專利名稱：：恢復lox和nrage蛋白質(zhì)正常共同表達和相互作用的物質(zhì)的制作方法恢復LOX和NRAGE蛋白質(zhì)正常共同表達和相互作用的物質(zhì)本發(fā)明涉及一種物質(zhì)在恢復LOX和NRAGE蛋白質(zhì)正常共同表達和相互作用中的用途。
背景技術(shù)：
：1)概述在多細胞生物中，體內(nèi)平衡是通過細胞增殖、細胞分化和細胞程序性死亡或非程序性死亡來維持的。以皮膚為例，人們認為它是一個具有保護生物不受外界侵害的特殊功能器官。皮膚對外界的防護作用通過一層高度角質(zhì)化的死細胞所構(gòu)成的角質(zhì)層得以保障。因此，通過導致細胞角質(zhì)化和死亡的這種分化作用的連續(xù)進行賦予了表皮細胞(角質(zhì)細胞)生命的節(jié)律(1)維持最初的細胞(表皮基底層的干細胞)；(2)不對稱分裂(每個干細胞分裂為兩個子細胞)；(3)分化(由子細胞形成表皮基底層上層)，(4)獲得對凋亡型細胞死亡的抗性;(5)發(fā)育成為角化細胞，以及(6)表皮上層細胞的程序性死亡。該平衡的任何改變都有可能是病理性的改變。本領域技術(shù)人員已經(jīng)獲知了許多生物分子及其作用機理，使得人們能夠理解細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡這些現(xiàn)象的某些方面。盡管如此，卻沒有任何關于將這三種生物現(xiàn)象聯(lián)系起來的機制的實質(zhì)信息，而這三種生物現(xiàn)象也構(gòu)成了人們要調(diào)節(jié)和控制的靶點。2)LOX(蛋白質(zhì))LOX是賴氨酸氧化酶(LO)家族中的一員，它是一種銅依賴性的氨基氧化酶。到目前為止，人們已經(jīng)鑒定了該家族中的5個成員LOX、LOXL、LOXL2、LOXL3和LOXL4。已知LOX在體內(nèi)和體外膠原的交聯(lián)中起作用，而LOXL很明顯與彈性纖維的體內(nèi)平穩(wěn)有關。其他同種型的體內(nèi)功能還不清楚。賴氨酸氧化酶可由各種細胞合成，如成纖維細胞、平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞和角質(zhì)細胞。因此，這些酶可以存在于多種組織中，例如皮膚、肝、腎、脾和動脈，并且在細胞內(nèi)和細胞外均存在一定的濃度。2.1)LOX在細胞外基質(zhì)中的穩(wěn)定作用-在細胞外作用已經(jīng)知道，LOX在細胞外所起的作用在于穩(wěn)定結(jié)締組織中的細胞外基質(zhì)(MEC)，事實上，LOX具有使膠原纖維和彈性硬蛋白形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的功能。為此，它催化前膠原纖維分子和原彈性蛋白質(zhì)分子的賴氨酸殘基和羥基賴氨酸殘基進行氧化脫M作用，該反應伴隨著氫氧化銨和過氧化氫的釋放。形成的醛殘基與相鄰的醛和胺官能度通過分子內(nèi)鍵和分子間鍵發(fā)生自發(fā)縮合。這種縮合源于膠原纖維和彈性硬蛋白纖維之間的連結(jié)。對LOX和LO家族的生物醫(yī)學功能進行了研究，發(fā)現(xiàn)它們與MEC的進化(老化、纖維化、癌癥、愈合、骨關節(jié)和心血管疾病、血管生成)有關。已經(jīng)在體外試驗中證實，有機腈是LOX的不可逆抑制劑。P-氨基丙腈(P-ANP)可以與底物烷基胺竟爭性的與LOX的活性部位相結(jié)合。LOs以P-ANP作為底物，形成席夫堿但是并不釋放產(chǎn)物乙醛，這以共價方式阻斷了活性部位，但是對合成反應沒有影響。基于此，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了各種賴氨酸氧化酶抑制劑即P-ANP在用于防止某些類型的細胞(如軟骨細胞)進行去分化作用的用途，這種去分化作用可以在細胞培養(yǎng)過程中系統(tǒng)性產(chǎn)生(Farjanel等，法國專利申請01.10443，CNRS,賴氨酸氧化酶抑制劑在細胞培養(yǎng)和組織工程中的用途，于2001年8月3日提交，公布號2828206),但是，在該申請中，僅是籠統(tǒng)地提及賴氨酸氧化酶，而沒有涉及具體的LOX同種型；此外，雖然述及它能夠特異性地抑制體外培養(yǎng)的細胞的去分化作用，但是沒有提供任何關于賴氨酸氧化酶在維持細胞增殖，分化和凋亡的平衡中的作用的信息，就更不用說LOX了，更沒有提供關于賴氨酸氧化酶的新配偶體或底物的信息，就更不用說LOX了。2.2)細胞內(nèi)的作用總的來講，人們對LOX以及LOs在細胞內(nèi)的作用了解的還不是很多，但人們公知的是，LOX參與了細胞發(fā)育、分化、遷移和衰亡的調(diào)節(jié)(Csizar，賴氨酸氧化酶新的多功能胺氧化酶家族，核酸研究和分子生物學(NucleicAcidresearchandMoiecularBiology),2001，70:2-28)，盡管如此，人們對它們的分子生物學機制現(xiàn)在還不是很清楚。2.2.1)LOX和細胞穩(wěn)態(tài)LOX可能參與了細胞穩(wěn)態(tài)(維持細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡)的調(diào)節(jié)是人們通常所接受的觀點(Jeay等，賴氨酸氧化酶通過阻止NF-KB的活化來抑制Ras介導的轉(zhuǎn)化，Mol.Cell.Biol,，2003，23:2251-2263)，然而對于它們的作用機制本領域技術(shù)人員尚不得而知。因此，一方面，本領域技術(shù)人員目前已有資料表明LOX與分化之間可能存在聯(lián)系，另一方面，LOX與細胞的增殖和轉(zhuǎn)化之間有關系，但是，現(xiàn)有技術(shù)均未提及LOX可能和細胞凋亡有關系。2.2.2)LOX和表皮分化已經(jīng)發(fā)現(xiàn)LOX存在于表皮組織中，并且根據(jù)角質(zhì)細胞分化的水平調(diào)節(jié)其表達(Noblesse等，賴氨酸氧化酶和賴氨酸氧化酶樣物質(zhì)存在于真皮和表皮的相當皮膚和人皮膚中并與彈性纖維有關(LysyloxydaselikeandlysyloxydasearepresentinthedermisandepidermisofaskinEquivalentandinhumanskinandareassociatedtoelasticfibers),J.Invest.Dermatol.,2004，122621-630)。然而，迄今為止的研究都沒有能明確LOX在角質(zhì)細胞中的作用，也沒能在細胞中發(fā)現(xiàn)其配偶體，沒有發(fā)現(xiàn)(或是含量很少)膠原和彈性硬蛋白。2.2.3)LOX與細胞轉(zhuǎn)化顯而易見，LOX基因與維持非腫瘤細胞的表型有關。為了解釋LOX的作用，人們提出了兩個假設。第一個假設認為，MEC的網(wǎng)狀形成誘導產(chǎn)生了有利于維持細胞非腫瘤狀態(tài)的三維環(huán)境。該假設得到這樣一個事實的支持當發(fā)生癌癥時，LOX和LOXL不再進行表達，盡管它們也存在于原位癌中(Peyrol等，賴氨酸氧化酶在原位和侵入性導管乳腺癌的基質(zhì)反應中的基因表達(Lysyloxidaseg6neexpressioninthestromalreactiontoinsituandinvasiveductalbreastcarcinoma),AmJPathol.Feb;150(2):497-5071997)。另一個假設是關于LOs在細胞內(nèi)對底物的作用，本領域技術(shù)人員還在對這些底物進行研究(Li等，賴氨酸氧化酶在纖維細胞核中的定位和活性(Localizationandactivityoflysyloxidasewithinnucleioffibrogeniccells),ProcNatlAcadSciUSA.，1997Nov25;94(24);12817-22.)。LOX酶似乎是ras致癌基因的抑制劑，該基因中體細胞基因突變與各種癌癥有關(Contente等，rrg基因的表達與LTR-c-H-ras轉(zhuǎn)化的NIH3T3的恢復突變有關(Expressionofg6nerrgisassociatedwithreversionofNIH3T3transformedbyLTR-c-H畫ras)，Science,1990，249:796-798;Csiszar等，結(jié)直腸胂瘤5q23.1染色體上的賴氨酸氧化酶基因的體細胞突變(Somaticmutationsofthelysyloxidasegeneonchromosome5q23.1incolorectaltumors)，Int.J.Cancer,2002，97:636-642)。最新的研究表明，LOX在ras致，抗肺瘤藥蘇拉明能夠再誘導LOX酶的表達(Palamakumbura等，自分泌生長因子對賴氨酸氧化酶在轉(zhuǎn)化的成纖維細胞中表達的調(diào)節(jié)(Autocrinegrowthfactorr6gulationoflysyloxidaseexpressionintransformedfibroblasts),JBiolChem.，2003，Aug15;278(33):30781-7;Epub2003Jun4)。另一方面，有實驗證明，LOX在成纖維細胞中的再表達能夠抑制它們在軟瓊脂中的生長，通過調(diào)節(jié)AKT蛋白質(zhì)的定位而作用于NF-kB信號通路(Jeay等，賴氨酸氧化酶通過阻止NF-B的活化從而抑制Ras介導的轉(zhuǎn)化(LysyloxydaseinhibitsRas-mediatedtransformationbypreventingactivationofNF-B)，Mol.Cell.Biol"23:2251-2263，2003).類似于其它的腫瘤抑制劑，LOX的作用可能是基于對底物和細胞配偶體的調(diào)節(jié)來實現(xiàn)的，但本領域技術(shù)人員對此尚不得而知。2.2.4)細胞凋亡術(shù)語"細胞凋亡"用來描述細胞死亡的一種特殊形式，該種細胞與壞死細胞具有不同的病理特征。細胞凋亡是一個需要獲得胱天蛋白酶的細胞程序性死亡過程。在該過程中，細胞獲得了特別顯著的病理特征，例如染色質(zhì)的凝聚和核的斷裂，導致細胞的自動銷毀和從組織中的清除，而同時不損害相鄰細胞。細胞凋亡相應于細胞發(fā)育或穩(wěn)態(tài)過程中的細胞自然死亡?，F(xiàn)有技術(shù)的信息表明，多種物質(zhì)和作用機制通過調(diào)節(jié)細胞凋亡和分化過程參與調(diào)節(jié)了細胞周期。3)NRAGE(蛋白質(zhì))具體而言，人們已知，是一個蛋白質(zhì)家族參與了細胞周期、細胞分化和細胞凋亡的調(diào)節(jié)。已知該家族為MAGE(黑素瘤相關抗原)蛋白質(zhì)家族，蛋白質(zhì)NRAGE(也被稱名為"與神經(jīng)營養(yǎng)蛋白受體相互作用的MAGE同源物(neurotrophin-receptor畫interactingMAGEhomolog)")為該家族中的一員，該蛋白質(zhì)由于其通過神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF的促細胞凋亡作用而為人們所知。蛋白質(zhì)NRAGE含有778個氨基酸，它在中心區(qū)域具有MAGE蛋白質(zhì)的第一特征結(jié)構(gòu)域MAGE同源結(jié)構(gòu)域(MHD-1)，并且在N-末端區(qū)域具有第二結(jié)構(gòu)域MHD-2，該結(jié)構(gòu)域僅存在于某些同種型中。這兩個結(jié)構(gòu)域中都富含賴氨酸殘基。在這兩個結(jié)構(gòu)域之間，存在一個被稱為IRD(散在重復結(jié)構(gòu)域(InterpersedRepeatDomain))的區(qū)域，迄今為止還沒有發(fā)現(xiàn)該區(qū)域存在于任何其他已知的蛋白質(zhì)中。蛋白質(zhì)NRAGE對細胞凋亡的調(diào)控是通過下列不同的途徑來完成的通過與p75NTR(嗜中性粒細胞因子(facteursneutrophils)(NGF)或TNF的低親和受體)相互作用，NRAGE能阻斷細胞周期的進行，因此通過胱天蛋白酶途徑促細胞凋亡。NRAGE還通過與IAP凋亡蛋白質(zhì)的細胞質(zhì)抑制劑相互作用而起到促細^<凋亡的作用。NRAGE還能直接對核同源因子的活性產(chǎn)生作用，例如參與組織成形基因調(diào)節(jié)的Msx和Dlx因子。雖然NRAGE的表達是很廣泛的，但是現(xiàn)有技術(shù)均未能獲知其在皮膚中存在的狀態(tài)。而且，現(xiàn)有技術(shù)也沒有描述LOX和細胞凋亡之間的聯(lián)系，更沒有描述LOX和NRAGE之間的關聯(lián)性。4)現(xiàn)有^L術(shù)總結(jié)現(xiàn)有技術(shù)沒有提供新的LOX配偶體或底物的鑒定方法，尤其是參與細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間平衡維持的那些，現(xiàn)有技術(shù)也沒有提供上皮細胞(特別是角質(zhì)細胞)中的新配偶體和底物的鑒定方法，同樣也沒有提供任何細胞類型的相關信息。現(xiàn)有4支術(shù)沒有給出關于LOX可能由于老化、存在或不存在暴露于UV或其它類型的4曼害作用或影響皮膚的疾病(4艮屑病、移植物抗宿主疾病、癌癥等)等因素的影響而發(fā)生在表皮細胞中的表達(尤其是在角質(zhì)細胞中的表達)改變的信息?，F(xiàn)有4支術(shù)也沒有1良LOX與細胞凋亡有關?，F(xiàn)有技術(shù)沒有給出NRAGE是否在皮膚中存在的信息，包括健康皮膚、因老化或受到紫外線照射發(fā)生改變的皮膚、遭受其它侵害的皮膚或發(fā)生疾病的皮膚?，F(xiàn)有技術(shù)沒有建立用于研究上皮細胞和表皮細胞中的NRAGE的模型?，F(xiàn)有才支術(shù)沒有給出任何關于LOX和NRAGE之間相互作用的信息?，F(xiàn)有技術(shù)沒有提供可以用于鑒別能夠調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE在角質(zhì)細胞中表達的活性成分的模型。另一方面，目前在歐洲，因為某些應用和人類試驗遭受到倫理學的非議，所以動物試驗被禁止。人們不能接受發(fā)明人使用動物或人來實施篩選方法。在MIMESKIN(Coletica，，法國)的三維模型中，LOX在表皮中表達，根據(jù)角質(zhì)細胞分化水平的不同，調(diào)節(jié)其表達(Noblesse等，2004)。在研究的過程中，沒有發(fā)現(xiàn)NRAGE的表達，也沒有發(fā)現(xiàn)LOX與細胞凋亡之間存在可能的聯(lián)系。因此，顯而易見，對于所述
