專利名稱：一種治療冠心病的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
胸痹證(冠心病心絞痛)是臨床上內(nèi)科的常見病和多發(fā)病，其主要發(fā)病學(xué)基礎(chǔ)是心肌供血不足導(dǎo)致的心肌損害，多發(fā)于中老年，流行病學(xué)調(diào)查表明，該病有低齡化傾向，也是目前死亡率較高的疾病，在歐美發(fā)達(dá)國家，因冠心病死亡者幾乎占病死總數(shù)的50％，該疾病是臨床上的常見病和多發(fā)病，美國全國有心肌缺血癥狀的患者達(dá)540萬，每年發(fā)生心肌梗死者超過150萬，死亡達(dá)50萬以上。我國此類疾病的發(fā)生發(fā)展速度更是驚人，隨著人們生活水平的提高，工作壓力的增加，社會競爭的激烈，城市人群中冠心病的發(fā)病人數(shù)和住院人數(shù)已升至內(nèi)科疾病的首位。
冠狀動脈硬化性心臟病其發(fā)病學(xué)、病理學(xué)基礎(chǔ)為冠狀動脈供血不足所導(dǎo)致的心肌損傷，由于發(fā)病部位及程度不同，可表現(xiàn)胸悶、氣短，心前區(qū)疼痛、如隱痛或絞痛、或伴有心率失常、心功能不全，甚至猝死。
因此心肌缺血性疾病的預(yù)防和治療任務(wù)十分艱巨，開發(fā)用于心肌缺血性疾病治療的藥物，滿足臨床的需要，不僅有直接的經(jīng)濟(jì)效益，通過改善病人的心肌缺血的狀況，提高人口健康水平同樣具有廣泛的社會效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種治療冠心病的藥物及其制備方法，以滿足心肌缺血性疾病的預(yù)防和治療的臨床需要，適用于胸痛胸悶，胸脅脹滿，心悸，唇舌紫黯，脈澀的治療。
處方中的中藥均具有活血通脈、行氣、止痛等作用；方中君藥抱莖苦荬菜為長白山特有的中藥材之一，性味苦，辛、微寒。具有涼血、活血、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解痙等功能，含有黃酮類化合物，以其成分生產(chǎn)的苦碟子注射液在治療冠心病心絞痛方面療效明顯確切。深受冠心病患者的歡迎，已成為臨床治療該病的重要中藥制劑。藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，抱莖苦荬菜可明顯增加冠脈血流量，抱莖苦荬菜灌流給藥可使離體豚鼠冠脈流量增加，增加麻醉犬冠脈流量，并能降低心肌耗氧量，靜脈注射可對抗垂體后葉素引起的兔心肌缺血。抱莖苦荬菜可明顯降低動物耗氧量，提高耐缺氧能力，對實(shí)驗(yàn)性心肌梗死有明顯的治療作用，明顯的縮小心肌梗死區(qū)范圍，降低病理性心電圖的Q波出現(xiàn)率和ST段抬高，降低損傷心肌的AST、CK、LDH含量，改善心肌缺血。具有抗血小板聚集，抑制纖維蛋白溶解酶活性，并具有明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用，毒性較低，大鼠口服生藥32g/kg，長期給藥未見毒性反應(yīng)。方中葛根為臣藥味甘，辛、性平，具有升陽通絡(luò)，活血化瘀之功效，是治療冠心病心絞痛的特選藥物之一，有文獻(xiàn)報(bào)道，葛根醇提浸膏片治療冠心病心絞痛有效率達(dá)86％，對缺血心電圖的改善率達(dá)44.4％，對急性心肌梗死有明顯的療效。葛根治療冠心病的主要有效成為葛根總黃酮和葛根素，藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，葛根總黃酮(TPF)具有明顯的擴(kuò)張冠狀動脈，降低血壓、減慢心率，降低心肌耗氧量的作用，對缺血再灌注心肌損傷有明顯的保護(hù)作用，并對心律失常有明顯的改善作用。還具有抗血小板聚集，降低血脂、抗氧化等多種功能，是心血管系統(tǒng)疾病的最常用藥物。醋炙延胡索為佐藥味辛、苦、性溫，功能，活血、行氣、止痛，該品長于止痛，尤宜氣滯血瘀所致的疼痛，是治療胸痹證的首選藥物之一。其主要成分為延胡索甲素、乙素、四氫小檗堿等。藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，延胡索有明顯的鎮(zhèn)痛作用，延胡索乙素為鎮(zhèn)痛的主要有效成分，延胡索還有明顯的鎮(zhèn)靜和催眠作用，實(shí)驗(yàn)表明能明顯的降低小鼠的自主活動，與巴比妥類藥物有協(xié)同作用，并能對抗苯丙胺的興奮作用；延胡索對心血管系統(tǒng)有明顯的作用，延胡索提取物能明顯的擴(kuò)張離體家兔和在體貓的冠狀動脈，降低冠狀動脈阻力，增加血流量。減輕異丙腎上腺素誘發(fā)的大量心肌壞死，改善壞死區(qū)邊緣缺血區(qū)的營養(yǎng)狀態(tài)；及抗心律失常作用。延胡索提取物的毒理學(xué)研究表明，其毒性較低，小鼠口服LD50為100±4.35g/kg，長期毒性試驗(yàn)研究未見明顯的毒性反應(yīng)。
本發(fā)明藥物組分的用量也是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量為在下述重量范圍內(nèi)都具有較好療效抱莖苦荬菜900～1100份，葛根700份～800份，醋炙延胡索450份～550份。
優(yōu)選為抱莖苦荬菜1000份，葛根750份，醋炙延胡索500份。
本發(fā)明藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內(nèi)服制劑。優(yōu)選的本發(fā)明藥物活性組分的制備方法如下
