng)只使用一 個(gè)裝置調(diào)配生物粘合劑時(shí)，具有纖維蛋白在該裝置中凝結(jié)的實(shí)際風(fēng)險(xiǎn)，這 將導(dǎo)ft調(diào)配和應(yīng)用系統(tǒng)的阻塞'
EP 0850650 Bl專利特別描述了一種預(yù)先激活的^ia分^!^劑，包含纖
維蛋白原和至少一種已激活的B因子，所述凝血因子的激活不依賴于鈣
離子，所述凝血因子選自因子XHa、因子XIa、因子VIIa和^JIb^t酶(ka 11 icr 6ine)中選擇；它可以通過簡(jiǎn)單加入鉤離子，經(jīng)形成纖維蛋白而iLi凝結(jié). 為了濃縮纖維蛋白原而又能保留在鉀離子的作用下實(shí)現(xiàn)凝血所必需的已激 活的^j6l因子，該^^W可以通過分級(jí)分離或JMH來自單一捐血者的已激
活的血漿而獲得，這種i^W也具有上i^ua分i^劑的缺陷以M^
的幾乎同時(shí)即形成纖維蛋白凝塊的缺陷.
W0 02/055102 Al專利申請(qǐng)描述了包括因子V!Ia和纖維蛋白原的組合 物，可用于限制或阻止因出血性疾病或內(nèi)外傷導(dǎo)致的出血.這些組^被 用作向患者靜脈注射，它們?cè)谟锈}離子和所有:^l因子存在的出血處或損 傷處起作用.與應(yīng)用這一組*相關(guān)的缺陷在于，纖維蛋白原會(huì)與巳經(jīng)擴(kuò) ^^!j出ifiL^損傷部位以外(例如通itiL'^的FT相互作用，且可食tfcifc液中 天然存在的鈣離子作用下，同存在于血液中的各種凝血因子-"^，引fek 液不適當(dāng)?shù)啬Y(jié)，這會(huì)導(dǎo)致出血區(qū)域外的^jfiL，有it^成的風(fēng)險(xiǎn).
前面提到的這些缺陷因此會(huì)引起問題，特別是在外^"f術(shù)的術(shù)野之內(nèi) 和/或急診情況下，操作手法的迅捷經(jīng)常必不可少.可觀察到，通it^組織 ^前形成纖維蛋白團(tuán)塊，這些缺陷可以導(dǎo)致組織的不均勻連接，由于凝 血塊的收縮，這種不均勻連^^^f加重，最^致痠痕不規(guī)則，促^S: 痕卑縮(癡^^L分離)和術(shù)后再次出血，
為了彌補(bǔ)上述缺陷，申諱v^尋求開發(fā)一種可符合雙重目標(biāo)的生物*^ 劑.第一目標(biāo)為，提供一種不含有^jfiL酶、包括血漿凝血因子的生物粘合
劑，在應(yīng)用于生物組織前，沒有形成纖維蛋白的危險(xiǎn)，第二目標(biāo)為滿;t使
這種生物粘^W可供實(shí)用的需要 一方面加快損傷組織的jhjfe能力，另一
方面加'bya織的連接以伐iii^合，
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的、不含^iL酶的、基于纖維蛋白原的、單一復(fù) *的、治療用途的液體生物^^W，包括因子vna和鉀離子源，
申請(qǐng)AiL現(xiàn)制造一種可實(shí)用的新藥劑(單一復(fù)合物的生物*^劑)^|_可 能的 一種jhifiL輔助物、 一種lt^、 一種愈合輔助物或通過形成^起作 用的封閉劑；所述藥劑用于生物組織、傷口或生物材料，同時(shí)包括上述目 的血漿因子和鉀離子源。
"單一復(fù)合物"，意味著將組成粘合劑的三種目的組分聯(lián)合應(yīng)用，從 而形成一種單一的液體復(fù)合物，而不同于51*技術(shù)中的^分*!^劑，
因此，這三種組分需在液態(tài)時(shí)^&j^容，即，它們結(jié)合而形成一個(gè)單 一復(fù)合物系統(tǒng)，不會(huì)在幾乎同時(shí)即導(dǎo)致纖維蛋白形成.這種單一復(fù)合物液 體*^ 〗是穩(wěn)定的，因?yàn)檫@些組分可以在液態(tài)介質(zhì)中^fc共存，以使介質(zhì) 可以有功能地應(yīng)用，而且甚至至少在應(yīng)用前24小時(shí)沒有提前觸發(fā):^ii^ 的危險(xiǎn).粘合劑的這種穩(wěn)定性經(jīng)證實(shí)，可以達(dá)到在371C下孵育24小時(shí)， 無纖維蛋白形成的程度。
