專利名稱：Hiv的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療HIV的方法，和POMC和/或CRF肽在制備用于治療 HIV的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
人類免疫缺陷病毒/獲得性免疫缺陷綜合征(HIV/AIDS)的蔓延已經(jīng)在 全世界導(dǎo)致了超過兩千萬例的死亡，并且目前影響著大約4千萬人。這對(duì) 于特別是發(fā)展中國家具有嚴(yán)重的社會(huì)-經(jīng)濟(jì)影響。到目前為止，針對(duì)HIV 和AIDS的唯一有效武器是治療，特別是高活性的抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療 (HAART)。然而，這不是在全世界可用的，具有毒性副作用，且經(jīng)常是最 需要的那些人不能得到治療。因此，對(duì)有效治療性HIV疫苗或預(yù)防性治療 的需要日益變得非常緊迫。
國際專利申請(qǐng)PCT/GB2005/050108描述了促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因 子(CRF)和/或阿黑皮素原(POMC)肽在治療患者一定范圍病癥中的用途。 讀者參考PCT/GB2005/050108，以獲得一系列可以治療的病癥。國際專利 申請(qǐng)WO03/004049和WO03/064472中描述了山羊血清產(chǎn)品的制備；現(xiàn)在 我們相信該血清產(chǎn)品可以是可用于本發(fā)明的CRF和POMC肽的有用來源。
目前我們還發(fā)現(xiàn)CRF和/或POMC肽在治療HIV，尤其是在患者中減 少病毒負(fù)荷和/或增加CD4+和CD8細(xì)胞計(jì)數(shù)中是有用的。
CRF是在下丘腦中產(chǎn)生的肽，并且相信其參與壓力反應(yīng)。人CRF詳 細(xì)記述在OMIM的目錄122560中(人的在線孟德爾遺傳，可通過 http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/進(jìn)入)。人CRF的核苷酸和氨基酸序列也是已 知的，且具有GENBANK登記號(hào)BC011031。人CRF序列和大小數(shù)據(jù)的知 識(shí)容許技術(shù)人員確定關(guān)于非人CRF的對(duì)等信息，所述非人CRF包括山羊 CRF。 CRF還己知為促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)。
"CRF肽"意指任何具有相應(yīng)序列、結(jié)構(gòu)或功能的肽。對(duì)于技術(shù)人員
應(yīng)該清楚的是上文提及的GENBANK目錄號(hào)中對(duì)于人CRF給出的規(guī)范核 苷酸和/或氨基酸序列可以被改變到一定程度而不影響所述肽的結(jié)構(gòu)或功 能。特別地，等位基因的變體和功能突變體包含在該定義中。突變體可以 包括保守的氨基酸取代；以及CRF的片段和衍生物。
據(jù)信向患者施用CRF刺激內(nèi)源CRF的產(chǎn)生，內(nèi)源CRF又刺激阿黑皮 素原(POMC)及其相關(guān)成分肽的產(chǎn)生。
POMC是腦垂體(以及大量其他器官，某些腫瘤諸如黑素瘤，和正常 皮膚細(xì)胞)中產(chǎn)生的肽(激素原)，其為一組對(duì)宿主施加許多影響的促腎 上腺皮質(zhì)激素的前體。POMC是下列各項(xiàng)的前體a， (3， y促黑激素(MSH); 促皮質(zhì)素(ACTH);卩和y促脂解素(LPH);禾b卩內(nèi)啡肽。這些激素全部 是從一個(gè)單一的大前體POMC切割而成，且在本文中稱為"POMC產(chǎn)物"。
人POMC詳細(xì)記述在OMIM的目錄176830中(人的在線孟德爾遺傳， 可通過http:〃www.ncbi,nlm.nih.gov/迸入)。人POMC的核苷酸和氨基酸序 列也已知，且具有GENBANK登記BC065832。人POMC產(chǎn)生具有分子量 為31kDa的糖基化蛋白質(zhì)前體。