技術(shù)領域：
的技術(shù)人員而言，還沒有一個能夠用于調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達的方法，從而當細胞穩(wěn)態(tài)受到影響(年齡、壓力、疾病)時，可以通過增殖、分化和細胞凋亡之間的平衡加以調(diào)節(jié)，這提出了一個新技術(shù)問題。現(xiàn)有技術(shù)中沒有提供能夠調(diào)節(jié)LOX的細胞內(nèi)配偶體(例如NRAGE)的表達的活性成分，同時對目的在于細胞調(diào)節(jié)的LOX表達進行調(diào)節(jié)或者不調(diào)節(jié)。就此而言，^J^獲得對這些活性成分的影響進行評價的客觀標準。發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的是為了解決以上所提到的技術(shù)問題，尤其是要解決提供一種在LOX蛋白質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用發(fā)生缺失和改變的情況下，鑒別能夠改善所勤目互作用的活性成分的方法的技術(shù)問題。具體而言，本發(fā)明的目的在于調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的細胞平衡，該平衡由于下列因素而受到干擾，如因為年齡、UV或受到其它因素的侵害導致皮膚發(fā)生改變，和/或疾病狀態(tài)，如4艮屑病、濕疹、移植物抗宿主疾病、扁平痺和/或癌癥。本發(fā)明還涉及活性成分在調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表it^而調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的細胞平衡中的用途，特別是在該平衡由于下列因素而受到干擾的情況下，如因為年齡或UV的影響或是其它一些有害因素的侵害導致皮膚發(fā)生改變，和/或是疾病狀態(tài)，如銀屑病、濕疹、移植物抗宿主疾病、扁平褲和/或癌癥。更具體而言，本發(fā)明還涉及在LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下用于改善LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間相互作用的活性成分。本發(fā)明解決了下列技術(shù)問題:提供了確定和監(jiān)測NRAGE表達的方法，特別是在皮膚細胞模型中。本發(fā)明還解決了下列技術(shù)問題提供了診斷與LOX和NRAGE之間的相互作用的調(diào)節(jié)發(fā)生異常有關的疾病的方法。發(fā)明描述總體上而言，本發(fā)明中使用的術(shù)語具有下列定義LOX:賴氨酸氧化酶LOX的人類蛋白質(zhì)同種型，特別是SEQIDNo.l氨基酸序列定義的同種型；NRAGE:NRAGE人類蛋白質(zhì)，特別是SEQIDNo.2氨基財列所定義的NRAGE人類蛋白質(zhì)；LOX表達的調(diào)節(jié)編碼LOX的基因的調(diào)節(jié)，尤其是對編碼LOX的信使RNA表達的調(diào)節(jié)，但同時也包括對從信使RNA到LOX合成的調(diào)節(jié)，從而對LOX的活性進行調(diào)節(jié)；NRAGE表達的調(diào)節(jié)編碼NRAGE的基因的調(diào)節(jié)，尤其是對編碼NRAGE的信使RNA表達的調(diào)節(jié)，但同時也包括對從信使RNA到NRAGE合成的調(diào)節(jié)，從而對NRAGE的生物作用進行調(diào)節(jié)。這些調(diào)節(jié)在細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡受到干擾的情況下應該能夠重新誘導該平衡。優(yōu)選在下列情況下認為活性成分對LOX有效相對于對照模型(通常情況下不與活性成分接觸)，在與活性成分接觸后，在包括至少一種具有LOX表達和/或LOX活性的細胞類型模型中，LOX的mRNA表達差別約為±50%和/或LOX的表達和/或LOX的活性差別約為士15%。優(yōu)選在下列情況下認為活性成分對NRAGE有效相對于對照模型(通常情況下不與活性成分接觸)，在與活性成分接觸后，在包括至少一種具有NRAGE表達和/或NRAGE活性的細胞類型才莫型中，NRAGE的mRNA表達差別約為士50。/。和/或NRAGE的表達和/或NRAGE的生物學作用差別約為±15%。在第一個方面，本發(fā)明涉及有效量的至少一種物質(zhì)在調(diào)節(jié)至少一種具有SEQIDNo.l序列的LOX蛋白質(zhì)的表達和/或活性和/或調(diào)節(jié)至少一種具有SEQIDNo.2序列的NRAGE蛋白質(zhì)的表達和/或活性的用途，用于生產(chǎn)調(diào)節(jié)LOX和NRAGE之間的相互作用的組合物，從而用于調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡，特別是在這些現(xiàn)象受到干擾的情況下，特別是在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失和改變的情況下。本發(fā)明涉及有效量的至少一種物質(zhì)在調(diào)節(jié)至少一種具有SEQIDNo.1序列的LOX蛋白質(zhì)的表達和/或活性和/或調(diào)節(jié)至少一種具有SEQIDNo.2序列的NRAGE蛋白質(zhì)的表達和/或活性的用途，用于生產(chǎn)改善LOX和NRAGE之間的相互作用的組合物，特別是在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失和改變的情況下。本發(fā)明還涉及有效量的至少一種物質(zhì)在調(diào)節(jié)至少一種具有SEQIDNo.2序列的NRAGE蛋白質(zhì)的表達和/或活性并任選調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.1序列的LOX蛋白質(zhì)的表達和/或活性的用途，用于生產(chǎn)預防或治療至少一種狀態(tài)的組合物，在該狀態(tài)中，細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡缺失或者發(fā)生改變。優(yōu)選，調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE在上皮細胞、特別是在角質(zhì)細胞中的表達。優(yōu)選，所述物質(zhì)用于調(diào)節(jié)LOX蛋白質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用，所述相互作用特別是發(fā)生在NRAGE的IRD區(qū)域。優(yōu)選，LOX和NRAGE的相互作用是包括通過LOX操控的酶催化而導致的NRAGE的聚合，特別是二聚。優(yōu)選，由于LOX的催化活性，LOX和NRAGE之間的相互作用使得產(chǎn)生H202，而H;r02又可以激活其他的分子，例如中性鞘磷脂酶或NF-kB。優(yōu)選，LOX和NRAGE之間的相互作用干擾LOX的非酶活性，特別是通過LOX的無功能性原區(qū)域(pror6gion)(A22-D169)發(fā)揮的活性。優(yōu)選，所述物質(zhì)用于治療和/或預防選自下列的疾病細胞暴露于應激狀態(tài)時，特別是細胞暴露于熱、細胞暴露于輻射(特別是太陽輻射)、細胞暴露于毒性物質(zhì)(例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì))、皮膚老化、扁平癬、移植物抗宿主疾病、濕滲、牛皮縳、癌癥(特別是上皮細胞癌)。優(yōu)選，所述物質(zhì)在細胞過度增殖的情況下用于減少細胞增殖，特別是癌癥(特別U底細胞型或刺細胞型上皮細胞癌，特別是皮膚上皮細胞癌)、牛皮褲、濕滲。優(yōu)選，所述物質(zhì)在細胞凋亡過多的情況下用于減少表皮的細胞凋亡，特別是在皮J^JL生老化的過程中、皮膚暴露于應急狀態(tài)時，特別是暴露于熱、暴露于輻射(特別是太陽輻射)、暴露于毒性物質(zhì)(例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì))或移植物抗宿主疾病。優(yōu)選，所述物質(zhì)在表皮細胞增殖過少的情況下用于促進細胞增殖，特別是在皮膚發(fā)生老化的過程中、皮膚暴露于熱、皮膚暴露于輻射(特別是太陽輻射)或移植物抗宿主疾病。優(yōu)選，所述物質(zhì)在下列情況下用于刺激LOX的表達并任選抑制NRAGE的表達在皮膚發(fā)生老化的過程中、皮膚暴露于應急狀態(tài)時，特別是暴露于熱或暴露于輻射(特別是太陽輻射)、暴露于毒性物質(zhì)(例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì))或移植物抗宿主疾病。優(yōu)選，所述物質(zhì)用于刺激表皮NRAGE的表達和/或活性并任選抑制LOX的表達和/或活性，從而用于預防或治療牛皮癬或濕滲。優(yōu)選所述物質(zhì)用于刺激LOX和NRAGE的表達，從而用于預防或治療癌癥，特別n底細胞型或刺細胞型上皮細胞癌，或扁平癬。優(yōu)選，所述組合物為化妝用組合物、營養(yǎng)組合物(compositionneutraceutique)、皮膚藥用組合物或藥用組合物。優(yōu)選，所述細胞平衡為角質(zhì)細胞增殖和細胞分化之間的平衡，細胞凋亡為角質(zhì)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡。優(yōu)選，在為植物(優(yōu)選根、莖、皮層、花、果實、種子、胚芽、樹膠、滲出物、葉子或整個植物)或者為蛋白質(zhì)的情況下，用于制備活性成分的原料經(jīng)輻射或者不經(jīng)輻射消毒，例如用p或Y射線以優(yōu)選5kGy的劑量照射，如果需要，隨后研成磨末，例如在室溫下研碎。接著，將得到的粉以2-5%(重量/重量)、優(yōu)選5%(重量/重量)分歉于極性溶劑中，例如水、醇、二醇(如丁二醇)或多元醇，和/或極性溶劑混合物中，優(yōu)選7jC/(醇、二醇或多醇)混合物，所述醇如乙醇、丙三醇、丁二醇和其他二醇、木糖醇等，可以對混合物的比例進行調(diào)整，優(yōu)選水/丁二醇之比為75/25-50/50的混合物，也可以采用非極性溶劑，例如鏈烷烴，或者采用非極性溶劑混合物，或者采用極性溶劑和非極性溶劑的混合物。優(yōu)選，在攪拌(例如磁力攪拌)2小時和對溶劑任選加熱后，優(yōu)選通過傾析或離心使樣品澄清，隨后優(yōu)選通過0.45fim或0.22,的濾膜過濾。優(yōu)選，在為特征分子(例如通過合成或半合成獲得的分子、通過純化獲得的生物分子)的情況下，所述用于制備活性成分的原料用溶劑進行稀釋，優(yōu)選用水或二甲基亞砜(濃度優(yōu)選為1(T6M-1(T2M，優(yōu)選為1(T4M數(shù)量級，或者基于所述分子的重量計，范圍在1%(重量/重量)_5%(重量/重量)之間)。隨后任選過濾得到的溶液，優(yōu)選通過0.45nm或0.22jim的濾膜過濾。優(yōu)選，根據(jù)上述方法獲得的活性成分的終濃度范圍優(yōu)選在0.01%體積/體積(v/v)-10。/。體積/體積(v/v)之間，更優(yōu)選在0.1。/。體積/體積(v/v)-1%體積/體積(v/v)之間。優(yōu)選，所述物質(zhì)選自植物或者植物的提取物大豆、麻黃(草麻黃(E/;Aeflfrflsi"iV"))、p卑酒花(jfiTM附w/"s1丄"/"/"s1)(/fw附w/"s丄"/;"/ws)、肉桂(樟屬(C,Vmfl附0/w"附s/p))、白色皂角草(Saponaireblanche)(石頭花屬(Gj;/wo/7/7a邵》、紅色檀香(戶,mcw/7ws5^她//簡力提取物、瀉根(必，fi/flAWc")、小枸骨葉冬青(PetitHoux)(假葉樹(及"scMSflc"/e^M力)、檸檬(CWrws//附ow/fl)、Mandarine(橘子(C/,r"srW/cM/crto))、反式-3-己烯酸乙酉旨、Khella(阿密茴(J/w附F&w"gflf))、藻酸、胡蘿卜(Z)""c附Ow^")、2-甲基丁酸曱酉旨(leMethyl2methylbutyrate)、中國八角茴香(Badianierdechine)(八角茴香(////"7|柳verw附))、柏(地中海柏木(C"/7rewws5^/wperv/rews))、樹膠(unegommeAsaeFoetida)、；Mt醇、黑刺李樹(Prunellier)(黑刺李(/Vm"ms印/"。5fl》、歐洲草莓樹(Arbousier)(草莓樹(^4rAw/"s、鹿蹄草(Pyrole)(傘形喜冬草(C7"附a//h7tf"附6e/to,fl))、香車葉草(Aspemleodorante)(J5/7ef"/"oflfom似)、艾蒿(Armoise)(北艾(Jfte附/siVivw/gnr/s))、接骨木(Sureau)(西洋接骨木(SflwiAwcws"/grfl))、中國白菜(5mss/cfl必mssicacfl附/e欲/s1var.jPeA:/"ews/s)、蘇里南苦木(QuassiadeSurinam)(Ckss,Via附crni)、可可樹(Cacoyer)(可可(77reo6ro附"c"cao))、穗絲(5"m.cfl)、紅色菝葜(Salsepardllerouge)(S/m7oxwifl,")、醋栗(Groseille)(紅醋栗(W6es1m6rw附))、雛菊(Pyrethre)(南歐派利^^(v4wfl(y;c/"s^rC/rr"附))、茴香(Fenouil)(/^efi/cw/w附)。