專利名稱：：包含迷迭香酸的組合物的改善的生物學(xué)作用的制作方法包含迷迭香酸的組合物的改善的生物學(xué)作用發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及包含迷迭香酸或提取物的組合物，所述提取物包含迷迭香酸，并且涉及這些組合物中的水解酶或微生物的用途，所述微生物包含或能夠產(chǎn)生水解酶。本發(fā)明還涉及用于改善包含迷迭香酸及其衍生物的組合物的生物學(xué)作用的方法。
背景技術(shù)：
：迷迭香酸是多種天然來源中存在的一種多酚，所述天然來源包括迷迭香、牛至(oregano)、甘牛至草、百里香、胡椒薄荷、聚合草、歐芽、蜜蜂花、鼠尾草、海索草、羅勒、熏衣草等。這些植物作為藥草治療已經(jīng)被報道，具有抗氧化、抗炎、抗癌和保肝特性。這些生物學(xué)作用與多酚、特別是迷迭香酸、黃酮和黃烷醇的存在有關(guān)，例如這些物質(zhì)在迷迭香葉子中被鑒定出來。的生物學(xué)作用，所述植物提取物包含所述迷迭香酸。發(fā)明目的因此，仍然需要改善包含迷迭香酸或植物提取物的組合物的生物學(xué)作用，所述植物提取物包含所述迷迭香酸及其衍生物。發(fā)明概述因此，本發(fā)明的目的是通過獨立權(quán)利要求的特性來解決的。從屬權(quán)利要求進(jìn)一步;^了本發(fā)明的中心思想。因此，第一方面，本發(fā)明涉及包含迷迭香酸和/或其衍生物與水解酶和/或微生物組合的組合物，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶。第二方面，本發(fā)明涉及包含迷迭香酸和/或其衍生物與其水解產(chǎn)物組合的組合物。用于改善或預(yù)防對皮膚損傷的權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物也是本發(fā)明的一部分。另外，本發(fā)明包括權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物的美容用途。另一方面，本發(fā)明涉及用于水解迷迭香酸的水解酶或孩i生物的用途，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶。包含迷迭香酸和/或其衍生物的組合物中的水解酶或微生物在改善所述組合物的生物學(xué)作用中的用途包括在本發(fā)明的進(jìn)一步的方面中，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶。另夕卜，本發(fā)明還提供了制備具有提高的生物學(xué)作用的包含迷迭香酸和/或其衍生物的組合物的方法，該方法包括以下步驟a.提供迷迭香酸和/或其衍生物，b.提供水解酶或微生物，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶，和c.將所述迷迭香酸和/或其衍生物以及水解酶或微生物與進(jìn)一步的成分混合，所述^:生物包含或產(chǎn)生所述酶，以產(chǎn)生所述組合物，從而迷迭香酸的水解發(fā)生在組合物中或體內(nèi)。最后，提供了用于改善個體健康的方法，該方法包括施用權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物的步驟。附圖本發(fā)明在下文中進(jìn)一步描述了附圖所示的某些實施方案，其中-圖l描述了迷迭香酸的分子結(jié)構(gòu)，-圖2描述了咖啡酸的分子結(jié)構(gòu)，-圖3描述了3，4-二羥基苯基乳酸的分子結(jié)構(gòu)，-圖4是顯示氯原酸酯酶量對迷迭香酸水解的影響((A)0.01U/mg，()0.02U/mg)以及對咖啡酸形成的影響((口)0.01U/mg，("0.02U/mg)的圖，-圖5是顯示pH對應(yīng)用氯原酸酯酶在pH5.0("、pH6.0(口)、pH7.0(▲)和pH8.0(命)下由迷迭香酸形成咖啡酸的影響的圖，-圖6是顯示溫度對迷迭香酸水解的影響(口)和對咖啡酸形成的影響("的圖，溫度為30。C、4(TC和50。C，應(yīng)用0.02U酶/mg的迷迭香酸，-圖7是顯示底物濃度對迷迭香酸水解速率和產(chǎn)量的影響的圖，應(yīng)用()1mg、(令)2mg、(A)4mg和(口)6mg的迷迭香酸和0.02單位的酶，pH6.6和40。C，-圖8是顯示與包含迷迭香酸的提取物(NaturexPE20)比較，包含水解后的迷迭香酸的提取物(水解的NaturexPE20)的改善的生物學(xué)作用。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包含迷迭香酸及其衍生物的組合物。該組合物可以是"食物組合物，，或"局部組合物，，。"食物組合物，，表示可以用于營養(yǎng)、藥物和/或美容目的的任何可消耗的產(chǎn)品。"局部組合物，，表示可以應(yīng)用于個體的皮膚、皮毛、指甲或頭發(fā)用于藥物和/或美容目的的任何組合物。優(yōu)選的是，組合物是食物組合物。