"POMC肽"意指任何具有相應(yīng)序列、結(jié)構(gòu)或功能的肽。對(duì)于技術(shù)人 員應(yīng)該清楚的是上文提及的GENBANK目錄號(hào)中對(duì)于人POMC給出的規(guī) 范核苷酸和/或氨基酸序列可以被改變到一定程度而不影響肽的結(jié)構(gòu)或功 能。特別地，等位基因的變體和功能突變體包含在該定義中。突變體可以 包括保守的氨基酸取代。"POMC肽"用于本文時(shí)，指任何起到下列各項(xiàng) 的前體作用的肽至少一種形式的MSH， ACTH，至少一種形式的LPH， 卩內(nèi)啡肽，met-腦啡肽和leu-腦啡肽；和優(yōu)選地所有a，卩和y MSH; ACTH; 卩和YLPH;和卩內(nèi)啡肽，met-腦啡肽和leu-腦啡肽。
發(fā)明概述
按照本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了一種治療HIV的方法，該方法包括 向患者施用促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子(CRF)肽。
該治療可以用于獲得下列效果中的一種或多種病毒負(fù)荷的減少；CD4 細(xì)胞的增多；或CD8細(xì)胞的增多。
我們相信該治療能夠成功地用于對(duì)抗人類患者中的HIV和AIDS。在不希望受到理論束縛的情形中，我們相信該治療通過降低病毒復(fù)制和傳播 所必需的高活性免疫反應(yīng)的水平，而限制并控制病毒在體內(nèi)的傳播。另外， 能夠控制由機(jī)會(huì)感染和隨之發(fā)生的促炎細(xì)胞因子的生成所引起的炎癥，所 述機(jī)會(huì)感染和隨之發(fā)生的促炎細(xì)胞因子的生成支持和刺激病毒復(fù)制和傳
播。同樣地，它減少HIV患者中病毒的負(fù)荷，增加血液中CD4和CD8的 計(jì)數(shù)，改善性欲，剌激食欲并顯著改善HIV/AIDS患者的生活品質(zhì)。
CRF可以是非人CRF;便利地是有蹄動(dòng)物的CRF;且最優(yōu)選地是山羊 的CRF。已經(jīng)令人驚訝地鑒定出山羊血清含有CRF，尤其是當(dāng)山羊受到生 理應(yīng)力如放血或免疫的刺激時(shí)。這為本發(fā)明的藥物組合物提供了便利的 CRF來源。還認(rèn)為CRF在患者中可能具有自身維持功效，因?yàn)槭┯米畛?量的CRP在患者體內(nèi)導(dǎo)致CRF的內(nèi)源生成；因此，最初施用的低水平CRF 可能對(duì)患者具有顯著作用，包括POMC肽水平的增高。當(dāng)然，可以使用獲 自除山羊以外的動(dòng)物的肽，以及重組體或肽的其他來源。
用于本發(fā)明時(shí)，肽的施用可以通過口服或腸胃外實(shí)現(xiàn)。腸胃外遞送的 方法包括局部、動(dòng)脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹 膜內(nèi)或鼻內(nèi)施用。除活性成分外，施用的組合物可以包括適合的藥用載體， 其包括賦形劑和其他促進(jìn)將所述活性化合物加工成為適于藥物施用的制 劑的成分。
利用在適于口服施用的劑量中的本領(lǐng)域已知藥用載體可以配制用于 口服施用的藥物組合物。所述載體能將該組合物配制成為適于患者攝入的 片劑、丸劑、糖錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、結(jié)晶漿液，混懸液等。
可以通過將活性化合物與固體賦形劑組合，在如果需要添加合適的另 外的化合物以獲得片劑或糖錠劑核之后，任選研磨得到的混合物，加工顆 粒的混合物，獲得用于口服應(yīng)用的藥物制劑。合適的賦形劑包括碳水化合 物或蛋白質(zhì)填料，如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露醇，山梨糖醇，來自玉米、 小麥、水稻、馬鈴薯、或其它植物的淀粉；纖維素，如甲基纖維素，羥丙 基甲基纖維素，或羧甲基纖維素鈉；和樹膠包括阿拉伯樹膠和黃芪膠；以