在第二方面，本發(fā)明涉及鑒定至少一種上述的活辨成分的方法，特別是用于調(diào)節(jié)LOX和NRAGE之間的相互作用并因此用于預防或治療至少一種病癥的活性成分，在上述病癥中，細胞增殖，分化和凋亡之間的平衡發(fā)生缺失或改變，其特征在于-使所述活性成分與至少一種能夠表達LOX蛋白質(zhì)(SEQIDNo.1)和/或NRAGE蛋白質(zhì)(SEQIDNo2)的活細胞接觸，并且-分析LOX和/或NRAGE的表達，尤其是用于鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE的表達和/或活性從而改善細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的細胞平衡的活性成分的方法。本發(fā)明還涉及在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下，鑒定至少一種調(diào)節(jié)LOX和NRAGE之間的相互作用從而用于改善LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用的活性成分的方法，其特征在于-使所述活性成分與至少一種能夠表達LOX蛋白質(zhì)(SEQIDNo.1)和/或NRAGE蛋白質(zhì)(SEQIDNo2)的活細胞接觸，并且畫分析LOX和/或NRAGE的表達，尤其是用于在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下，鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE的表達和/或活性從而改善LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用的活性成分的方法。優(yōu)選，在與所述活性成分接觸前，細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡(其中活細胞能夠表達LOX和/或NRAGE蛋白質(zhì))或者LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用發(fā)生了缺失或改變。優(yōu)選，所述活細胞是上皮細胞，特別是角質(zhì)細胞。優(yōu)選，所述方法包括分析LOX和/或NRAGE的信使RNA的表達。優(yōu)選，所述方法包括使用一定量的RT-PCR，特別是使用如下的引物-對于LOX基因正向引物ACGTACGTGCAGAAGATGTCC反向引物GGCTGGGTAAGAAATCTGATG-對于NRAGE基因正向引物TGCACAGACATCAGCAGATGG反向引物TTCACGGATGATATCTCTCAGC。優(yōu)選，所述方法包括分析信使RNA表達的動力學，例如采用定量RT-PCR技術(shù)。本發(fā)明還涉及對患者進行化妝或治療的方法，在所述患者中，至少一種細胞類型的細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡受到干擾，該方法包括通過施用一種調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達的物質(zhì)來改善LOX和NRAGE之間的相互作用。本發(fā)明還涉及對患者進行化妝或治療的方法，在所述患者中，LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生了缺失或改變，該方法包括使用或施用一種調(diào)節(jié)具有Seq.IDNo.1的LOX的表達和/或活性的物質(zhì)和/或者調(diào)節(jié)具有Seq.IDNo.2的NRAGE的表達和/或活性的物質(zhì)。本發(fā)明還涉及對具有下列病癥的患者進行化妝或治療的方法，在所述病癥中，細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生了缺失或改變，該方法包括使用或施用一種調(diào)節(jié)NRAGE的表達和/或活性并任選調(diào)節(jié)LOX的表達和/或活性的物質(zhì)。在第三方面，本發(fā)明涉及制備組合物的方法，該方法包括-使用一種前面所述的鑒定方法鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達和/或活性從而用于改善細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的活性成分；并且-使所述活性成分與至少一種用于化妝組合物、營養(yǎng)組合物、皮膚藥用組合物或藥用組合物的賦形劑混合，所述組合物用于預防或治療至少一種病癥，在所述病癥中，細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生了缺失或改變。本發(fā)明還涉及制備組合物的方法，該方法包括使用一種上述的鑒定方法來鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達和/并且-使所述活性成分與至少一種用于化妝組合物、營養(yǎng)組合物、皮膚藥用組合物或藥用組合物的賦形劑混合，所述組合物用于在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生了缺失或改變的情況下改善LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用。在第四個方面，本發(fā)明涉及對NRAGE定位的方法，該方法包括使用至少一種抗NRAGE的抗體用于檢測和定位存在的NRAGE，尤其是在包括至少一種角質(zhì)細胞的重建模型或皮膚切片中，優(yōu)選凈皮證明具有細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生了缺失或改變的病癥的人皮膚的切片。在第五方面，本發(fā)明涉及用于制備組合物的抗NRAGE抗體，所述組合物用于檢測細胞中的NRAGE表達被調(diào)節(jié)的情況，特別是在上皮細胞中，優(yōu)選角質(zhì)細胞。優(yōu)選，該組合物用于檢測病癥，在該病癥中，細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡或者LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生了缺失或改變，尤其是在表皮中發(fā)生了缺失或改變，所述病癥選自細胞暴露于應急狀態(tài)(特別是細胞暴露于熱)或細胞暴露于輻射(特別是太陽輻射)，或者細胞暴露于毒性物質(zhì)(例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì))、皮膚老化、扁平痺或移植物抗宿主疾病、濕瘆、牛皮癬和癌癥，特別U底細胞型或刺細胞型上皮癌，尤其是皮膚上皮癌。優(yōu)選，所述組合物還包括抗LOX的抗體，用于檢測細胞中LOX表達的調(diào)節(jié)，特別是上皮細胞，優(yōu)選角質(zhì)細胞。優(yōu)選，所述組合物還包括抗LOX的抗體，用于檢測角質(zhì)細胞中的LOX表達的調(diào)節(jié)。優(yōu)選，所述角質(zhì)細胞是人類角質(zhì)細胞。發(fā)明詳述本發(fā)明人出乎意料之外地發(fā)現(xiàn)了LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用。該發(fā)現(xiàn)非常重要，是本發(fā)明的出發(fā)點之所在。事實上，該發(fā)現(xiàn)表明，LOX作為位于細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡途徑交叉點上的蛋白質(zhì)，能夠控制細胞穩(wěn)態(tài)。另一方面，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了NRAGE蛋白質(zhì)可以特別是在表皮中進行表達，尤其是在角質(zhì)細胞中。該發(fā)現(xiàn)使得可以在細胞穩(wěn)態(tài)受到千擾的情況下將LOX和NRAGE之間的相互作用作為化妝學或治療的耙點從而恢復細胞穩(wěn)態(tài)。1)檢測和鑒定LOX/NRAGE之間相互作用的體外試驗人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)LOX存在于表皮中(Noblesse等，賴氨酸氧化酶和賴氨關(Lysyloxydase-likeandlysyloxydasearepr6sentinthedermisandepidermisofaskinEquivalentandinhumanskinandareassociatedtoelasticfibers),XInvest.Dermatol.122:621-630，2004)，發(fā)明人一直在進行研究，試圖確定LOX是否在該水平上起作用，但是，迄今為止，已知的主要作用(即在膠原和彈性硬蛋白交聯(lián)中的作用)在這些細胞中不可能存在，因為雖然LOX存在于這些細胞中，但M原和彈性硬蛋白卻不存在(或極少)。為此，采用雙雜交技術(shù)在酵母中對LOX的蛋白質(zhì)配偶體進行了研究，對正常人皮膚的角質(zhì)細胞的DNAc文庫進行了篩選，采用GAL4BD-hLOXmat作為誘導物，由此證明了NRAGE是LOX的蛋白質(zhì)配偶體(見實施例1)。然后，發(fā)明人又采用Hela細胞通過雙雜交技術(shù)進行了粉￡，在哺乳動物細胞中同樣觀察到這種潛在的配偶作用(見實施例2).隨后的步驟包括測定這種LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的潛在配偶作用是否是直接的物理作用。這可以通過將它們的基因轉(zhuǎn)染到Cos7細胞中后產(chǎn)生的LOX和NRAGE蛋白質(zhì)的共免疫沉淀技術(shù)來實現(xiàn)。一方面，獲得的結(jié)果證明了LOX和NRAGE之間的物理作用，并明確了LOX與NRAGE作用的具體區(qū)域，該區(qū)域被稱為IRD(散在重復結(jié)構(gòu)域)，該區(qū)域為MAGE蛋白質(zhì)家族的NRAGE的特異性區(qū)域(見實施例3)。就此而言，在該階段值得注意的是，當考慮結(jié)合方式時發(fā)現(xiàn)LOX和NRAGE之間的相互作用是特別重要的，一方面，NRAGE蛋白質(zhì)含有兩個富含賴氨酸殘基的區(qū)域，該區(qū)域可能成為在LOX催化作用下進行二聚化的適合部位，另一方面，正是這個二聚體使得NRAGE蛋白質(zhì)發(fā)揮其功妙3匕'由于在體外試驗中發(fā)現(xiàn)了LOX和NRAGE之間存在直接的物理作用，并且相互作用的區(qū)域為NRAGE的IRD區(qū)域，發(fā)明人產(chǎn)生了這樣一個疑問這種相互作用是否也存在于體內(nèi)？在這點上，需要注意的是，與LOX不同，NRAGE在皮膚中的存在未曾報道過。2)檢測正常人皮膚和重構(gòu)正常人皮膚中NRAGE的存在發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了NRAGE在皮膚中表達的證據(jù)，在表皮和真皮中都有表達(見實施例4和5)。在本發(fā)明中，發(fā)明人實施了定位NRAGE在皮膚中表達的方法。在表皮中，發(fā)明人出乎意料之外地發(fā)現(xiàn)，NRAGE不是以均勻的方式表達的，而是以梯度的方式表達的，這與廣泛存在的蛋白質(zhì)的表達方式不同。表皮結(jié)構(gòu)表皮是一種基于基底膜的復層上皮，所述基底膜與真皮層相連。其厚度平均在60到100nm之間，它由四層構(gòu)成，由角質(zhì)細胞逐漸分化而成，從深層到表層依次為-基底層(僅有一層細胞)-棘層(5到6層細胞)-顆粒層(1到3層細胞)-角質(zhì)層或鱗屑層(5到10層細胞)NRAGE不存在于基底層中，但似乎存在于分化的角質(zhì)細胞的基礎層(premisescouches)中，在鱗屑層中顯著增加。這些在表皮的基底層之上的^i^出層中的增加與關于LOX觀察到的相符，LOX出現(xiàn)在基底層中。相反,LOX在表皮的最上層中減少，同時其中出現(xiàn)NRAGE，由此導致產(chǎn)生了3個不同的區(qū)域-1個表皮的最下面區(qū)域，該區(qū)域包括基底層和增殖的基底層上面的基礎層，其中^(^達LOX;-1個表皮的中間區(qū)域，從不增殖的基底層上面的基礎層到鱗屑層基礎層，其中LOX和NRAGE共同表達；-l個表皮的最上面區(qū)域，其中^L^達NRAGE。在細胞水平上觀察到的結(jié)果表明，LOX和NRAGE出現(xiàn)在細胞的外圍，特別是在細胞膜下面的區(qū)域，此夕卜，NRAGE似乎還出現(xiàn)在細胞質(zhì)中(見實施例4和5)。因此，發(fā)明人首次證明了NRAGE在皮膚中的存在真皮和表皮，而且還證明。表皮包括一個在其中兩個LOX和NRAGE蛋白質(zhì)在細胞水平上均表達和分裂的區(qū)域，尤其是在角質(zhì)細胞中，另外還對這兩個蛋白質(zhì)進行了定位細胞膜下的外圍區(qū)域(另外NRAGE還存在于細胞質(zhì)中)。由此，發(fā)明人通過體外研究證明，在LOX和NRAGE均存在的皮膚區(qū)域可以使它們發(fā)生直接作用。3)LOX和/或NRAGE在老化和發(fā)生了一些病理變化的表皮中的表達受到了干擾發(fā)明人還出乎意料之外地發(fā)現(xiàn)，老化的皮膚和發(fā)生了一些病理性變化的皮膚均伴隨著LOX和/或NRAGE在表皮中的表達受到了干擾。