本發(fā)明的生物*^'〗一《9^用于傷口或淤血青紫的組織時(shí)，可完成其 組織修復(fù)功能，因?yàn)橥ㄟ^與生物粘合劑在傷口或於血青紫組織上的接觸， 在原位形成了^jfaJ1,
事實(shí)上，這種原位^iL酶形成由因子VIIa提供，因子VHa因此與所有血 4Ua分相接觸，導(dǎo)致了外源性和內(nèi)源性^i^i^徑的觸發(fā)和遞進(jìn)，如前文所 述，其生物學(xué)活性依賴于同內(nèi)源性的磷脂特性組織因子的相互作用.激活
的因子vnia織因子復(fù)合物M在鈣離子的情況下，將存在于血漿中的因子
X轉(zhuǎn)化為激活的因子X，激活的因子X將^jfe酶原轉(zhuǎn)化為氣ifiL酶---種
負(fù)責(zé)在纖維蛋白原存在時(shí)，通過產(chǎn)生纖維蛋白以形^jk^塊的酶.
然后發(fā)生纖維蛋白的形成，繼而所得的生物粘合劑的粘性得到增強(qiáng)， 由于那時(shí)纖維蛋白直接形成于傷口或?qū)t手術(shù)修復(fù)的組織，在那里鱗脂細(xì)
雖然纖維蛋白原和鈣離子已^液中天然存在，本發(fā)明中的生物^
劑中，由于有它們的作用，可能會(huì)加強(qiáng)并更進(jìn)一步加iiiE織連接和jiufiL的
逸艮，甚至與現(xiàn)有技術(shù)中的粘合劑比也是如此，這是本^fe^劑的決定性優(yōu)點(diǎn).
本發(fā)明的生物粘合劑有許多其它優(yōu)點(diǎn).其可用'tfc^L了在處理和制備 現(xiàn)有技術(shù)中的生物粘合劑中的缺陷，特別是在急診情況下，其可以提高組 織粘性連接的能力，防止享縮，不會(huì)在癡痕形成中繼發(fā)出血.典型地，連 接it^可在一^之內(nèi)例如在30秒之內(nèi)有效完成，
例如，本發(fā)明的*^劑避免了可見于傷口處的纖維蛋白"結(jié)塊"或成 團(tuán)，這可歸因于*^劑不均勻附著，可能是由于在*^前已形成的纖維蛋 白所致；與例如應(yīng)用^ia分生物粘^W漆于一方面為纖維蛋白原和因子X m的混合物，另一方面為鈣離子:^k酶';^^)在相同期間內(nèi)獲得的^邊 界相比，其形成的癧痕為一條清晰的線，^ift分^^W^察到有上^: 果.
它便于制備而且具有更高的時(shí)間穩(wěn)定性，目前為止，在37tc下孵育24 小時(shí)，^j9^到纖維蛋白形成.例如，它因此在液態(tài)時(shí)室溫下至少24小時(shí) 內(nèi)是穩(wěn)定的，特別地，為48小時(shí)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，^現(xiàn)有技術(shù)中的纖維蛋白原和FVIIa (優(yōu)選為血漿 來源的)均適^^ii^^W，然而前狄它們與隨4l^得的液體^^^J中 的鈣離子是相容的，即它們的接觸不會(huì)導(dǎo)致纖維蛋白原凝結(jié)為纖維蛋白， 特別是在應(yīng)用前的24小時(shí)之內(nèi).事實(shí)上，1^少局部^jfiL酶(Fna)外，纖 維蛋白原和FVHa這兩種活'fetla分因此需缺少其它菱血因子，以免M在銬 離子的情況下觸發(fā)內(nèi)源性或外源性^jfiL瀑布。這些需缺少的^jfiL因子為因
子n(Fn)和Fx，伏^選為:^jfiai原因子(因子n， vn， k和x)。
例如,纖維蛋白原中，f n和fx的最大可接受含量均為大約o. 1 iu/g纖 維蛋白原。
更優(yōu)i^， ^#〗中的纖維蛋白原和兩&不是從預(yù)先激活的血漿中提 取的。
纖維蛋白原(優(yōu)選為病毒滅活的)可以利用現(xiàn)有技術(shù)中提出的靴方法
分離出來?？梢允褂胑p 0305243中描述的方法，或者是申請(qǐng)人在fr 0506640
專利申請(qǐng)中提出的方法，據(jù)此可獲得纖維蛋白原的i MI物.也可以應(yīng)用轉(zhuǎn) 基罔的纖維蛋白原.
