專(zhuān)利名稱(chēng)：：抗菌的細(xì)胞外多糖溶劑化體系的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及細(xì)菌性耳、鼻或喉疾病的治療，其中包括慢性中耳炎伴積液(COME)、復(fù)發(fā)性急性中耳炎(RAOM)、膽脂瘤和慢性鼻竇炎。
背景技術(shù)：
：COME和RAOM是中耳的炎癥性疾病。生物被膜形成可能是COME致病機(jī)理中的一個(gè)因素，參見(jiàn)Post,J.C."中耳炎中細(xì)菌性生物被膜的直接證據(jù)"(Directevidenceofbacterialbiofilmsinotitis)，Laryngoscope111(12):2083-94(2001)，Ehrlich等，"中耳炎灰鼠模型的中耳粘膜上粘膜生物被膜的形成"(MucosalBiofilmFormationonMiddle-EarMucosaintheChinhillaModelofOtitisMedia),JAMA287(13):1710-15(2002)以及Fergie,N等，"中耳炎伴積液是生物被膜感染嗎？"(Isotitismediawitheffusionabiofilminfection),ClinOtolaryngolAlliedSci.29(l):38-46(2004)。當(dāng)細(xì)菌與表面相互作用形成覆蓋表面并為細(xì)菌進(jìn)一步繁殖提供一種活克隆的多聚被膜(有時(shí)被稱(chēng)為表多糖或細(xì)胞外多糖聚合物)時(shí)，生物被膜就形成了。定居在生物被膜內(nèi)的細(xì)菌比處于浮游(planktonic)(懸浮的)狀態(tài)的細(xì)菌更加難以清除，對(duì)許多抗生素和殺蟲(chóng)劑極端耐受。實(shí)驗(yàn)表明，大量不同細(xì)菌所產(chǎn)生的細(xì)胞外多糖(EPS)基質(zhì)和毒素可導(dǎo)致宿主產(chǎn)生炎癥。有跡象表明與COME和RAOM相關(guān)的慢性炎癥是宿主對(duì)細(xì)菌生物被膜產(chǎn)生的反應(yīng)。一般情況下首先利用口服抗生素治療COME和RAOM，如果需要再通過(guò)放置鼓膜造孔插管進(jìn)行更激進(jìn)的治療。偶爾在中耳發(fā)生嚴(yán)重感染或內(nèi)含粘液很多的情況下，可以沖洗中耳(例如，用鹽水)。雖然大多數(shù)患者的鼓膜造孔插管都能發(fā)揮作用，但是約有20%的最初放置鼓膜造孔插管的患者需要做其他手術(shù)(增殖腺切除術(shù)，第二組鼓膜造孔插管，通常是既進(jìn)行增殖腺切除術(shù)又放置鼓膜造孔插管)以治療持續(xù)性的COME或持續(xù)性的RAOM。膽脂瘤是本發(fā)明涉及的另一種耳疾病。雖然一般都認(rèn)為膽脂瘤大多是由真皮細(xì)胞組成的囊腫，但是這種疾病也有細(xì)菌生物被膜的參與，參見(jiàn)Chole等，"膽脂瘤中生物被膜形成的證據(jù)"(EvidenceforBiofUmFormationinCholesteatomas),ArchOtolaryngolHeadNeckSurg.128，1129-1133頁(yè)(2002年10月)。在膽脂瘤中，細(xì)菌生物被膜形成，誘導(dǎo)炎癥發(fā)生，弓l起良性腫瘤產(chǎn)生，其中良性腫瘤主要由位于其核心的細(xì)菌和真皮細(xì)胞組成。腫瘤可腐蝕聽(tīng)骨鏈(聽(tīng)骨)和顳骨乳突部，對(duì)聽(tīng)力造成損害。手術(shù)暴露和切除是去除膽脂瘤最常用的治療方法。但是這些方法的失敗率高達(dá)25%，主要是因?yàn)槟懼鰰?huì)復(fù)發(fā)，因此需要再次手術(shù)或進(jìn)行其他治療。慢性鼻竇炎(CRS)是副鼻竇的炎癥，癥狀有前部或后部流鼻涕、鼻塞或面部壓力、疼痛或腫脹至少持續(xù)約12周。在美國(guó)估計(jì)有10%或以上的人患有CRS。大多數(shù)CRS患者開(kāi)始時(shí)采用藥物治療，但是每年有成千上萬(wàn)的難治性CRS患者需要進(jìn)行功能性的內(nèi)窺鏡鼻竇手術(shù)(FESS)。CRS患者的生活質(zhì)量通常都有下降，每年需要花費(fèi)的醫(yī)療費(fèi)用和損失的工作時(shí)間價(jià)值數(shù)十億美元。CRS是對(duì)多種機(jī)制產(chǎn)生的Thl和Th2炎癥反應(yīng)，其中包括而不限于細(xì)菌毒素、細(xì)菌分泌的和細(xì)菌生物被膜內(nèi)所包含的細(xì)胞外多糖基質(zhì)、真菌、對(duì)細(xì)菌和真菌產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng)以及自身免疫失調(diào)。與CRS及其伴隨炎癥相關(guān)的細(xì)菌包括金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及粘膜炎莫拉菌。包含一種或多種這些微生物以及可能還包含真菌的生物被膜是CRS發(fā)病機(jī)理中的一種因素，參見(jiàn)，例如，Ramadan等，"慢性鼻竇炎和生物被膜"(Chronicrhinosinusitisandbiofilm)，OtolaryngolHeadNeckSurg.132:414-417(2005)以及Ferguson等，"人細(xì)菌性慢性鼻竇炎中存在生物被膜的證據(jù)"(DemonstrationofBiofilminHumanBacterialChronicRhinosinusitis),AmJRhinol，5:19，452-457頁(yè)，(2005)。細(xì)菌生物被膜所包含的細(xì)菌菌落和真菌所分泌的細(xì)胞外多糖(EPS)基質(zhì)和毒素都能激發(fā)宿主的炎癥反應(yīng)。COME、RAOM、膽脂瘤和CRS的病因?qū)W及慢性特征可能與細(xì)菌生物被膜的存在及其術(shù)后的頑固性有關(guān)。發(fā)明概述鹽水和抗生素可用于處理耳鼻或喉部的細(xì)菌生物被膜，但是在難以治療的病例中可能無(wú)法使慢性狀況得到足夠的緩解。有許多技術(shù)和產(chǎn)品已被用于清除或殺死牙科水線(xiàn)和醫(yī)療設(shè)備或其他體表上所發(fā)現(xiàn)的生物被膜內(nèi)的細(xì)菌，但是這些可能都不適于治療人體組織。比較理想的是去除或殺死耳、鼻或喉部中的生物被膜內(nèi)寄生的細(xì)菌，如果可能要充分清除或破壞生物被膜本身以阻止細(xì)菌再生和生物被膜重新形成。我們還希望在達(dá)到此目的的同時(shí)還能夠滿(mǎn)足與人體組織接觸時(shí)生物相容性的要求，以及使用較小劑量的物質(zhì)和較短的給藥周期?，F(xiàn)在己經(jīng)發(fā)現(xiàn)包含金屬離子螯合劑和表面活性劑的溶劑化體系在破壞耳、鼻或喉部細(xì)菌生物被膜方面有令人吃驚的療效，同時(shí)該溶劑化體系相當(dāng)溫和，足以滿(mǎn)足直接應(yīng)用于精細(xì)或敏感組織的要求。本發(fā)明在一個(gè)方面提供了金屬離子螯合劑和重量百分比超過(guò)0.2%的表面活性劑在制備細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病治療藥物中的用途，其中表面活性劑能分離、清除或破壞附著或粘附到中耳或內(nèi)耳的至少一部分上、鼻腔或鼻竇腔的內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的至少一部分生物被膜。