3.1)LOX和NRAGE在表皮中的狀況3.1.1)老年人皮膚老年人的皮膚的特征在于，表皮增殖減少并且非常薄(減少到僅存在數(shù)個細胞層)以及角質(zhì)化過度。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，LOX在老年人的皮膚中完全缺失(通過使用的技術(shù)可以檢測)。相反，NRAGE卻大量在細胞質(zhì)中和基底層上面的基礎層中表達，并且沒有表達梯度的變化。因此，本發(fā)明可以通過重新誘導分化區(qū)和/或調(diào)節(jié)凋亡區(qū)，可以刺激LOX的表達(和/或活性)，同時抑制或者不抑制NRAGE的表達(和/或活性)，尤其是通過恢復LOX和NRAGE的共同表達區(qū)。此外，還使皮膚增厚，尤其是表皮增厚。因此，本發(fā)明的目的特別是在于校正或預防皮膚的老化。3丄2)移植物抗宿主疾病GVHGVH可能是一種因為造血干細胞的同種異體移植所引起的疾病。它與移植物中的免疫細胞(淋巴細胞)對抗患者的正常器官(尤其是皮膚、肝臟和消化管)的作用有關。在皮膚中，免疫排斥反應表現(xiàn)為皮疹、發(fā)癢和炎癥。患有該病的患者的皮膚都很薄，并伴有表皮細胞凋亡的增加。發(fā)明人進行的組織學研究證明，在細胞質(zhì)和基底層上面的基礎層中LOX出現(xiàn)缺失而NRAGE大量出現(xiàn)。因此，本發(fā)明的目的在于刺激LOX的表達(和/或活性)，同時抑制或不抑制NRAGE的表達(和/或活性)產(chǎn)生，從而可以重新誘導LOX和NRAGE的共同表達區(qū)，使它們能夠相互作用并使移植物抗宿主疾病的皮膚表象減少，同時特別是伴有皮膚、尤其是表皮的增厚。所以，本發(fā)明使GVH患者的該種疾病的皮膚表象減輕。3.1.3)扁平癬扁平癬是一種病因未知的皮膚病，其特征在于出現(xiàn)直徑為幾毫米的丘疹，該種丘疹呈紫色、扁平狀、確定、干燥并且十分的癢。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，在該種疾病中，LOX表達急劇減少，甚至完全缺失，而NRAGE的表達也非常不規(guī)律。無疑，這些觀察結(jié)果反映了這兩個蛋白質(zhì)之間相互作用的消失，或是十分的微弱。因此，本發(fā)明的目的在于刺激LOX的表達(和/或活性)，調(diào)節(jié)或者不調(diào)節(jié)NRAGE的表達(和/或活性)，從而重新誘導LOX和NRAGE的共同表達區(qū)，使它們能夠相互作用并恢復至正常表皮狀態(tài)。因此，本發(fā)明能夠治療、緩解患者的扁平癬或預防該病的發(fā)生。3.1.4)牛皮癬牛皮癬是一種慢性皮膚疾病，其特征在于紅斑性的鱗狀損害。其原因是角質(zhì)細胞的快速增長，造成表皮更新加快并增厚。從組織學的角度來看，可以觀察到最終分化階段的初期步驟中的細胞增殖過度、不完全的最終分化并同時伴隨著細胞凋亡的缺失或減少。發(fā)明人檢測到了LOX的大量表達和NRAGE的正常存在，在相關區(qū)域均勻分布，沒有表達梯度的變化。關于這種與正常不同的表達強度特征，還存在大量與蛋白質(zhì)定位有關的異常。所以，在牛皮癬患者的皮膚中，LOX基本上是在表皮的下面部分表達，而NRAGE僅在上面部分表達，如此，這些蛋白質(zhì)的表M生了變化，無在健康的皮膚中觀察到的重合區(qū)(zonederecouvrement)。在細胞中，僅在細胞質(zhì)中觀察到NRAGE，而在細胞膜下的外圍區(qū)域則沒有觀察到。對牛皮癬的這些觀察結(jié)果表明，盡管LOX和NRAGE蛋白質(zhì)都在表皮中存在，但是由于它們沒有存在于同一區(qū)域，所以它們之間不能發(fā)生相互作用。這種相互作用的缺失，導致了表皮功能的紊亂，同時反映出LOX和NRAGE的相互作用在維持表皮細胞穩(wěn)態(tài)中起作用。所以，抑制LOX的表達(和/或活性)和/或任選刺激(優(yōu)選部分刺激)NRAGE的表達(和/或活性)，特別是能夠獲得LOX表達和NRAGE表達的重合區(qū)，從而重新誘導產(chǎn)生調(diào)節(jié)的增殖區(qū)，使有利于角質(zhì)細胞凋亡的增殖過度降低。在另一方面，刺激NRAGE的表達(和/或活性)和/或抑制(優(yōu)選部分)LOX的表達(和/或活性)，特別是能夠獲得LOX表達和NRAGE表達的重合區(qū)，從而重新誘導產(chǎn)生調(diào)節(jié)的增殖區(qū)，使有利于角質(zhì)細胞凋亡的增殖過度降低。因此，本發(fā)明可以預防和/或治療牛皮癬，或在一定程度上降低其影響。3丄5、濕療濕滲是一種皮膚病，臨床特征在于紅、面積或大或小的局部肺脹，而且還形成滲液的嚢泡，隨后形成痂蓋，同時伴隨著劇癢。在濕務匱性期，伴有皮膚的改變和皮膚的增厚。在表皮中，細胞凋亡減少。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，細胞外圍中的LOX表達非常強。相反，NRAGE的表達很少并且僅僅局限在細胞質(zhì)中，無疑，這就造成了研究的兩種蛋白質(zhì)之間相互作用的缺失或者很弱。因此，刺激NRAGE的表達(和/或活性)和/或抑制(優(yōu)選部分)LOX的表達(和/或活性)，可以增加細胞的凋亡并因此可以減少濕疹的影響。所以，本發(fā)明能夠預防和/或治療濕滲，特別是減少濕滲的影響。3丄6)皮膚上皮細胞癌人們鑒別了兩大類的皮膚上皮細胞癌-基底細胞癌(占90%)是一種^很慢的腫瘤，基本上是局限性的，它幾乎從來不發(fā)生轉(zhuǎn)移。它是由于基底層的角質(zhì)細胞的增殖失控所引起的。-棘細胞癌(占10%)是一種更具攻擊性的局限性腫瘤，可能發(fā)生轉(zhuǎn)移。它源于棘層的角質(zhì)細胞的增殖失控。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在研究的兩種類型的癌癥(基底細胞癌和棘細胞癌)的攻擊性細胞中，LOX和NRAGE不存在，同時還伴有在腫瘤周圍的表皮中LOX和NRAGE漸進性缺失。發(fā)明人還觀察到，LOX在肺瘤周圍的基底部大量表達，而NRAGE的表達卻是缺失的。值得注意的是，在該階段LOX表達的喪失是出乎人們預料之外的，在這之前的研究中從來沒有在這兩種癌中被證明過，并且可能是上皮細胞所特有的，因為LOX通常被認為在原位癌中是存在的。NRAGE表達的缺失的概念也是全新的，過去從來也沒有在任何的癌癥中有所描述。這樣，刺激NRAGE的表達(和/或活性)和LOX的表達(和/或活性)，可以恢復細胞穩(wěn)態(tài)。這就有可能逆轉(zhuǎn)腫瘤表型，尤其是對于皮膚的上皮細胞癌。3.2)對病理組織研究的小結(jié)從這些觀察中，發(fā)明人證明，在細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡下調(diào)的情況下，或者在老年A^皮中或者在患有各種影響特別是表皮的疾病中，均存在系統(tǒng)性LOX和/或NRAGE表達缺陷的特征，這些缺陷能夠改變它們之間的相互作用或者使它們不能發(fā)生相互作用。這4吏得發(fā)明人試圖尋找一個通過對LOX或NRAGE進行調(diào)控來恢復細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的方法，優(yōu)選對LOX和NRAGE同時進4亍調(diào)控。由這些意外的發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人已經(jīng)找到了一種鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達從而通過它們之間的相互作用恢復對這些蛋白質(zhì)的調(diào)控的活性成分的方法，所述活性成分可以用于制備組合物，特別是化妝組合物或藥用組合物。在該方法中，在表皮細胞增殖減少(皮膚老化、GVH)的情況下，其特征在于表皮過薄和LOX表達的缺失，可以刺激LOX的表達，同時抑制或不抑制NRAGE的表達，通過調(diào)節(jié)LOX和NRAGE的共同表達，重新誘導產(chǎn)生一個調(diào)節(jié)的細胞分化和凋亡區(qū)，從而誘導皮膚增厚。在表皮細胞增殖過度(牛皮癬、濕滲)的情況下，其中NRAGE表達低下，可以刺激NRAGE的表達，同時抑制或是不抑制(輕柔的)LOX的表達，增加細胞的凋亡以重新諸導產(chǎn)生一個調(diào)節(jié)的細胞增殖區(qū)(LOX/NRAGE重合區(qū))，使得細胞增殖過度被停止。在發(fā)生了大量的表皮細胞凋亡的情況下(皮膚老化、皮膚暴露在應急狀態(tài)下，尤其是在暴露于熱的情況下，或是暴露于輻射(特別是太陽輻射)，或是暴露于毒性物質(zhì)(如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì))，或是在移植物抗宿主疾病(GVH中)，在這些情況下，NRAGE是表達過度的，可以在抑制NRAGE表達的同時刺激或是不刺激LOX的表達。4)對LOX參與細胞凋亡的證明發(fā)明人出乎預料之外地發(fā)現(xiàn)，LOX和細胞凋亡之間存在人們之前未知的聯(lián)系。獲得的證據(jù)反映了LOX在角質(zhì)細胞中的抗細胞凋亡作用，具體而言，該作用包括對促凋亡蛋白質(zhì)NRAGE的調(diào)節(jié)。5)活性成分的研究對活性成分的研究是通過特別是對LOX和NRAGE的信使RNA的表達的分析來進行的，特別是在培養(yǎng)的角質(zhì)細胞中，優(yōu)選人類角質(zhì)細胞。在進行有效接觸的充分條件下，使活性待測的活性成分與培養(yǎng)的角質(zhì)細胞接觸足夠的時間。優(yōu)選在不同的濃度下對活性成分進行檢測，從而檢測濃度對細胞的影響。優(yōu)選，本發(fā)明所篩選的活性成分是植物源的，特別是要避免與化學合成有關的問題。來源于植物的活性成分的優(yōu)點是本領域技術(shù)人員公知的，特別是在藥學、皮膚藥學、營養(yǎng)學和化妝學領域中。對活性成分的研究可以通過、特別是通過提取全部RNA、然后進行定量RT-PCR進行。具體而言，優(yōu)選的引物序列是實施例13中使用的序列，但不限于此。每個測定中cDNA的定量通過與肌動蛋白的cDNA比較進行。然后，對活性成分存在時和不存在時的作用進行比較。與對照相比，當NRAGE和/或LOX的表達和/或活性得到調(diào)節(jié)(刺激或抑制)時，可以對活性成分進行定性。優(yōu)選，活性成分使LOX和/或NRAGE的信使RNA的表達調(diào)節(jié)至少50%，或者4吏LOX和/或NRAGE的表達和/或活性調(diào)節(jié)至少15%。根據(jù)本發(fā)明，可以將化合物制備為組合物的形式，特別是化妝組合物、皮膚藥用組合物或藥用組合物。因此，對于這些組合物而言，含有的賦形劑例如為至少一種選自下列的成分軟化劑、乳化劑、表面活性劑、潤濕劑、增稠劑、干燥劑、調(diào)理劑、消光劑(agentsmatifiant)、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、結(jié)構(gòu)調(diào)理劑(lesagentsdetexture)、亮光劑、成膜劑、增溶劑、顏料、著色劑、香料和濾光劑。優(yōu)選，這些賦形劑選自氨基酸及其衍生物、聚甘油、酯類、纖維素聚合物和衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂、乳4失蛋白、乳過氧化物酶、蔗糖M定劑、維生素E及其衍生物、天然和合成蠟、植物油、甘油三酸脂、皂化劑、植物甾醇、植物酯、硅氧烷及其衍生物、水解蛋白質(zhì)、霍霍巴油及其衍生物、親水和疏水的酯類、甜菜堿、M氧化物、植物提取物、蔗糖酯、二氧化鈦、甘氨酸、對羥基苯甲酸酯，優(yōu)選丁二醇、硬脂醇聚醚-2(les"areth-2)、硬脂醇聚醚-21(lest6areth-21)、15-二醇硬脂醚(leglycol國15st6arylether)、十六醇(lec6t6arylalcool)、苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯曱酸丁酯、丁二醇、天然維生素E、甘油、二羥基十六烷基鈉、羥基十六基異丙基異丙醚、甘醇硬脂酸酯、三異壬精、椰油酸辛酯(l，octylcocoate)、聚丙烯酰胺、異構(gòu)石蠟、月桂醇聚醚-7(laureth-7)、卡波姆、丙二醇、丙三醇、紅沒藥醇、硅油、氫氧化鈉、PEG30二聚羥基埂脂酸酯、甘油三癸/辛酸酯、辛酸十六酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、霍霍巴油、硫酸鎂、EDTA、環(huán)甲基珪酮、黃原膠、檸檬酸、十二烷基硫酸鈉、蠟和礦物油、異硬脂酸異硬脂酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇異硬脂酸酯、PEG8蜂蠟、氫化棕櫚芯油甘油西旨(lesglyc6ridesd'huiledecoeurdepalmehydrog6n6e)、氬化棕櫚油甘油酯、羊毛油、芝麻油、乳酸蠟基酯、羊毛醇、蓖麻油、二氧化鈦、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯、等滲鹽溶液。優(yōu)選，上述組合物配制為下列形式溶液(水溶性的或脂溶性的)、乳劑或者水溶性或脂溶性凝膠，特別是罐裝的或是管裝的，特別是沐浴露、、M水、奶液、乳液、微乳或超微乳，尤其是水包油型或是油包水型，或是多重的或是珪化的；洗液，尤其是玻璃瓶裝的，或是塑料瓶裝的或是一個帶劑量的瓶子或是制成噴霧劑；安瓿劑；糖漿；液態(tài)香皂；皮膚用小面餅；軟膏；泡沫劑；注射溶液；無水產(chǎn)品，優(yōu)選液態(tài)、糊狀或是固體，例如條狀的，尤其是口紅形式；粉；片劑。-圖1:NRAGE蛋白質(zhì)序列和示意圖。-圖2:在實施例2中獲得的雙雜交相互作用結(jié)果的平均值。-圖3:鑒定重構(gòu)皮膚中LOX和NRAGE的存在。畫圖4:釆用共聚焦顯微鏡對人皮膚切片中的LOX和NRAGE進行共定位。-圖5:91歲的老年人皮膚切片中LOX和NRAGE的檢測。-圖6:移植物抗宿主疾病患者皮膚切片中LOX和NRAGE的檢測。-圖7:基底細胞癌和棘細胞癌患者皮膚切片中LOX和NRAGE的檢測。