因子x m (優(yōu)選為病毒滅活的)可以利用現(xiàn)有技術(shù)中提出的^r方法分
離出來，而且優(yōu)^fc，它可以形成可以伴隨纖維蛋白原-^l分級(jí)分離血 漿的過程中故分離的蛋白，在這種情況下，>{^^應(yīng)用fr 0506640專利申請(qǐng)
中描述的方法。也可以應(yīng)用轉(zhuǎn)基因的因子xm.
因子VEa(優(yōu)選為病毒滅活的)特別是其濃縮物的制4Ht是已知的.例如 可提到EP 346 241專利.也可以應(yīng)用重組的因子VHa(Novo公司生產(chǎn))或者 轉(zhuǎn)基因的因子VHa.
然而這些活性成分也需要符合一定的純化指標(biāo)，如前文所述，所述指 標(biāo)與某些的其它血漿因子的存在相關(guān).
優(yōu)選地，本發(fā)明的粘合劑還包括因子xm，外源性提供的因子xm可
M纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)的交聯(lián)，并JL^而提高其凝結(jié)力和愈合能力.
因子x m (優(yōu)選為病毒滅活的)特別是其濃縮物可以利用現(xiàn)有技術(shù)中提 出的^r方法分離出來，而且優(yōu)i^fc，它可以形成可以伴隨纖維蛋白原一 起在分級(jí)分離血漿的過程中被分離的蛋白.在這種情況下，優(yōu)選應(yīng)用
FR 0506640專利申請(qǐng)中描述的方法.也可以應(yīng)用轉(zhuǎn)基因的因子XIE.
通過制造兩種可用的活性成分纖維蛋白原和FVIIa，以及鈣離子，可以 以工業(yè)^t產(chǎn)本發(fā)明的^!^^J
>ffc^fc， ^M^W僅由纖維蛋白原、FVEa以及鈣離子的';S^城，
這種由上iL^種組分糸他'tti4ia成的粘合劑，具有只需要兩種生物活性組 分的優(yōu)點(diǎn)，iiii過僅需最小有效量的活性組分，^*地降低了工業(yè)*^制 備這種3^W的成本，
所述^劑的組成成分需達(dá)到有效劑量，以使該*^劑可以達(dá)到所期 望的治療目的.
然而，申請(qǐng)AJC察到，當(dāng)兩種活性組^p鉤離子的含量經(jīng)特別挑選時(shí)，
方可達(dá)到最佳的上述所期望的效果.
這樣，該生物粘合劑纖維蛋白原的唾^:優(yōu)^為60-120mg/mL,更優(yōu)選 為80-100mg/mL,這樣的纖維蛋白原含量至少提#-"種有效的*^連接， 例如損傷組織的*1^連接，這可以通過*^連接的撕裂強(qiáng)度清楚表明，其 至少能達(dá)到與5^技術(shù)中的^分*劑同樣的撕裂強(qiáng)度，例如大于或等 于125 g/cm2,
特別地，它包括50-500 IU/mL，更優(yōu)選為70-300 IU/mL，特別地為 80-120 IU/mL的因子VIIa;以及4-30 ji咖l/mL，更優(yōu)為8-20 n咖l/mL的鉀 離子源，
特別地，因子Xm的存在量為30 IU/mL至700IU/mL，更優(yōu)選為100 IU/mL至400IU/mL,
該濃度和活性以每毫升的最終液體生物粘^w溶液為單位。該溶液特 別地可通過凍干組分的重溶獲得.如上所述，這些血漿因子優(yōu)逸地以上述 濃度存在，以便提供本發(fā)明的生物粘合劑所期望的功能。
鉤離子源表現(xiàn)為適合臨床應(yīng)用的水溶拴組分；優(yōu)選地，這些組分為無 機(jī)鹽，例如氯化鈣(CaCl2)或葡萄糖酸鈣。