及蛋白質(zhì)明膠和膠原蛋白。如果需要，可以添加崩解劑或增溶劑，如交聯(lián) 的聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂，褐藻酸或其鹽。
可對(duì)糖錠劑核提供合適的包衣，如濃縮的糖溶液，其還可包含阿拉伯
樹膠，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，卡波普凝膠，聚乙二醇，二氧化鈦，漆溶 液，和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？蓪⑷玖匣蝾伭咸砑拥狡瑒┗蛱清V 劑包衣，以用于產(chǎn)品識(shí)別或表征活性化合物的量。
可以口服使用的藥物制劑包括由明膠制備的壓入配合(push-fit)膠囊，
以及由明膠和包衣如甘油或山梨糖醇制備的軟的、密封的膠囊。壓入配合 膠S可包含與下列各項(xiàng)混合的活性成分填料或粘結(jié)劑如乳糖或淀粉，潤 滑劑如滑石或硬脂酸鎂，和任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，所述活性化合物 可被溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪油，液體石蠟，或液體聚乙二醇 中，具有或不具有穩(wěn)定劑。
用于腸胃外施用的藥物制劑包括活性化合物的水溶液。對(duì)于注射，可 將本發(fā)明的藥物組合物配制在水溶液中，優(yōu)選地在生理相容的緩沖液如
Hank's溶液，林格溶液或生理鹽水中。水性混懸液注射液可包含增加所述
混懸液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉，山梨糖醇或葡聚糖。另外，活性 化合物的混懸液可被制備為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸浠鞈乙?。合適的親脂性溶劑或
賦形劑包括脂肪油如芝麻油；或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯；
或脂質(zhì)體。任選的，混懸液還可包括合適的穩(wěn)定劑或增加化合物的溶解度
以允許制備高度濃縮的溶液的試劑。
對(duì)于局部或鼻內(nèi)施用，可在制劑中使用適于穿透特定屏障的滲透劑。 基本上依據(jù)本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)制備方法可以制備用于本發(fā)明的藥物
組合物。
用于本發(fā)明的肽或組合物可以被凍干。這提高產(chǎn)物的儲(chǔ)存期和穩(wěn)定 性，并改善可運(yùn)輸能力。這尤其有利于在溫暖的氣候和不容易獲得冷藏設(shè) 備的地方使用。凍干的產(chǎn)物能夠在施用前重建。
本方法可以進(jìn)一步包括施用一種或多種肽調(diào)節(jié)或釋放因子，其可誘導(dǎo) 患者的各種細(xì)胞對(duì)另外的肽的級(jí)聯(lián)釋放。這類另外的因子優(yōu)選源自與CRF 相同的來源，特別是山羊血清。其中，合適的因子包括a-HLA， TGF-p， 和IL-IO。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本方法可包括施用血管升壓素，卩內(nèi)啡肽和腦 啡肽中的一種或多種。在某些實(shí)施方案中，本方法可包括施用CRF結(jié)合 蛋白，CRF-BP。它結(jié)合CRF并且可作為存儲(chǔ)庫用于對(duì)患者進(jìn)行CRF的隨
后釋放。
本方法還可包括施用POMC肽或POMC產(chǎn)物；某些POMC產(chǎn)物可以 有效施用給患者刺激進(jìn)一步的生產(chǎn)，或其可有效用于在產(chǎn)生內(nèi)源POMC 前獲得理想的應(yīng)答。