-圖8:扁平痺患者皮膚切片中LOX和NRAGE的檢測。-圖9:牛皮痺患者皮膚切片中LOX和NRAGE的定位。-圖10:濕滲患者皮膚切片中LOX和NRAGE的定位。-圖11:用伊文思藍對重構(gòu)皮膚進行染色(表皮層是紅色的，細胞是藍色的，真皮的基質(zhì)纖維是紅色的，真皮層和表皮的融合處用點標記出來)。-圖12:用免疫組織化學方法對重構(gòu)細胞中的細胞角蛋白進行檢測(高度表達的細胞呈紅色，核呈藍色，真皮層和表皮的融合處用點標記出來)。-圖13:用免疫組織化學方法對重構(gòu)細胞中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶進行檢測(高度表達的細胞呈紅色，核呈藍色，真皮層和表皮的融合處用點標記出來)。本發(fā)明的其他目的、特征和優(yōu)點在所屬領域的技術(shù)人員參照下列實施例閱讀了所述解釋性說明后將是顯而易見的，所述實施例僅用于說明本發(fā)明，而不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。這些實施例為本發(fā)明整體的一部分，在描述現(xiàn)有技術(shù)時所^L的任何新特征(包括實施例)就其功能和總體上而言都構(gòu)成本發(fā)明整體的一部分。因此，每個實施例都有一個總的范圍。另外，在這些實施例中，除特別指明外，所有的百分比均是重量百分比，并且除有相反說明外，所有的溫度均是攝氏度，除特別指明外，壓力均指大氣壓。實施例實施例l:使用雙雜交技術(shù)在酵母中克隆NRAGE最初，本發(fā)明在角質(zhì)細胞中對LOX的潛在配偶體進行了研究。采用了在酵母(2HL)中的雙雜交技術(shù)。2HL系統(tǒng)能夠?qū)?誘導物"蛋白質(zhì)和"目標"潛在配偶體之間的相互作用進行鑒定和定性。在這種情況下，誘導物蛋白質(zhì)是一個與Gal4基因的DNA結(jié)合域融合的LOX成熟區(qū)域(結(jié)合域，BD)。與Gal4基因的活化區(qū)域(活化域，AD)融合的目標則是人角質(zhì)細胞的互補DNA文庫編碼的基因。誘導物(LOX)的結(jié)構(gòu)域與所述文庫序列編碼的結(jié)構(gòu)域之間的相互作用，使得Gal4啟動子能夠結(jié)合并活化，從而控制賦予酵母AH109缺陷型的不同基因，這就使得它在缺陷培養(yǎng)基中生長并激活半乳糖苷酶的活性。因此，借助于反應物篩選技術(shù)，鑒定了編碼為LOX配偶體的候選蛋白質(zhì)的基因細胞內(nèi)蛋白質(zhì)黑色素瘤相關的抗原D1(MAGE-D1)或NRAGE(圖1)。在酵母中通過誘導物GAL4BD-hLOXmat(成熟人LOX)雙雜交來篩選角質(zhì)細胞的基因文庫采用在pGAD-10載體中的正常人皮膚角質(zhì)細胞的cDNA文庫。該篩選采用的誘導物為LOXmat，它是由人類的LOX酶的cDNA區(qū)編碼的，這個區(qū)域沒有信號肽也沒有無功能性原區(qū)域。在后期(enphasederri6re)將該核苷酸序列插入到位于pBD-Gal4Cam栽體中的GAL4轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合區(qū)(結(jié)合域BD)。借助于下列誘導物，通過PCR(聚合S^反應)將插入至pGal4-BD載體的Gal4結(jié)合域后的+494至+1254的LOX片段擴增1)gggatcegcatggtgggcgacgac(引入BamHI)2)ttgtcgactaatacggtgaaattgtgc(在保留的終止子中引入Sal1)。最初擴增的片段被插入到TOPO載體中，然后再插入到pGal4-BD中。為了有效表達BD-LOXmat融合蛋白，采用pBD-LOXmat豫導質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母AH109。在AH109酵母中進行轉(zhuǎn)化的酵母的篩選6.88x106cfu(在缺陷培養(yǎng)基中生長)，80個篩選的菌落在含有腺嘌呤，組氨酸，色氨酸和亮氨酸的缺陷培養(yǎng)基中生長，其中23個生長旺盛。實施例2:在哺乳動物(2HM)中通過雙雜交技術(shù)檢測LOX和NRAGE之間的相互作用在脂轉(zhuǎn)染胺存在下，一方面，用質(zhì)粒pAct和pAct-NRAGE轉(zhuǎn)染海拉細胞，另一方面，用pBind和pBind-LOXmat進行轉(zhuǎn)染。48h后測定熒光素酶活性，結(jié)果用相對于對照(pBind空白栽體)的熒光素酶活性表示。該實驗以一式三份進行，所得結(jié)果的均值在圖2中示出。在后期將實施例1中使用的用于酵母雙雜交的hLOX序列插入到pBind載體(Promega，MadisonUSA)的Gal4結(jié)合域，用于哺乳動物的雙雜交相互作用。將捕獲物(laproie)N-RAGE插入到載體pAct(Promega)中的VP16Gal4活化域。起始于氨基酸152(核苷酸458)。實施例3:LOX和NRAGE在哺乳細胞中的免疫共沉淀對于LOX基因(全人的(complethumain)、人成熟區(qū)和鼠成熟區(qū))，通過構(gòu)建物pcLOX32畫V5His(LOX)或PcLOX36畫V5His或pcLOX27-V5His對細胞Cos7(哺乳動物腎的上皮細胞)共同轉(zhuǎn)染，而對于NRAGE，則采用pNM3-HA(完全NRAGE)或pNM7-HA(IRD區(qū))進行。轉(zhuǎn)染在直徑為100mm的培朱mL中采用脂轉(zhuǎn)染試劑進行。48h以后，轉(zhuǎn)染的細胞在500jiL裂解緩沖液進行裂解，細胞裂解物中的蛋白質(zhì)與V5抗體或HA抗體一起溫育，以1/250的濃度向細胞裂解物中加入單克隆V5抗體或HA抗體，在4。C下振蕩1小時30分鐘。形成的免疫復合物(CI)通過與G-瓊脂糖蛋白質(zhì)在4。C下振蕩1小時進行沉淀。用裂解緩沖液洗滌3次(每次10min)并用SDS-PAGE緩沖液提取后，用10%的SDS-PAGE膠對全部免疫復合物進行電泳，隨后進行蛋白質(zhì)印跡檢測。將免疫復合物轉(zhuǎn)移到PVDF(聚乙烯氟)膜，顯色的方法是-對于NRAGE，用稀釋至1/1.000的HA抗體，隨后采用稀釋至1/20.000抗IM^L過氧化物酶抗體-對于LOX，采用稀釋至1/5.000的V5-HRP抗體檢測通過HRP的化學發(fā)光來實現(xiàn)。所獲得結(jié)果表明，NRAGE的完整形式(NM3-HA)和人LOX的完整形式(LOX32H)、人的成熟區(qū)的LOX(LOX36H)和鼠的成熟區(qū)的LOX(LOX27H)均可以免疫共沉淀。此外，NRAGE(NM7-HA)(相應于IRD區(qū))同樣可以與這三個重組蛋白質(zhì)免疫共沉淀，這說明這個區(qū)域與相互作用有關。實施例4:用免疫組織化學方法檢測LOX和NRAGE在重構(gòu)皮膚中的存在使用的重構(gòu)皮膚模型(MIMESKIN⑧，Engelhard里昂，法國)是采用正常人成纖維細胞接種的真皮基質(zhì)(膠原/糖胺多糖/殼聚糖，MIMEDISC,Engelhard里昂，法國)制備的，在它的表面是正常人角質(zhì)細胞。在培養(yǎng)45天(通過暴露于氣-液界面使細胞分化)后，將樣品固定在Bcmin固定劑或曱醛中，然后包封于石蠟中。采用下列抗體，對切片進行免疫標記-根據(jù)Sommer等所述的方法獲得并純化的LOX抗體(血吸重病鼠肝肌成纖維細胞賴氨酸氧化酶的瞬時表達(Transientexpressionoflysyloxidasebylivermyofibroblastsinmurineschistosomiasis),LaboratoryInvestigation69:460-470,1993)-NRAGE抗體(山羊多克隆IgG),畫兔抗山羊第二抗體。用與過氧化物酶綴合的兔IgG抗體并采用二M聯(lián)苯胺作為底物、隨后用蘇木精進4亍反染色(contre-coloration)來檢測免疫復合物。圖3代表重構(gòu)皮膚中LOX和NRAGE的免疫組織化學檢測。用連續(xù)的線標示出表皮和真皮的連接處，真皮的基底部用箭頭標出，角質(zhì)細胞用箭頭的頭標出。LOX在基底層表達，并且在基底層上面的層中也有，但在分化層逐漸消失。NRAGE表達變化較小，在不增殖的基底層上面的層中表達，并且在顆粒層和棘層中表達增強，在此沒有觀察到有LOX的表達。所以，它們與重構(gòu)皮膚MIMESKIN⑧模型表皮的不增殖的基底層上面的層有關。它們的共同存在在人類的正常皮膚中用免疫組織學方法進行了驗證。由此，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，LOX和NRAGE蛋白質(zhì)在表皮中表達，并且在棘層中有一個共同存在的區(qū)域。實施例5:采用共聚焦顯微:鏡對人正常皮膚中LOX和NRAGE的共同存在進行定位冷凍的正常人皮膚樣品來源于外科手術(shù)切除術(shù)(包皮)。使用實施例4的第一LOX和NRAGE抗體來檢測LOX和NRAGE的表達。使用的第二抗體是-驢抗兔IgG-FlTC抗體，熒光標記為綠色；-驢抗山羊IgG-R抗體，蘇丹紅標記為紅色。陰性對照沒有使用第一抗體。用共聚焦垂直顯孩i鏡AXIOPLAN2LSM510ZEISS對兩個標記進行觀察，并且用dZEISSLSM5ImageBrowser軟件獲得圖像。圖4代表使用共聚焦顯微鏡對正常人皮膚中的LOX和NRAGE的免疫檢測。觀察的結(jié)果驗證了實施例4的結(jié)果，在正常人皮膚表皮的棘層中LOX和NRAGE共同存在，LOX和NRAGE幾乎完全共同表達。細胞水平的觀察結(jié)果表明，LOX和NRAGE出現(xiàn)在細胞的外圍(在細胞膜下外圍區(qū)域)，NRAGE同時還出現(xiàn)在細胞質(zhì)中。因此，發(fā)明人證明，在體外證實的它們之間發(fā)生直接相互作用的a在LOX和NRAGE共同存在的表皮中也是具備的。實施例6:不同年齡的人皮膚中LOX和NRAGE的定位根據(jù)實施例4描迷的方法，對來自兩個不同年齡(20歲以下和60歲以上)類型的人皮膚層進行免疫組織學研究。圖5代表對一個91歲的人的皮膚進行的標記。結(jié)果表明，表皮增殖過低、皮膚非常薄(細胞層數(shù)減少)同時角質(zhì)化過度。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)LOX完全缺失(通過采用的技術(shù)可以檢測)。相反，NRAGE表達增加、存在于細胞質(zhì)中并且出現(xiàn)于基底層上面的1^出層中，但沒有梯度表達。實施例7:對移植物抗宿主疾病f或GVH)的人皮膚中的LOX和NRAGE進行檢測根據(jù)實施例4所述的的方法，對患有移植物抗宿主疾病(GVH)的人皮膚切片進行免疫組織學研究。該研究采用了5個不同的患者。圖6表明，LOX在表皮中幾乎完全缺失(在真皮中的表達沒有發(fā)生改變)，而NRAGE則明顯存在，位于細胞質(zhì)中并在基底層上面的基礎層出現(xiàn)。實施例8:對細胞癌和棘細胞癌人皮膚中LOX和NRAGE的檢測根據(jù)實施例4所述的方法，對患有基底細胞癌和棘細胞癌的患者皮膚樣品進行免疫組織學研究。圖7表明在這兩種皮膚癌中研究的結(jié)果-LOX和NRAGE在肺瘤周圍的表皮中的表達逐漸減少畫在攻擊型上皮細胞中LOX和NRAGE缺失-在腫瘤周圍的真皮基質(zhì)反應(lainactionstromaledermique)中LOX表達增加-在腫瘤周圍的真皮基質(zhì)反應中NRAGE缺失實施例9:對扁平癬患者皮膚中的LOX和NRAGE進行檢測才艮據(jù)實施例4所述的方法，對3個患有扁平癬的患者的皮膚切片進行免疫組織學研究。圖8表明，LOX在表皮中的表達急劇減少，甚至于完全消失。該紊亂與NRAGE在表皮中的表達不規(guī)則有關。實施例10:對牛皮癬患者皮膚中LOX和NRAGE的存在進行定位才艮據(jù)實施例4所述的方法，對5個患有牛皮痺的患者的皮膚切片進行免疫組織學研究。圖9是所有這些切片觀察結(jié)果的代表，表明，在表皮中，LOX表達非常強，存在中等量的NRAGE,同時相關區(qū)域有或濃或淡的標記，沒有發(fā)現(xiàn)表達梯度。除這些變化的表達強度特征之外，與正常的細胞相比，相關蛋白質(zhì)存在的位置也出現(xiàn)了很多異常。所以，在患有牛皮縳的皮膚中，LOX主要在表皮下部表達，而NRAGE僅僅在上部表達，蛋白質(zhì)的表達發(fā)生了改變，不存在在健康的皮膚中正常觀察到的重合區(qū)。而在細胞中，NRAGE僅僅在細胞質(zhì)中被觀察到，在細胞膜下的周邊沒有發(fā)現(xiàn)。實施例11:對濕瘆患者皮膚中LOX和NRAGE的存在進行定位根據(jù)實施例4所述的方法，對患有濕滲的患者皮膚進行免疫組織學研究。圖10表明，LOX在表皮中外圍的表達非常強。相反，NRAGE表達很少，僅在細胞質(zhì)中觀察到，這表示LOX和NRAGE在細胞中不再共同存在于一個區(qū)域。實施例12:LOX對細胞凋亡抑制作用的研究.該研究采用單層生長至匯合的分化的人角質(zhì)細胞培養(yǎng)物進行。在正?；蚴谴俚蛲?通ii暴露于45。C士0.5。C，1小時30分鐘進行熱休克)的條件下，加入P-APN(0.02。/。p/v(重量/體積))，通過觀察對LOX活性的抑制，研究LOX對細胞凋亡的作用。對于由于細胞凋亡所引起的細胞死亡的檢測和定量采用TUNEL(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP切口端標記(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabelling))方法,該方法基于伴隨細胞凋亡DNA標i己的消失。第一步，用TdT(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶)標記DNA切口，TdT可以催化熒光素標記的核苷酸與DNA的游離3，OH末端聚合。第二步，與堿性磷酸酶的底物一起溫育，然后通過與堿性磷酸酶綴合的抗熒光素抗體檢測摻入的熒光。借助于在DNase酶溶液中的DNA片段獲得陽性對照，并通過加入磷酸鹽緩沖液獲得陰性對照，由此確認該試驗的有效性。