專利名稱：：顯示親神經(jīng)活性、神經(jīng)調(diào)節(jié)劑活性、腦血管活性和抗卒中活性的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是藥理學(xué)領(lǐng)域，并涉及這樣的藥物制備物，其對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和腦血管功能狀況顯示復(fù)雜的多元活性。現(xiàn)有技術(shù)大量涉及不同藥理學(xué)基團(tuán)的斜申經(jīng)和腦血管藥物帝躋做用于以不同病理的卒中(stroke)為主的腦血管疾病CNS病理的錢療法中。每一種包括在綜合治療當(dāng)中的不同藥理學(xué)方向的制備物均意在特異性消除精神神經(jīng)綜合征和疾病的癥狀群中的某些或其他癥狀的強(qiáng)度。多藥療法具有一系列顯著的缺點(diǎn)，這些缺點(diǎn)與制定合理的給藥劑量方案以及同時(shí)應(yīng)用多種藥物制齊啲方案的復(fù)雜性相關(guān)，又與預(yù)測它們的功效和耐體以及可能的協(xié)同畐IJ作用相關(guān)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的^人神經(jīng)精神藥理學(xué)角度開^M用的藥物制劑。如果這個(gè)目的可以達(dá)到，將可達(dá)到以下的技術(shù)效果藥物制劑在單一治療時(shí)能夠?qū)δX神經(jīng)和腦血管疾病中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和腦血管功能狀態(tài)產(chǎn)生復(fù)雜效果，以及具有卩l(xiāng)lh中樞神會(huì)孫統(tǒng)(CNS嫉病病理學(xué)發(fā)展的治療和預(yù)防特性。上述技術(shù)效果得以實(shí)現(xiàn)依賴于N-氨甲酰基-甲基-4-苯基-2-吡咯垸酮(Phenotopil)作為顯示斜申經(jīng)一神經(jīng)調(diào)節(jié)劑活性、腦血管活性和抗卒中活性的藥劑的應(yīng)用，已知N-氨甲?；谆?4-苯基-2-吡咯烷酮用作抗高血壓和抗^L藥劑(在缺血性心臟病(IHD)中)(USSR發(fā)明人i正書No.797219A61K21/40,3C07D207/26;RF專利No,2183117,ClA61K31/40;iaE專利No.002380^1A61K31/4015);具有益智活性的藥劑和藥物組合物(RF專利No.2050851,ClA61K31/40;RF專利No,2240783,ClA61K9/20，31/40A61P25/28);和用作具有抗抑郁活性的藥劑(RF專利No,2232578，Cl^A61K31/41,52A61P25/24)。該藥劑對(duì)于急性腦血管疾病病理的效果沒有被記載。提議使用N-氨甲?；?甲基-4-苯基-2-吡咯烷酮(Phenotropil)作為親神經(jīng)性神經(jīng)調(diào)節(jié)劑型腦血管活性抗卒中治療劑，與應(yīng)用涉及不同藥理學(xué)基團(tuán)的藥劑相比，它具有很多優(yōu)點(diǎn)，也就是顯著的多重療效；服用簡單且可以任意藥物形式應(yīng)用；相對(duì)低毒性(LD30=800mg/Kg);沒有顯著的負(fù)作用；依療樹頓沒有成癮性、繊性或耐藥性，該藥劑在有機(jī)體內(nèi)不發(fā)生代謝并且以原型排出體外。作為評(píng)估Pheno加pil戶腿效果的模型，選擇了腦血管病理的最嚴(yán)重的和最常見的形式一卒中，對(duì)該疾病迄今為止仍沒有療效顯著的治療方法。在發(fā)達(dá)國家，腦血管疾病在引起死亡的疾病中祠瞎第三位，并且通常較其他疾病更容易致殘。與大多數(shù)其他疾病相比，大量勞動(dòng)力人口數(shù)量的損鄉(xiāng)成了更嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)敏參見-Ye工Gusev，V工Skvortsova等，2003;N.V.Vereschagin,N.V.Varakin，2001;T.R.Harrison等,1997)。在卒中過程中存在兩個(gè)主要的發(fā)展方向溶栓、神經(jīng)調(diào)節(jié)和神經(jīng)傲戶。溶栓的效果已經(jīng)被多數(shù)臨床研究證實(shí)；對(duì)于顯示神經(jīng)調(diào)節(jié)劑活性和神經(jīng)〈^戶活性的藥學(xué)藥劑，目前正在積極地尋找。