以上三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加6～10倍量水煎煮3次，每次為1～3小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)60％～70％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根加入8～10倍量30％乙醇回流提取2～3次，每次2～3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入8～10倍量65％～75％乙醇回流提取2～3次，每次2～3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉。
優(yōu)選為以上三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加10、8、6倍量水煎煮3次，依次為3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)65％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根加入10倍量30％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入8倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉。
本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如顆粒劑、丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、口服液等。
本發(fā)明在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，以活血化瘀、行氣止痛為治療原則組成的處方，用于胸痛胸悶，胸脅脹滿，心悸，唇舌紫黯，脈澀。經(jīng)臨床多年應(yīng)用，對于氣滯血瘀型冠心病心絞痛具有明顯的療效，本發(fā)明組方合理，工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)明確、可控，制劑穩(wěn)定，藥效作用明確、毒副作用低，臨床服用量小，可靠、方便。臨床成人口服劑量成藥為0.05g·kg-1體重，含生藥量0.375g·kg-1體重。
具體實(shí)施例方式
下面通過有關(guān)具體的實(shí)施例和試驗(yàn)對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但不受限于此。
實(shí)施例1本發(fā)明顆粒劑的制備抱莖苦荬菜900克，葛根700克，醋炙延胡索450克。
以上三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加10、8倍量水煎煮2次，依次為3小時(shí)、2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)60％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根分別加入8、9、10倍量30％乙醇回流提取3次，依次為3小時(shí)、2小時(shí)，1小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入9倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，加入制備顆粒劑的常規(guī)輔料，制成顆粒劑。
實(shí)施例2本發(fā)明膠囊劑的制備抱莖苦荬菜1000克，葛根750克，醋炙延胡索500克。
以上三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加10、8、6倍量水煎煮3次，依次為3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)65％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根加入10倍量30％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入8倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，過篩，分裝入膠囊，制成1000粒，即得。
實(shí)施例3本發(fā)明片劑的制備抱莖苦荬菜1100克，葛根800克，醋炙延胡索550克。
以上三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加10、8、6倍量水煎煮3次，依次為3小時(shí)、2小時(shí)、2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)70％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根加入9倍量30％乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入10倍量65％乙醇回流提取3次，第一次3小時(shí)、第二次2小時(shí)、第三次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉；加入制備片劑的常規(guī)輔料，壓片。
本發(fā)明藥效學(xué)研究結(jié)果及評價(jià)。
實(shí)驗(yàn)材料1、實(shí)驗(yàn)動物(1)Wistar大鼠，雌雄兼用，體重250-270克。由長春高新醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)研究中心提供。合格證號SCXK(吉)2003-0004。