試驗結(jié)果見下表表l無熱休克(標記細胞％)熱休克(標記細胞％)無P-APN6%39%加入P-APN56%81%所得結(jié)果表明-熱休克(45'?！?.5°(:,1小時30分鐘)能誘導標記的細胞凋亡畫用pAPN來抑制LOX的酶活性導致細胞凋亡顯著增加。這些結(jié)果證明了LOX活性的抗細胞凋亡作用。實施例13:使用在含鉤培養(yǎng)基中培養(yǎng)的分化角質(zhì)細胞來分析LOX和NRAGE的信使JINA的表達，加入或者不加入待測活性成分(通過例如定量RT-PCR對活性成分進行篩選)采用青年人正常包皮角質(zhì)細胞對所述活性成分進行檢測(合并的正常A^皮包皮角質(zhì)細胞-Clonetics)于37。C、5。/。C02環(huán)境中，用補充有抗生素的K-SFM(不含角質(zhì)細胞血清的培養(yǎng)基)培養(yǎng)角質(zhì)細胞使其擴增至第3代。將細胞例如以每cm240000個細胞的濃度接種于96孔平板中，培養(yǎng)至80%匯合。隨后，將細胞在高鈣培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)(CaCl21.7mM,37。C，5%CO;s)來誘導細胞分化。在為植物(優(yōu)選^f艮、莖、皮層、花、果實、種子、胚芽、樹膠、滲出物、葉子或整個植物)或者為蛋白質(zhì)的情況下，用于制備活性成分的原料經(jīng)輻射或者不經(jīng)輻射消毒，例如用卩或Y射線以優(yōu)選5kGy的劑量照射，如果需要，隨后研成磨末，例如在室溫下研碎。接著，將得到的粉以2-5%(重量/重量)、優(yōu)選5%(重量/重量)分散于極性溶劑中，例如水或丁二醇，和/或極性溶劑混合物中，優(yōu)選7jC/(醇、二醇或多醇)混合物，所述醇如乙醇、丙三醇、丁二醇和其他二醇、木糖醇等，可以對混合物的比例進行調(diào)整，優(yōu)選7K/丁二醇之比為75/25-50/50的混合物，也可以采用非極性溶劑，例如鏈烷烴，或者釆用非極性溶劑混合物，或者采用極性溶劑和非極性溶劑的混合物。在攪拌(例如磁力攪拌)最少2小時后，通過傾析或離心使樣品澄清，(^優(yōu)選通過0.45nm或0.22nm的濾膜過濾。在為特征分子(例如通過合成或半合成獲得的分子、通過純化獲得的生物分子)的情況下，所述用于制備活性成分的原料用溶劑進行稀釋，優(yōu)選用水或二甲基亞砜(濃度優(yōu)選為1(T6M-10-2M，優(yōu)選為1(^M數(shù)量級，或者基于所述分子的重量計，范圍在1%(重量/重量)-5%(重量/重量)之間)。隨后任選過濾得到的溶液，優(yōu)選通過0.45nm或0.22jun的濾膜過濾。優(yōu)選，根據(jù)上述方法獲得的活性成分的終濃度范圍優(yōu)選在0.01%體積/體積(v/v)-10%(v/v)之間，更優(yōu)選在0.1%-1%(v/v)之間，例如1%(v/v)。細胞培養(yǎng)優(yōu)選在高鉀、無生長因子的K-SFM培養(yǎng)基中進行24小時。將細胞用pH7.4的磷酸鹽緩沖液洗滌，然后在-8(TC冷凍。總RNA的提取根據(jù)生產(chǎn)商的關于96孔平板的說明，采用SV總RNA分離系統(tǒng)(SVTotalRNAIsolationSystem)(Promega，Meylan，法國)4^取總RNA?；虮磉_的改變通過采用實時RT-PCR測定相對于肌動蛋白(管家基因)的每個基因的表達進行，并以相對于未處理的陰性對照的％表示。實時RT畫PCR(O-RT-PCR)將10nL濃度為5ng/jiL的總RNA加至40jiL的PCR混合物(25jiL的SYBRGreenBufferMix2x，0.5jiL酶混合物，最終濃度為0.5nM正向引物，和最終濃度為0.5jiM反向引物，不含RNase和DNase的水適量至RT-PCR各階《^應的條件為逆轉(zhuǎn)錄，50°C，30min;聚合酶活化，95°C，15min;PCR循環(huán)(95。C,15s;60°C，30s;72°C，30s)x50次。融合曲線90°C,lmin30。C，lmin50°C-95°C，10s/。C(融合曲線)刺激或抑制以相對于未處理對照(不存在待檢物質(zhì))的百分比表示。肌動蛋白基因60'C進行雜交正向引物GTGGGGCGCCCCAGGCACCA反向引物CTCCTTAATGTCACGCACGATTTCLOX基因6(TC進行雜交正向引物ACGTACGTGCAGAAGATGTCC反向引物GGCTGGGTAAGAAATCTGATGNRAGE基因60。C進行雜交正向引物TGCACAGACATCAGCAGATGG反向引物TTCACGGATGATATCTCTCAGC內(nèi)披蛋白基因60。C進行雜交正向引物TGTTCCTCCTCCAGTCAATACCC反向引物ATTCCTCATGCTGTTCCCAGTGC考慮到存在的細胞群體，將所有的結(jié)果都以相對于用作報告基因(管家基因)的肌動蛋白的信號表示。根據(jù)該實驗，將T的標準域值C(T)(=循環(huán)域值)設定為0.05到0.01，然后根據(jù)下式計算每個基因的標準單位S基因《x107x(1/2)c(t)基因<<x>>C(T)基一x代表4緣因的焚光信號達到0.01一0.05的域值所需的循環(huán)數(shù)。目標基因值以相對于肌動蛋白的信號通過下式計算R=S基因《x/S肌動蛋白o比較處理樣品和未處理樣品的結(jié)果，《x》表示肌動蛋白基因、LOX基因或NRAGE基因?；钚猿煞值暮Y選每一試驗中cDNA的量以相對于肌動蛋白的cDNA量和陰性對照(不含活性成分)報道。當檢測的結(jié)果的因子值約為2時，則認為結(jié)果具有顯著意義。在測定的120個活性成分中，在所述的試驗濃度和條件下，有3個符合該標準。所述活性成分如下表所示表2<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>優(yōu)選，所述麻黃提取物為整,物的提取物，尤其是4吏用極性溶劑，如水或水/丁二醇的混和物(例如75/25或50/50),優(yōu)選水。優(yōu)選，啤酒花的提取物為嘩酒花雌花序提取物，尤其是使用極性溶劑，如水或水/丁二醇的混和物(例如75/25或50/50),優(yōu)選水。優(yōu)選，大豆提取物為大豆種子提取物，尤其是使用極性溶劑，如水或水/丁二醇的混和物(例如75/25或50/50)，優(yōu)選水。結(jié)論根據(jù)對120種活性成分在不同條件下進行測定，發(fā)現(xiàn)-一種活性成分能夠顯著激活編碼NRAGE和LOX的基因的mRNA的合成率-一種活性成分能夠顯著激活編碼NRAGE的基因的mRNA的合成率，但同時它又不對編碼LOX的基因起作用。-一種活性成分能夠顯著激活編碼LOX的基因的mRNA的合成率，但同時它又不對編碼NRAGE的基因起作用。該研究使得可以篩選能夠調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的活性成分，至少是對角質(zhì)細胞的調(diào)節(jié)。麻黃提取物可以用于例如治療疾病，如治療癌癥，優(yōu)選皮膚上皮細胞癌(基底細胞癌或棘細胞癌)，或是扁平癬，或者任選用于治療GVH的皮膚表象，也可以用于減少皮膚老化。大豆提_取物可以用于例如治療疾病，如治療癌癥，如皮膚上皮細胞癌(基底細胞癌或棘細胞癌)，GVH或扁平痺，或者用于對抗或預防老化。大豆提取物能夠特別是用于對抗細胞過度增殖。哞酒花提取物能夠用于例如治療疾病，如治療癌癥，如皮膚上皮細胞癌(基底細胞癌或棘細胞癌)，濕滲或牛皮癉。啤酒花提取物能夠特別是用于對抗細胞過度增殖。大豆提取物和嘩酒花提取物聯(lián)合可以用于例如治療疾病，如治療癌癥，如皮膚上皮細胞癌(基底細胞癌或棘細胞癌)，或扁平褲。大豆提取物和麻黃提取物聯(lián)合可以用于例如治療疾病，如治療癌癥，如皮膚上皮細胞癌(基底細胞癌或棘細胞癌)，或扁平癬。哞酒花提取物和麻黃提取物聯(lián)合可以用于例如治療疾病，如治療癌癥，如皮膚上皮細胞癌(基底細胞癌或棘細胞癌)，或扁平褲。實施例14:通過定量RT-PCT，分析角質(zhì)細胞在鈣存在下在分化過程中NRAGE和LOX的信4吏RNA表達的動力學，活性成分對表達動力學的影響用于使細胞生長至80%匯合的試驗條件與實施例13中所述的相同。使細胞在鈣(CaCh1.7mM)和活性成分存在下進行分化。在培養(yǎng)2、3和4天后，通過Q-RT-PCR進行分析(實施例13中所述的方法)。另外還測定了9個另外的物質(zhì)。其中一個是桂皮拔，取物，該提取物在所述試驗條件下對LOX和NRAGE具有抑制作用。表3名稱NRAGE擴增作對照LOX擴增作對照桂皮2J0.90.53J化70.74J0.20.5(J:天)優(yōu)選，所述桂皮提取物為樹皮提取物，特別是采用極性溶劑提取，如水或水和丁二醇的混合物(75/25或50/50),優(yōu)選水。結(jié)論桂皮提取物可以用于例如治療疾病，如牛皮褲。桂皮提取物和大豆提取物聯(lián)合(其作用在前述實施例中測定)可以用于治療例如疾病，如GVH的皮膚表象、濕滲、牛皮褲，或者用于減少皮膚老化。實施例15:在沒有鈣的條件下對培養(yǎng)的角質(zhì)細胞的LOX信使RNA的表達進行分析，加入或者不加入活性待測的活性成分(使用例如定量RT-PCR進行分析，對活性成分進行篩選)采用青年正常人角質(zhì)細胞進行這些活性成分的測定，所述角質(zhì)細胞通過將外科手術(shù)獲得的人活組織進行酶化提取、在補充有抗生素的K-SFM(不含角質(zhì)細胞血清但含補充物的培養(yǎng)基)培養(yǎng)基中于37X:、5%C02環(huán)境中培養(yǎng)至單層獲得。在第2代時將細胞接種于24孔平板中，例如以每cm230000個細胞的濃度，然后培養(yǎng)至95。/。匯合。隨后，用pH7.4的磷酸鹽緩沖液洗滌細胞層，優(yōu)選該緩沖液含有鈣和鎂，然后與加入活性待測的活性成分或者加入在不含補充物但是含有抗生素的K-SFM培養(yǎng)基中稀釋的陽性對照。在0.1%體積/體積(v/v)-l。/。(v/v)濃度下對不同來源(例如，來源于植物、生物技術(shù)或合成)的活性成分進行測定。例如，在l。/。(v/v)濃度下，對植物來源的活性成分進行測定，在0.1。/。(v/v)濃度下，對合成分子進行測定，具體而言，植物來源的活性成分是通過在2-5%(p/p)的溶劑或溶劑混合物中浸泡植物(優(yōu)選，根、根狀莖(rhyzome)、莖、皮層、花、果實、種子、胚芽或葉子)，優(yōu)選7jC/(乙醇、二醇或多元醇)(例如乙醇、甘油、丁二醇和其他二醇、木糖醇等)，濃度在100/0-0/100(v/v)。然后將獲得的拔:取物過濾或蒸鎦，回收可溶性組分，優(yōu)選隨后將其通過0.45jim的濾膜過濾。通過在微生物(優(yōu)選乳桿菌屬或酵母菌屬)存在下進行植物提取物的發(fā)酵獲得生物技術(shù)的水解產(chǎn)物。隨后，將這些水解產(chǎn)物經(jīng)過優(yōu)選0.45nm的濾膜過濾。培養(yǎng)優(yōu)選在下列條件下進行37*C，5%C02，不含生長因子但含有抗生素的K-SFM培養(yǎng)基。陰性對照是培養(yǎng)基，或者是含有測試的提取物提取過程中使用的0.1%(v/v)-1%(v/v)溶劑的培養(yǎng)基。優(yōu)選，使用的用于誘導細胞分化的陽性對照是氯化釣溶液(CaCl2，1.7mM的終濃度)。沒有經(jīng)過處理的細胞(陰性對照)在經(jīng)過pH7.4的磷酸鹽溶液洗滌后于-80匸冷凍。在活性成分或?qū)φ沾嬖谙绿幚?4h后，用pH7.4的磷酸鹽溶液洗滌細胞，然后于-80'C冷凍?？俁NA的提取根據(jù)生產(chǎn)商的關于24孔平板的說明，采用SV總RNA分離系統(tǒng)(SVTotalRNAIsolationSystem)(Promega，Meylan，法國)提取總RNA。基因表達的改變通過釆用實時RT-PCR測定相對于肌動蛋白(管家基因)的每個基因表達進行，并以相對于未處理的陰性對照的％表示。實時RT-PCR(O畫RT-PCR)將lOfiL濃度為5ng/nL的總RNA加至40jiL的PCR混合物(25pL的SYBRGreenBufferMix2x，0.5jiL酶混合物，最終濃度為0.5jiM正向引物，和最終濃度為0.5nM反向引物，不含RNase和DNase的水適量至40nL)。RT-PCR各階"^應的條件為逆轉(zhuǎn)錄，50。C,30min;聚合酶活化，95°C，15min;PCR循環(huán)(95。C，15s;60°C，30s;72°C，30s,78°C，30s)x50次。融合曲線90°C,lmin30°C，lmin50°C—95°C，10s/°C(融合曲線)使用的引物肌動蛋白基因60。C雜交正向引物GTGGGGCGCCCCAGGCACCA反向引物CTCCTTAATGTCACGCACGATTTCLOX基因6(TC雜交正向引物ACGTACGTGCAGAAGATGTCC反向引物GGCTGGGTAAGAAATCTGATG考慮到存在的細胞群體，將所有的結(jié)果都以相對于用作管家基因(管家基因)的肌動蛋白的信號表示。根據(jù)該實驗，將T的標準域值C(T)(=循環(huán)域值)設定為0.05到0.01,然后根據(jù)下式計算每個基因的標準單位S基因《LOX》107x(1/2)C(T)基因《LOX》C(T)基因《LOX》代表使《LOX》基因的熒光信號達到0.01-0.05的域值所需的循環(huán)數(shù)。目標基因值以相對于肌動蛋白的信號通過下式計算R=S基因《LOX》/S肌動蛋白o比較處理樣品和未處理樣品的結(jié)果。活性成分的篩選每一試驗中cDNA的量以相對于肌動蛋白的cDNA量和陰性對照(NT)報道。當檢測的結(jié)果的因子值約為2(刺激)或0.5(抑制)時，則認為結(jié)果具有顯著意義。在測定的60個活性成分中，在所述的試驗濃度和條件下，有30個符合該標準。所述活性成分如下表所示表1<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>結(jié)論根據(jù)對60種活性成分在不同條件下進行測定，發(fā)現(xiàn)-3種活性成分能夠顯著抑制編碼LOX的基因的mRNA的合成率-28種活性成分能夠顯著激活編碼LOX的基因的mRNA的合成率。