本發(fā)明另一方面提供治療HIV的方法，其包括向患者施用POMC肽 和/或POMC產(chǎn)物。
優(yōu)選地，POMC是非人POMC;適宜地是有蹄動(dòng)物POMC;最優(yōu)選地 是山羊POMC。盡管POMC在腦垂體中產(chǎn)生，因而沒有預(yù)測(cè)其存在于血 清中，至少是以顯著的水平存在，然而，令人驚訝地鑒定到山羊血清包括 POMC， POMC-相關(guān)的肽，和與POMC級(jí)聯(lián)相關(guān)的分子，特別是當(dāng)山羊受 到生理應(yīng)力如放血或免疫所刺激的時(shí)候。這為本發(fā)明的藥物組合物提供了 便利的POMC來源。還認(rèn)為POMC在患者中具有自身維持功效，因?yàn)槭?用最初量的POMC后導(dǎo)致患者中內(nèi)源POMC的產(chǎn)生；因此，最初施用的 低水平POMC對(duì)患者具有顯著作用。如同CRF肽一樣，當(dāng)然可以使用除 山羊外的其他POMC肽來源，包括重組的POMC。
據(jù)信，通過對(duì)受試者施用POMC及其相關(guān)分子，肽被蛋白酶水解，以 提供一種或多種以受試者易于利用的形式的POMC的產(chǎn)物；還存在對(duì)刺激 下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA)的分子級(jí)聯(lián)的誘導(dǎo)。
依照本發(fā)明的其它方面，提供了一種治療HIV的方法，其包括施用兩 種或多種a、 P和Y促黑激素(MSH);促皮質(zhì)素(ACTH); P和Y促脂解 素(LPH);和P內(nèi)啡肽?？紤]到在施用時(shí)POMC可能的蛋白水解，可能 通過施用兩種或多種衍生自POMC的個(gè)體激素可以實(shí)現(xiàn)相似的作用?？商?供所列舉的激素作為個(gè)體肽，或作為一種或多種前體分子(例如，POMC 的部分分解產(chǎn)物)。優(yōu)選地，在藥物組合物中包括三種、四種、五種、六 種或七種激素，其(任選地與CRF —起)誘導(dǎo)持續(xù)產(chǎn)生這類分子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。 可以以與一種或多種載體分子的組合來提供各種成分，所述載體分子結(jié)合 一種或多種成分，并且因而作為釋放所述成分的貯存庫或貯存池。載體分 子還可與POMC和其相關(guān)肽組合使用。
POMC或CRF肽的最佳劑量尚未確定；然而可以適宜地對(duì)受試者施 用0.01-10 mg/kg的齊U量;更優(yōu)選0.01-5 mg/kg， 0.025-2 mg/kg，并且最優(yōu)
選0.05-1 mg/kg的劑量。
施用的精確劑量可根據(jù)因素如患者的年齡、性別和體重，施用的方法 和劑型，以及待治療的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性而變化?？梢钥紤]其它因素如 飲食，施用時(shí)間，患者的狀態(tài)，藥物組合和反應(yīng)靈敏性。通過負(fù)責(zé)治療的 臨床醫(yī)師可確定有效的治療方案?？蛇M(jìn)行一次或多次施用，并且典型地， 在一系列至少三次、五次或更多次施用后觀察益處。對(duì)于維持所述組合物 的有益功效而言重復(fù)施用可以是理想的。
盡管可以使用的備選途徑包括肌內(nèi)或損害內(nèi)注射，口服，氣霧劑，腸 胃外或局部途徑，治療可以通過任何有效途徑，優(yōu)選通過皮下注射而進(jìn)行。
盡管可使用其它制劑，治療優(yōu)選作為液體制劑來進(jìn)行。該液體制劑可 以從凍干制劑重建。例如，所述治療可以與適當(dāng)?shù)乃幱幂d體混合，并且可 以配制成在適當(dāng)?shù)慕M合物中的固體(片劑，丸劑，膠囊，顆粒等)用于口 服、局部或腸胃外施用。
