專利名稱：：用于增強(qiáng)認(rèn)知功能和神經(jīng)保護(hù)的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喝唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮及其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備適于增強(qiáng)認(rèn)知功能或具有神經(jīng)保護(hù)作用的藥物的用途以及相應(yīng)的治療方法。
背景技術(shù)：
：公布的國際專利申請(qǐng)No.W003/010166和匈牙利專利申請(qǐng)No.PO103063中首次公開了式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喵唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠喚酮及其藥學(xué)上可接受的鹽。從現(xiàn)有技術(shù)中得知式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮是具有有價(jià)值的安定作用的、可用于治療精神病，尤其是精神分裂癥的候選藥物。按照現(xiàn)有技術(shù)，措詞"安定作用"被理解為抗精神病藥物在患有下述疾病的病人中所起的緩解作用窘迫、妄相、幻覺和由于精神病而導(dǎo)致的精神性運(yùn)動(dòng)興奮。近幾十年來，在藥物研究領(lǐng)域中出現(xiàn)了若干疾病，其與由不斷衰老而引起的神經(jīng)元死亡、慢性神經(jīng)元衰退、智力衰退或癡呆有關(guān)。這些疾病包括多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布(Creuzfeld-Jacob)病、亨廷頓綜合征、肌萎縮性脊髄側(cè)索硬化癥(ALS)、帕金森病、中風(fēng)和由于急性腦或脊髄外傷導(dǎo)致的或者由于暴露于毒性物質(zhì)而引起的或者因?yàn)榫植咳毖a(chǎn)生的神經(jīng)元死亡。上述病癥的特征性癥狀是學(xué)習(xí)能力下降、記憶喪失以及在一些情況下的智力衰退。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)可以劃分出兩類記憶。所謂的"短期記憶"特征在于信息的保留時(shí)間短，從一些分鐘至若干小時(shí)。措詞"長(zhǎng)期記憶"指信息的保留時(shí)間從幾小時(shí)至幾年(Baddley和Warington，J.Verb.Learn.Verb.Behav.9，176-179[1970]);Wright等人，Science229，287-289[1985])。信息從短期記憶轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)期記憶的過程稱作鞏固。將信息從短期或長(zhǎng)期記憶中回憶起來的過程稱作記憶。雖然記憶完全喪失相對(duì)而言是很少的，但是伴隨錯(cuò)亂的記憶或記憶力衰退而發(fā)生的病癥卻不斷上升。全世界有一千八百萬人口患有阿爾茨海默病，而且在未來一些年中預(yù)計(jì)患有該疾病的病人數(shù)量會(huì)顯著增加(Fletcher,Mol.Med.Today,3/10p.429-434，1997)。發(fā)明概述基于上述事實(shí)，我們研究的目的是開發(fā)適于治療那些與錯(cuò)亂的記憶和記憶力衰退有關(guān)，但不涉及精神病的病癥和疾病的藥物。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了上述目的。本發(fā)明基于下述的令人驚訝的認(rèn)識(shí)據(jù)證實(shí)在動(dòng)物模型試驗(yàn)中式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}_2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽可以有效預(yù)防由全腦缺血引起的神經(jīng)元死亡或者預(yù)防由于局灶性腦缺血所導(dǎo)致的神經(jīng)元損傷。此外，據(jù)發(fā)現(xiàn)化學(xué)上類似的式(II)的利培酮{3-(2-(4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)-1-哌啶基)-乙基)-6，7，8,9-四氫-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮}或其它抗精神病藥物不具有這種作用。因此，可以得出結(jié)論上述的神經(jīng)保護(hù)作用與式(I)化合物的已知的抗精神病作用無關(guān)。鑒于目前認(rèn)識(shí)到的神經(jīng)保護(hù)作用，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異噍唑-3-基)哌啶-1-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮及其藥學(xué)上可接受的鹽可用于改善由多發(fā)性硬化、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病(即，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥，ALS)、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征和帕金森病中的神經(jīng)元死亡所產(chǎn)生的行為參數(shù)。