該研究使得可以篩選可能調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的活性成分，至少是對角質(zhì)細胞的調(diào)節(jié)。實施例16:在重構(gòu)皮膚模型中用組織學方法分析與表皮增殖/分化穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)有關的蛋白質(zhì)的表達，與或者不與活性待測的活性成分接觸(比如麻黃提取ft使用的重構(gòu)皮膚模型(MIMESKIN⑧，Engelhard里昂，法國)是采用正常人成纖維細胞接種的真皮基質(zhì)(膠原/糖胺多糖/殼聚糖，MIMEDISC,Engelhard里昂，法國)制備的，在它的表面是正常人角質(zhì)細胞，這些細胞通過用酶處理外科手術(shù)切除的活組織提取的，所述皮膚才莫型用于進行細胞增殖或分化的標記。具體而言，根據(jù)下述方法重構(gòu)皮膚模型-將0.5-1x106個正常人皮膚成纖維細胞接種于膠原/糖胺多糖/殼聚糖基的矩形基質(zhì)上，隨后在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)21天，例如補充有下列物質(zhì)的DMEM-Glutamax培養(yǎng)基10。/。小牛血清、抗壞血酸(優(yōu)選終濃度為lmM)、EGF(表皮生長因子)(優(yōu)選終濃度為10ng/ml)、Normocin(優(yōu)選終濃度是100ng/mL)。-將0.5-1乂106個人類正常的角質(zhì)細胞接種于真皮等同物中，隨后在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，例如補充有下列物質(zhì)的DMEM-Glutamax/HamF-12(比例為3/1v/v):小牛血清、抗壞血酸(優(yōu)選終濃度為lmM)、EGF(表皮生長因子)(優(yōu)選終濃度為10ng/ml)、氫化可的松(優(yōu)選終濃度為0.4ng/ml)、umuline(優(yōu)選終濃度為0.12UI/ml)、isuprel(優(yōu)選終濃度為0.4ng/ml)、triiodothyronie(優(yōu)選終濃度為2xl09M)、腺嘌呤(優(yōu)選終濃度為24.3ng/ml)、Normocine(優(yōu)選終濃度為100ng/ml)。在浸入條件下(encontitionimmerg&)，將培養(yǎng)繼續(xù)7天。隨后將培養(yǎng)物再置于氣-液界面上與浸入培養(yǎng)相同的培養(yǎng)基(但是不加入小牛血清、氫化可的松、isuprel、triiodothyronie和umuline)中14天。最好將活性成分(麻黃提取物)在上述培養(yǎng)基中稀釋至0.5一1%，在分別接種成纖維細胞和角質(zhì)細胞3天后使用(即第3天至第21天和第24天至第42天)。優(yōu)選在重構(gòu)皮膚的出現(xiàn)階段(即第28天至第42天)通過加入終濃度為1.5mM的氯化鈣來制備陽性對照，以刺激表皮的分化。在培養(yǎng)的最后，將這些樣品冷凍、封入到熱敏樹脂中，然后低溫切成5nm的切片。采用下列物質(zhì)對切片進4亍標記一抗人轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶第一抗體—抗人細胞角蛋白-10第一抗體-與alexa-fluor綴合的第二抗體-伊文思藍—4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)對于免疫標記的目測采用光學顯微鏡(Axioskop^lus-Zeiss,德國)進行，對免疫標記的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的定量通過圖像分析進行(Lucia-Nikon,法國)，評價活性成分的治療作用(Holm-sidak統(tǒng)計學檢驗，p<0.01)。表l:對轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶標記的定量強度未經(jīng)活性鈣0.5%的麻黃1%的麻黃成分處理0.1490.0610.0820.2760.0990.0760.1260.1960.0920.0640.0940.192平均值0.1130.0670.1000.221均方根偏差0.031O駕0.0230.048相對于NT100%59%88%196%相對于NT的—無無有顯著性相對于含鉀的169%100%149%330%相對于含鉤的無-無有顯著性這些結(jié)果表明，所述活性成分能夠以劑量依賴方式誘導與陽性對照相同類型的表皮分化。事實上，經(jīng)過處理的皮膚具有更多數(shù)量的表達轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的角質(zhì)細胞層，特別是在顆粒層中。此外，所獲得的標記的強度更高并且更確定，由表皮部分變大說明。定量結(jié)果清楚地表明了，在處理之后、特別是用濃度為1%(誘導2次)的活性成分誘導的蛋白質(zhì)形式。圖11代表用^"文思藍對重構(gòu)皮膚的染色情況(表皮層為紅色，細胞為藍色，真皮基底纖維為紅色，真皮和表皮的連接處用虛線標出)。該結(jié)果表明，活性成分以劑量依賴方式誘導了與陽性對照相同類型的表皮分化。事實上，經(jīng)過處理的皮膚具有更多數(shù)量的分化的角質(zhì)細胞層，特別是同時還觀察到顆粒層厚度的增加。此外，在用麻黃處理的真皮中，成纖維細胞的密度也同樣具有有意義的增加。圖12代表對重構(gòu)皮膚中的細胞角化蛋白-10的免疫組織學檢測(細胞呈很強的紅色標記，細胞核為藍色，真皮和表皮的連接處用虛線標出)。該結(jié)果表明，活性成分以劑量依賴方式誘導了與陽性對照相同類型的表皮分化。事實上，經(jīng)過處理的皮膚具有更多數(shù)量的表達細胞角化蛋白-10的角質(zhì)細胞層，特別是在顆粒層中。圖13代表對重構(gòu)皮膚中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的免疫組織學檢測(細胞呈很強的紅色標記，細胞核為藍色，真皮和表皮的連接處用虛線標出)。實施例17:使用本發(fā)明的產(chǎn)物制備水包油型乳劑形式的化妝用制劑或藥用制劑制劑17a水適量至100丁二醇2甘油二羥基十六基鈉磷酸鹽異丙基羥基十六基醚32乙二醇硬脂三異壬精椰油酸辛酯5旨SE146丁二醇對羥基苯甲酸甲脂對羥基苯曱酸乙酯，對羥基苯甲酸丙酯調(diào)節(jié)pH值到25.5D本發(fā)明產(chǎn)物0.01一10%制劑17b水丁二醇甘油聚丙烯酰胺，石蠟油溶劑月桂醇聚醚-7適量加至100232.8B丁二醇對羥基苯甲酸甲月旨，對羥基苯甲酸乙酯，對羥基苯甲酸丙酯-苯氧基乙醇對羥基苯甲酸曱脂，對羥基苯曱酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯對羥基苯甲酸乙酯2丁二醇0.5本發(fā)明產(chǎn)物0.01一10%制劑17c卡波姆丙二醇甘油水椰油酸辛酯沒藥醇硅油(二甲基珪氧烷)0.5035適量至1000.300.30氫氧化鈉2_苯氧基乙醇0.50對羥基苯甲酸甲脂，對羥基苯甲酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯，對羥基苯曱酸乙酯香料0.30本發(fā)明產(chǎn)物0.01-10%本發(fā)明的實施例18:本發(fā)明產(chǎn)物在油包水型制劑中的用途PEG30-3聚二羥J^更脂酸酯甘油三癸酸酯3辛酸十六酯4己二酸二丁基酯3葡萄籽油1.5霍霍巴油1.5苯氧基乙醇0.5對羥基苯曱酸甲脂，對羥基苯甲酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯對羥基苯曱酸乙酯旦甘油3丁二醇3硫酸鎂化5EDTA仏05水適量至100環(huán)甲基硅氧烷硅油(二甲基硅氧烷)1香料0.3本發(fā)明產(chǎn)物0.01-10%本發(fā)明物的實施例19:本發(fā)明產(chǎn)物在洗發(fā)水和沐浴液形式的制劑中的用途丁二醇0.5對羥基苯甲酸甲脂，對羥基苯甲酸乙酯，對羥基苯曱酸丙酯苯氧基乙醇，0.5對羥基苯甲酸曱脂，對羥基苯甲酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯，對羥基苯甲酸乙酯檸檬酸0.8聚氧乙烯烷基石克酸鈉40.0本發(fā)明產(chǎn)物0.01-10%本發(fā)明的實施例20:本發(fā)明產(chǎn)物在口紅或其他無水產(chǎn)品形式的制劑中的用途A地蠟17.0異硬脂酸異硬脂酯31.5丙二醇二壬酸酯2.6丙二醇異^J旨酸酯1.7PEG-8蜂蠟3.0氬化棕櫚仁油3.4甘油酯氫化棕櫚油甘油酯羊毛油3.4^M由1.7乳酸十六烷基酯1.7礦物油，羊毛醇3.05_蓖麻油適量力口至100二氧化鈦3.9CI15850:10.616CI45410:10.256CI19140:10.048CI774912.048本發(fā)明產(chǎn)物品0.05%本發(fā)明的實施例21:本發(fā)明的產(chǎn)物在水性啫喱型制劑中的用途(眼霜，瘦身乳等)水適量加至100卡波姆0.5丁二醇15苯氧基乙醇，對羥基苯甲酸甲脂，0.5對羥基苯甲酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯對羥基苯甲酸乙酯旦本發(fā)明產(chǎn)物0.01-10%本發(fā)明的實施例22:本發(fā)明的產(chǎn)物在3部分乳劑型制劑中的用途初乳Wl/OPEG-30-二聚羥J^更脂酸酯4癸酸三甘油酯7.5異十六烷15PPG-15石更脂基醚(PPG畫15st6arulether)7.5旦水65.3苯氧基乙醇0.7對羥基苯甲酸甲脂，對羥基苯甲酸丙酯，對羥基苯曱酸丁酯，對羥基苯甲酸乙酯次乳Wl/OAV2AAl乳60泊洛沙姆407苯氧基乙醇對羥基苯甲酸曱脂對羥基苯甲酸丙酯，水20.3-溴-2-硝基-1，3-丙二醇適量加至100卡波姆15三乙醇胺pH6.0-6.5本發(fā)明的實施例23:制M有本發(fā)明產(chǎn)物的藥用制劑制劑23a:制備片劑賦形劑每片的克數(shù)乳糖0.3590.240絲本發(fā)明產(chǎn)物*0.001-0.1*可以例如根據(jù)實施例13所述的提取方法l^進行干燥獲得本發(fā)明產(chǎn)物。制劑23b:制備膏劑賦形劑低密度聚乙烯5.557液體石錯適量加至ioo本發(fā)明產(chǎn)物*0.001-0.1*可以例如才艮據(jù)實施例13所述的提取方法l^進行干燥獲得本發(fā)明產(chǎn)物。制劑23c:制備注射用制劑賦形劑等滲鹽水5mlB本發(fā)明產(chǎn)物*0.001-0.1g*可以例如根據(jù)實施例13所述的提取方法l^進行干燥獲得本發(fā)明產(chǎn)物。實施例24:對含有本發(fā)明成分的制劑的化妝用可接受性的評估毒理學實驗采用根據(jù)實施例2獲得的化合物進行，將化合物以10%的濃度加至0.5。/。的黃原膠啫喱中，評價對兔眼的影響，通過單次經(jīng)口給大鼠施用研究異常毒性，并采用豚鼠進行致敏性實驗。釆用兔進行皮膚初級刺激的評估將上述制備的制劑不經(jīng)稀釋以0.5ml的劑量施用于3只兔的皮膚上，使用的方法是OCDE關于《對皮膚的急性刺激性/腐蝕性》條例中所推薦的方法。根據(jù)1982年2月1日制定并于1982年2月21日在JORF上公布的標準對這些產(chǎn)品進行分類。由實驗結(jié)果可以得出結(jié)論，本發(fā)明產(chǎn)物對皮膚而言屬于無刺激性類。對兔眼部刺激性的評價根據(jù)1987年2月24日第405號OCDE關于《對眼的急性刺激性/腐蝕性》條例中所推薦的方法，將上述制劑純品以0.1ml的量滴入3只兔的眼中一次。由該試驗結(jié)果可以得出結(jié)論，根據(jù)91/326CEE條例的標準，上述制劑純品(未經(jīng)稀釋)對于眼睛是沒有刺激性的。通過對大鼠單次經(jīng)口施用測定異常毒性根據(jù)1987年2月24日的第401號OCDE條例所倡導并適用于化妝用產(chǎn)品的方法，將上述制劑經(jīng)口以5g/Kg體重的劑量單次施用于5只雄性大鼠和5只雌性大鼠。結(jié)果表明，LDo和LD5o均在5000ing/Kg以上。因此，測定的上述制劑不屬于對消化道有危險的制劑類。用豚鼠進行潛在的皮膚致敏性研究對上述制劑進行Magnusson和Kligmann描述的最大P艮度化試驗，根據(jù)OCDE的第406號條例的方案。上述制劑屬于與皮膚接觸無致敏性類。權(quán)利要求1.有效量的至少一種調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.1序列的LOX表達和/或活性和/或調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.2序列的NRAGE表達和/或活性的物質(zhì)在制備用于調(diào)節(jié)LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用從而尤其是在細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡受到干擾、特別是在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的組合物中的用途。2.有效量的至少一種調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.l序列的LOX表達和/或活性和/或調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.2序列的NRAGE表達和/或活性的物質(zhì)在制LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用的組合物中的用途。3.