(2)昆明小白鼠雌雄各半，體重23-23g。由長春高新醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)研究中心提供。合格證號SCXK(吉)2003-0004。
(3)犬普通健康家犬，雌雄不限。體重12-17kg。
2、實(shí)驗(yàn)藥品(1)本發(fā)明藥物，(以下簡稱蝶脈心通膠囊)長春中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院新藥中心提供，規(guī)格0.3g/粒，含生藥7.5g。批號030310。
(2)垂體后葉素注射液上海禾豐制藥有限公司。批號010501。
(3)冠心丹參膠囊規(guī)格0.3g/粒，長春海王生物制藥有限責(zé)任公司。批號20030301。
(4)鹽酸腎上腺素注射液上海天豐藥廠。批號020302。
(5)肝素上海生物化學(xué)制藥廠出品(第二軍醫(yī)大學(xué)衛(wèi)輝試劑廠)，配制濃度3％。
(6)氯化硝基四氮唑藍(lán)中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司，規(guī)格0.25g/瓶，批號20030102。
(7)SOD、MDA測試藥盒南京建成生物工程研究所提供。
3、實(shí)驗(yàn)儀器(1)生理記錄儀RM-6000型，日本光電公司。
(2)高速數(shù)據(jù)記錄儀ML-785 Powerlab/8sp型，澳大利亞。
(3)電磁血液流量計(jì)MFV3200型，日本光電公司。
(4)人工呼吸機(jī)3-C型，上海醫(yī)療器械廠。
(5)醫(yī)用離心機(jī)LDZ5-2型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠。
(6)電子稱MP120-1型，上海第二天秤儀器廠。
(7)多功能血液凝集儀TYXN-96型，上海通用機(jī)電技術(shù)研究所。
(8)血液流變儀BV-100型，北京泰諾德。
(9)生化分析儀深圳邁瑞公司產(chǎn)品。
(10)體內(nèi)血栓形成儀BT-87-3型，包頭醫(yī)學(xué)院心血管研究室產(chǎn)品。
(11)恒溫培養(yǎng)箱C-5420型，美國。
(12)醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)BI-2000型，成都泰盟科技有限公司。
實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果一、蝶脈心通膠囊對心肌缺血損傷模型保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)蝶脈心通膠囊對犬急性心肌缺血模型的影響1、試驗(yàn)方法選用健康家犬30只，雌雄兼用，體重12-17kg。隨機(jī)分為5組。每組6只。
采用結(jié)扎犬冠狀動脈前降支法(1)復(fù)制心肌缺血模型。
手術(shù)剝離左冠狀動脈，于前降支的1/3至1/2，或下1/3選一結(jié)扎點(diǎn)穿一絲線，以備結(jié)扎。
記錄一段各測試點(diǎn)(12個(gè)測試點(diǎn)，一個(gè)對照點(diǎn))心外膜電位圖。完畢后結(jié)扎法結(jié)扎冠狀動脈。15分鐘后描記各測試點(diǎn)心外膜電位圖，作為給藥前對照。然后經(jīng)十二指腸給藥，蝶脈心通膠囊給藥組劑量分別為高劑量組1.0g·kg-1體重(折合生藥7.5g·kg-1體重)，中劑量組0.5g·kg-1體重(折合生藥3.75g·kg-1體重)，低劑量組0.25g·kg-1體重(折合生藥1.87g·kg-1體重)。陽性對照組(冠心丹參膠囊)1g·kg-1體重，對照組給予同劑量蒸餾水。然后分別記錄給藥后30、60、120、180分鐘的心外膜心電圖，360分鐘后處死動物取心臟。
觀察指標(biāo)計(jì)算各標(biāo)點(diǎn)的平均ST段抬高的mV值和ST段抬高的總毫米數(shù)(∑-ST)，以結(jié)扎前后∑-ST的差值表示心肌損傷的程度。以ST≥2mV的電極數(shù)為N-ST，表示心肌壞區(qū)的范圍。
同時(shí)分別在冠狀動脈結(jié)扎前，結(jié)扎后180min、360min經(jīng)犬股動脈各取血一次。每次取血5ml，3000r/min離心10min，取血清，液氮速凍，置-80℃冰箱保存待測。測定血清磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。
采用定量組織測定N-BT染色法(2)。于冠狀動脈結(jié)扎后360min將心臟取下，用鹽水沖洗，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌組織，用濾紙吸去水分，稱全心濕重。沿冠狀溝切除心房，留下心室，稱重。將心臟橫切成約1cm厚的心肌片，用生理鹽水洗干凈。在左心室結(jié)扎區(qū)附近同一部位取心肌組織200mg，加冷生理鹽水制成10％組織勻漿液，離心取上清，分光光度法測定心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。
切片心肌放入0.1％的硝基四氮唑蘭(N-BT)。在37℃二氧化碳孵箱中溫育5～7分鐘。染色過程中不時(shí)攪拌染色液，使之與心肌有充分的接觸機(jī)會。染色后立即用水沖洗，洗去多余的染料。數(shù)碼相機(jī)拍攝照片后，醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)掃描每片心肌的總面積和壞死區(qū)面積，累積計(jì)算心肌總壞死面積占整個(gè)心肌總面積的百分比。