本發(fā)明的另一方面提供了(a)金屬離子螯合劑、(b)能分離、清除或破壞附著或粘附到中耳或內(nèi)耳的至少一部分上的、鼻腔或鼻竇腔的內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的至少一部分生物被膜的表面活性劑、以及(c)足以使pH大于5的緩沖劑在制備細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病治療藥物中的用途。本發(fā)明另一方面提供了治療細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病的方法，該方法包括a)將包含金屬離子螯合劑和重量百分比大于0.2%的表面活性劑的溶劑化體系應(yīng)用到附著或粘附于中耳或內(nèi)耳的至少一部分上的、鼻腔或鼻竇腔內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的生物被膜上，以及b)分離、清除或以其他方式破壞至少一部分生物被膜。本發(fā)明另一方面提供了治療細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病的方法，該方法包括a)將包含金屬離子螯合劑、兩性離子表面活性劑和足以使溶劑化體系的pH大于5的緩沖劑的溶劑化體系應(yīng)用到附著或粘附于中耳或內(nèi)耳至少的一部分上的、鼻腔或鼻竇腔內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的細(xì)菌生物被膜上，以及b)分離、清除或以其他方式破壞至少一部分生物被膜。本發(fā)明另一方面提供了用于破壞組織上的細(xì)菌生物被膜的溶劑化體系，其組成包含金屬離子螯合劑、重量百分比大于0.2%的表面活性劑和抗微生物劑。本發(fā)明另一方面提供了用于破壞組織上的細(xì)菌生物被膜的溶劑化體系，其組成包含金屬離子螯合劑、兩性離子表面活性劑和足以使溶劑化體系的pH大于5的緩沖劑。本文公開(kāi)的用途、方法和系統(tǒng)可用于中耳或內(nèi)耳的治療或術(shù)后護(hù)理以及鼻、口腔或咽部的治療或術(shù)后護(hù)理。本文公開(kāi)的方法和系統(tǒng)還可用于治療疾病或慢性疾病如慢性中耳炎伴積液、復(fù)發(fā)性急性中耳炎、膽脂瘤、慢性鼻竇炎以及其他細(xì)菌性耳、鼻、口腔或咽部疾病。附圖的簡(jiǎn)要描述圖1是正在利用本文公開(kāi)的方法進(jìn)行治療的中耳的橫斷面示意圖。圖2是圖1的局部放大圖，顯示的是本文公開(kāi)的溶劑化體系用于處理咽鼓管峽附近的細(xì)菌生物被膜。各個(gè)圖中類(lèi)似的附圖標(biāo)記代表類(lèi)似的元件。圖中各元件不是按比例繪制的。優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)描述下面的詳細(xì)說(shuō)明描述了一些實(shí)施方式，但并不代表對(duì)本發(fā)明的限制。本文所有的重量、數(shù)量和比例都以重量單位計(jì)，除非特別指明。下面所顯示的術(shù)語(yǔ)有如下意思術(shù)語(yǔ)"抗微生物劑"是指采用下文實(shí)施例中描述的細(xì)菌平板計(jì)數(shù)方法，能夠使一種或多種金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌或粘膜炎莫拉菌菌群中的細(xì)菌數(shù)量下降90。/。以上(即，至少下降一個(gè)對(duì)數(shù)級(jí))的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"附著的"和"粘附的"用于指細(xì)菌生物被膜和表面時(shí)意味著生物被膜已在表面建立并且至少部分地包被或覆蓋了表面，能夠在一定程度上對(duì)抗從表面的清除。由于這種關(guān)系的性質(zhì)非常復(fù)雜且了解不多，因此這種用法并不意味著任何特定的附著或粘附機(jī)制。術(shù)語(yǔ)"細(xì)菌生物被膜"是指粘附到表面上的細(xì)菌群落，群落內(nèi)的生物體包含在細(xì)菌產(chǎn)生的細(xì)胞外聚合物(EPS)基質(zhì)內(nèi)。術(shù)語(yǔ)"生物相容性的"用于指物質(zhì)時(shí)意味著該物質(zhì)在接觸機(jī)體時(shí)不會(huì)產(chǎn)生明顯的毒性或不良反應(yīng)。術(shù)語(yǔ)"生物可降解的"用于指物質(zhì)時(shí)意味著該物質(zhì)到達(dá)體內(nèi)時(shí)會(huì)被降解或腐蝕形成更小的化學(xué)物質(zhì)。這種降解過(guò)程可能是酶催化的、化學(xué)的或生理的過(guò)程。術(shù)語(yǔ)"生物可吸收的"用于指物質(zhì)時(shí)意味著該物質(zhì)能夠被機(jī)體吸收。術(shù)語(yǔ)"分離"、"清除"和"破壞"用于指附著或粘附到表面的細(xì)菌生物被膜時(shí)意味著原來(lái)存在于表面上的生物被膜至少有一定數(shù)量的生物被膜不再附著或粘附于表面上。這種用法并不意味著任何特定的分離、清除或破壞機(jī)制。術(shù)語(yǔ)"螯合劑"是指能與其他材料特別是金屬離子結(jié)合進(jìn)而抑制或阻止材料從溶液中跑出的化合物。術(shù)語(yǔ)"金屬離子螯合劑"是指能與一種或多種金屬離子如堿金屬、堿土金屬、鐵離子等結(jié)合進(jìn)而抑制或阻止金屬離子從溶液中析出的螯合劑。按原子序數(shù)逐漸升高排序，堿金屬有鋰、鈉、鉀、銣、銫和鈁，堿土金屬有鈹、鎂、鈣、鍶、鋇和鐳。術(shù)語(yǔ)"溶劑化"是指形成包含溶劑或其他載體的溶液或分散液，溶質(zhì)溶解或懸浮于溶液或分散液中。按照?qǐng)D1的描述，提供了一種將溶劑化體系應(yīng)用于治療部位如耳10內(nèi)的方法，該方法包括將插管12插過(guò)耳道14和鼓膜18內(nèi)的耳管16(例如，通過(guò)鼓膜切開(kāi)術(shù)放置)，然后插到中耳20內(nèi)。插管12也可通過(guò)其他方式插入而不需要進(jìn)行鼓膜切開(kāi)術(shù)，例如通過(guò)針頭或其他導(dǎo)引裝置介導(dǎo)通過(guò)耳、咽鼓管或鼻，摸索著操作，或者利用其他導(dǎo)引技術(shù)如顯微內(nèi)窺鏡、虛像導(dǎo)引內(nèi)窺鏡插入，或利用可彎曲的尖頭追蹤裝置進(jìn)行影像導(dǎo)引手術(shù)。如圖1所示，插管12的遠(yuǎn)端22被放置在咽鼓管26的峽部24之上。插管12可以被放置，如果需要還可以修改其形狀和大小以治療中耳20的其他部分(為了這種討論的目的，這部分被認(rèn)為至少包括鼓膜、中耳內(nèi)層、內(nèi)部結(jié)構(gòu)如聽(tīng)骨鏈和邊緣結(jié)構(gòu)如乳突)，治療內(nèi)耳部分(為了這種討論的目的，這部分被認(rèn)為至少包括半規(guī)管28和耳蝸30)，或者治療鼻腔、口腔或咽部的其他部位。例如，如果希望治療內(nèi)耳，可以制備其他通路開(kāi)口(例如，在圓窗或卵圓窗附近的膜上)。