研究按MRF衛(wèi)生部在2000年出版的新藥理學(xué)基礎(chǔ)中關(guān)于實(shí)驗(yàn)(臨床前期)研究手冊中的方法執(zhí)行。研究得出的結(jié)果已經(jīng)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每組的均值和標(biāo)準(zhǔn)差都已經(jīng)被計(jì)算。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)準(zhǔn)確性已經(jīng)MStudentt檢驗(yàn)、percent-square檢驗(yàn)禾隨ann-Whitney檢^i平估。組間差異準(zhǔn)確性被認(rèn)定為p〈0.05。(參見V.P.Borovkov2001;S.Glanz,1999)。實(shí)施例1.禾傭出血性卒中模型(大腦內(nèi)創(chuàng)傷后血腫)5開^Phenotropil的抗卒中活性實(shí)驗(yàn)4頓體S/人200克到250克的白色遠(yuǎn)系繁殖的雄性大鼠。大鼠飼難人工飼養(yǎng)環(huán)境，自由進(jìn)食和7jC，在晝夜自然交替環(huán)境下。為了在用7jC合氯斷400mg/Kg)麻醉的大鼠中產(chǎn)生出血性卒中(HS)，對(duì)大鼠進(jìn)行腦功能區(qū)定^^頁骨切開術(shù)(stereotaxiccraniotomy),之后用mandarin刀破壞內(nèi)囊區(qū)域中的腦組織，從大鼠舌下取的血(0.02至0.03mL)被注射至U破壞區(qū)域。如此，局部自發(fā)出血性雙側(cè)卒中在內(nèi)囊區(qū)i,生(直徑2mm，深度3mm)并且不損害J^局部的大腦結(jié)構(gòu)和新皮層。假手術(shù)(falselyopemted)的動(dòng)物和喂食生理鹽7K的HS動(dòng)物作為對(duì)照組動(dòng)物。術(shù)后5小時(shí)Phenotropil以100mg/Kg劑量應(yīng)用特殊的管子胃內(nèi)給藥，并且之后在每日的該時(shí)間士3備合藥、機(jī)7天。手術(shù)期間和術(shù)后立即有40%大鼠死亡。觀，S后一小時(shí)內(nèi)存活的大鼠14天。Phenotropil的影響用動(dòng)物的存活率、在改gJ.V.Gannushkina(1977)禾PRotarod檢驗(yàn)中記為McGrow卒中指^fi平分的神經(jīng)缺陷7K平、在^H上弓l體向上(chinningup)測試中的肌張力(musculartonus)的保持、在曠iii微中的定向和探查行為來ifi古。認(rèn)知功能的研^l過被動(dòng)回避反應(yīng)的條件反執(zhí)CRPA)在標(biāo)準(zhǔn)個(gè)晰standardunit)上進(jìn)行。CRPA重復(fù)性測i攻為維新己憶曲線(memoiytrail))在訓(xùn)練后24小時(shí)內(nèi)以及術(shù)后第3、7禾tU4鄉(xiāng)行。當(dāng)評(píng)佐洞穴HM(buiTow-reflex)維持時(shí)，記錄首7^SA暗室的潛伏時(shí)間。術(shù)后第一天在幾乎所^tHS動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)生M7K背景下的神經(jīng)學(xué)異常(9(P/。到100%)，出現(xiàn)行為軟弱無力、動(dòng)作遲緩，四肢虛弱，而在假手術(shù)的大鼠中出顆Lh3S癥狀的只占30%到40%(見表1)。Phenotropil背景的HS病例中，神經(jīng)學(xué)異常比例為40%到50%并且與假手術(shù)組大鼠差異不明顯。神經(jīng)學(xué)異常表現(xiàn)為環(huán)形場ite動(dòng)(manegemovement),并且四肢麻，接^Pheno加pil治療的卒中的動(dòng)物中缺失，而細(xì)S+生理鹽7jC組中，出現(xiàn)深度神經(jīng)學(xué)異常的動(dòng)物的比例分別為40%、30%和30%。因此，細(xì)S急性期，Phenotropil表現(xiàn)出明顯的斜申經(jīng)活性和腦血管活性艦少了神經(jīng)狀態(tài)的異常。HS大鼠肌張力的記錄顯示在卒中后第三鄉(xiāng)張力的減弱見于平均40%到50%的大鼠，和在第七天和第十四天見于38%到36%大鼠(見表2)。接效henotropil的大鼠中在42%到33%的動(dòng)物中觀察至1』肌張力減弱。^Phenotropil弓l入七天后發(fā)現(xiàn)25%的大鼠肌張力減弱，并且第十四天時(shí)這個(gè)數(shù)字降到16%，與卒中組相比這個(gè)數(shù)字是統(tǒng)計(jì)學(xué)上可靠的(見表2)。