本發(fā)明還提供了 CRF在制備用于治療HIV的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明 還提供了 POMC中制備用于治療HIV的藥物中的應(yīng)用。CRF或POMC可 以是被分離的、純化的CRF或POMC，盡管優(yōu)選地，它們與上文所討論 的多種其它成分組合施用。具體地，可使用生物活性載體蛋白和血管升壓 素。
附圖簡述
現(xiàn)在，將僅僅通過參考附圖的舉例方式來描述本發(fā)明的這些和其方
面，在附圖中


圖1-4顯示血清成分的胰蛋白酶消化的質(zhì)譜分析-，
圖5-9顯示在用所述組合物治療后，關(guān)于在患者的炎癥模式(proflle) 中轉(zhuǎn)換的證據(jù)。
發(fā)明詳述
國際專利公布WO03/004049和WO03/064472描述了山羊血清組合物 的生成。以下給出該生產(chǎn)方法的概括。
血清組合物的制備
通過利用肌內(nèi)注射濃度為1(^病毒顆粒/ml的HIV 3b，肌內(nèi)注射混懸 于正常商業(yè)上清液中的裂解的HlV-3b病毒來接種山羊。預(yù)先在6(TC對(duì)該 病毒進(jìn)行了 30分鐘的熱殺死。在最佳程序中，每周注射該山羊，注射4 周，然后在第6周時(shí)，對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行采血，從而獲得該試劑。
在無菌技術(shù)下從山羊采取約400cc的血液。典型地， 一旦血液的體積 得到補(bǔ)充，動(dòng)物可以在10—14天后再次釆血。預(yù)采血的方案對(duì)于刺激血 清的活性組分的產(chǎn)生是有用的。除非另外指明，全部后繼制備步驟優(yōu)選地 在4〔進(jìn)行。然后將所述血液離心以分離血清，然后將血清過濾以去除大 的凝塊和特定的物質(zhì)。然后將血清用過飽和的硫酸銨(47%的溶液，于4 °C，處理，以沉淀抗體和其它物質(zhì)。將得到的溶液在BeckmanJ6M/E離心 機(jī)中于3500rpm離心45分鐘，之后去除上清液。將沉淀的免疫球蛋白和 其它固體物質(zhì)重懸浮于足以再溶解該沉淀的PBS緩沖液(磷酸鹽緩沖液) 中。
然后將溶液針對(duì)PBS緩沖液于4。C進(jìn)行滲濾，截留分子量為10,000 道爾頓。滲濾后，將產(chǎn)品經(jīng)過0.2微米的濾器過濾到無菌的容器中，并將 蛋白質(zhì)濃度調(diào)整至4-5mg/ml。將溶液置于小瓶中，以提供lml的單一劑量， 并在使用前貯存于-22'C。
血清組合物的分析
PCT/GB2005/050108報(bào)道了以該方法制備的血清組合物含有POMC 和CRF肽，并提示了這些肽在該血清的功效中的積極作用。以下給出了 血清分析的概括。
將組合物樣品在凝膠上進(jìn)行大小分級(jí)，并且利用針對(duì)P內(nèi)啡肽的抗體 進(jìn)行蛋白印跡分析。檢測(cè)到強(qiáng)烈的信號(hào)，表明存在e內(nèi)啡肽，盡管表觀分 子量接近31kDa，遠(yuǎn)大于P內(nèi)啡肽的預(yù)期大小。這提示P內(nèi)啡肽作為較大 肽的一部分存在于樣品中；所述大小與POMC的大小相一致。
我們還對(duì)組合物進(jìn)行了質(zhì)譜分析，并且己經(jīng)檢測(cè)到至少兩種POMC-衍生的肽，P內(nèi)啡肽和促腎上腺皮質(zhì)激素相關(guān)的分子。也已鑒定了 CRH-BP (促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白)。
圖1-4
通過Thermofmnegan LCQ質(zhì)譜已在產(chǎn)品中鑒定了 POMC肽和 CRF-BP。CRF主要調(diào)節(jié)ACTH在垂體前葉中的合成和分泌。認(rèn)為除了 CRF 和CRF-BP外施用POMC和/或其組分肽啟動(dòng)了級(jí)聯(lián)效應(yīng)，因而增加了合 成的和持續(xù)升高濃度的POMC肽的產(chǎn)生。CRF-BP具有作為CRF的貯存 庫的能力。