圖2是一部分圖1的放大圖。溶劑化體系可通過(guò)側(cè)壁36上的開(kāi)口34分散，滴加、噴霧或以其他方式應(yīng)用到細(xì)菌生物被膜上，例如位于咽鼓管26的上部40上的生物被膜38。本文公開(kāi)的方法可用于其他的耳、鼻或喉部治療。例如，本文的方法可用于患者的鼻腔或鼻竇腔。本文的方法還可通過(guò)將溶劑化體系應(yīng)用于扁桃體、增殖腺或附近組織來(lái)實(shí)現(xiàn)。當(dāng)扁桃體和增殖腺是完整的時(shí)候可以進(jìn)行這種治療，或者在摘除扁桃體、增殖腺或者兩者都摘除時(shí)作為術(shù)后護(hù)理來(lái)進(jìn)行，例如，將溶劑化體系應(yīng)用于咽部，如扁桃體窩。有關(guān)這種方法的進(jìn)一步詳細(xì)描述參見(jiàn)與本發(fā)明同日提交的共同待批的申請(qǐng)(代理人案號(hào)151-P-28168WOO1)，該申請(qǐng)的完整說(shuō)明書(shū)已納入本文作為參考。溶劑化體系可用于破壞耳、鼻或咽部組織上的細(xì)菌生物被膜，從而有助于其分離、清除或破壞。優(yōu)選的溶劑化體系是與中耳或內(nèi)耳精細(xì)組織和結(jié)構(gòu)生物相容的，最好不包含可能會(huì)對(duì)這種組織或結(jié)構(gòu)造成潛在損傷或者對(duì)長(zhǎng)期聽(tīng)力造成損害的成分。理想的溶劑化體系具有足夠低的粘度以便于通過(guò)粉末噴霧或其他噴霧方式、灌洗、噴霧、擦抹、芯吸或滴加轉(zhuǎn)移到細(xì)菌生物被膜上。理想的溶劑化體系還應(yīng)該易于通過(guò)隨后的沖洗、漂洗、引流或吸收而從治療部位清除。雖然不希望受理論的束縛，但是金屬離子螯合劑可復(fù)合、結(jié)合或束縛金屬離子，其中金屬離子可交聯(lián)、橋接表多糖或細(xì)胞外多糖基質(zhì)內(nèi)的聚合物鏈或有助于使其結(jié)合在一起。然后溶劑化體系包圍未結(jié)合的聚合物鏈或片段，分解基質(zhì)，溶劑化未結(jié)合的聚合物鏈或片段，將它們帶到溶液或分散液內(nèi)，這樣它們就很容易被沖洗或清除出治療的中耳或內(nèi)耳組織或結(jié)構(gòu)，例如，另外采用溶劑化體系或單獨(dú)的漂洗液。理想的金屬離子螯合劑是弱酸，其酸性足以螯合表多糖或細(xì)胞外多糖基質(zhì)內(nèi)的一種或多種金屬離子，但是其酸性又不會(huì)損傷被治療的組織。特別感興趣的金屬離子(因?yàn)樗鼈兛赡軈⑴c靶細(xì)菌生物被膜)包括鈉、鈣和鐵。理想的金屬離子螯合劑是水溶性無(wú)毒的，如果用于耳內(nèi)不會(huì)加劇長(zhǎng)期聽(tīng)力喪失。代表性的酸包括而不限于羧酸、二元酸、或三元酸，如甲酸、乙酸、氯乙酸、二氯乙酸、草酸、草氨酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、天冬氨酸、富馬酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、亞氨基二乙酸、戊二酸、2-酮戊二酸、谷氨酸、己二酸、檸檬酸、葡萄糖醛酸、粘酸、次氮基三乙酸、水楊酸、酮庚二酸、苯甲酸、扁桃酸、氯扁桃酸、苯乙酸、鄰苯二甲酸和硼酸；礦物酸，如鹽酸、正磷酸和膦酸，及上述酸的混合物。檸檬酸是一種優(yōu)選的酸。例如，金屬離子螯合劑的濃度可以是至少約0.01M、至少約0.05M或至少約0.1M，例如約0.01到0.5M、約0.05到0.4M，或者0.1到約0.3M。增加金屬離子螯合劑的量可促使生物被膜更快地被破壞。溶劑化體系還包含表面活性劑。理想的表面活性劑是水溶性且無(wú)毒的。典型的表面活性劑包括陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑、陽(yáng)離子表面活性劑和兩性離子表面活性劑。典型的陰離子表面活性劑包括而不限于CVC24烷基苯磺酸鹽；(:6《24烯屬磺酸鹽；C6-C24石蠟磺酸鹽；枯烯磺酸鹽；.二甲苯磺酸鹽；C6-C24垸基萘磺酸鹽；C6-C24垸基或二烷基二苯醚磺酸鹽或二磺酸鹽，CVCM單烷基或二烷基磺基琥珀酸鹽；磺化的或硫酸化的脂肪酸；CVC24醇硫酸鹽(例如CVd2醇硫酸鹽)；帶有1到約20個(gè)環(huán)氧乙垸基團(tuán)的CVC24醇醚硫酸鹽；Q-C24烷基、芳基或烷芳基磷酸酯或其帶有l(wèi)到約40個(gè)環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙浣或環(huán)氧丁烷單元的垸氧基化的類(lèi)似物；以及上述物質(zhì)的混合物。例如，陰離子表面活性劑可以是鵝去氧膽酸鈉、十二垸基肌氨酸鈉鹽、十二烷基硫酸鋰、1-辛烷磺酸鈉鹽、水合膽酸鈉、去氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉(也稱(chēng)為月桂基硫酸鈉)或甘氨脫氧膽酸鈉。典型的陽(yáng)離子表面活性劑包括而不限于具有下式的季胺化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中R、R'、R"和R'"各自是可選地包含一個(gè)或多個(gè)P、0、S或N雜原子的CrC^垸基、芳基或芳垸基，X是F、Cl、Br、I或烷基硫酸根。例如，陽(yáng)離子表面活性劑可以是一水合氯化十六烷基吡啶錫或溴化十六烷基三甲基銨。典型的非離子表面活性劑包括而不限于帶有1到約20個(gè)環(huán)氧乙烷基團(tuán)(例如，約9到20個(gè)環(huán)氧乙垸基助的C6-C24醇乙氧基化物(例如，C6-C14醇乙氧基化物)；帶有1到約100個(gè)環(huán)氧乙烷基團(tuán)(例如，約12到20個(gè)環(huán)氧乙烷基團(tuán))的C6-C24烷基酚乙氧基化物(例如，CVdo烷基酚乙氧基化物)；帶有1到約20個(gè)糖苷基團(tuán)(例如，約9到20個(gè)糖苷基團(tuán))的(VC24垸基糖苷(例如，CVC2。烷基糖苷)；CVC24脂肪酸酯乙氧基化物、丙氧基化物或甘油酯；C4-C24單或二鏈烷醇酰胺；及其混合物。例如，非離子表面活性劑可以是聚氧乙烯二醇十二垸基醚、N-癸酰-N-甲基葡糖胺、洋地黃皂甙、n-十二垸基B-D-麥芽苷、辛基B-D-吡喃葡糖苷、辛基苯酚乙氧基化物、異辛基苯基聚氧乙烯(8)醚、聚氧乙烯去水山梨糖醇單月桂酸酯或聚氧乙烯(20)去水山梨糖醇單油酸酯。典型的兩性離子表面活性劑包括而不限于具有下式的氨基烷基磺酸鹽化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中R、R'、R"和R'"各自是可選地包含一個(gè)或多個(gè)P、0、S或N雜原子的d-CM烷基、芳基或芳烷基；具有下式的氧化胺化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中R、R'、R"和R'"各自是可選地包含一個(gè)或多個(gè)P、0、S或N雜原子的d-Cw垸基、芳基或芳烷基；或具有下式的甜菜堿化合物R'OR"其中R、R'、R"和R'"各自是可選地包含一個(gè)或多個(gè)P、O、S或N雜原子的d-C24垸基、芳基或芳烷基，n約為1-10。