HS大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力異常動(dòng)力學(xué)的研^M示，錢一天到第三天，運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)異常見于48%到50%的動(dòng)物，在第七天至牒十四天見于38%到45%的存活動(dòng)物(見表3)。Phenotropil劑量100mg/Kg時(shí)能降低大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)異常。在卒中后第七天到第十四天獲得顯著的和統(tǒng)計(jì)學(xué)上可靠的結(jié)果(見表3)。嚙齒類動(dòng)物的洞穴g，有限陰暗空間的天生g。在術(shù)后第一天，動(dòng)物維持洞穴^M旦是自S組和一次應(yīng)用Pheno加pil的背景下出現(xiàn)反射的潛伏時(shí)間延長了(見表4)。研究中發(fā)現(xiàn)在齡實(shí)驗(yàn)中一l[頓生理鹽7K(原始(intact)動(dòng)物)的對(duì)照組大鼠，當(dāng)CRPA在訓(xùn)練(在暗室黑暗區(qū)域的痛覺苦剌激)后24小時(shí)重復(fù)時(shí)，80%的動(dòng)物記住了目前的卒中并且^^觀察時(shí)間內(nèi)不SA"危險(xiǎn)'的暗室。在訓(xùn)練后一天，對(duì)照正常大鼠和假手術(shù)大鼠很好的記起了在暗室中目前的卒中，并且70%到80%的動(dòng)物沒有m危險(xiǎn)區(qū)域。其他大鼠iSA黑暗區(qū)域的潛伏期很長(見表5a)。出血性卒中(HS)大鼠iSA暗室的潛伏時(shí)間在訓(xùn)練一天后確實(shí)減少。僅有25y。的動(dòng)物沒有iSA暗室，也就是，它們回憶起目前的卒中，而75。/。大鼠的記〖乙被干擾(見表5a)。Phenotropil在100mg/Kg劑量下，在術(shù)后5小時(shí)內(nèi)一次給藥(訓(xùn)練后一天內(nèi)重復(fù)進(jìn)行CRPA)，使得獲得記憶的動(dòng)物數(shù)量增加到40%(^動(dòng)物一25%)，并延長了iSA黑暗危險(xiǎn)區(qū)域的潛伏時(shí)間。然而，Phenotropil—次給藥后的該有益效果與原始動(dòng)物中的該交娘相比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是不可靠的，但是與HS組大鼠比較，它使得駄暗室的潛伏時(shí)間延長48%并且使得一天后保辦己憶的動(dòng)物的數(shù)量增加60%。對(duì)記憶受損的HS動(dòng)物進(jìn)行手術(shù)后3天，戰(zhàn)的數(shù)字在同樣水平(見表5a)。在注射3處henotropil后，發(fā)51iaA暗室的潛伏時(shí)間延長，不SA暗室的動(dòng)物的ia也增加了，但是即使Phenotropil的這些效果與假手術(shù)組相比也是統(tǒng)計(jì)學(xué)上不可靠的(見表5a)，但是與使用生理鹽7jC的HS組相比是有顯著區(qū)別的和可靠的。在訓(xùn)練后的7和14天內(nèi)，原始動(dòng)物和假手術(shù)動(dòng)物回憶起了不良條件皿行CRPA(見表5b)。與它們相比，細(xì)S和訓(xùn)練后第7到14天，動(dòng)物對(duì)于暗室中疼痛朿微的記l"乙被有效地干預(yù)。而且，記〖乙受損盼瞎況與術(shù)后1和3天內(nèi)的數(shù)字相比更為顯著。因此，在7天內(nèi)僅有16%的動(dòng)物回憶起了不良刺激，而其他大鼠已經(jīng)在28秒之內(nèi)iSA危險(xiǎn)黑暗區(qū)域。在14天內(nèi)僅有9X保歉RPA(見表5b)。Phenotropil以100mg/Kg劑雖續(xù)7天被糊到大鼠體內(nèi)，細(xì)S術(shù)后第7天和第14天在卒中后期對(duì)記憶異常進(jìn)行魏。發(fā)現(xiàn)在該藥齊啲影響下回憶起不良割牛的大鼠在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有明顯可靠的增加(升到40。/。)(對(duì)HS大鼠一9%)。3SA危險(xiǎn)暗室的潛伏時(shí)間與HS-大鼠的相比明顯增加3銜見表5b)。因此，在二次湖后Phenotropil能夠重建在被動(dòng)避免^f牛礎(chǔ)豐翻中的出血性卒中所干擾的記fc。