此外，在使用式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮進(jìn)行藥理學(xué)試驗(yàn)的過程中，發(fā)現(xiàn)所述化合物在以下體內(nèi)動(dòng)物模型中有效所述動(dòng)物模型適于用來檢測(cè)對(duì)學(xué)習(xí)能力以及對(duì)與記憶改善作用有關(guān)的機(jī)能作用的增強(qiáng)，其中所述模型例如為被動(dòng)回避行為模型、八-臂迷宮模型和所謂的物體識(shí)別模型。現(xiàn)有技術(shù)中并未提及對(duì)學(xué)習(xí)能力以及抗精神病藥物，例如化學(xué)上類似的式(n)的利培酮的記憶力改善作用的增強(qiáng)作用。上述4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮的令人驚訝的神經(jīng)保護(hù)和記憶力增強(qiáng)作用以及學(xué)習(xí)能力改善作用證明其本身在沒有遭受精神的個(gè)體中。因此，上述作用與現(xiàn)有技術(shù)中已知的式(I)化合物的抗精神病作用是相互獨(dú)立的。發(fā)明詳述基于上述作用，式(I)的4-氯-5-(2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異噍唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮及其藥學(xué)上可接受的鹽適合用于治療與學(xué)習(xí)能力喪失、記憶障礙或智力衰退有關(guān)的疾病或病癥，例如由急性腦或脊髓損傷所導(dǎo)致的病癥、中風(fēng)、腦痙攣、腦或脊髓外傷之后的神經(jīng)元死亡。此外，給藥式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮或其藥學(xué)上可接受的鹽還可以治療老齡化所引起的智力衰退、有毒物質(zhì)的作用而導(dǎo)致的認(rèn)知功能衰退。在本發(fā)明的描述中，措詞"藥學(xué)上可接受的鹽"意指使式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠溱酮與藥學(xué)上適當(dāng)?shù)?、無毒的無機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)而制得的鹽。這種藥學(xué)上可接受的鹽為式(I)化合物例如與氯化氫、溴化氫、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸、酒石酸、馬來酸、富馬酸、乳酸、蘋果酸、杵檬酸、苯磺酸、曱苯磺酸、甲磺酸等所形成的鹽。借助頸動(dòng)脈雙側(cè)阻塞的沙鼠全腦缺血模型和中樞腦動(dòng)脈永久阻塞的大鼠局灶性腦缺血模型來試驗(yàn)式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠喚酮的神經(jīng)保護(hù)作用。將式(II)的利培酮[3-(2-(4-(6-氟-1，2-苯并[d]異鳴唑-3-基)-l-哌啶基)乙基)-6，7，8，9-四氫-2-曱基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮]用作參考化合物。在重50-80g的雄性沙鼠中進(jìn)行全腦缺血模型試驗(yàn)。在手術(shù)過程中，用乙醚麻醉動(dòng)物，在中央部位進(jìn)行腹部切割，從而釋放氣管區(qū)域內(nèi)的頸動(dòng)脈。使頸動(dòng)脈與迷走交感神經(jīng)主干分離，使用動(dòng)脈鉗阻塞動(dòng)脈3分鐘，隨后再釋放。在手術(shù)過程中監(jiān)測(cè)體溫并使用紅外線燈將體溫保持在正常范圍內(nèi)(37.5±0.5"C)。手術(shù)之后以0.lmg/kg的劑量經(jīng)腹膜給藥試驗(yàn)物質(zhì)式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠喚酮和參考物質(zhì)式(II)的利培酮。手術(shù)四天后，使用戊巴比妥-Na(60mg/kgip.，10ml/kg)麻醉動(dòng)物，并用生理鹽水灌注大腦直至整個(gè)左側(cè)腦室。使用固定液(200m1/動(dòng)物)再繼續(xù)灌注30分鐘。固定液含有0.1%的戊二醛、4%的多聚甲醛和溶于0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中的0.2%的苦味酸。經(jīng)灌注之后，從頭骨中分離出大腦并貯存在上述固定液中，在水箱中于4C下保持至少一周。使用冷凍顯微切片機(jī)將含有背側(cè)海馬狀突起的腦部切成60-mm厚的冠狀部分。在0.1M的磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中將該部分洗滌4次并振蕩30分鐘，在該過程中所述腦部分漂浮在洗滌溶液中。隨后，使用銀浸漬法對(duì)所述腦部分進(jìn)行著色。通過銀浸漬法所進(jìn)行的著色作用包括(a)將所述試樣在預(yù)備溶液中浸沒2次，歷時(shí)5分鐘(所述的預(yù)備溶液包含2%的氫氧化鈉水溶液和0.875%的氫氧化銨水溶液)；(b)使所述試樣在溶液中浸漬IO分鐘(0.875%的氫氧化銨和0.5o/。的硝酸銀在水中的溶液)，(c)洗滌試樣2次，歷時(shí)2分鐘，最后在溶于29.1%的乙醇水溶液中的、0.5%的碳酸鈉和0.01%的硝酸銨溶液中洗滌1分鐘；(d)通過將所述部分浸沒在顯影溶液(在9.9%乙醇中的1-1.5%的甲醛和0.01%的硝酸銨)中而顯影l(fā)分鐘；(e)定影3次，歷時(shí)3分鐘，每次都在0.5%的醋酸溶液中進(jìn)行。