例如，兩性離子表面活性劑可以是3-[(3-膽酰胺丙基)二甲基銨基]-2-羥基-l-丙垸磺酸鹽、3-[(3-膽酰胺丙基)二甲基銨基]-l-丙垸磺酸鹽(有時(shí)被稱(chēng)為CHAPS)、3-(癸基二甲基銨基)丙烷磺酸內(nèi)鹽(有時(shí)被稱(chēng)為辛酰基磺基甜菜堿)或N-十二烷基-N,N-二甲基-3-銨基-l-丙烷黃酸鹽。優(yōu)選的表面活性劑包括垸基硫酸鹽、垸基磺酸鹽、芳基磺酸鹽和兩性離子表面活性劑。理想的表面活性劑可以作為純的化合物制備，或者在某些情況下利用產(chǎn)品如液體橄欖油皂制備。例如，表面活性劑的濃度至少約為0.002M、至少約0.005M或至少約0.01M，例如約0.002到1M、約0.005到0.7M，或約0.01到0.5M。如果以重量計(jì)，表面活性劑優(yōu)選占溶劑化體系的0.2重量％以上，例如，占溶劑化體系的約0.3%至1」30%、約0.5%到25%，或者約1%到20%。增加表面活性劑的量可促使生物被膜更快地被破壞。溶劑化體系還可任選地包含許多其他組分，其中包括水和其他溶劑(例如醇)、緩沖劑、抗微生物劑以及各種輔助試劑。優(yōu)選的溶劑化體系包含水和一種或多種緩沖劑。緩沖劑優(yōu)選能使溶劑化體系維持在合適的pH以便于接觸人體組織，理想的pH大于5。例如，將溶劑化體系緩沖至接近中性pH，例如，pH大于5而小于8.5。例如，緩沖劑占溶劑化體系一直到約25%。示例性的緩沖劑包括而不限于氯化鉀、甘氨酸、鄰苯二甲酸氫鉀、醋酸鈉、鄰苯二甲酸氫鉀、巴比妥鈉和檸檬酸鈉。當(dāng)金屬離子螯合劑是弱酸時(shí)，理想的緩沖劑是該酸的鹽。包含一種或多種抗微生物劑的溶劑化體系也是優(yōu)選的。EPS基質(zhì)使生物被膜粘附于下面的表面，還可保護(hù)其包被的微生物；因此，生物被膜內(nèi)的細(xì)菌對(duì)抗生素作用的耐藥性比浮游細(xì)菌高約100到1000倍。生物被膜被破壞成未結(jié)合的聚合物或片段并被溶劑化體系溶劑化或分解后，抗微生物劑能夠更有效地攻擊留下的細(xì)菌。典型的抗微生物劑包括活性氧化合物如過(guò)氧化氫、分離的或平衡衍生或分離的過(guò)酸如氯過(guò)氧苯甲酸、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧庚酸、過(guò)氧辛酸、過(guò)氧癸酸、過(guò)氧甲酸、過(guò)氧檸檬酸、過(guò)氧乙醇酸、過(guò)氧乳酸、過(guò)氧苯甲酸，以及衍生自二酸或二酯如己二酸、琥珀酸、戊二酸或丙二酸的單酯過(guò)酸；氨基糖苷類(lèi)；氯霉素類(lèi)；氨芐西林；安沙霉素類(lèi)；(3-內(nèi)酰胺類(lèi)如碳頭孢烯、碳青霉烯、頭孢菌素、頭孢霉素、單環(huán)卩-內(nèi)酰胺類(lèi)、氧頭孢烯類(lèi)、青霉素及其所有衍生物；羧酸酯如對(duì)羥基烷基苯甲酸酯和烷基肉桂酸酯；殼聚糖鹽；立方相(cubic-phase)脂質(zhì)；含鎵的抗微生物劑如乙酰丙酮鎵、溴化鎵、氯化鎵、氟化鎵、碘化鎵、麥芽酚酸鎵(galliummaltolate)、硝酸鎵、氮化鎵、滲濾鎵(galliumpercolate)、亞磷酸鎵和硫酸鎵；碘化合物和其他活性齒素化合物如碘、卣間化合物、多聚卣化物、金屬次氯酸鹽、次氯酸、金屬次溴酸鹽、次溴酸、氯和溴代乙內(nèi)酰脲類(lèi)、二氧化氯和亞氯酸鈉；林可酰胺類(lèi)；大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)；硝基呋喃類(lèi)；有機(jī)過(guò)氧化物，其中包括苯甲酰過(guò)氧化物和烷基苯甲酰過(guò)氧化物；臭氧；酚醛衍生物，其中包括鄰苯基苯酚、鄰芐基對(duì)氯苯酚、叔戊苯酚和Q-Q烷基羥基苯甲酸鹽；季胺化合物如氯化垸基二甲基節(jié)基銨和氯化二烷基二甲基銨；喹啉；單線(xiàn)態(tài)氧發(fā)生劑；磺胺類(lèi)；砜；磺酸如十二烷基苯磺酸；四環(huán)素類(lèi)抗生素如四環(huán)素、金霉素、土霉素、去甲四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、賴(lài)甲環(huán)素、甲氯環(huán)素、美他環(huán)素、美索環(huán)素(methocycline)、米諾環(huán)素等；萬(wàn)古霉素；它們的衍生物及其混合物。本文引用的許多試劑代表包含有用的特定物質(zhì)的類(lèi)別，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知這些物質(zhì)各自的用途。例如，青霉素示例包括而不限于阿姆地諾西林(amdinocillin)、阿姆地諾西林雙酯(amdinocillinpivoxil)、阿莫西林、氨芐西林、阿帕西林、阿撲西林、阿度西林、阿洛西林、阿坎西林(acampicillin)、巴氨西林、芐基青霉酸、芐基青霉素鈉、羧芐青霉素、卡印西林、氯甲西林、鄰氯青霉素、環(huán)青霉素、雙氯青霉素、依匹西林、芬貝西林、氟氯西林、海他西林、利南西林、美坦西林、青霉素鈉、美洛西林、奈夫西林鈉、苯唑西林、培那西林、氫碘酸噴沙西林、苯乙芐胺青霉素G、芐星青霉素G、青霉素G二苯甲胺、青霉素G鈣、哈胺青霉素G、青霉素G鉀、普魯卡因青霉素G、青霉素N、青霉素O、青霉素V、芐星青霉素V、哈胺青霉素V、青哌四環(huán)素、非奈西林鉀、哌拉西林、匹氨西林、丙匹西林、喹那西林、卡達(dá)西林、舒他西林、酞氨西林、替莫西林、替卡西林及上述物質(zhì)的混合物或其他物質(zhì)(例如，結(jié)合克拉維酸的青霉素，例如葛蘭素史克公司(GlaxoSmithKline)商品名為AUGMENTINTM銷(xiāo)售的阿莫西林和克拉維酸的組合物)。采用下文實(shí)施例中描述的細(xì)菌平板計(jì)數(shù)方法，優(yōu)選的抗微生物劑可使一種或多種金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌或粘膜炎莫拉菌菌群中的細(xì)菌數(shù)量下降99%以上(即，至少下降2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí))、下降99.9%以上(即，至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)級(jí))、下降99.99%以上(§卩，至少下降4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí))、下降99.999。/。以上(g卩，至少下降5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí))。溶劑化體系可包含其他治療藥物。典型的治療藥物包括適用于耳鼻喉科的任何藥物，其中包括鎮(zhèn)痛藥、抗膽堿能藥、抗真菌藥、抗組胺藥、血液制品、留體或非甾體類(lèi)抗炎藥、抗寄生蟲(chóng)藥、抗病毒藥、生物靜力組合物、化療藥/抗腫瘤藥、細(xì)胞因子、減充血?jiǎng)?、免疫抑制劑、粘多糖、核酸、肽、蛋白質(zhì)、類(lèi)固醇、血管收縮藥、維生素、及上述藥物的混合物，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其他治療藥物。