曠場法斜牛中定位和探查行為的研艦示，HS大鼠中在術(shù)后第一琉動(dòng)活性和探査行為的總指標(biāo)有顯著的下降(幾乎2銜。類似的大鼠標(biāo)己行為也扭S后第14天被觀察到，盡管動(dòng)物稍微活躍一對(duì)見表6)。當(dāng)HS后3^Phenotropil的效果被記錄，它能增加行為總指標(biāo)至原始動(dòng)物和假手術(shù)組動(dòng)物的行為指標(biāo)水節(jié)見表6)。在注射后7天記:^Phenotropi啲效果，運(yùn)動(dòng)行為的總指標(biāo)與HS組相比增加了2.7倍(見表6)。在術(shù)后14^Phenotropil的iSSS動(dòng)行為的效果被維持。在表7中可以看出在術(shù)后14天中假手術(shù)組大鼠有一只動(dòng)物死亡。HS+生理鹽水組在第一天23%的動(dòng)物死亡，到第14天這個(gè)系數(shù)達(dá)到57%。Pheno加pil以100mg/Kg劑量，一天泡寸一次f掛七天，可以完全dlh動(dòng)物死亡。研究結(jié)果顯示，與假手術(shù)組動(dòng)物相比，出血性卒中(大腦內(nèi)外傷后血腫)大鼠中發(fā)現(xiàn)了以下情況明顯的神經(jīng)損傷、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力的損傷、訓(xùn)練過程和記IZ的減弱，和動(dòng)物死亡率的增加。而且，直到觀察的第14天加重的病理癥候?qū)W依然顯著。Phenotropil當(dāng)在術(shù)后5小時(shí)內(nèi)以100mg/Kg劑量,到動(dòng)物體內(nèi)，之后每天一次、持續(xù)7天，結(jié)果是卒中和卒中后的異常得到明顯改善。卒中后一天內(nèi)該藥劑改善了神經(jīng)學(xué)異常的McGrow評(píng)分，當(dāng)在卒中后第7天和第14天的過程中4柳時(shí)，它增加了肌張力并且改善了運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性。當(dāng)?shù)诙g頓Phenotropil時(shí)，重建被卒中干擾的記憶，在卒中后第7天和第14天改善被動(dòng)避免的劍牛反射的重復(fù)。Pheno加pil的最顯著的效果是它完全阻止出血性卒中動(dòng)物死亡的能力。因此，J轉(zhuǎn)維射Phenotropil(lOOmg/Kg，體內(nèi))7天，對(duì)出血性卒中(大腦內(nèi)外傷后血腫沐鼠模型顯示顯著的抗卒中活性，表現(xiàn)在改善神經(jīng)學(xué)狀況、一般行為、認(rèn)知功能，且最重要的是防止動(dòng)物死亡。實(shí)施例2.Phenotropil對(duì)急性WL性卒中模型效果的i啊古對(duì)于大腦中動(dòng)脈末梢閉塞(OMCA)的大鼠，^f頓局部腦WL模型進(jìn)行研究，該研究由S.T.Chen首次描述(1989)。用水合氯醛麻斷300mg/Kg，腹膜內(nèi)注射)，動(dòng)物的頭部在一側(cè)固定好，左側(cè)朝上。在切開左耳與左眼中間部的艦后，顳部的肌肉纖維被分離提升至顱骨表面。^ffl0.5mm直徑鉆頭的牙鉆機(jī)器，在鱗狀骨和額骨之間的縫隙區(qū)域制造一個(gè)直徑大約3-4mm的孔，從而暴露出大腦中動(dòng)脈和大腦下靜脈交叉的區(qū)域。j頓顯微鏡(01ympusSZ-CTV)，在高放大倍與14.0x33)l鵬下，一憤殊的金屬鉤l戯燈臟側(cè)大腦中動(dòng)脈下。使用電凝法閉塞大腦中動(dòng)脈，閉塞部位艦大腦中動(dòng)脈分i^頁分支和頂分支的部位。此時(shí)，在顯微鏡,鵬下，觀察到閉塞部位上游沿大腦中動(dòng)EifiL流停止。術(shù)后傷口被分層縫合，并閉塞身體同側(cè)的頸動(dòng)脈。大腦組織應(yīng)用2，3,5-3四唑氯化物(TTC)禾,組織化學(xué)^^法染色，來ifj古藥劑對(duì)^L部位的影響(BedersonLB.等，1986)。為此，OMCA后72小時(shí)內(nèi)麻醉動(dòng)物被斷頭，將它們的腦組織從頭蓋中取出。制備厚度為lmm的六片額fltt刀片，之后用TTC染色。然后，每一片染色的切片被兩面掃描并應(yīng)用MOCHA軟^(JandelScientific,version1.2.0.0)用計(jì)^l幾測量面積。同側(cè)腦半球的面積卿和損傷面積(DA)。病灶體積占身體同側(cè)腦半球的體積的百分比按照以下公式計(jì)算￥,)^(^=(8,1+8(^)2+...