將著色的腦部分放覃在O.lM的磷酸鹽緩沖液(pH7,4)中，隨后放置在鉻的白明膠中，將其安放在載玻片上并脫水(干燥)、用二甲苯處理10分鐘并使用dpx組織粘合劑(Fluka)粘合蓋片。按照下列6分制評(píng)價(jià)在海馬CA1區(qū)內(nèi)的雙側(cè)神經(jīng)元損傷情況0—未觀察到損傷；1—0-10%的神經(jīng)元損傷；2一10-30%的神經(jīng)元損傷；3-30-50%的神經(jīng)元損傷；4-50-70%的神經(jīng)元損傷；5-70-90%的神經(jīng)元損傷；6-90-100%的神經(jīng)元損傷。將在處理組中測(cè)得的平均分?jǐn)?shù)以在照動(dòng)物的情況下觀察到的平均分?jǐn)?shù)的百分?jǐn)?shù)表示。借助非參數(shù)的Mann-WhitneyU-試驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果總結(jié)在表1中。表1在沙鼠雙側(cè)頸動(dòng)脈阻塞所致的全腦缺血中觀察到的、式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異嚙唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-_2-甲基-3-(2H)噠嗪酮和利培酮對(duì)海馬神經(jīng)元損傷的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>**p<0.01,vs.對(duì)照，Mann-WhitneyU-試驗(yàn)上述試驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，在O.lmg/kgi.p.的劑量下，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基卜2-曱基-3-(2H)噠嗪酮顯著降低海馬CA1區(qū)內(nèi)的神經(jīng)元損傷比例，而同樣劑量的式(n)的利培酮沒有作用。在意圖研究式(I)化合物在局灶性腦缺血模型中的作用的試驗(yàn)中，采用Brint及其同事們的方式(Brint，S.Focalbrainischemiaintherat:methodsforreproducibleneocorticalinfarctionusingtandemocclusionofthedistalmiddlecerebralandipsilateralcommoncarotidarteries.J.Cereb.BloodFlowMetab.8:474-485，1988)。用60mg/kgi.p.的戊巴比妥麻醉重200-220g的雄性SPRD大鼠，使用電燒灼器阻塞中樞腦動(dòng)脈的末梢臂和同一側(cè)的頸動(dòng)脈。手術(shù)之后經(jīng)腹膜給藥試驗(yàn)化合物和參考化合物30分鐘。手術(shù)的48小時(shí)之后，使用120mg/kgi.p.的戊巴比妥再次麻醉大鼠并用3ml4%的氯化2，3，5-三苯基四唑(TTC)溶液灌注大腦直至整個(gè)左側(cè)腦室。1小時(shí)之后，除去所述大腦并將其立即放入水冷的生理鹽水中保持1-2分鐘。隨后，將所述大腦一個(gè)接一個(gè)地放置在8%的福爾馬林溶液中。24小時(shí)之后，制備1-mm厚的冠狀部分，用計(jì)算機(jī)圖像記錄和分析系統(tǒng)確定損傷的大腦組織區(qū)域。用ANOVA和Duncan-試驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果總結(jié)在表2和圖1中。表24-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-絲}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮和利培酮在大鼠永久性局灶性缺血中的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*P<0.01基于在局灶性腦缺血的大鼠模型中獲得的結(jié)果得出結(jié)論，如果以0.03mg/kgi.p.的劑量給藥，則式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喝唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2^噠嗪酮在統(tǒng)計(jì)學(xué)上以顯著的方式降低腦梗死的尺寸，而據(jù)證明式(II)的利培酮在同樣的劑量范圍內(nèi)(0.01-0.3mg/kgip.)是無效的。在上面提供的動(dòng)物試驗(yàn)中，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嚷酮預(yù)防由全腦缺血所引起的神經(jīng)元損傷和由于局灶性腦缺血所導(dǎo)致的大腦組織損壞。由于與已知具有抗精神病活性的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-l-基]-乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮具有類似作用的式(II)的利培酮并未顯示任何神經(jīng)保護(hù)作用，因此式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)-哌啶-l-基]-乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮的這些作用是預(yù)料不到的。使用被動(dòng)回避、八-臂徑向迷宮和物體識(shí)別試驗(yàn)，在大鼠中研究了4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮對(duì)學(xué)習(xí)和記憶過程的影響。