可包含在溶劑化體系中的其他輔助試劑包括染料、色素或其他著色劑(例如，F(xiàn)D&C3號(hào)紅、FD&C20號(hào)紅、FD&C6號(hào)黃、FD&C2號(hào)藍(lán)、D&C5號(hào)綠、D&C4號(hào)橙、D&C8號(hào)紅、焦糖、二氧化鈦、水果或蔬菜著色劑如甜菜粉或(3-胡蘿卜素、姜黃酸、辣椒以及本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其他物質(zhì))；指示劑；調(diào)味劑或甜味劑，其中包括而不限于八角油、櫻桃、肉桂油、檸檬油(例如，檸檬油、白檸檬油或橙皮油)、可可、桉樹(shù)、草藥芳烴(如丁香油、鼠尾草油或肉桂油)、乳糖、麥芽糖、薄荷腦、薄荷油、糖精、環(huán)己氨磺酸鈉、薄荷原油、山梨醇、蔗糖、香草醛、冬青油、木糖醇以及上述物質(zhì)的混合物；抗氧化劑；消泡劑；以及流變改性劑，其中包括增稠劑和觸變膠。優(yōu)選的是，溶劑化體系的使用量和使用厚度至少應(yīng)該足以覆蓋期望的生物被膜部分。例如，在治療部位附近確定或制造一個(gè)合適的開(kāi)口(例如，在中耳進(jìn)行某種治療時(shí)做鼓膜切開(kāi)術(shù))，這樣就可以方便地將導(dǎo)管、插管、注射器、導(dǎo)引管或其他導(dǎo)管經(jīng)該開(kāi)口推入以遞送溶劑化體系。如果治療部位是內(nèi)耳，那么可以按照上述方法制造進(jìn)一步的通路開(kāi)口。溶劑化體系可應(yīng)用于靶組織及其所包含的或其上所粘附的靶生物被膜，從而破壞、溶劑化并隨后清除生物被膜和其中的微生物。治療包括化學(xué)稀釋或機(jī)械破碎。例如，可以適當(dāng)小心地將溶劑化體系以加壓噴霧的方式施用以去除治療部位上形成的細(xì)菌生物被膜、細(xì)菌和其他外源有機(jī)體。這可以通過(guò)如下過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)金屬離子螯合劑通過(guò)螯合鈣離子破壞生物被膜EPS基質(zhì)，所得破壞的片段(例如，甘露糖醛酸和古洛糖醛酸)被溶解成水性溶液，這樣再通過(guò)鼓膜切開(kāi)術(shù)或咽鼓管、鼻或口腔抽吸、灌洗或其他清除技術(shù)進(jìn)行徹底的清除。優(yōu)選的是，將足夠量的溶劑化體系注入到治療部位以取代膿液或可能存在的其他物質(zhì)，使過(guò)多的物質(zhì)從治療部位流出，直到過(guò)多的物質(zhì)的顏色不再發(fā)生變化。溶劑化體系可以留在原處直到其自然流出，或者被清除掉或被吸收，或者使溶劑化體系保留一段時(shí)間(例如，數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間)然后用鹽水或其他合適的液體沖洗掉。溶劑化體系優(yōu)選直接施加到治療部位，因?yàn)橹苯邮┘涌纱偈股锉荒じ毂黄茐?。例如，?duì)于在中耳或內(nèi)耳中進(jìn)行的過(guò)程，溶劑化體系優(yōu)選直接施加到中耳或內(nèi)耳區(qū)，而不是僅僅加到耳道使其轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)鼓膜。需要時(shí)溶劑化體系的施加以及被移除或破壞的生物被膜和細(xì)菌的去除可以重復(fù)進(jìn)行，從而確保完全清除令人討厭的微生物。比較理想的是，溶劑化體系作為破壞生物被膜和抑制其再生的多步驟治療方案的一部分使用。例如，可以進(jìn)行一系列被廣泛地分類(lèi)為清洗/破壞、殺傷、保護(hù)/包被、換氣和愈合的步驟。通過(guò)給予上述溶劑化體系完成清洗/破壞步驟。通過(guò)將合適的抗微生物劑施加到治療部位來(lái)執(zhí)行殺傷步驟。例如，這個(gè)步驟可通過(guò)在溶劑化體系內(nèi)添加抗微生物劑來(lái)完成，或者通過(guò)在術(shù)中或術(shù)后單獨(dú)給予這種抗微生物劑來(lái)完成(例如，局部給藥、口服或全身給藥)。通過(guò)用保護(hù)性封閉劑包被至少一部分被處理組織來(lái)執(zhí)行保護(hù)/包被步驟。封閉劑可提供多種益處，例如抑制或阻止組織表面再生細(xì)菌菌落和新生物被膜形成菌落；降低炎癥反應(yīng)；促進(jìn)傷口愈合或者促使機(jī)體的內(nèi)在免疫系統(tǒng)恢復(fù)。封閉劑可包含一種或多種抗微生物劑以進(jìn)一步攻擊經(jīng)過(guò)上述清洗/破壞步驟后剩余的所有細(xì)菌生物被膜、生物被膜片段或細(xì)菌。有關(guān)優(yōu)選封閉劑的進(jìn)一步詳細(xì)描述參見(jiàn)上述共同待批的申請(qǐng)(代理人案號(hào)no.151-P-28168WO01)。換氣步驟是指保留或者形成適當(dāng)?shù)拈_(kāi)口(例如，鼓膜上的裂縫，或者閉塞的或部分閉塞的鼻道、鼻竇或鼻竇口內(nèi)的開(kāi)口)并使其保持開(kāi)放一段時(shí)間，從而保證治療部位能夠正常換氣。開(kāi)口保留時(shí)間要因開(kāi)口的性質(zhì)以及是否安置鼓膜造孔插管來(lái)治療而定。例如，如果鼓膜上已經(jīng)形成裂縫并且未在開(kāi)口處放置插管，那么可以讓裂縫保持開(kāi)放數(shù)天并愈合，從而使耳道自然閉合。愈合步驟是指使經(jīng)過(guò)清洗的、保護(hù)的和封閉的部位重新回到正常狀態(tài)，例如，通過(guò)一種或多種愈合機(jī)制如調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、吞噬作用、粘膜重塑、纖毛重生、或者全部或部分恢復(fù)正常聽(tīng)力或平衡。下面的非限制性實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)施例1金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌菌株是從鼻竇疾病患者的鼻竇內(nèi)分離的D患有囊性纖維化或免疫抑制疾病(HIV感染、胰島素依賴(lài)的糖尿病或腎病)的患者以及在前一個(gè)月內(nèi)使用過(guò)抗生素或口服過(guò)潑尼松的患者被排除在外。所有患者都患有頑固性鼻竇炎，也就是說(shuō)，盡管成功地進(jìn)行了功能性的內(nèi)窺鏡鼻竇手術(shù)(FESS)來(lái)治療伴隨或不伴隨鼻息肉的頑固性慢性鼻竇炎(CRS)，但是依然具有對(duì)抗治療措施的持續(xù)性癥狀。CRS的發(fā)生按照2003年美國(guó)耳鼻喉科-頭頸外科協(xié)會(huì)(AAO-HNS)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，參見(jiàn)Benninger等，"成人慢性鼻竇炎定義、診斷、流行病學(xué)和病理生理學(xué)"("Adultchronicrhinosinusitis:Definitions,diagnosis,epidemiology,andpathophysiology"),OtolaryngolHeadNeckSurg129(3增補(bǔ)):S1國(guó)S32(2003)。所選擇的患者在樣本采集前超過(guò)12個(gè)月對(duì)治療措施頑固，并且FESS的失效被診斷為與技術(shù)因素如阻塞性粘連、額竇阻塞或鉤突殘留無(wú)關(guān)。