+SPA)6)/(S卿l+SdH)2+…+S卿6)，其中S(da)禾口S卿是每一切片DA和IH的面積(RodaJ.M.等,簡)。為評(píng)估對(duì)動(dòng)物行為和狀態(tài)的干擾的動(dòng)力學(xué)，應(yīng)用神經(jīng)精神藥理學(xué)中的一種復(fù)雜方銜T.A.Voronina^000)。用被動(dòng)避免的條件反射模型來研究大鼠的訓(xùn)練和記IZ(CRPA，來自LafayetteInstrumentCo.,USA的單位(unit)"被動(dòng)避免")。動(dòng)物術(shù)后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行CRPA訓(xùn)練，訓(xùn)練后一天重復(fù)反射3倂中(180秒)。動(dòng)物的神經(jīng)狀況由蒙古沙鼠的McGrow's卒中指feif^(Stroke-indexscale)確定(McGrow,1977)，i亥i粉由LV.Garaiushkina修正(1996)。ifi古用記分方式執(zhí)行。如果幾個(gè)神經(jīng)學(xué)缺陷的癥狀在動(dòng)物中存在，動(dòng)物狀況的嚴(yán)重程度由相應(yīng)得分的總數(shù)決定。計(jì)數(shù)具繊輕(卒中指i^人0.5到2.5)的神經(jīng)學(xué)癥狀的大鼠和具有較重(卒中指跳3到IO)的神經(jīng)學(xué)癥狀的大鼠的數(shù)目。研究4頓Vistar系雄性大鼠(250-300克)，戶欣大鼠在動(dòng)物飼養(yǎng)中心自由進(jìn)食和浙K并且在12小時(shí)晝夜交替環(huán)境下飼養(yǎng)。在石開究期間，實(shí)^]物被隨機(jī)分配在11個(gè)組中。Phenotropil以100mg/Kg、200mg/Kg和300mg/Kg劑量術(shù)前60^H中經(jīng)HM內(nèi)aM至U三組動(dòng)物體內(nèi)并在術(shù)后5^H中內(nèi)纟^M內(nèi)注射到三組動(dòng)物體內(nèi)。生水被注射到假手術(shù)組動(dòng)物體內(nèi)。之后，戶脫的溶液在第2天和第3天被注射1次。臓的溶液嚴(yán)格地在每天的同一時(shí)間士3佛做射。記錄為McGraw卒中指f私平分的動(dòng)物的神經(jīng)學(xué)狀況分析顯示頓的手糊物有輕微的神經(jīng)學(xué)狀況的損傷，表現(xiàn)為震顫、易激性下降、動(dòng)作遲緩、單側(cè)輕度瞼下垂。神經(jīng)學(xué)狀況的損傷在術(shù)后72小時(shí)的發(fā)展變化顯示在表8中。需要指出的是鄉(xiāng)一天已經(jīng)出現(xiàn)的震顫和動(dòng)作遲緩在術(shù)前接^Pheno加pil治療的動(dòng)物中出現(xiàn)頻報(bào)低(見表8)。在第2天和第3天確認(rèn)軟弱無力、動(dòng)作遲緩、震顫出現(xiàn)在未接受藥物的大腦中動(dòng)脈閉塞對(duì)照組動(dòng)物中，則術(shù)后階段接受Pheno加pil治療的動(dòng)物顯示了更ffl3I的陽性動(dòng)力學(xué)伴有震顫和動(dòng)作遲緩的動(dòng)物的數(shù)目在第2天明顯下降。動(dòng)物中左側(cè)輕度瞼下垂的出現(xiàn)和發(fā)展可以^:后水腫的證據(jù)。己憶過禾毀月間，發(fā)現(xiàn)的結(jié)果記錄在表9中。OMCA動(dòng)物產(chǎn)生了明顯斷己憶損傷。^Phenotropil背景下，與第5組相比，OMCA的全部組的動(dòng)物iSA暗室黑暗區(qū)域的潛伏時(shí)間明顯延長。當(dāng)Phenotropil被預(yù)防性使用60^H中到OMCA時(shí)，代表藥齊啲高度的斜申經(jīng)效果的這些指標(biāo)在第1組和第2組之間沒有顯著差異。在術(shù)后72小時(shí)內(nèi)對(duì)照組動(dòng)物損傷面積(第5組)是身體同側(cè)半球面積的11.5±0.98%(計(jì)算公式紅面給出的)。動(dòng)物的下列指標(biāo)被記錄，戶腿動(dòng)物術(shù)前60min接受100mg/Kg、200mg/Kg禾口300mg/Kg齊糧的Phenotropil:7.4±0.72%(第6組)；6.52±0.58%(第7組)；6.03±0.75%(第8組)。術(shù)后^I^Pheno加pil(在大腦中動(dòng)脈閉塞5倂中內(nèi))以100mg/Kg，200mg/Kg，300mg/Kg劑量得出以下結(jié)果11+0.87%(第9組)；10.79+0.97%(第10組)；9.5+0.94%(第11組)(見表10)。