如上所述，本發(fā)明的生物粘合劑準(zhǔn)^^在液態(tài)下應(yīng)用，且包括所有組分 的液態(tài)均質(zhì)'^物.它也可以表現(xiàn)為冷凍形式，在這種狀態(tài)下，其適于長 期儲(chǔ)存至少2年，而無任何纖維蛋白形成的危險(xiǎn)，這一點(diǎn)可以在解凍后觀 察到，簡(jiǎn)單將其置于室溫下即已足以使該^W可供應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及一種如前文所限定的，不含凝血酶、基于纖維蛋白原的、 供治療應(yīng)用的生物*!^劑，包括因子VIIa和鈣離子源，呈現(xiàn)為凍干形式以 適于長期M.其可以通過應(yīng)用已知的將液態(tài)轱合劑凍干的技術(shù)^^得. 應(yīng)用上述形式的*^劑具有決定性的優(yōu)點(diǎn)，只類《#^有兩種活性組分的凍 干產(chǎn)品和鉤離子源在生物相容的溶劑或水性介質(zhì)中簡(jiǎn)單地重溶，即可獲得 穩(wěn)定的液體*^劑，這一制備工作可在預(yù)計(jì)應(yīng)用時(shí)提前完成.另外，這一
凍干粘合劑可以非常容易地##在室溫下至少2年，而沒有^r纖維蛋白
形成的危險(xiǎn)，這一點(diǎn)可在溶解后觀察到，其也可以^Mr^ifc直接運(yùn)送到病 人需要應(yīng)用這種^W的地點(diǎn),
本發(fā)明還涉及一種用于制備^l本發(fā)明的生物粘合劑的藥盒，包括包 ^置，其包括"H^額凍干的纖維蛋白原血漿因子， 一份額凍干的FVEa血 漿因子，"H^額粉狀的鉤離子源，以;SUW4溶劑。
特別地，這種藥盒包括三種不同的獨(dú)立的干粉狀份額，每一份額特定 地包括一種本發(fā)明^劑的組成成分，事實(shí)上，itA—種中間產(chǎn)品，然后 這些份額可以容易地合并、溶解在生物相容的溶劑或水性介質(zhì)例如注射用 純水(PPI)中，以獲得本發(fā)明的穩(wěn)定的液體生物粘合劑，如果需要，濃縮后 其可以被隨即冷凍，制造這樣一種可應(yīng)用的藥盒的優(yōu)點(diǎn)是，il^種不同組 分的^^額可以長期M在室溫下至少2年，在重溶時(shí)不^^觀察到纖維蛋白 的形成，通過簡(jiǎn)單的溶解就可以獲得穩(wěn)定的液體生物粘合劑.
事實(shí)上，該包錄置形成了將齡劑的組分特別儲(chǔ)存和制備的裝置， 該粘合劑可在應(yīng)用前進(jìn)行調(diào)配.其進(jìn)一步優(yōu)i^在至少三種不同的粘^W 組分中，至少包括一個(gè)容器，更優(yōu)^W于^"組分至少包括一個(gè)容器。 每一容器用*^納一種組分，然后其可以溶解在水性溶劑中.該容器可以
是^t玻璃材料或生物相容的聚合物制成的小瓶。
優(yōu)選地，該包^t置可以有利地為包含至少三種組分的單一容器，這
樣的包裝的優(yōu)點(diǎn)是，通過將4r^組分簡(jiǎn)單溶解即可直^^供可應(yīng)用的液體
有利地，該藥盒還包括一種調(diào)配液體粘合劑的裝置， 一旦液體粘^W 已通過用水性溶劑溶解上述份額完成制備，即可進(jìn)行調(diào)配.這樣的裝置例 如表現(xiàn)為一種合ii^量的注射器，該容量取決于擬紐的*^#〗的劑量， 所述注射器包括一個(gè)細(xì)針頭，典型地具有小于2咖的直徑，特別為小于l咖，
或者包括其它常規(guī)導(dǎo)管.
優(yōu)選地，上述藥盒包括一個(gè)由所述的凍干血漿因子份額混合而成的雙 組分份額，以及一^N^狀的鈣離子源份額.這種藥盒因此一方面包括一個(gè) 份額的本發(fā)明的纖維蛋白原與因子vna血漿因子混合物，另一方面包括一 ^H^額的粉狀鉤離子源，也可以呈現(xiàn)為凍干產(chǎn)品的形式，在應(yīng)用前，簡(jiǎn)單
將它們^f在4，與水溶媒例如PPI水混合在""^lt^夠了，或者，該 藥盒可以包括一份額的血漿因子凍干混合物，以及另一方面， 一個(gè)份額的 鈣離子源水溶液.