利用直接內(nèi)窺鏡導(dǎo)引和Nadel等，"慢性鼻竇炎的內(nèi)窺鏡導(dǎo)引培養(yǎng)物"("Endoscopicallyguidedculturesinchronicsinusitis")，AmJRhinol12:233-241(1998)所描述的方法連續(xù)收集樣品，直到分別獲得10個(gè)金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌的標(biāo)本。簡(jiǎn)言之，給予局麻藥，使鼻翼收縮，利用內(nèi)窺鏡觀察鼻道中部和鼻腔。將一個(gè)薄而柔軟的藻酸鈣拭子(STARSWABIITM收集與轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，安大略省艾托比克斯塔萊公司(CollectionandTransportSystem,StarplexScientific,Etobicoke，Ontario))插入并弓l導(dǎo)至(j最多膿液的部位。如果沒(méi)有看到膿液，那么擦拭上頜竇15秒。采樣過(guò)程中小心避免與側(cè)鼻腔壁或鼻前庭接觸。利用標(biāo)準(zhǔn)方法接種和培養(yǎng)樣品。細(xì)菌用VITEK2TM系統(tǒng)(北卡羅來(lái)納州達(dá)拉謨的生物系統(tǒng)公司(Biomerieux，Durham,NC))鑒定。按照Stepanovic等，"定量測(cè)定葡萄球菌生物被膜形成的經(jīng)修改的微滴定板試驗(yàn)"("Amodifiedmicrotiter-platetestforquantificationofstaphylococcalbiofilmformation"),JMicrobiolMethods40:175-179(2000)所描述的方法進(jìn)行結(jié)晶紫染色以確定生物被膜的存在。為了孵育和培養(yǎng)，將上述冷凍保存的菌株接種到含0.5%羊血的胰酶解大豆酪蛋白胨瓊脂(TSA)上。24小時(shí)后，每個(gè)菌株挑選1到4個(gè)克隆在TSA上培養(yǎng)。培養(yǎng)物在37°C培養(yǎng)24小時(shí)以使其適應(yīng)胰酶解大豆酪蛋白胨肉湯(TSB)-TSA培養(yǎng)基并確保無(wú)污染。按照Gotz，"葡萄球菌和生物被膜"("StaphylococcusandBiofilm")，MolMicrobiol43:1367-1378(2002)描述的方法，TSA固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的克隆在5mL添加0.5%葡萄糖的TSB培養(yǎng)基中擴(kuò)增，37"至少孵育24小時(shí)。采用滴流反應(yīng)器(DFR)來(lái)確定遞送至金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌生物被膜的各種試驗(yàn)溶液利用或不利用流體動(dòng)力清除羥磷灰石(HA)包被的載玻片上的這些細(xì)菌生物被膜的有效性。DFR上的載玻片從水平傾斜10°，模擬一種低剪切環(huán)境。DFR被放置在37'C需氧條件下的孵育箱內(nèi)。在細(xì)菌接種前約20分鐘，將無(wú)菌培養(yǎng)基(金黃色葡萄球菌用10%TSB;綠膿桿菌用1。/。TSB)滴加到DFR的載玻片上，使其覆蓋載玻片形成條件培養(yǎng)層。然后用lmL金黃色葡萄球菌或綠膿桿菌培養(yǎng)物接種載玻片。傾斜DFR使載玻片處于水平位置，孵育4小時(shí)以使細(xì)菌附著到基板上。隨后設(shè)定DFR使載玻片再次傾斜10°角，以每小時(shí)10mL的速度將無(wú)菌培養(yǎng)基滴加到載玻片上。3天以后，進(jìn)行生物被膜清除試驗(yàn)。兩種方法可用于處理每種細(xì)菌所形成的生物被膜。第一應(yīng)用方法包括DFR內(nèi)的靜態(tài)處理，將溶劑化試劑(被稱(chēng)為CAZS)滴加到生物被膜上。CAZS溶劑化試劑包含去離子水、25g/L(相當(dāng)于0.13M)檸檬酸、5.35g/L(相當(dāng)于0.02M)辛?；腔鸩藟A兩性離子表面活性劑(CH3(CH2)9N+(CIi3)2CH2CH2CH2S03-，CAS15163-36-7)和充足的檸檬酸鈉(約240g/L)，其中檸檬酸鈉的作用是將系統(tǒng)緩沖到pH5.4。第二應(yīng)用方法包括將鹽水或CAZS遞送至DFR外側(cè)，通過(guò)加壓噴射灌洗將流體動(dòng)態(tài)剪切力施加到生物被膜上。所有處理都要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)以確保各載玻片之間的變化在可接受的限度內(nèi)。另外，兩種細(xì)菌都準(zhǔn)備多個(gè)平板以確定批內(nèi)及批間差異。每個(gè)DFR批次都設(shè)定一個(gè)對(duì)照載玻片。每種細(xì)菌進(jìn)行的每種處理都要進(jìn)行三批試驗(yàn)。對(duì)于靜態(tài)處理來(lái)說(shuō)，流向DFR的液體是靜止的，DFR處于水平位置，蓋子被去掉。一個(gè)載玻片上滴加25mLCAZS。對(duì)照載玻片不用CAZS處理。IO分鐘后，載玻片用鹽水(25mL)漂洗。然后從內(nèi)流管上斷開(kāi)DFR，在層流通風(fēng)廚內(nèi)取出載玻片，放置到50mL無(wú)菌管內(nèi)。再次用鹽水漂洗(2mL)后，反復(fù)刮擦載玻片表面，將刮擦下來(lái)的物質(zhì)和鹽水收集到試管內(nèi)。將試管渦旋10秒，超聲破碎2分鐘，再次渦旋10秒，使細(xì)菌分散成懸液，然后對(duì)懸液進(jìn)行系列稀釋,將懸液加到三個(gè)含TSA的平板內(nèi)，每板100^L，37^孵育24小時(shí)。人工計(jì)數(shù)克隆形成單位(CFU)，計(jì)算CFU數(shù)/cm2。所得到的平板計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化成log(lO)，以每批三個(gè)載玻片的兩批DFR所得到的平板計(jì)數(shù)的平均值(±SD)表示。對(duì)于流體動(dòng)態(tài)處理來(lái)說(shuō)，從DFR取出載玻片，放置到手套箱內(nèi)。載玻片用支架固定，利用能進(jìn)行加壓噴射灌洗的裝置用約150mL鹽水或CAZS噴射洗滌約20秒。噴射洗滌既要進(jìn)行邊到邊掃描動(dòng)作，又要進(jìn)行上下掃描動(dòng)作，從而使所有區(qū)域都被噴射洗滌兩次，每個(gè)軸向洗滌一次。然后將載玻片放到50-mL無(wú)菌管內(nèi)，按照上述方法漂洗、刮擦、分散、孵育和評(píng)價(jià)。計(jì)算每一種處理后金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌數(shù)目(即，每個(gè)平板上的CFU數(shù))與對(duì)照相比的平均下降百分比(士SD)，所得到的結(jié)果利用雙樣本/試驗(yàn)(MINITABTM14版，Minitab，StateCollege,PA)進(jìn)行評(píng)價(jià)。P值小于0.05被認(rèn)為與對(duì)照相比有顯著性差異。