工作結(jié)果顯示Phenotropil在術(shù)后時(shí)期能夠f尉;H己憶功能，改善動(dòng)物的神經(jīng)學(xué)狀態(tài)，該效果M;與對(duì)照組5相比CRPA首次進(jìn)入室內(nèi)黑暗區(qū)域的潛伏時(shí)間的延長、動(dòng)物更積極的行為、和更少的震顫次數(shù)來證實(shí)。藥劑的預(yù)防性注射(術(shù)前60併中)導(dǎo)致了相對(duì)對(duì)照組動(dòng)物結(jié)果而言損傷病灶面積明顯的下降100mg/Kg-下降36%;200mg/Kg-下降43%;300mg/Kg-下降48%。術(shù)后5併中注射Phenotropil100mg/Kg，200mg/Kg和300mg/Kg，分別導(dǎo)致了腦損傷面積下降4%、6%和17%。可以看出當(dāng)需要較高劑量的時(shí)候，WL型卒中盼'齊糧一效果"臓關(guān)系在卒中的急性表現(xiàn)階段歸重要的。Phenotropi底劑量為300mg/Kg時(shí)并且特別是在預(yù)防性^頓的時(shí)候表現(xiàn)出它的最佳效果。實(shí)施例3.Phenotropi勝射10天的抗卒中活性i刊介研究按照實(shí)施例2中記載的方法在2組動(dòng)物中進(jìn)行(每第2組0只大鼠)。Phenotropil(300mg/Kg)和等體積的生a&7K經(jīng)腹膜內(nèi)注射10天(在每天的同一時(shí)間士3併中)，第一天從術(shù)后5辦中開始。實(shí)驗(yàn)性研究大鼠要選擇相似體重的大鼠(270克±10克)。身體同側(cè)腦半球的體積由實(shí)驗(yàn)的第3天和第10天決定，腦半嘛損傷面積的病理形態(tài)學(xué)狀況也被研究。每組的損傷面積的瘢痕在第10天被記錄。與接^Phenotopil治療的組的大鼠不同，頓照組中觀察到腦半球的萎縮(收縮到受損面積)，而在第10天在Phenotropi祖中腦半球沒有發(fā)生萎縮。身體同側(cè)腦半球的體積在第1組動(dòng)物中平均被縮小了10%(見表11)。在第2組中腦半球的體積沒有發(fā)生可靠的改變，逸就是即使是短期^fflPhenotropil的治療效果的證據(jù)。估爐的研究顯示Phenotropil顯示出顯著且普遍的斜申經(jīng)活性和腦血管活性，在CNS病理為實(shí)驗(yàn)性出血性和WL性卒中的條件中具有抗卒中活性。在各種病因的腦血管病理的CNS異常的急性期JOTPhenotropil的背景下，功能記憶標(biāo)準(zhǔn)、行為反應(yīng)、運(yùn)動(dòng)活性和肌張力被重建，在疾病研艦夠早的時(shí)肌可去除明顯的神經(jīng)學(xué)缺陷并完全咴復(fù)精神神經(jīng)狀況。出血性卒中注射藥劑的最小治療齊糧(100mg/Kg)能夠100%，1±動(dòng)物死亡。同時(shí)，對(duì)照組有57%的大鼠死亡。在缺血性卒中中，在術(shù)前60射付主射Pheno加pil并一天一次tf^三天，平均縮減了42。/。的腦損傷面積(當(dāng)齊U量是300mg/Kg時(shí)縮減的面積為48%)，逸就i正實(shí)了其預(yù)防和治療腦血管異常和CNS疾病發(fā)展的i頓效果和前景。在卒中的急性發(fā)作階段，M以100、200和300mg/Kg劑量在術(shù)后5射中內(nèi)ai寸Phenotropil和隨后的3天給藥i錢iJ，該指標(biāo)表現(xiàn)出較不顯著的效果(在300mg/Kg齊糧下為17。/。)，但是當(dāng)治療過程延長到10天則產(chǎn)生了Elhl茵中破壞性改變的效果。發(fā)現(xiàn)的Phenotropil對(duì)不同病因的卒中的效果超越了^^蟲的藥理學(xué)t4M，這在前面已經(jīng)說明，并M示Phenotropil是一種新一代藥物的母體藥物，它能產(chǎn)生普遍的神經(jīng)學(xué)活性和能夠保證CNS功能狀態(tài)的相稱的(神經(jīng)調(diào)節(jié)劑)重建，從而根據(jù)一些或其他CNS異常鵬病，導(dǎo)致產(chǎn)生不同的多重效應(yīng)，包括腦血管一神經(jīng)保護(hù)活性。參考書目1、N.V.Vereschagin,Yu.Ya^Varakin.StrokeregistersinRussia:resultsandmethodologicalaspectsoftheproblem//Journ.ofneurol.andpsychiatr"namedafterS.S.Korsakov(Supplement"Stroke"),M.,2001.No.l，第3440頁。