優(yōu)i^， 4^發(fā)明的藥盒的特征在于，^"H^額的凍干的纖維蛋白原或F
vna血漿因子，或者由所述的凍干血漿因子份額';^^組成的^ia^^額， 包括可藥用的凍干穩(wěn)定劑.穩(wěn)定劑同樣可以應(yīng)用于凍干的生物^^劑。
實(shí)際上，不同的血漿因子凍干產(chǎn)品可通過使用常^t術(shù)將血漿因子或 每一種這些因子的液體濃縮物或溶液凍干而獲得，為了該目的，優(yōu)i^fc包
括如申請(qǐng)人的FR 04 02001專利申請(qǐng)所描述的凍干穩(wěn)定劑.在這種情況下， 該穩(wěn)定劑優(yōu)選地呈現(xiàn)為精氨酸、至少一種疏^^酸和檸檬t鈉組成的
';^物，其可以進(jìn)一步加入甘氨酸和/或賴氨酸。優(yōu)選地，每升蛋白濃縮物
中M添加劑的濃度如下
精氨酸25 - 50 g/L，優(yōu)選35- 45 g/L (參照美國專利US 5399670); 檸檬酸三鈉0.5至大約12 g/L;
亮氨酸、異亮氨酸或它們的混合物5-15 g/L,優(yōu)選9-llg/L;以及 甘氨酸和/或賴氨酸各為1-5 g/L，優(yōu)選各為1. 5-2, 5 g/L. 如果需要，穩(wěn)定劑也可以包括;M5域已知的穩(wěn)定輔助劑，
因此，本發(fā)明還涉;MMI本發(fā)明所述的藥盒用于制備液態(tài)或可能為冷
凍態(tài)的生物M劑的應(yīng)用通過將所述藥盒中的三個(gè)份額溶解于生物相容
的水溶液中，如果需要隨4lie行冷凍'
本發(fā)明還涉及前文所述的生物粘合劑用作藥劑的應(yīng)用。在*劑以冷 凍形式^f^藏的情況下，在應(yīng)用前解凍即已足夠。在其為凍干態(tài)粘合劑的情 況下，重溶于生物相容的水溶液中佳:其可應(yīng)用于實(shí)現(xiàn)所期望的效果.
本發(fā)明的生物粘合劑因此被用于制備一種用于jhA和/或治愈受損的 生物組織的藥劑，所述生物組織例如皮膚或者^可手^#作的器官淋、 肝、肺、腸等)，其如前文所述可表現(xiàn)為淤血青紫的組織或出血的傷口，在 ^j6l瀑布所需的所有因子存在的情況下，其出血可能甚至?xí)浅５?該粘 合劑可以在有血漿存在的情況下，用于制P種治療受損傷組織的藥劑， 例如用于連接這些組織，所述組織選自軟骨、膠原、骨和骨粉.
此外，有血漿存在時(shí)，本發(fā)明的生物粘合劑還可以用于制P種用于
融合生物材料的藥劑，所述生物材料可選自聚乳酸或海藻酸鹽.因此，血 漿的參與在某些情形下是必要的，而且最好是可相容的或自體的血漿，這 些情形需要提供外源性的血漿因子以啟動(dòng)B瀑布。這種ll供特別^l可以 在口腔科或8Mt常規(guī)手術(shù)的術(shù)野中完成.
該生物組織也可以來源于培養(yǎng)或分化的干細(xì)胞，
雖然本發(fā)明的粘合劑是一種藥劑，特別是一種局部應(yīng)用的lbfr，即外 用于上述的傷口或其它損傷，但并不排除該藥劑也可以是一種合適的膠囊， 可以為胃腸耐受的或者非胃腸耐受的，其中的生物粘合劑為干粉態(tài)的，被 ^^u^用于治療消化道出血。
本發(fā)明的粘合劑至少24小時(shí)的穩(wěn)定性使其可以保持為液態(tài)，因此可以 用于制備用于松塞胂瘤乾區(qū)的滋養(yǎng)血管的藥劑，這可以有利M過注射途 徑來實(shí)現(xiàn)，即應(yīng)用常規(guī)導(dǎo)管，直接到^Jt瘤靶區(qū)以"千化"該肺瘤.