圖l-4顯示獲自產(chǎn)物的胰蛋白酶消化物的質(zhì)譜分析的采樣數(shù)(hits)，所 述產(chǎn)物通過SDS-PAGE從污染蛋白分離。如上所述，這些分子的一些是 POMC級(jí)聯(lián)的誘導(dǎo)劑和調(diào)節(jié)劑。利用更多的焦點(diǎn)分析的進(jìn)一步研究(如肽 分餾，免疫沉淀和濃縮)將揭示存在更多的肽。圖1顯示存在POMC-衍 生的促腎上腺皮質(zhì)激素，圖2顯示存在CRF-BP，圖3顯示存在腦啡肽原 A，圖4顯示存在腦啡肽原B。 CRF-BP的存在提示所述產(chǎn)物中包括一些 CRF，同時(shí)POMC和相關(guān)的肽也清楚地存在。
我們還研究了用所述血清組合物治療對(duì)患者自身的血清的影響。下文 描述這些影響。
在治療的患者中，從促炎性TH-1模式到抗炎性TH-2細(xì)胞因子模式轉(zhuǎn)換的 證據(jù)
圖5顯示在用上述制備的山羊血清產(chǎn)品治療前后兩組患者(健康的志 愿者)血清中TGF-P的水平。兩組患者(每組n-3)表現(xiàn)出對(duì)于產(chǎn)生的TGF-e濃度的不同反應(yīng)，但所有患者都響應(yīng)治療而表現(xiàn)出血清水平的增高(前血 清=治療前患者的血清水平；第2次后和第5次后=第2次和第5次施用 后)。該數(shù)據(jù)顯示治療誘導(dǎo)增加濃度的抗炎細(xì)胞因子TGF-P 。
圖6顯示在治療前(前血清)和治療后在一組患者血清中IL-4的水平。 可見治療后(第2次施用后)，在患者血清(n二5)中IL-4水平顯著增加。 然而，在第5次施用后，在所有患者中IL-4水平下降，但相比于治療前還 是較高。已知IL-4下調(diào)TH-1細(xì)胞的促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生。可能是在所有患 者中所見到的濃度的一致變化與IL-4在TH-1至TH-2轉(zhuǎn)換中的作用相一 致。
圖7顯示在治療前后在一組患者血清中的IL-6水平?？梢娫谥委熀?br> (第2次施用后和第5次施用后)，患者血清(n-4)中IL-6的水平降低。
圖8顯示在治療前后在一組患者血清中的IFN- y水平?？梢娫谥委熀?(第2次施用后和第5次施用后)，在患者血清中IFN- y的水平降低。 圖9顯示人外周血細(xì)胞(PBMCs)的治療在單核亞群中誘導(dǎo)抗炎細(xì)胞因 子IL-10的產(chǎn)生。T和B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分離自從人志愿者獲得的 PBMC。將所有細(xì)胞類型用等劑量的產(chǎn)物處理16小時(shí)，并且利用ELISA 對(duì)它們的上清液分析IL-10含量?？梢娪蒚細(xì)胞群產(chǎn)生的IL-10水平不受 治療的影響，并且在B細(xì)胞中僅誘導(dǎo)了IL-10的少量增加，然而，通過所 述治療在單核細(xì)胞群中誘導(dǎo)了 IL-10濃度的顯著增加。所有的測(cè)定重復(fù)三 次，并+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差來進(jìn)行。這些數(shù)據(jù)是至少三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表。
總結(jié)和結(jié)論
我們?cè)谏衔暮蚉CT/GB2005/050108中顯示了如上所述的山羊血清產(chǎn) 品含有POMC肽和產(chǎn)物，禾flCRF肽。我們還顯示了該血清產(chǎn)品的施用誘
導(dǎo)患者炎性模式的轉(zhuǎn)換。
WO03/004049描述了如上所述制備的山羊血清產(chǎn)品用于治療患有 HIV的患者的應(yīng)用。該公布中提示了該血清對(duì)HIV的有益效果是由于抗 -FAS和抗-HLA分子的存在而產(chǎn)生的；沒有可能存在POMC或CRF的提 示。該公布觀察到經(jīng)該血清給藥的患者經(jīng)歷了 CD4和CD8細(xì)胞計(jì)數(shù)的增 多，病毒負(fù)荷的減少和P24值的降低。