2、試驗(yàn)結(jié)果(1)對急性心肌缺血時(shí)心外膜電圖的影響蝶脈心通膠囊高劑量組(1.0g·kg-1)在給藥30-120min內(nèi)，心肌缺血區(qū)心外膜心電圖ST段升高總毫米數(shù)(∑-ST)明顯低于同期模型對照組(P＜0.05，P＜0.01)。中劑量組(0.5g·kg-1)在給藥60-120min內(nèi)∑-ST與同期模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，低劑量組與模型組比較未見顯著性差異(P＞0.05)。陽性對照組(冠心丹參膠囊)動物心肌缺血時(shí)心外膜電圖ST段升高總毫米(∑-ST)在給藥后60-120min與模型組比較有顯著差異。提示蝶脈心通膠囊對犬心肌缺血程度(∑-ST)有明顯的改善作用。結(jié)果見表1。
對心肌缺血范圍(N-ST)的影響觀察表明，蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1給藥120min、180min心肌缺血范圍(N-ST)與對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，中劑量組和低劑量組與對照組比較未見顯著性差異(P＞0.05)，表明蝶脈心通膠囊對減小心肌缺血的范圍有一定的作用。結(jié)果見表2。
表-1 蝶脈心通膠囊對急性心肌缺血模型動物心肌缺血程度(∑-ST mV)的影響(x±s N＝6)

與給藥前比較*P＜0.05，**P＜0.01。
表-2蝶脈心通膠囊對急性心肌缺血模型心肌缺血范圍(N-ST)的影響(x±s，N＝6)

與給藥前比較*P＜0.05。
(2)蝶脈心通膠囊對犬急性心肌缺血區(qū)范圍的影響(染色法)染色法觀察心肌缺血區(qū)范圍結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1和0.5g·kg-1及陽性對照組動物心肌壞死面積的百分比明顯低于模型組(P＜0.05)。低劑量組與模型組比較未見顯著性差異(P＞0.05)。同劑量蝶脈心通膠囊與陽性對照組(冠心丹參膠囊)比較無顯著性差異。結(jié)果表明蝶脈心通膠囊有減小心肌梗死面積的作用。結(jié)果見表3。
表-3 蝶脈心通膠囊對犬急性心肌梗死面積的影響(x±s)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
(3)蝶脈心通膠囊對心肌缺血模型動物血漿酶含量的影響實(shí)驗(yàn)中分別于冠狀動脈結(jié)扎前和結(jié)扎后180min和360min取血，生化分析檢測血漿磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)含量變化。
結(jié)果表明，與結(jié)扎前比較，藥后180分鐘時(shí)，各組動物血清LDH均明顯高于扎前，CK升高不明顯，結(jié)扎后360分鐘檢測表明，各組動物的CK和LDH均明顯高于結(jié)扎前。表明心肌缺血時(shí)伴有血清相關(guān)酶含量增加并與缺血時(shí)間有關(guān)。
組間差異比較表明，與對照組比較，蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1組在藥后180min和360min時(shí)血清CK、LDH含量均明顯低于對照組，0.5g·kg-1組動物在藥后180min時(shí)血漿LDH含量與對照組比較有顯著性差異。藥后360分鐘時(shí)血清CK、LDH含量均明顯低于對照組。0.25g·kg-1組在藥后360分鐘時(shí)血清CK、LDH含量均明顯低于對照組。結(jié)果表明蝶脈通膠囊可明顯降低心肌缺血損傷動物的血清酶含量，提示蝶脈通膠囊對心肌缺血損傷有一定的保護(hù)作用。結(jié)果見表4。
表-4 各組動物血清CK、LDH含量變化的比較(x±s，N＝6)

與結(jié)扎前比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
與模型組比較※P＜0.05，※※P＜0.01。
(3)蝶脈心通膠囊對犬急性心肌缺血模型動物心肌組織SOD、MDA含量的影響結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1組和0.5g·kg-1組動物心肌組織SOD活性明顯高于同期對照組，0.25g·kg-1組與對照組比較未見顯著性差異。MDA含量變化比較表明，蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1組動物心肌組織MDA低于同期對照組，其它兩組也有一定的下降趨勢。表明蝶脈心通膠囊對心肌缺血代謝過氧化物產(chǎn)物的清除及減輕心肌繼發(fā)性損傷有一定的作用。
表-5 蝶脈心通膠囊對心肌缺血模型動物血漿SOD、MDA含量的影響(x±s)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(二)蝶脈心通膠囊對異丙腎上腺素(ISOP)心肌缺血模型的影響1、實(shí)驗(yàn)方法選取標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖正常的40只大鼠，雌雄兼用，體重250-270克，隨機(jī)分成5組對照組、陽性對照組(冠心丹參膠囊)、蝶脈心通膠囊高劑量組、中劑量組和低劑量組給藥組。每組8只。
各組大鼠按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)劑量給藥，蝶脈心通膠囊高劑量組口服給予大鼠給予蝶脈心通膠囊2g·kg-1體重(生藥15·kg-1體重)；中劑量組1g·kg-1體重(生藥7.5g·kg-1體重)，低劑量組0.5g·kg-1體重(含生藥3.8g·kg-1體重)；陽性對照藥組(冠心丹參膠囊)1g·kg-1體重。對照組給予同劑量蒸餾水。連續(xù)給藥14天，并從給藥第12天起，各組大鼠口服給藥同時(shí)，經(jīng)腹腔注射異丙腎上腺素10mg·kg-1體重。連續(xù)注射3天，后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。