在重200-220g(CharlesRiver,Budapest)的雄性Wistar大鼠中進(jìn)行了被動(dòng)回避試驗(yàn)。將試驗(yàn)動(dòng)物置于具有12-12小時(shí)晝夜亮-暗周期的空間內(nèi)。在6:OOam打開照明?？臻g的相對(duì)濕度為60±10%。在帶有五個(gè)通道的所謂步入型裝置中進(jìn)行試驗(yàn)，所迷裝置適合進(jìn)行被動(dòng)回避學(xué)習(xí)試驗(yàn)。所述裝置包括兩個(gè)20x20x16cm的樹脂玻璃箱子。一個(gè)箱子是透明的，另一個(gè)是不透明的、涂黑的。在具有7.5x8cm開口的兩個(gè)箱子之間具有一個(gè)分隔墻。所述開口可以通過受計(jì)算機(jī)控制的開閉門而被打開或關(guān)閉。借助兩個(gè)平行的光電池排來檢測(cè)大鼠從一個(gè)箱子至另一個(gè)箱子的轉(zhuǎn)移，在動(dòng)物轉(zhuǎn)移之后門自動(dòng)關(guān)閉。涂黑的箱子的地板由不銹鋼桿組成，所述不銹鋼桿裝備了適于輸送電擊的電路。在裝置的光亮(透明)側(cè)的門之上有IO-W的燈泡。在相差24小時(shí)的連續(xù)兩日中進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)的第一部分是所謂的獲取周期，其中所述動(dòng)物能夠獲得該情形下(一進(jìn)入暗箱就輸送電擊)特有的信息。試驗(yàn)的第二部分是所謂的保留周期。在該階段中，對(duì)動(dòng)物回憶起在第一部分中收集到的信息的能力進(jìn)行試驗(yàn)(一進(jìn)入暗箱就輸送電擊，因此留在亮室中受傷較少)。在試驗(yàn)的笫一天(獲取周期)，將編號(hào)的動(dòng)物放置在裝置的透明室中，同時(shí)關(guān)閉閘門。30秒之后，打開門，動(dòng)物可以自由進(jìn)入暗箱中。同時(shí)，將用于測(cè)定轉(zhuǎn)移潛伏期的時(shí)鐘打開。轉(zhuǎn)移潛伏期是閘門打開至動(dòng)物從亮室轉(zhuǎn)移至暗室所經(jīng)歷的時(shí)間長(zhǎng)短。當(dāng)動(dòng)物進(jìn)入暗箱時(shí)，測(cè)量潛伏期的時(shí)鐘停止。進(jìn)入暗室后3秒鐘時(shí)，以爪擊的形式向動(dòng)物輸送0.4mA的電擊并保持10秒。屬于絕對(duì)對(duì)照組的動(dòng)物未遭受爪擊。經(jīng)電擊之后，將動(dòng)物立刻從裝置中移出。給動(dòng)物180秒的時(shí)間來進(jìn)入暗室。絕對(duì)對(duì)照組的作用是證明動(dòng)物能夠回憶起該電擊。這是獲取過程的本質(zhì)。在24小時(shí)之后的第二天的試驗(yàn)(保留周期)中，將所述動(dòng)物再次置于裝置中。該方法的隨后部分與第一天相同，差別僅在于除了一組之外，其它都未向動(dòng)物輸送電擊。與第一天類似，給動(dòng)物180秒的時(shí)間來進(jìn)入暗箱。第二天時(shí)，在確定式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異嚙唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮的作用的試驗(yàn)過程中，在將動(dòng)物置于所述裝置中之前，用試驗(yàn)物質(zhì)[式(I)化合物]和參考物質(zhì)[式(II)的利培酮]或者用載體(0.4%的甲基纖維素)處理試驗(yàn)動(dòng)物。以0.005mg/kg的劑量、5ml/kg的體積進(jìn)行口服治療。用多因素(multipleway)方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。用Duncan-試驗(yàn)分析各組之間的差異。表3和圖2中說明了結(jié)果?；谠囼?yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基)-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮在極低、0.005mg/kg的劑量下即顯著改善記憶。在同樣的劑量下利培酮未顯示任何作用。表34-氯-5-{2-[4-(6-氟1，2-苯并[d]異喝唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-絲}—2-甲基-3-(2H)歧，秦酮和利培酮在大鼠被動(dòng)回避模型中的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>**:p<0.05，與對(duì)照相比++:p<0.05，與0.4mA/10秒電擊的情況相比八-臂徑向迷宮試驗(yàn)適用于研究學(xué)習(xí)和記憶過程，也適用于篩選影響這種過程的候選藥物。所述裝置由八邊形的中央平臺(tái)(直徑30cm，高2Scm)和連接在中央平臺(tái)上的八個(gè)70cm長(zhǎng)、llcm高的臂組成，所述臂的相對(duì)端被伺料容器所封閉。迷宮的底部是不銹鋼的，墻壁和頂棚由樹脂玻璃制成。飼料容器由不銹鋼制成。在研究過程中，使用重240-250g的雄性SPRD大鼠。動(dòng)物的亮-暗周期是12-12小時(shí)，在7:00am進(jìn)行照明轉(zhuǎn)化。在照明周期(9:00am-3:00pm)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。在所謂的食物療法期間，由于采用饑餓驅(qū)動(dòng)力來進(jìn)行學(xué)習(xí)，因此所述動(dòng)物被部分固定。