WO02/07760還描述了制備和使用相同的山羊血清產(chǎn)品以治療患有 HIV的患者。該公布報(bào)道了顯示出體外SIV中和作用的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。該公布 的實(shí)施例3描述了以如上所述的相同方法制備山羊血清產(chǎn)品。該血清的施 用導(dǎo)致HIV病毒負(fù)荷的減少(定義為HIV-1 RNA拷貝數(shù)/ml血漿)，和CD4 與CD8細(xì)胞計(jì)數(shù)的增多。再一次，沒有作出這些特性可以由POMC或CRF
肽的存在而產(chǎn)生的提示。
考慮到PCT/GB2005/050108的發(fā)現(xiàn)，以及本文中所提出的數(shù)據(jù)，所述 數(shù)據(jù)是所述山羊血清產(chǎn)品含有POMC肽和產(chǎn)物，和CRF肽，且這些肽和 產(chǎn)物是有活性的生物試劑，所以我們相信這些肽和產(chǎn)物在治療人類患者中
的HIV和/或AIDS可以是有效的，從而除其他效果以外獲得病毒負(fù)荷的 減少，CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)的增多和CD8細(xì)胞計(jì)數(shù)的增多中的一種或多種效果。
還已知HIV誘導(dǎo)多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)損傷，其引起神經(jīng)變性和 一定范圍的神經(jīng)病理。這些包括HIV腦炎、HIV腦白質(zhì)病，軸突損傷，和 彌散性腦灰質(zhì)萎縮，其與不同嚴(yán)重度的神經(jīng)元損失相關(guān)。認(rèn)為后者是由程 序性細(xì)胞死亡過程所引起的。這些病癥導(dǎo)致認(rèn)知功能的喪失和癡呆?？紤] 到所述的POMC/CRF肽對(duì)神經(jīng)變性病癥的作用(見PCT/G2005/050108)， 這樣的肽很可能可以用于減輕HIV/AIDS的這些癥狀以及HIV/AIDS本身。
還報(bào)道了在感染了 HIV的人中的下丘腦垂體腎上腺(HPA)軸有功能 障礙。細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的操作對(duì)控制HIV感染可能具有有益效果。刺激炎性 細(xì)胞上的黑皮質(zhì)素受體可能是改變HIV感染過程的有效治療方法。在本文 所述的血清產(chǎn)品中存在的源自阿黑皮素原的肽包括促腎上腺皮質(zhì)素 [ACTH(l-39)]， a-黑素細(xì)胞-刺激激素[a-MSH(l-13)]，和相關(guān)的氨基酸序 列。黑皮質(zhì)素肽具有有力的抗炎/抗細(xì)胞因子活性。
在感染了HIV的患者體內(nèi)，細(xì)胞因子諸如細(xì)胞白介素l (IL-1)和腫 瘤壞死因子(TNF)可能是有害的。已經(jīng)研究了黑皮質(zhì)素對(duì)IL-l和TNF-a 在HIV患者血液中的產(chǎn)生的作用。當(dāng)在存在或缺乏a- MSH (1-13), a-MSH (11-13)，ACTH(l-24)，或ACTH(l-39)的條件下，在受到LPS刺激的全血 樣品中測(cè)量細(xì)胞因子的產(chǎn)生時(shí)，發(fā)現(xiàn)了黑皮質(zhì)素以濃度依賴的方式減少這 兩種細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在對(duì)正常外周血單核細(xì)胞(PBMC)的獨(dú)立試驗(yàn)中， 發(fā)現(xiàn)a- MSH (l-13)抑制IL-1卩和TNF-a的產(chǎn)生，所述IL-ip和TNF-a是由 HIV包膜糖蛋白gp 120所誘導(dǎo)的。這些結(jié)果提示刺激炎性細(xì)胞中的黑皮質(zhì) 素受體可能是減少促進(jìn)HIV復(fù)制的細(xì)胞因子產(chǎn)生的新型方法。