大鼠仰臥位固定在鼠固定臺上，在清醒狀態(tài)下記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖。觀察心電圖的變化情況，以心電圖J點(diǎn)上升(＞1.5mv)，或T波低平(＜波高50％)，或雙向、倒置，或ST段下移(＞0.5mv)。有其中一項(xiàng)即為心肌缺血陽性，計(jì)算各組動物心肌缺血發(fā)生率(％)。計(jì)算各組大鼠各S-T段變化的總毫伏數(shù)(∑-ST)，即心肌缺血程度。
經(jīng)腹主動脈取血，生化分析儀檢測血漿磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)。
心肌缺血發(fā)生率經(jīng)X2檢驗(yàn)，各組S-T段變化的總毫伏數(shù)比較用t檢驗(yàn)。
2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)蝶脈心通膠囊對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血發(fā)生率的影響結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊給藥高劑量組和是劑量組大鼠心肌缺血發(fā)生率(％)明顯低于對照組，低劑量組大鼠心肌缺血發(fā)生率(％)也有下降趨勢。但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表6。
表-6 對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血發(fā)生率(N-ST)的影響

與對照組比較*P＜0.05。
(2)蝶脈心通膠囊對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血程度的影響各組大鼠心肌缺血程度(∑-ST)比較表明，蝶脈心通膠囊高劑量組和中劑量組及陽性對照組動物心肌缺血程度(∑-ST)小于對照組。蝶脈心通膠囊低劑量組與對照組比較未見顯著性差異。提示蝶脈心通膠囊對于大鼠靜脈注射異丙腎上腺素所致的心肌缺血有改善作用。結(jié)果詳見表7。
表7 蝶脈心通膠囊對急性心肌缺血程度(∑-ST)的影響(x±s)

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
(3)蝶脈心通膠囊對急性心肌缺血模型大鼠心血漿LDH和CK含量的影響結(jié)果表明大鼠連續(xù)注射異丙1腎上腺素，可造成明顯的心肌損傷，表現(xiàn)為大鼠血漿中CK和LDH水平明顯高于對照組。
與模型組比較，蝶脈心通膠囊2.0g·kg-1組和1.0g·kg-1組可明顯降低實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠血漿中CK含量(P＜0.05)，蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1組大鼠LDH水平低于模型組(P＜0.05)，其它給藥各組CK和LDH也有一定下降趨勢，但統(tǒng)計(jì)學(xué)未見顯著性差異(P＞0.05)。提示蝶脈心通膠囊對于大鼠異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血性損傷有一的保護(hù)作用。結(jié)果詳見附表8。
表8蝶脈心通膠囊對心肌缺血大鼠血漿LDH和CK值的影響(x±s)

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
三、蝶脈心通膠囊對犬血液動力學(xué)的影響1、實(shí)驗(yàn)方法健康成年犬30只，雌雄兼用，體重12～17kg；隨機(jī)分為5組。即(1)空白對照組；(2)蝶脈心通膠囊高劑量組(1.0g·kg-1體重)；(3)蝶脈心通膠囊中劑量組0.5g·kg-1體重)；(4)蝶脈心通膠囊低劑量組(0.25g·kg-1體重)。(5)陽性對照組(冠心丹參膠囊1.0g·kg-1體重)。
試驗(yàn)時(shí)犬經(jīng)靜脈注射戊巴比妥鈉(30mg·kg-1體重)麻醉，右側(cè)臥位固定于手術(shù)臺上，剪去頸部、胸部和后肢內(nèi)側(cè)的毛，分離股靜脈插入靜脈插管，以備輸液；頸部正中切口，分離氣管并做氣管插管，以備連通人工呼吸機(jī)；分離頸總動脈，并插管連通八道生理記錄儀血壓測試系統(tǒng)；在左側(cè)第4～5肋間橫向切開皮膚，分離肌肉，切開胸腔，用開胸器撐開胸腔切口，暴露心臟，同時(shí)開動人工呼吸機(jī)?？v向切開心包膜，縫制心包籃，使心臟固定于適宜位置，然后分離升主動脈根部和左旋支冠狀動脈，分別放置適宜內(nèi)徑的電子流量計(jì)探頭，分別測量心輸出量(CO)和冠狀動脈血流量(CF)。將動脈插管內(nèi)和心室插管內(nèi)分別充滿肝素生理鹽水。動脈插管插入頸總動脈，測量動脈血壓(BP)；左心室插管經(jīng)左心室心尖部插入左心室心腔內(nèi)測量左心室內(nèi)壓(LVSP)。將針狀電極插入犬四肢皮下。記錄第II導(dǎo)聯(lián)心電圖及測量心率(HR)。將左室內(nèi)壓電信號輸入電子微分器測量左室內(nèi)壓變化速率(dp/dt)。上述各項(xiàng)指標(biāo)同步記錄于八道生理記錄儀上，上腹部正中切口，分離十二指腸并做十二指腸插管，以備給藥。手術(shù)完畢后，待動物基本穩(wěn)定后，首先記錄一段給藥前上述指標(biāo)的正常曲線，然后經(jīng)十二指腸給藥，劑量分別為1.0g·kg-1體重(折合生藥7.5g·kg-1體重)，中劑量組0.5g·kg-1體重(折合生藥3.75g·kg-1體重)，低劑量組0.25g·kg-1體重(折合生藥1.87g·kg-1體重)。陽性對照組(冠心丹參膠囊)1g·kg-1體重，對照組給予同劑量蒸餾水。分別記錄給藥后30、60、120、180min上述各項(xiàng)觀測指標(biāo)變化，并對其變化的百分率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間差異的顯著性檢驗(yàn)用t-檢驗(yàn)。