2、Internaldiseases,T.ILHarrison等lM.:MeditsinaJ997.V.10,494頁。ofpharmacologicalsubstances//Inthebook:Manualonexperimental(preclinical)studiesofnewpharmacologicalsubstances.M"2000.第153-158頁。4、T.A.VoroninajS.B,Seredenin.MethodicalGuidanceonstudyingtranquilizing(anxiolytic)actionofpharmacologicalsubstances//Inthebook:Manualonejq3erimental(preclinical)studiesofnewpharmacologicalsubstances.M"2000.第126-130頁。newdirectionsintheirprophylaxisandtreataient〃J.ofneuropathol.andpsychiatr.M.1996.No.l,第14-18頁。6、I.V.Gannushkina.Functionalangioarchitectureofbrain.M"Meditsina^1977，第224頁。7、Ye丄Gusev.TheproblemofstrokeinRussia.〃Journ.ofneurol.andpsychiatr.,namedafterS.S.Korsakov(Supplement"Stroke").M.,2003.No.9,第3-7頁。8、Ye.I.Gusev，V丄Skvortsova.Cerebralischemia.M.,Meditsina^2001。9、Ye.I.Gusev,V丄SkvortsovajL.V.Stakhovskaya.EpidemiologyofstrokeinRussia.〃Journ.ofneurol.andpsychiatr"namedafterS.S.Korsakov(Supplement"Stroke").M"2003.No.8，第4-9頁。10、A.N.Makarenko,N.S.Kositsin^S.V.Karpenko，V.A.Mishina.發(fā)明證書No.1767518of03.11.1990。11、Manualone鄧erimental(preclinical)studiesofnewpharmacologicalsubstances.M.,2000,第159-161頁。12、BedersonJ.B"PittsLH"GermanoS.M.,NishimuraM.C"DavisR丄，，BartkowskiH.M.Evaluationof2，3,5-triphenyltetrazoliumchlorideasastainfordetectionandquantificationofe鄧erimentalcerebralinfarctioninmt//Stroke.-1986.-V.17,第1304-1308頁。13、ChenS.T.，HsuC.Y.，Hog肌E.L，MaricqH.,BalentineJ.D.AmodeloffocalNo.4.-第738-743頁。14、JackowskiA"CrockardA"BumstockG"RossRussellR,KristekF.Thetimecourseofintaicranialpathophysiologicalchangesfollowingeq)eiimentalsubarachnoidhaemorrageintherat//Joumalofcerebralbloodflowandmetabolism.-1990.-V.10.-第835-849頁。15、RodaJ.M.，CarcellerF"Diez-TejedorE"AvendanoC.Reductionofinfarctsizebyintra-arterialnimodipineadministeredatreperfUsioninaratmodelofpartiallyreversiblebrainfocalischemia//Stroke.-1995.-V.26,No.10,第1888-1892頁。16、SmithS"HodgesH"SowinskiP.Long-TermbeneficialeffectsofBW619C89onneurologicaldeficit,cognitivedeficitandbraindamageaftermiddlecerebralarteryocclusionintherat//Neuroscience.