應(yīng)用該3^W,可以通it^微手術(shù)(M、活檢、息肉切除等)所應(yīng)用 的內(nèi)窺鏡系^^^jhjfir。
本齡劑的流動(dòng)性，顯著與其穩(wěn)定'昧關(guān)，使其可能通過一細(xì)針頭， 典型地具有小于l咖的直徑，特別為小于0.5咖，應(yīng)用于顯微鏡下手術(shù)， 例如在,的應(yīng)用.
以下的實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但并不是對(duì)其范圍的限制。 制備2ml本發(fā)明的生物粘^W樣品(樣品A)，包括濃度為80 mg/mL的 纖維蛋白原，100 IU/mL的因子VIIa和5 nmol/mL的氯化鈣，將^4^入一
個(gè)注射器中。
還制P種M技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)生物粘合劑樣品B，包括一方面為由濃度為 80 mg/mL的纖維蛋白原和100 IU/mL的因子X邁的混合物Bl，另一方面 為鈣離子和濃度為500 IU/mL的^jfiL酶組成的iS^ B2.分別將'^^ Bl 和B2抽入兩個(gè)不同的注射器中，注射器的末端被設(shè)置為可以連接單個(gè)計(jì)頭 以使^^B1、 B2可以融^^在^,
對(duì)一只麻醉后的兔實(shí)施剖腹手術(shù).^Jfli^露，著手形成第一個(gè)切口 使該創(chuàng)面出血。在利用壓迫拭去多余的血液后，立即將生物粘^W樣品B 施用在切口創(chuàng)面處，即通過單個(gè)的針頭，同時(shí)擠入兩個(gè)注射器中的內(nèi)容物， 這使得制備出Bl和B2均勻'^物.使傷口的^^^fe接30秒，以M 物^^J凝結(jié)。
在愈合后，可觀察到所得的痠痕不^J'J且有可見的纖維蛋白"團(tuán)塊"。 這些團(tuán)塊歸因于不均勻的凝結(jié)，可能是由于在^前纖維蛋白形成所敢.
在肝臟的另一部位實(shí)施第二切口，其與上述第一切口采用相同的手術(shù) 方式，將容納在單個(gè)注射器中的M本發(fā)明的生物粘合劑樣品A施用于切 口創(chuàng)面，且使傷口的雙緣^HS接35秒，以使生物粘^W凝結(jié)，
在愈合后，可觀察到所得的叛痕具有一條清晰的線，而且沒有任何瘢 痕享縮的傾向。見不到多余纖維蛋白的泉逸，i^明在沒有手術(shù)傷口，因 此沒有組織因子存在的情況下，沒有多余的粘合劑產(chǎn)生凝結(jié).
權(quán)利要求
1.一種不含凝血酶、基于纖維蛋白原的、穩(wěn)定的、單一復(fù)合物的、治療用途的液體生物粘合劑，包括因子VIIa和鈣離子源。
2. ^MI權(quán)利要求1所述的生物*!^劑，由纖維蛋白原、FVHa和鉀離子的 單一復(fù)*組成，
3. #^權(quán)利要求1或2所述的生物粘合劑，最終的液體生物粘^W溶液 包括60-120mg/mL的纖維蛋白原^1:'
4. ^權(quán)利要求3所述的生物i^W，其中最終的液體生物^!^W溶液 包括80-100mg/mL的纖維蛋白原含量.
5. 4MI權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的生物粘合劑，每毫升最終的液體生物 3^W溶液包括50至500IU的激活的因子Vn(50-500IU/mL),
6. ^MI權(quán)利要求5所述的生物*^劑，包括70-300IU/mL的激活的因子 Vn,特別為80-120IU/mL.
7. M權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)所述的生物粘合劑，其中最終的液體生物粘 ^W溶液包括的鈣離子源濃度為4-30fi咖l/mL.
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的生物粘合劑，其中包括的鈣離子源濃度為 8-20一ol/mL,
9. ^權(quán)利要求1-8^"項(xiàng)所述的生物*^ ，進(jìn)一步包括因子xm。
10. 儲(chǔ)權(quán)利要求9所述的生物3fe^W，其中每毫升最終的液體生物齡 劑溶液中，^^有的因子XIE劑量為100IU至400IU(100 IU/mL-400 IU/mL),
11. M權(quán)利要求l-10任一項(xiàng)所述的生物粘合劑，表現(xiàn)為冷凍態(tài)，適于長期儲(chǔ)存.
12. —種不含^jk酶、基于纖維蛋白原的、治療用途的生物粘合劑，包括 ^NI權(quán)利要求l-ll^-"項(xiàng)所限定的因子Vna和鈣離子源，M為凍干狀態(tài)，適于長期儲(chǔ)存.