因而，動(dòng)物規(guī)律地每天進(jìn)食由2份標(biāo)準(zhǔn)祠料球所組成的飲食，保持一周。一周之后，動(dòng)物的體重達(dá)到正常進(jìn)食動(dòng)物的約80-85%。在適應(yīng)期間，在最初的兩天內(nèi)將動(dòng)物放置在迷宮中IO分鐘。將每個(gè)飼料容器中裝滿小片餅干。只有在經(jīng)過了迷宮之后才給動(dòng)物喂食飼料。在持續(xù)10-12天的學(xué)習(xí)期間，所述動(dòng)物應(yīng)該學(xué)會(huì)在迷宮中找到所有的餅干片并且避免進(jìn)入到那些已經(jīng)經(jīng)過了的臂中。在迷宮中耗時(shí)5分鐘之后，所述動(dòng)物返回至它們的籠子中，籠子中提供每日的那份飼料。在學(xué)習(xí)階段之后進(jìn)行選擇階段，其目的是僅將那些已經(jīng)學(xué)會(huì)了任務(wù)，即經(jīng)過三次試驗(yàn)只犯一次大錯(cuò)(TE〈-1和ICR>=7，t〈-5分鐘)的動(dòng)物選出來參與試驗(yàn)。使用裝在隔壁房間的攝像機(jī)監(jiān)測(cè)動(dòng)物的活動(dòng)。在實(shí)際的試驗(yàn)過程中，將所述動(dòng)物分成三個(gè)組C(對(duì)照)，S(東茛菪堿)和T(試驗(yàn))。用經(jīng)i.p.的載體(0.4%的曱基纖維素，預(yù)處理時(shí)間40分鐘)和經(jīng)皮下的溶劑(生理鹽水，預(yù)處理時(shí)間30分鐘)來處理作為絕對(duì)對(duì)照的組C。用經(jīng)i.p.的載體和經(jīng)皮下的0.5mg/kg東萊菪堿處理組S。只有在組S的特性顯著差于組C時(shí)才能評(píng)價(jià)所述試驗(yàn)。分別用經(jīng)腹膜的、0.Olmg/kg劑量的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮或0.Olmg/kg的利培酮和經(jīng)皮下的0.5mg/kg劑量的東萊菪堿處理組T,在試驗(yàn)過程中，將所述動(dòng)物單獨(dú)置于所述迷宮中，使用攝像機(jī)監(jiān)測(cè)它們的活動(dòng)。當(dāng)所述動(dòng)物完成它們的任務(wù)時(shí)，從迷宮中移出動(dòng)物。結(jié)果評(píng)價(jià)包括確定下列變量初始正確答案數(shù)；總錯(cuò)誤數(shù)(TE錯(cuò)誤)；被多次進(jìn)入的臂數(shù)(WM錯(cuò)誤)、未被進(jìn)入過的臂數(shù)(RM錯(cuò)誤)、在第一次錯(cuò)誤之前被進(jìn)入的臂數(shù)(ICR)。工作記憶(WM)錯(cuò)誤表明動(dòng)物的工作記憶被損壞，因?yàn)閯?dòng)物不能記得其進(jìn)入到特定的臂中。RM錯(cuò)誤表明參考記憶受到損壞，因?yàn)閯?dòng)物不能回憶起應(yīng)該進(jìn)入到哪個(gè)臂中15(在本試驗(yàn)中為其所有)。用方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)，用Duncan-試驗(yàn)確定各組之間的差異。基于表4中總結(jié)的試驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論，當(dāng)以0.01mg/kg的劑量經(jīng)腹膜給藥時(shí)，在被研究的所有三個(gè)參數(shù)中，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異鳴唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基卜2-甲基-3-(2H)噠嗪酮都顯著預(yù)防由東萊菪堿治療所引起的記憶退化。在同樣的劑量下，精神病抑制藥利培酮未顯示顯著的作用。表4在大鼠的八-臂迷宮模型中，4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯基[d]基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠。秦酮和利培酮對(duì)東萊菪堿-誘發(fā)的記憶力缺乏的作用化綠劑量微ICR觀TE(mg/kg)編號(hào)N(秒)對(duì)照(c)-78.0±00±00±0東t菪堿(s)0.573,4±4.6±5."0.3"1.2**0.9"利培酮(A-r)0.0183.0±4.2±6.0±0.1"0.3**0.3"4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1'2-苯并[d]0.0186，0±1.5士2.3±異喝哇-3-*)艱咬+基]乙基-0.4**++0.5+0.5+-2-甲基-3-(2H)&喚酮(A—1)*p<0.01，與對(duì)照相比++p<0.01，+p<0.05，與組S相比ICR:初始正確響應(yīng)數(shù)WME:工作記憶錯(cuò)誤數(shù)TE:總錯(cuò)誤數(shù)大鼠的物體識(shí)別試驗(yàn)是以觀察動(dòng)物面臨未知環(huán)境時(shí)的情況為基礎(chǔ)的，它們四處狂奔和發(fā)現(xiàn)可用的區(qū)域。在有未知物體放置在它們的16區(qū)域范圍內(nèi)時(shí)其具有類似的表現(xiàn)。在本發(fā)明的試驗(yàn)設(shè)置中，在實(shí)際試驗(yàn)的前一天，將動(dòng)物放置在箱子中，在此動(dòng)物們有兩分鐘時(shí)間來熟悉環(huán)境。在試驗(yàn)的第一天，將兩個(gè)同樣的物體(在本設(shè)置中為塑料沖洗瓶和玻璃瓶)放置在所述箱子中，確定動(dòng)物考察兩個(gè)物體所耗費(fèi)的時(shí)間長(zhǎng)度。