有效量的至少一種調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.2序列的至少一種NRAGE蛋白質(zhì)表達和/或活性并任選調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.1序列的LOX蛋白質(zhì)表達和/或活性的物質(zhì)在制備用于預防或治療其中細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生缺失或改變的疾病的組合物中的用途。4.根據(jù)權(quán)利要求l-3中任一項的用途，其特征在于上皮細胞、特別是角質(zhì)細胞中的LOX的表達和/或活性和/或NRAGE的表達和/或活性被調(diào)節(jié)。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的用途，其特征在于所述物質(zhì)用于調(diào)節(jié)LOX蛋白質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用，所i^目互作用特別是在NRAGE蛋白質(zhì)IRD域中的相互作用。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的用途，其特征在于LOX和NRAGE之間的相互作用包括通過LOX操控的酶催化的NRAGE聚合，特別是二7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的用途，其特征在于LOX和NRAGE劑的H202的產(chǎn)生，所述其他分子特別是中性鞘磷脂酶或NF-kB。8.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的用途，其特征在于LOX和NRAGE之間的相互作用是通過干擾LOX的非酶活性，特別是LOX無功能性原區(qū)域的活性。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項的用途，用于治療和/或預防選自下列的疾病細胞暴露于應急狀態(tài)，特別是細胞暴露于熱，或細胞暴露于輻射，特別是暴露于太陽輻射，或細胞暴露于毒性物質(zhì)，例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì)；皮膚老化；扁平癬；移植物抗宿主疾病(GVH),濕滲；牛皮癬和癌癥，特別是上皮細胞癌。10.根據(jù)權(quán)利要求l-9中任一項的用途，用于在細胞增殖過度的情況下減少增殖，特別是癌癥，特別U底細胞型和刺細胞型上皮細胞癌，特別是皮膚上皮細胞癌。11.根據(jù)權(quán)利要求l-9中任一項的用途，用于在細胞凋亡增加的情況下減少表皮細胞凋亡，特別是在皮膚老化過程中，在皮膚暴露于應急狀態(tài)時，特別是暴露于熱，或皮膚暴露于輻射，特別是暴露于太陽輻射，或皮膚暴露于毒性物質(zhì)，例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì)；或移植物抗宿主疾病(GVH)。12.根據(jù)權(quán)利要求l-9中任一項的用途，用于在表皮細胞增殖過少的情況下增加細胞增殖，特別是在皮膚老化過程中，皮膚暴露于熱，或皮膚暴露于輻射，特別是暴露于太陽輻射，或移植物抗宿主疾病(GVH)。13.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項的用途，用于在下列情況下刺激LOX的表達并任選抑制NRAGE的表達在皮膚老化過程中，在皮膚暴露于應急狀態(tài)時，特別是暴露于熱，或皮膚暴露于輻射，特別是暴露于太陽輻射，或皮膚暴露于毒性物質(zhì)，例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì)，或移植物抗宿主疾病(GVH)。14.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項的用途，用于刺激表皮NRAGE的表達和/或活性并任選抑制LOX的表達和/或活性，從而用于預防或治療牛皮褲和濕滲。15.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項的用途，用于刺激LOX和NRAGE的表M而用于預防或治療癌癥，特別U底細胞型和刺細胞型上皮細胞癌，特別是皮膚上皮細胞癌。16.根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項的用途，其特征在于所述組合物為化妝用組合物、營養(yǎng)用組合物、皮膚藥用組合物或藥用組合物。17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項的用途，其特征在于所述細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡為角質(zhì)細胞的細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡。18.根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項的用途，其特征在于所述物質(zhì)選自下列物質(zhì)或植物的提取物大豆、麻黃(草麻黃(^^Wms/"/c"))、啤酒花(好w附w/"s丄w/w/w51)、肉桂(樟屬(CiVma附o附w附sp/))、白色皂角草(5Vi/wfmZre6/tf"c/re)(石頭花屬((^戸0/7/1//"邵》、紅色檀香(尸,mow7"51s^"勵Vi船)、竭根(5^y畫Virfi》/cfl)、小枸骨葉冬青(PetitHoux)(假葉樹(及"sc"sac"/ea加》、梓樣(C7,ms//附o剛Vi)、Mandarine(橘子(CV""s1r"/c"/"to))、反式畫3-己烯酸乙酯、Khella(阿密茴(^ww/F&"flgfl))、藻酸、胡蘿卜(D""c附CVwy似)、2-甲基丁酸曱酯、中國八角茴香(Badianierdechine)(八角茴香(////"'"附ver"附))、才白(地中'海4白木(61"http://*^^"151^附/^//^1>5))、樹股(unegommeAsaeFoetida)、木糖醇、黑刺李樹(Pnmellier)(黑刺李(/Vww"ss/w'"仍"))、歐洲草莓樹(Arbousier)(草莓樹04W","s朋Wo))、鹿蹄草(Pyrole)(傘形喜冬草(Or/附"/7/r,7fli//w6e//flto))、香車葉草(Asperuleodorante)(/4sper"/flofiton,flf)、艾蒿(Armoise)(北艾(/4fte附ZwVivw/gflr/s))、接骨木(Sureau)(西洋接骨木(ia附6MCMS1"/gm))、中國白菜(必mys7'cfl^Bm柳'cflc"附/e欲/s1va八尸eA:/wmsis)、蘇里南苦木(QuassiadeSurinam)(CVwsifl"附"m)、可可樹(Cacoyer)(可可(77r^6ro附flozc—)、穗絲(5^r/c")、紅色獲葜(Salsepareillerouge)(S附,7flxor""似)、醋栗(Groseille)(紅醋栗(及幼esrw6r"附))、雛菊(Pyrethre)(南歐》泉利^f(Jwflcyc/ms/;jTe^rw/w))、茴香(Fenouil)19.鑒定用于調(diào)節(jié)LOX和NRAGE之間的相互作用從而用于預防或治療至少一種其中細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生缺失或改變的狀態(tài)的活性成分的方法，其特征在于-將活性成分與至少一種能夠表達LOX蛋白質(zhì)(SEQIDNo.1)和/或NRAGE蛋白質(zhì)(SEQIDNo.2)的活細胞接觸，和-分析LOX和/或NRAGE的表達，特別是用于鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達和/或活性從而用于改善細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的活性成分。20.鑒定用于調(diào)節(jié)LOX和NRAGE之間的相互作用從而在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下改善LOX蛋白質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用的活性成分的方法，其特征在于-將活性成分與至少一種能夠表達LOX蛋白質(zhì)(SEQIDNo.1)和/或NRAGE蛋白質(zhì)(SEQIDNo.2)的活細胞接觸，和-分析LOX和/或NRAGE的表達，特別是用于鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達和/或活性從而用于在質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用的活性成分。21.根據(jù)權(quán)利要求19或20的鑒定方法，其特征在于所述平衡為細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡，所述活細胞能夠表達LOX蛋白質(zhì)和/或NRAGE蛋白質(zhì)，或者LOX蛋白質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用在與活性成分接觸前發(fā)生了缺失或改變。22.根據(jù)權(quán)利要求19-21任一項的鑒定方法，其特征在于所述活細胞為上皮細胞，特別是角質(zhì)細胞。23.根據(jù)權(quán)利要求19-22任一項的鑒定方法，其特征在于所述方法包括分析LOX和/或NRAGE的信使RNA的表達。24.根據(jù)權(quán)利要求19-23任一項的鑒定方法，其特征在于所述方法包括采用定量RT-PCR，特別是采用下列引物對于LOX基因正向引物ACGTACGTGCAGAAGATGTCC反向引物GGCTGGGTAAGAAATCTGATG對于NRAGE基因正向引物TGCACAGACATCAGCAGATGG反向引物TTCACGGATGATATCTCTCAGC。25.制備組合物的方法，該方法包括-采用根據(jù)權(quán)利要求19—24中任一項的鑒定方法鑒定調(diào)節(jié)LOX和/或NRAGE表達和/或活性從而用于改善細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的活性成分，-將活性成分與至少一種用于制備化妝用組合物、營養(yǎng)組合物、皮膚藥用組合物或藥用組合物的賦形劑混合，所述組合物用于預防或治療至少一種其中細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生缺失或改變的狀態(tài)。26.制備組合物的方法，該方法包括-采用根據(jù)權(quán)利要求19-24中任一項的鑒定方法鑒定調(diào)節(jié)LOX和/間的相互作用的活性成分，-將活性成分與至少一種用于制備化妝用組合物、營養(yǎng)組合物、皮膚藥用組合物或藥用組合物的賦形劑混合，所述組合物在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下用于改善LOX蛋白質(zhì)和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用。27.對NRAGE進行定位的方法，該方法包括采用至少一種抗NRAGE的抗體檢測和定位NRAGE的存在，特別是在至少包括角質(zhì)細胞的重構(gòu)皮膚才莫型中，或在皮膚切片中，優(yōu)選在證明表皮存在細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡發(fā)生缺失或改變狀態(tài)的人的皮膚切片中。28.NRAGE抗體在制備用于檢測細胞、特別是上皮細胞、優(yōu)選角質(zhì)細胞NRAGE表達的調(diào)節(jié)的組合物中的用途。29.根據(jù)權(quán)利要求28的用途，其特征在于所述組合物用于檢測其中細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡或者LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的狀態(tài)，特別是表皮水平上的缺失或改變，所述狀態(tài)選自細胞暴露于應急狀態(tài)，特別是細胞暴露于熱，或細胞暴露于輻射，特別是暴露于太陽輻射，或細胞暴露于毒性物質(zhì)，例如化學毒性物質(zhì)或微生物毒性物質(zhì)，皮膚老化，扁平癬，移植物抗宿主疾病(GVH)，濕疹，牛皮癬和癌癥，特別U底細胞型或棘細胞型上皮癌，尤其是皮膚上皮癌。全文摘要本發(fā)明涉及一種物質(zhì)在恢復蛋白質(zhì)LOX和NRAGE的正常共同表達和相互作用中的用途。具體而言，本發(fā)明涉及有效量的至少一種調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.1序列的LOX表達和/或活性和/或調(diào)節(jié)具有SEQIDNo.2序列的NRAGE表達和/或活性的物質(zhì)在制備用于調(diào)節(jié)LOX和NRAGE蛋白質(zhì)之間的相互作用從而特別是在LOX和NRAGE之間的相互作用發(fā)生缺失或改變的情況下調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞分化和細胞凋亡之間的平衡的組合物中的用途。本發(fā)明特別是能夠用于預防或治療皮膚老化、扁平癬、移植物抗宿主疾病、濕疹、牛皮癬、癌癥，特別是基底細胞型癌和棘細胞型上皮癌，特別是皮膚上皮癌。文檔編號A61P17/06GK101365421SQ200680049264公開日2009年2月11日申請日期2006年10月26日優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日發(fā)明者C·布埃,C·格萊扎爾,C·雷梅爾米耶,E·佩里爾,I·奧利,O·達穆爾,P·佐默,V·安德烈申請人:巴斯夫美容護理法國公司;科學研究國家中心;克洛德貝納爾里昂第一大學