POMC和CRF肽及產(chǎn)物，單獨(dú)地或者組合地，提供新型藥品，該藥 品具有調(diào)節(jié)HPA軸和起到黑皮質(zhì)素來源和產(chǎn)生黑皮質(zhì)素的調(diào)節(jié)劑作用的 能力。具體地，似乎將高活性促炎性TH1細(xì)胞因子轉(zhuǎn)換為抗炎性TH2模 式。由此調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放。
存在支持這樣的觀念的證據(jù)，所述觀念是單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞的感染 通過多種途徑促進(jìn)HIV的感染。在AIDS中由機(jī)會(huì)感染引起的NF- kB活 化增加CCR5受體的表達(dá)和TNF-a的表達(dá)，這二者容許持續(xù)的HIV感染。
另外，發(fā)現(xiàn)病毒負(fù)荷的減少與對(duì)感染的和/或發(fā)炎的組織的治療相關(guān)；這進(jìn)
一步支持免疫活化和病毒復(fù)制之間的聯(lián)系。因此，用POMC/CRF肽和/或
產(chǎn)物治療患者會(huì)減少患者內(nèi)細(xì)胞的傳染性，并可能減少感染向身體器官如
腦的傳播，所述POMC/CRF肽和/或產(chǎn)物減少組織炎癥和促炎細(xì)胞因子水 平和巨噬細(xì)胞活化水平。
權(quán)利要求
1. 一種治療HIV的方法，其包括向患者施用促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子(CRF)肽。
2. 權(quán)利要求l的方法，其中獲得了下列效果中的一種或多種病毒負(fù) 荷的減少；cd4細(xì)胞的增多；或cd8細(xì)胞的增多。
3. 權(quán)利要求l的方法，其中所述crp是非人crf。
4. 權(quán)利要求3的方法，其中所述crf是山羊crf。
5. 權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括施用一種或多種肽 調(diào)節(jié)或釋放因子。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述因子選自包括a-HLA,TGF-卩，禾口IL-IO的組。
7. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其包括施用血管升壓素，P內(nèi)啡肽 和腦啡肽中的一種或多種。
8. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其包括施用crf結(jié)合蛋白， crf-bp。
9. 前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其包括施用pomc肽或pomc產(chǎn)物。
10. —種治療hiv的方法，其包括向患者施用pomc肽和/或pomc 產(chǎn)物。
11. 一種治療HIV的方法，其包括施用a，卩和y促黑激素(MSH);促 皮質(zhì)素(acth);卩和y促脂解素(lph);和卩內(nèi)啡肽中的兩種或更多種。
12. crf肽在制備用于治療hiv的藥物中的用途。
13. pomc肽和/或pomc產(chǎn)物在制備用于治療hiv的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明描述了利用阿黑皮素原(POMC)和促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)肽及其產(chǎn)物治療HIV的方法，以及所述肽在制備藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61K38/22GK101394862SQ200780007742
公開日2009年3月25日 申請(qǐng)日期2007年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月6日
發(fā)明者迪爾德麗·麥金托什 申請(qǐng)人:艾姆斯科有限公司