試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)度為4-5分鐘?？疾烀總€(gè)物體所耗費(fèi)的時(shí)間長(zhǎng)度差就是所謂的辨別指數(shù)。在試驗(yàn)的第二天(在第一個(gè)試驗(yàn)周期之后的24小時(shí))，將兩個(gè)不同的物體放置在所述箱子中，其中的一個(gè)物體對(duì)動(dòng)物而言是已知的而另一個(gè)是未知的。在對(duì)照組中，辨別指數(shù)沒有顯著差別，這表示所述動(dòng)物不能回憶起其第一天已經(jīng)熟悉了的物體。當(dāng)在第一天將增強(qiáng)記憶力的藥物給藥于所述動(dòng)物(例如，口服，試驗(yàn)前60分鐘)時(shí)，所述動(dòng)物能夠更好地回憶起已經(jīng)認(rèn)知的物體，未知物體的辨別指數(shù)有利地得到提高。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮甚至在極低的劑量，0.Olmg/kg下也顯著增強(qiáng)了記憶功能(表5)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>總之，本發(fā)明基于下述的令人驚訝的認(rèn)識(shí)，由于式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮及其藥學(xué)上可接受的鹽適合預(yù)防由沙鼠頸動(dòng)脈阻塞所致的全腦缺血而引起的海馬CA1區(qū)內(nèi)的神經(jīng)元死亡，因此其具有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用，并且所述化合物顯著降低由于局灶性缺血而導(dǎo)致的大鼠的腦損傷。此外，還出乎意料地發(fā)現(xiàn)，式(I)的4-氟-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基卜2-曱基-3-(2H)噠喚酮及其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽在提高學(xué)習(xí)和記憶過程中顯示出有利的作用。因此得出結(jié)論，式(I)的-(2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異鳴唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮可以有利地用于治療缺血或外傷引起的急性腦和脊髓神經(jīng)元損傷(包括但不限于不同形式的中風(fēng)、腦痙攣、腦血管收縮、由事故造成的頭或脊髓受傷、慢性神經(jīng)退化疾病，包括運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病(ALS)、多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征、帕金森病)以及任何其中神經(jīng)元或其一部分受到損傷或破壞的疾病、病癥或狀態(tài)，用以降低神經(jīng)元死亡速度，從而降低疾病的進(jìn)展速度。此外，式(I)的4-氯-5-(2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮及其藥學(xué)上可接受的鹽適用于治療和/或預(yù)防其中學(xué)習(xí)或記憶功能受到損傷或者存在受到這種損傷風(fēng)險(xiǎn)的疾病、病癥或狀態(tài)。這些疾病為阿爾茨海默病、科爾薩科夫病(Korsakoff-disease)、亨廷頓綜合征和帕金森病以及由于老齡化而引起的智力衰退、由腦血管所引起的癡呆或者由于暴露于有毒物質(zhì)而導(dǎo)致的認(rèn)知功能喪失。由于參考化合物，式(II)的利培酮同樣具有抗精神病活性，但是卻不具有上面提及的神經(jīng)保護(hù)和認(rèn)知增強(qiáng)作用，因此上述作用并不遵循于式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮的由現(xiàn)有技術(shù)已知的抗精神病活性。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供一種式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于獲得神經(jīng)保護(hù)作用或用于影響認(rèn)知功能的用途。式(I)化合物的用途通常是通過將含有治療有效量的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基)-2-曱基-3-(2H)噠漆酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的這種藥物給藥于需要該治療的病人而實(shí)現(xiàn)的。確定式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯基[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基)-2-甲基-3-(2H)噠噪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)際劑量是醫(yī)生的任務(wù)。式(I)化合物的常用日劑量為0.01-300mg/kg，其取決于例如待治療的疾病的類型、質(zhì)量和嚴(yán)重程度、病人的年齡、性別、生理狀態(tài)、其它治療和給藥方法。