2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)蝶脈心通膠囊對正常麻醉犬血壓、心率的影響連續(xù)觀察表明，各組動物的血壓均呈下降趨勢，其中蝶脈心通膠囊1.0g·kg-1體重和0.5g·kg-1體重給藥組動物血壓在給藥后60分鐘后下降率分別為-12.53±3.09％，-11.10％±4.27，120分鐘后為-14.48％±4.82、-11.18％±8.49，其下降幅度明顯大于同期對照組。表明蝶脈心通膠囊對麻醉犬血壓下降有一定的促進(jìn)作用。其它劑量組不明顯。詳見表8。
給藥后連續(xù)觀察180min，各組動物給藥前后心率未見顯著性變化，結(jié)果表明蝶脈心通膠囊對正常犬心率無明顯的影響。結(jié)果詳見表9。
(2)蝶脈心通膠囊對麻醉犬左室內(nèi)壓及左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt)的影響給藥后連續(xù)觀察180min，蝶脈心通膠囊高劑量在給藥30分鐘后左室內(nèi)壓及左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt)均明顯下降，與同期對照組比較有顯著性差異，持續(xù)到120分鐘。中劑量組在動物給藥30分鐘后左室內(nèi)壓及左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt)均明顯下降，與同期對照組比較有顯著性差異，持續(xù)到60分鐘。低劑量組也有下降趨勢，但與對照組比較未見顯著性差異，提示蝶脈心通膠囊可降低犬左室內(nèi)壓及左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt)。結(jié)果見表10。
(3)蝶脈心通膠囊對麻醉犬主動脈流量的影響結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊高劑量給藥組，藥后30分鐘和60分鐘時(shí)主動脈流量與給藥前比較分別增加10.74±16.40％和13.43±23.9％，明顯高于同期對照組，120分鐘時(shí)，主動脈流量與給藥前比較雖然下降-7.18±9.95％，但與同期對照組(-25.51％±14.75)比較仍有顯著性差異；中劑量組藥后30分鐘和60分鐘時(shí)主動脈流量與給藥前比較分別增加3.51±6.77％和1.52±5.9％，120分鐘時(shí)，主動脈流量與給藥前比較雖然下降-9.77％±8.81％，但與同期對照組(-25.51％±14.75)比較仍有顯著性差異；結(jié)果表明蝶脈心通膠囊可增加犬主動脈流量。結(jié)果見表12。
(4)蝶脈心通膠囊對麻醉犬冠狀動脈流量的影響冠狀動脈血流量監(jiān)測表明，蝶脈心通膠囊高劑量組給藥后30min、60min、120min時(shí)，冠狀動脈流量與給藥前比較分別增加13.13±11.99％、22.40±13.40％、+5.73±25.10％，而同期對照組冠狀動脈流量與給藥前比較分別下降-5.22±14.38、-15.40±14.68、-21.64±13.19，二者比較有顯著性差異。中劑量組給藥后30min、60min、120min時(shí)冠脈流量與給藥前比較分別增加5.73±25.10％，而同期對照組下降8.9％，藥后60min時(shí)冠狀動脈流量變化率分別為+1.08±10.19％、+3.68±17.65％，-0.17±18.58％，明顯高于同期對照組。提示蝶脈心通膠囊能明顯增加冠狀動脈流量。見表13。
(5)蝶脈心通膠囊對麻醉犬總外周阻力的影響結(jié)果表明，高劑量組和中劑量組動物在給藥后30min、60min、120min時(shí)血管總外周阻力均明低于同期對照組，低劑量組總周阻力與對照組比較未見顯著性差異。表明蝶脈心通膠囊可降低實(shí)驗(yàn)動物血管總外周阻力。見表15。
(6)蝶脈心通膠囊對麻醉犬心臟指數(shù)的影響從數(shù)據(jù)中表看出蝶脈心通膠囊對犬心臟指數(shù)影響。給藥前后比較表明，蝶脈心通膠囊高劑量組和中劑量組在給藥后30min、60min、120min可明顯增加動物心臟指數(shù)，表明蝶脈心通膠囊對心臟功能有明顯的調(diào)節(jié)作用。見表16。
(7)蝶脈心通膠囊對麻醉犬心肌耗氧量的影響給藥后連續(xù)觀察覺180min，結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊高劑量組犬在藥后30min、60min和120min明顯降低心肌耗氧量，中劑量組在藥后30min、60min明顯降低心肌耗氧量，低劑量組與對照組間無顯著差異。結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊可不同程度的降低動物心肌耗氧量。見表17。
綜上所述，蝶脈心通膠囊高劑量組和中劑量組可不同程度的降低血壓、心室內(nèi)壓、心室內(nèi)壓上升速率，增加動物主動脈和冠脈流量、降低心肌耗氧量，增加心臟指數(shù)，降低總外周阻力，對動物心率無明顯的影響。
表-9 蝶脈心通膠囊對麻醉犬平均動脈血壓的影響(kPa x±s n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-10 蝶脈心通膠囊對麻醉犬心率的影響(x±s；次/分；n＝6)