結(jié)果顯示在下面的表l中，以三個(gè)平板評(píng)價(jià)兩次的克隆形成單元數(shù)的平均值(log)(iSD)/厘米表示表l根據(jù)處理類(lèi)型得到的細(xì)菌平板計(jì)數(shù)(log)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表l的結(jié)果說(shuō)明細(xì)菌的生物被膜可以被明顯清除。在處理前，金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌都在DFR上形成大量生物被膜，其對(duì)照的CFU計(jì)數(shù)為7.8到9.51og/cm^靜態(tài)CAZS處理可使金黃色葡萄球菌CFU數(shù)下降2.5個(gè)log(從5.11xl()8到1.65xlO6;P=0.001)，綠膿桿菌CFU數(shù)下降2.9個(gè)log(從1.69x109到1.91x106;P=0.002)。單獨(dú)遞送流體動(dòng)態(tài)鹽水進(jìn)行機(jī)械破壞可使金黃色葡萄球菌CFU數(shù)下降2.3個(gè)log(從5.11x108到2.38x1C)6;P二0.001)，綠膿桿菌CFU數(shù)下降2.4個(gè)log(從1.69x109至1」7.31x106;P=0.001)。但是，用流體動(dòng)態(tài)CAZS進(jìn)行機(jī)械破壞可使金黃色葡萄球菌CFU數(shù)下降3.9個(gè)log(從5.11x108到6.37x104;P=0.001)，綠膿桿菌CFU數(shù)下降5.2個(gè)log(從1.69x109至1」1.04x104;P=0.001)。共聚焦掃描激光顯微鏡(CSLM)用于檢測(cè)三個(gè)未進(jìn)行平板計(jì)數(shù)的載玻片(每種處理及每種細(xì)菌三個(gè)載玻片)以觀察對(duì)照樣品和處理樣品的生物被膜結(jié)構(gòu)。利用含兩種核酸染料(SYT09，檢測(cè)發(fā)綠色熒光的活細(xì)胞，碘化丙啶，檢測(cè)發(fā)紅色熒光的死細(xì)胞)的BACLIGHTLive/Dead試劑盒(加利福尼亞州卡斯百英吉分子探針公司(MolecularProbes,Invitrogen，Carlsbad,CA))對(duì)載玻片進(jìn)行染色以便于CSLM。染色以后，載玻片通過(guò)CSLM檢測(cè)，放大倍數(shù)630X,使用帶2-光子MAITAItm附件的LEICASP2聲-光射束分離器(伊利諾斯少H拜諾布的雷薩微系統(tǒng)公司(LeicaMicrosystems，Bannockburn，IL))進(jìn)行熒光激發(fā)，在綠色及紅色光譜處檢測(cè)。每個(gè)載玻片分成IO個(gè)大小相等的區(qū)域。從生物被膜的頂層到基板每隔l卞m拍攝一個(gè)影像，從而獲得每個(gè)部位的影像堆疊。CSLM分析表明對(duì)照載玻片上覆蓋了較厚的生物被膜。用鹽水流體動(dòng)態(tài)處理和用CAZS靜態(tài)處理可使覆蓋的生物被膜的量明顯減少，殘余的生物被膜的組織結(jié)構(gòu)明顯簡(jiǎn)化。用CAZS進(jìn)行流體動(dòng)態(tài)處理可使覆蓋的生物被膜的量及生物被膜的組織結(jié)構(gòu)明顯減少。對(duì)于每種處理所達(dá)到的生物被膜量的減少來(lái)說(shuō)，這些結(jié)果與平板計(jì)數(shù)分析得到的結(jié)果基本一致。在探究的三種處理方法中，用CAZS進(jìn)行電動(dòng)沖洗和加壓噴射灌洗是最有效的破壞細(xì)菌生物被膜的方法。利用鹽水進(jìn)行電動(dòng)沖洗也可以獲得明顯的生物被膜減少效果。但是，沖洗溶液內(nèi)存在表面活性劑和檸檬酸可明顯加大金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌生物被膜內(nèi)CFU計(jì)數(shù)的下降幅度。發(fā)生大的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下降，金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌生物被膜的細(xì)菌平板計(jì)數(shù)平均分別下降3.9和5.2個(gè)log(下降10,000到100,000倍)。在體外能夠達(dá)到這種幅度的下降說(shuō)明在中耳或內(nèi)耳、鼻腔或鼻竇腔、或者口腔或咽部組織內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)?shù)闹委熞矐?yīng)該能夠有效破壞這些部位的細(xì)菌生物被膜。殘留的低水平的頑固性細(xì)菌感染可以被宿主的防御機(jī)制處理，或者通過(guò)局部給予或口服抗微生物劑，以及通過(guò)使用上述封閉劑來(lái)處理。通過(guò)用硝酸鎵替代一部分水來(lái)調(diào)整實(shí)施例1所使用的CAZS溶劑化體系，經(jīng)過(guò)這樣調(diào)整的系統(tǒng)包含25%硝酸鎵。另外用去離子水制備含25%硝酸鎵的對(duì)照溶液。當(dāng)使用實(shí)施例1的靜態(tài)處理技術(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，給予硝酸鎵對(duì)照溶液可使金黃色葡萄球菌CFU數(shù)下降3.4個(gè)log(4批的平均值)，綠膿桿菌CFU數(shù)下降4.1個(gè)log(3批的平均值)。給予包含CAZS和硝酸鎵的溶液進(jìn)行靜態(tài)處理可使金黃色葡萄球菌CFU數(shù)下降5.2個(gè)log(2批的平均值)，綠膿桿菌CFU數(shù)下降5.5個(gè)log(2批的平均值)。雖然本文為了說(shuō)明優(yōu)選實(shí)施方式而對(duì)具體實(shí)施方式進(jìn)行了說(shuō)明和描述，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，只要不脫離本發(fā)明的范圍，可以為了達(dá)到相同目的進(jìn)行各種替代的或等價(jià)的實(shí)施。本發(fā)明意在涵蓋本文所討論的優(yōu)選實(shí)施方式的所有改變或變體。因此，可以很明確地說(shuō)，本發(fā)明僅由權(quán)利要求及其等價(jià)形式所限定。權(quán)利要求1.金屬離子螯合劑和重量百分比超過(guò)0.2％的表面活性劑在制備細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病治療藥物中的用途，其中表面活性劑能分離、清除或以其他方式破壞附著或粘附到中耳或內(nèi)耳的至少一部分上的、鼻腔或鼻竇腔內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的至少一部分生物被膜。2.(a)金屬離子螯合劑、(b)能分離、清除或以其他方式破壞附著或粘附到中耳或內(nèi)耳的至少一部分上的、鼻腔或鼻竇腔內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的至少一部分生物被膜的表面活性劑、以及(c)足以使pH大于5的緩沖劑在制備細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病治療藥物中的用途。3.