本發(fā)明的進(jìn)一步的方面是式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基卜2-甲基-3-(2H)噠嗪酮及其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備可用于影響認(rèn)知功能或提供神經(jīng)保護(hù)作用的藥物的用途。本發(fā)明的進(jìn)一步的方面提供含有式(I)的4-氯-5_U-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的栽體以及任選地混有一種或多種現(xiàn)有技術(shù)中已知的藥學(xué)上可接受的助劑的藥物。根據(jù)本發(fā)明的藥物中的活性成分含量通常為0.1-95重量％，優(yōu)選為1-50重量％，最有利為5-30重量％。根據(jù)本發(fā)明的藥物可以口服給藥?？诜幬锟梢猿史勰⑵瑒?、糖衣片劑、咀嚼片劑、膠嚢、微膠囊、顆粒、糖衣丸、錠劑、溶液或乳液形式。根據(jù)本發(fā)明的藥物的另一種類型適于腸道外給藥，例如適用于靜脈內(nèi)的注射液、皮下或腹膜內(nèi)注射液或者為輸注液。根據(jù)本發(fā)明的、不同類型的藥物經(jīng)直腸給藥(例如，栓劑)，經(jīng)皮膚給藥(例如，藥骨)，植入或局部用的形式(例如，乳霜、軟貪或藥骨)。根據(jù)本發(fā)明的固體、半固體或液體藥物可以通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法來制備。19根據(jù)本發(fā)明的適于口服給藥的藥物含有活性成分，式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1,2-苯并[d]異嗝唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(211)-噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽以及栽體或添加劑(例如，乳糖、葡萄糖、淀粉、磷酸鉤、微晶纖維素)，粘結(jié)劑(例如，白明膠、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷酮)，崩解劑(例如，交聯(lián)羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮)，成片助劑(例如，硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、硅酸、二氧化硅或表面活性劑(例如，月桂基硫酸鈉)。適合口服給藥、呈液體形式的、含有式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠溱酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物可以為溶液、糖漿、懸浮液或乳液，并且可以含有懸浮助劑(例如，白明膠、羧甲基纖維素)，溶劑(例如，氺、油、甘油、聚乙二醇、乙醇)，緩沖液(例如，醋酸鹽、膦酸鹽或檸檬酸鹽緩沖液)和穩(wěn)定劑(例如，4-羥基苯曱酸甲酯)。含有式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的腸道外藥物是無菌等滲溶液，除了溶劑之外其還可以含有緩沖液和穩(wěn)定劑。含有式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的半固體藥物含有均勻分散在制劑基質(zhì)(例如，聚乙二醇、可可油)中的活性成分?？梢愿鶕?jù)現(xiàn)有技術(shù)中已知的藥物學(xué)方法來制備本發(fā)明的含有4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物。將活性成分與固體或液體栽體和助劑均勻混合并將其轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬飫┬?。適當(dāng)?shù)妮d體和輔助物質(zhì)以及適當(dāng)?shù)姆椒ㄔ诂F(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開(Remington,sPharmaceuticalSciences,18版，MackPublishingCo.，Easton，USA,1990)。含有式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物含有單元?jiǎng)┬偷幕钚猿煞帧１景l(fā)明的進(jìn)一步目的是一種用于影響認(rèn)知功能或提供神經(jīng)保護(hù)作用的方法向需要這種治療的病人給藥治療有效量的4-氯-5-(2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。權(quán)利要求1.式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備神經(jīng)保護(hù)藥物的用途2.式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-1-基]乙基-氨基}-2-曱基-3-(2H)噠噪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備適于影響記憶或?qū)W習(xí)能力的藥物的用途。3.式(I)的4-氯-5-(2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異嗜,唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠噪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備適于治療或預(yù)防神經(jīng)元死亡、智力衰退、多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征、肌萎縮性脊髄側(cè)索硬化癥、帕金森病或中風(fēng)的藥物的用途。