表-11 蝶脈心通膠囊對犬左室內(nèi)壓(LDP)的影響(kPa；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-12 蝶脈心通膠囊對犬左室內(nèi)壓最大上升速率的影響(kPa/cm/s；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-13 蝶脈心通膠囊對犬主動脈流量的影響(L/min；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-14 蝶脈心通膠囊對犬冠狀動脈流量的影響(ml/min；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-15 蝶脈心通膠囊對犬總外周阻力的影響(Kpa s/L；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-16 蝶脈心通膠囊對犬心臟指數(shù)的影響(L/min.M2；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
表-17 蝶脈心通膠囊對犬心肌耗氧量的影響(ml/100g/min；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
四、蝶脈心通膠囊對瘀血模型動物血液流變學(xué)的影響本試驗(yàn)以腎上腺素與冰水刺激為致瘀因素復(fù)制大鼠血瘀證動物模型，觀察蝶脈心通膠囊對血瘀證模型動物全血不同切變率下的粘度變化及血漿粘度變化。
1、實(shí)驗(yàn)方法(1)試驗(yàn)動物選用Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重250-300g。隨機(jī)分為6組，每組10只。
(2)試驗(yàn)藥品蝶脈心通膠囊(同前)。
(3)給藥途徑、方法及劑量所有動物灌胃給藥，每天灌胃給藥一次。給藥劑量分別為蝶脈心通膠囊高劑量組2g·kg-1體重(生藥15g·kg-1體重)；中劑量組1g·kg-1體重(生藥7.5g·kg-1體重)，低劑量組0.5g·kg-1體重(含生藥3.8g·kg-1體重)；陽性對照藥組(冠心丹參膠囊)1g·kg-1體重。模型組給予同劑量蒸餾水。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃給藥14天。
(4)血瘀證模型的復(fù)制于末次給藥后30分鐘造模，除空白組外，其它各組動物經(jīng)皮下注射鹽酸腎上腺素1mg/kg。2小時(shí)后，將動物放入冰水中(4℃)浸泡5分鐘，取出，2小時(shí)后再次注射同劑量鹽酸腎上腺素。禁食20小時(shí)后，在乙醚麻醉下經(jīng)腹主動脈穿刺取血，肝素抗凝。血液流變儀測試全血粘度、血漿粘度。
各組測試結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異的顯著性檢驗(yàn)用t檢驗(yàn)。
2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)蝶脈心通膠囊對血瘀證模型動物全血粘度的影響結(jié)果表明，大鼠在腎上腺素及冰水刺激下，全血粘度、血漿粘度與對照組比較均明顯升高。表明皮下注射鹽酸腎上腺素加冰水刺激可造成動物急性血流循環(huán)障礙。
與模型組比較，在同樣造模的條件下，蝶脈心通膠囊(高劑量和中劑量)給藥組及陽性藥對照組動物高切變率、中切變率、低切變率下的粘度的全血粘度與模型組比較均顯著性降低。提示蝶脈心通膠囊可降低瘀血?jiǎng)游锬Ｐ脱焊哒碃顟B(tài)，改善血液循環(huán)，有利于缺血心肌的血液供應(yīng)。結(jié)果見表18。
表-18 蝶脈心通膠囊對血瘀證模型動物全血粘度的影響(x±s)

與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 ***P＜0.001。
與對照組比較※P＜0.05，※※P＜0.01 ※※※P＜0.001。
五、蝶脈心通膠囊對血瘀證模型動物血漿粘度的影響血漿粘度觀察表明，模型組動物血漿粘度明顯升高，與模型組比較，蝶脈心通膠囊高劑量組和中劑量組動物血漿粘度明顯降低，表明蝶脈心通膠囊可降低瘀血模型動物血漿粘度，改善血液循環(huán)。結(jié)果見表19。
表-19 蝶脈心通膠囊對瘀血?jiǎng)游锬Ｐ脱獫{粘度的影響(x±s)

與模型組比較*P＜0.05， **P＜0.01 ***P＜0.001。
與對照組比較※P＜0.05， ※※P＜0.01 ※※※P＜0.001。
六、蝶脈心通膠囊抗缺氧作用的試驗(yàn)研究(一)蝶脈心通膠囊對缺氧環(huán)境下小鼠生存時(shí)間的影響本實(shí)驗(yàn)采用容器密閉法，觀察單位體積內(nèi)小鼠無氧氣補(bǔ)給情況下動物的存活時(shí)間，結(jié)果表明，蝶脈心通膠囊(3g·kg-1體重、2g·kg-1體重)給藥動物在缺氧境下的存活時(shí)間明顯長于空白對照組，表明蝶脈心通膠囊可以不同程度的提高動物耐缺氧能力。
(二)蝶脈心通膠囊對甲狀腺素耗氧動物模型動物的影響結(jié)果表明，與模型組比較，蝶脈心通膠囊給藥各組動物的存活時(shí)間均明顯延長，提示蝶脈心通膠囊可提高耗氧模型動物的耐氧能力。