13. ^權(quán)利要求12所述的生物粘合劑，包括藥物學(xué)可接受的凍干狀穩(wěn)定劑組分，優(yōu)i^4現(xiàn)為精氨酸、至少一種疏7M^酸和檸檬酸三鈉的混 緣
14. 一種制備M權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)所述的生物粘合劑的藥盒，包括包^*置，其包括一^#額的凍干的纖維蛋白原血漿因子， 一個(gè)份額的 凍干FVIIa血漿因子， 一個(gè)份額的粉狀鈣離子源和水溶劑。
15. 條權(quán)利要求14所述的藥盒，其中的包錄置進(jìn)一步包括至少一個(gè)容 器，用于容納所述*^劑的至少三種不同成分.
16. 絲權(quán)利要求14或15所述的藥盒，其中的包錄置為包括至少所述 三種成分的單一容器.
17. ;f^權(quán)利要求14-16任一項(xiàng)所述的藥盒，還包括調(diào)配液體*^劑的設(shè) 備，一M過將所述的各^N^額與水溶劑溶)Sf^液體^^劑后，可 進(jìn)賴配，
18. ^權(quán)利要求14-17任一項(xiàng)所述的藥盒，包括由所述的兩種凍干血漿 因子份額'^而成的^ia^^額，以及粉狀的鈣離子源份額.
19. ^權(quán)利要求14-18任一項(xiàng)所述的藥盒，其中frH^額的凍干纖維蛋 白原或FVna血漿因子，或者由所述的兩種凍干血漿因子份額混合而成 的)5Ua^^額，包含有藥物學(xué)可接受的凍干批隱定劑組分.
20. 絲權(quán)利要求19所述的藥盒，其中穩(wěn)定劑組分呈現(xiàn)為精氨酸、至少一 種疏;!K^酸和檸檬t鈉的^^,
21. ;fM&權(quán)利要求14-20任一項(xiàng)所述的藥盒的應(yīng)用，通過將所述藥盒中三 ^H^額溶解在生物相容的^^劑中，制^^M，〗要求1-12限定的任 一生物粘合劑，如果需要，繼而i^ff冷凍.
22. 條權(quán)利要求1-13^"項(xiàng)所限定的生物^^W，所i^物^!^W作為藥劑使用.
23. ^權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所限定的生物粘合劑在制—種用于jLjMp /或治1^損傷的生物組織的藥劑中的應(yīng)用.
24. 4MI權(quán)利要求23所述的應(yīng)用，其中損傷組織為淤血青紫的組織或出血的傷口.
25. 絲權(quán)利要求23或24所述的應(yīng)用，其中損傷組織為^J^或^TT行 外^-f術(shù)的器官.
26. ;^權(quán)利要求23-25任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述藥劑為局部應(yīng)用的敷料，或者其中所述的生物粘合劑呈干粉狀的膠囊.
27. ^!權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所述的生物粘^W^jfe漿在制—種用于治 療受損傷組織的藥劑中的應(yīng)用，所述受損傷組織選自軟骨、膠原、骨 和骨粉.
28. 絲權(quán)利要求1-13 fr"項(xiàng)所述的生物^^W;5UMtfr制^"種用于融合生物材料的藥劑中的應(yīng)用，所述生物材料選自海藻酸鹽或聚乳酸.
29. ^Mt權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所述的生物粘合劑在制—種用于栓塞肺瘤 把區(qū)的滋養(yǎng)血管的藥劑中的應(yīng)用.
全文摘要
本發(fā)明涉及一種不含凝血酶、基于纖維蛋白原的用于治療用途的生物粘合劑，其包括因子VIIa和鈣離子源。本發(fā)明還涉及這種生物粘合劑作為藥劑的用途，特別是作為用于生物組織、傷口或生物材料的敷料。
文檔編號(hào)A61L24/10GK101351220SQ200680047503
公開日2009年1月21日 申請(qǐng)日期2006年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者阿卜德薩達(dá)·什圖魯 申請(qǐng)人:分餾及生物技術(shù)法國實(shí)驗(yàn)室