—種治療細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病的方法，該方法包括-a)將包含金屬離子螯合劑和重量百分比大于0.2%的表面活性劑的溶劑化體系應(yīng)用到附著或粘附于中耳或內(nèi)耳的至少一部分上的、鼻腔或鼻竇腔內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的生物被膜上，以及b)分離、清除或以其他方式破壞至少一部分生物被膜。4.一種治療細(xì)菌性耳、鼻或喉部疾病的方法，該方法包括a)將包含金屬離子螯合劑、兩性離子表面活性劑和足以使溶劑化體系的pH大于5的緩沖劑的溶劑化體系應(yīng)用到粘附于中耳或內(nèi)耳的至少一部分上的、鼻腔或鼻竇腔內(nèi)表面上的、或者口腔或咽部組織上的細(xì)菌生物被膜上，以及b)分離、清除或以其他方式破壞至少一部分生物被膜。5.權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述溶劑化體系被用于中耳的至少一部分上。6.權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述溶劑化體系被用于鼻腔或鼻竇腔。7.權(quán)利要求3到6中任一權(quán)利要求所述的方法，其特征在于，所述方法包括通過(guò)噴射、灌洗、噴霧、擦洗、芯吸或滴加來(lái)施用溶劑化體系，還包括通過(guò)沖洗、漂洗、吸干或吸收來(lái)去除溶劑化體系。8.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包含弱酸，其酸性足以螯合細(xì)菌生物被膜內(nèi)的一種或多種金屬離子，但是其酸性又不足以損害中耳或內(nèi)耳。9.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括鈉、鈣或鐵的螯合劑。10.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括羧酸、二元酸、三元酸或上述酸的混合物。11.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括甲酸、乙酸、氯乙酸、二氯乙酸、草酸、草氨酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、天冬氨酸、富馬酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、亞氨基二乙酸、戊二酸、2-酮戊二酸、谷氨酸、己二酸、葡萄糖醛酸、粘酸、次氮基三乙酸、水楊酸、酮庚二酸、苯甲酸、扁桃酸、氯扁桃酸、苯乙酸、鄰苯二甲酸、硼酸、或上述酸的混合物。12.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括檸檬酸。13.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述金屬離子螯合劑存在的濃度為約0.01到0.5M。14.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法15.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述溶劑化體系的pH小于8.5。16.權(quán)利要求1或2所述的用途或權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述溶劑化體系還包含抗微生物劑。17.—種用于破壞組織上的細(xì)菌生物被膜的溶劑化體系，其組成包含金屬離子螯合劑、重量百分比超過(guò)0.2%的表面活性劑和抗微生物劑。18.—種用于破壞組織上的細(xì)菌生物被膜的溶劑化體系，其組成包含金屬離子螯合劑、兩性離子表面活性劑和足以使溶劑化體系的pH大于5的緩沖劑。19.權(quán)利要求17或18所述的溶劑化體系，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包含弱酸，其酸性足以螯合細(xì)菌生物被膜內(nèi)的一種或多種金屬離子，但是其酸性又不足以損害施加溶劑化體系的中耳或內(nèi)耳部分。20.權(quán)利要求19所述的溶劑化體系，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括鈉、鈣或鐵的螯合劑。21.權(quán)利要求19所述的溶劑化體系，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括羧酸、二元酸、三元酸或上述酸的混合物。22.權(quán)利要求19所述的溶劑化體系，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括甲酸、乙酸、氯乙酸、二氯乙酸、草酸、草氨酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、天冬氨酸、富馬酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、亞氨基二乙酸、戊二酸、2-酮戊二酸、谷氨酸、己二酸、葡萄糖醛酸、粘酸、次氮基三乙酸、水楊酸、酮庚二酸、苯甲酸、扁桃酸、氯扁桃酸、苯乙酸、鄰苯二甲酸、硼酸，或上述酸的混合物。23.權(quán)利要求21所述的溶劑化體系，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括檸檬酸。24.權(quán)利要求17或18所述的溶劑化體系，其特征在于，所述表面活性劑包括垸基硫酸鹽、烷基磺酸鹽或芳基磺酸鹽，或者上述物質(zhì)的混合物。25.權(quán)利要求17或18所述的溶劑化體系，其特征在于，所述抗微生物劑包括殼聚糖鹽、立方相脂質(zhì)、含鎵化合物、羧酸酯、磺酸、活性鹵素化合物、活性氧化合物、有機(jī)過(guò)氧化物、臭氧、單線(xiàn)態(tài)氧發(fā)生劑、酚衍生物或季銨化合物。26.權(quán)利要求25所述的溶劑化體系，其特征在于，所述抗微生物劑包括乙酰丙酮鎵、溴化鎵、氯化鎵、氟化鎵、碘化鎵、麥芽酚酸鎵、硝酸鎵、氮化鎵、滲濾鎵、亞磷酸鎵、硫酸鎵，或上述物質(zhì)的混合物。27.權(quán)利要求17或18所述的溶劑化體系，其特征在于，所述金屬離子螯合劑存在的濃度為約0.01到0.5M。28.權(quán)利要求17或18所述的溶劑化體系，其特征在于，所述表面活性劑占溶劑化體系的約0.5%妾1」25%。29.權(quán)利要求17或18所述的溶劑化體系，其特征在于，該溶劑化體系還包含緩沖劑，pH大于5而小于8.5。全文摘要慢性中耳炎伴積液(COME)、復(fù)發(fā)性急性中耳炎(RAOM)、膽脂瘤、慢性鼻竇炎和其他細(xì)菌性耳、鼻或喉疾病可通過(guò)將溶劑化體系施加到附著或粘附在治療部位的細(xì)菌生物被膜上進(jìn)行治療。溶劑化體系可破壞生物被膜，有助于清除。文檔編號(hào)A61K45/06GK101443079SQ200780016794公開(kāi)日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年5月8日優(yōu)先權(quán)日2006年5月10日發(fā)明者C·O·劉易斯,D·A·奧利弗,M·F·米恩笛申請(qǐng)人:麥德托尼克艾克斯歐麥德股份有限公司