二、毒理學(xué)研究綜述(一)蝶脈心通膠囊動物急性毒性試驗(yàn)資料綜述為了解蝶脈心通膠囊一天內(nèi)大劑量給藥對實(shí)驗(yàn)動物安全性的影響，根據(jù)毒理學(xué)試驗(yàn)觀察的要求，進(jìn)行相關(guān)的試驗(yàn)觀察，試驗(yàn)中根據(jù)預(yù)試驗(yàn)情況，分組給藥，小鼠高劑量組未見死亡，因此無法計(jì)算該制劑的半數(shù)致死量(LD50)。試驗(yàn)改為動物的最大耐受量(MTD)的測定。結(jié)果受試動物口服蝶脈心通膠囊的MTD為32g·kg-1體重(折合生藥量為227.2g·kg-1體重)，相當(dāng)于成人每日用量0.05g·kg-1體重(生藥量0.35g·kg-1體重)的640倍，未見毒性反應(yīng)及動物死亡。根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)Wright化法則，可以推測出蝶脈心通膠囊口服給藥的LD50必大于32g·kg-1體重。表明該藥口服給藥安全性較大。
(二)蝶脈心通膠囊動物長期毒性試驗(yàn)資料綜述本試驗(yàn)用Wistar大鼠，經(jīng)口服(灌胃)分別給予蝶脈心通膠囊5.0g·kg-1體重(折合生藥量37.5g·kg-1體重)、2.5g·kg-1體重(折合生藥量18.75g·kg-1體重)、1.25g·kg-1體重(折合生藥量9.37g·kg-1體重)。分別相當(dāng)于臨床擬用劑量(0.05g·kg-1體重，生藥量0.375g·kg-1體重)的100倍、50倍和25倍，連續(xù)灌胃給藥26周，可逆性觀察2周。
結(jié)果表明，經(jīng)給藥期及停藥后可逆性觀察，受試動物一般狀態(tài)良好，大鼠食量各組間無顯著性差異，體重增長基本一致，糞便性狀未見異常。血常規(guī)及血液生化檢測均表明該制劑對受試動物血常規(guī)、肝功能、腎功能均無不良影響。肉眼及顯微鏡下病理學(xué)檢查均未見與藥物毒性有關(guān)的病理變化。停藥后無繼發(fā)性毒性反應(yīng)發(fā)生。
試驗(yàn)結(jié)果提示，在相當(dāng)于臨床擬用劑量100、50、25倍的劑量下給藥觀察26周(療程4周)及可逆性觀察2周。受試動物未見與藥物毒性有關(guān)的毒性反應(yīng)。提示該制劑口服安全性較大。
權(quán)利要求
1.一種治療冠心病的藥物，其特征在于它是由下列重量份的原料藥制成的抱莖苦荬菜900～1100份，葛根700份～800份，醋炙延胡索450份～550份。
2.如權(quán)利要求1所述的治療冠心病的藥物，其特征在于它是由下列重量份的原料藥制成抱莖苦荬菜1000份，葛根750份，醋炙延胡索500份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的治療冠心病的藥物的制備方法，包括以下步驟方中三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加6～10倍量水煎煮3次，每次為1～3小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)60％～70％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根加入8～10倍量30％乙醇回流提取2～3次，每次2～3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入8～10倍量65％～75％乙醇回流提取2～3次，每次2～3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉。
4.如權(quán)利要求3所述的治療冠心病中風(fēng)的藥物的制備方法，包括以下步驟方中三味，取1/3量延胡索粉碎成細(xì)粉；抱莖苦荬菜分別加10、8、6倍量水煎煮3次，依次為3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至50℃測相對密度1.10-1.15的清膏，加入乙醇使醇濃度達(dá)65％，攪拌均勻，4℃靜置24小時(shí)，濾過，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；葛根加入10倍量30％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；剩余延胡索加入8倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并濃縮至50℃測相對密度1.30-1.35的稠膏；延胡索細(xì)粉與上述3種稠膏混勻，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療冠心病的藥物及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。它是由下列重量份的原料藥制成的抱莖苦荬菜900～1100份，葛根700份～800份，醋炙延胡索450份～550份。本發(fā)明在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，以活血化瘀、行氣止痛為治療原則組成的處方，用于胸痛胸悶，胸脅脹滿，心悸，唇舌紫黯，脈澀。經(jīng)臨床多年應(yīng)用，對于氣滯血瘀型冠心病心絞痛具有明顯的療效，本發(fā)明組方合理，工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)明確、可控，制劑穩(wěn)定，藥效作用明確、毒副作用低，臨床服用量小，可靠、方便。
文檔編號A61P9/00GK101062110SQ20071005568
公開日2007年10月31日 申請日期2007年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月25日
發(fā)明者張永和, 鄧毅峰, 周鳴, 蓋國忠, 于秀華, 黃曉巍, 王明星, 歐喜燕, 付春張, 玉東, 李煥榮 申請人:長春中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院