4.式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠漆酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備適于改善記憶，治療或預(yù)防記憶喪失、記憶障礙或遺忘癥的藥物的用途。5.神經(jīng)保護(hù)藥物，其包含式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的栽體和/或助劑。6.適于治療神經(jīng)元死亡、智力衰退、多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、帕金森病或中風(fēng)的藥物，其包含式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或助劑。7.適于增強(qiáng)記憶或?qū)W習(xí)能力的藥物，其包含作為活性成分的式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基〗乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其酸加成鹽和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或助劑。8.適于改善記憶或預(yù)防或治療記憶喪失、記憶障礙或遺忘癥的藥物，其包含與藥學(xué)上可接受的栽體和/或助劑相混合的式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。9.制備根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)的藥物的方法，該方法包括將式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽與適當(dāng)量的藥學(xué)上可接受的栽體以及任選的其它藥學(xué)上可接受的助劑相混合，并將如此獲得的混合物轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬飫┬汀?0.式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(210噠溱酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于預(yù)防或治療神經(jīng)元死亡、智力衰退、多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征、肌萎縮性脊髄側(cè)索硬化癥、帕金森病或中風(fēng)的用途。11.式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于改善學(xué)習(xí)能力或增強(qiáng)記憶或預(yù)防或治療記憶喪失、記憶障礙或遺忘癥的用途。12.治療神經(jīng)元死亡、智力衰退、多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、帕金森病或中風(fēng)的方法，該方法包括向需要這種治療的人給藥治療有效量的式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}_2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。13.改善記憶或治療或預(yù)防記憶喪失、記憶障礙或遺忘癥的方法，該方法包括向需要這種治療的人給藥治療有效量的式(I)的4-氯一5_{2-[4_(6-氟-l，2-苯并[d]異喁唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。14.改善學(xué)習(xí)能力的方法，該方法包括向需要這種治療的人給藥治療有效量的式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-l，2-苯并[d]異嚙唑-3-基)哌啶-l-基]乙基-氛基)-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。全文摘要本發(fā)明涉及式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備適于改善認(rèn)知功能或者獲得神經(jīng)保護(hù)作用的藥物的用途。含有式(I)的4-氯-5-{2-[4-(6-氟-1，2-苯并[d]異噁唑-3-基)哌啶-1-基]乙基-氨基}-2-甲基-3-(2H)噠嗪酮或其治療上可接受的鹽的藥物可以用于治療或預(yù)防神經(jīng)元死亡、智力衰退、多發(fā)性硬化、克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布病、亨廷頓綜合征、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、帕金森病、記憶障礙、記憶喪失、遺忘癥、中風(fēng)或用于改善記憶功能或?qū)W習(xí)能力。文檔編號(hào)A61K31/501GK101516373SQ200780030655公開日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年7月3日優(yōu)先權(quán)日2006年7月3日發(fā)明者G·勒維,G·吉格萊爾,G·塞納希,G·希米格,H·考姆帕格納,I·加克薩爾伊,J·鮑爾科齊,K·莫里茨,L·G·哈爾申,M·阿高斯頓,S·凱爾泰斯申請(qǐng)人:埃吉斯藥物股份公開有限公司