-1997.-V.77，No.4，第1123-1135頁。表1.Phenotropil(100mg/Kg,體內(nèi)給夠在出血性卒中的第1，大鼠的神經(jīng)學(xué)異常的影響(McGiDwi平分)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*—與假手術(shù)組大鼠相比差異的可靠JtP^).05tf)**—與卒中大鼠相比差異的可靠敘^0.05(^)表3Pheno加pil對(duì)動(dòng)物出血性卒中后在Rotarod實(shí)驗(yàn)中對(duì)運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>a.u.:纟樹單位*—與假手術(shù)組大鼠相比差異的可靠敘^0.05W)**—與HS大鼠相比差異的可靠m^0.05tf)表4.Phenotropil對(duì)進(jìn)行洞穴反射的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表5a.Phenotropil對(duì)大腦內(nèi)外傷后血腫大鼠重復(fù)CRPA的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*-與假手術(shù)大鼠相比差異的可靠^P^.05(x2)料-與HS大鼠相比差異的可靠jgP50.05tf)表5b.<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>*—與假手術(shù)大鼠相比差異的可靠敷^).05(淞驗(yàn)；《)**—與HS大鼠相比差異的可靠動(dòng)^).05(t檢驗(yàn)；x2)表7.Phenotropil對(duì)HS后動(dòng)物存活率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>*—與假手術(shù)大鼠相比差異的可靠itP^0.05tf)**—與HS大鼠相比差異的可靠敷S0.05tf)表8.0MCA動(dòng)物神經(jīng)學(xué)異常<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>記錄數(shù)字顯示了每組表現(xiàn)出歹!J舉的癥狀的動(dòng)物的數(shù)目。表9.Phenotropil對(duì)術(shù)后24小時(shí)^L性卒中急性期(OMCA)接受訓(xùn)練(CRPA)的大鼠的影響和對(duì)訓(xùn)練后24小時(shí)重復(fù)CRPA維持測試的影口向<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*—與第1組相比差異的可靠<0.05**—與第5組相比差異的可靠<0.05表10.OMCA中腦損傷面積的尺寸<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*與第5組相比pO.Ol(對(duì)照組動(dòng)物用OMCAw/o藥劑)。表ll.在OMCA中同側(cè)腦半球體積的改變<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*與對(duì)照組相比，第1組在第3天差異的可靠度pO.Ol。權(quán)利要求1、N-氨甲?；?甲基-4-苯基-2-吡咯烷酮(Phenotropil)作為顯示親神經(jīng)—神經(jīng)調(diào)節(jié)劑活性、腦血管活性和抗卒中活性的藥劑的用途。全文摘要本發(fā)明涉及藥物，特別涉及顯示親神經(jīng)活性和腦血管活性的藥理學(xué)和藥物制劑。本發(fā)明的新穎性在于N-氨甲酰基-甲基-4-苯基-2-吡咯烷酮藥劑，其注射到有機(jī)體內(nèi)以動(dòng)物百分之百存活率、消除不同病因的腦卒中的神經(jīng)綜合征的發(fā)展、使腦的受損面積和它所致的破壞性發(fā)展局部化的形式而顯示普遍的顯著反應(yīng)。已證實(shí)的是本發(fā)明的藥劑能顯示普遍的親神經(jīng)(神經(jīng)調(diào)節(jié)劑)活性并產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)性腦血管活性。文檔編號(hào)A61P9/10GK101415418SQ200780011631公開日2009年4月22日申請(qǐng)日期2007年2月27日優(yōu)先權(quán)日2006年3月28日發(fā)明者R·V·阿哈普金,T·A·沃羅寧那,V·I·阿哈普金那申請(qǐng)人:V·I·阿哈普金那