迷迭香酸(圖l)及其衍生物通常存在于植物中，例如迷迭香、牛至、甘牛至草、百里香、胡椒薄荷、聚合草、歐芹、蜜蜂花、鼠尾草、海索草、羅勒、熏衣草、紫蘇等。迷迭香酸的"衍生物，，表示包含至少一個迷迭香酸部分的任何化合物。這些包括迷迭香酸的低聚物、聚合物、糖苷等。迷迭香酸及其衍生物可以以純的化合物或通過不同藥草來提供，所述藥草例如紫蘇(/VW〃ff/rafe"e附￡.)、鼠尾草(S"/v/acy^"""fe￡，)、薄荷(7VfewfA"fl^vewse丄.)、羅勒w附6fl^7Zcw附丄.)、百里香(7Ty;附W51vw/gflr/s￡.)、中國南蛇藤(0/a",附A/mfa/,)等。優(yōu)選其是通過迷迭香(/仍mflW"附JL)來提供的。另外，包含迷迭香酸源的植物的提取可以應(yīng)用本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行。實際上，本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含植物提取物，所述植物提取物包含迷迭香酸和/或其衍生物。優(yōu)選的是，提取物在組合物中存在的量范圍為0.01g至20g(以干物質(zhì)計算)。因此，本發(fā)明提供了組合物，該組合物包含迷迭香酸和/或其衍生物與水解酶(例如酯酶)或微生物組合，所述微生物包含或產(chǎn)生能水解迷迭香酸或其衍生物的水解酶。由于酶對迷迭香酸和/或其衍生物的水解作用，組合物可以進(jìn)一步包含用所述酶水解迷迭香酸和/或其衍生物的水解產(chǎn)物。這些可以包括咖啡酸、3,4-二羥基苯基乳酸等以及它們的混合物。本發(fā)明的組合物可以是干燥的、濕的或半濕的組合物。"干燥的，，表示具有小于0.6的水活性的組合物。"半濕的"表示具有0.6和0.9之間的水活性的組合物，并且"濕的，，表示具有大于0.9的水活性的組合物。組合物可以包含適合的食物或藥物載體。這些包括牛奶、酸奶酪、奶酪、發(fā)酵牛奶、基于牛奶的發(fā)酵產(chǎn)品、冰淇淋、基于發(fā)酵谷類的產(chǎn)品、基于牛奶的粉末、兒童和嬰兒用配方、動物(特別是寵物)用食物、片劑或錠劑、液體細(xì)菌混懸劑、干燥形式的口服添加物和液態(tài)形式的口服添加物。因此，組合物可以是以下形式的食物組合物完全營養(yǎng)食物、飲料、礦泉水、湯、食物添加物和代替食物、溶液劑、噴霧劑、散劑、片劑、膠嚢劑、營養(yǎng)棒、液體細(xì)菌混懸劑、糖果、基于牛奶或基于發(fā)酵牛奶的產(chǎn)品、酸奶酪、基于牛奶的粉末、腸營養(yǎng)產(chǎn)品、兒童和/或嬰兒用組合物、基于谷類的產(chǎn)品或基于發(fā)酵谷類的產(chǎn)品、基于大豆的產(chǎn)品、冰淇淋、巧克力、咖啡、"烹調(diào)"產(chǎn)品例如蛋黃醬、番茄泥或色拉調(diào)味品、寵物食物等。因此，該組合物還可以用于動物。對于攝食，許多口服組合物并且特別是食物添加物的實施方案是可能的。它們是通過用于制備糖包衣片劑、明膠膠嚢劑、凝膠劑、乳劑、片劑、膠嚢劑或溶液劑的常規(guī)方法來配制的。特別的是，可以將包含迷迭香酸和/或其衍生物與水解酶或微生物組合的組合物摻入到食物添加物或濃縮食物(例如食物棒或壓縮或非壓縮粉末)的任何其它形式中，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶。粉末可以在泡騰々欠料、乳酪產(chǎn)品或大豆衍生的產(chǎn)品中用水稀釋，或者可以摻入到食物棒中。可選擇的是，組合物可以是以下形式的局部組合物水、水-醇或油性溶液劑、溶液型的*劑或者洗液或漿液型的分敉劑、具有液體或半液體稠度的牛奶型的乳劑，其通過將油相分散在水相中獲得(OAV)，反之亦然(W/O),或者具有柔軟、半-固體或固體稠度的乳膏、水凝膠或無水凝膠型的混懸劑或乳劑，或者其它離子和/或非離子型微乳、微嚢或微粒或者嚢泡綠體。本發(fā)明的組合物可以包含常規(guī)的賦形劑和組分，例如脂肪和/或水組分、保濕劑(humectifyingagents)、增稠劑、防腐劑、結(jié)構(gòu)改進(jìn)劑、矯味劑和/或包衣劑、抗氧化劑、染料，它們通常存在于食物和/或局部領(lǐng)域。優(yōu)選的是，組合物中存在的水解酶是酯酶。本發(fā)明的基本原則是某些水解酶能夠?qū)⒚缘闼?圖l)裂解為咖啡酸(圖2)和3，4-二羥基苯基乳酸(圖3)，它們比迷迭香酸更容易被生物利用。因此，改善了包含迷迭香酸或植物提取物的組合物的生物功效，所述植物提取物包含迷迭香酸。通過提供包含所述水解酶的組合物，本發(fā)明使迷迭香酸轉(zhuǎn)化為上述咖啡酸和3，4-二羥基苯基乳酸的過程在食物基質(zhì)本身中、在局部應(yīng)用產(chǎn)品的本身中或者在體內(nèi)消化過程的早期或在局部應(yīng)用上發(fā)生，從而提高包含迷迭香酸和/或其矛汙生物的組合物的生物功效。因此，包含迷迭香酸和/或其衍生物的本發(fā)明的組合物具有改善的生物學(xué)作用。可選擇的或另外的是，本發(fā)明的組合物可以包含微生物，所述微生物包含或產(chǎn)生此類水解酶。本發(fā)明的組合物中存在的酶或微生物的量是使得至少10%、優(yōu)選至少30%、更優(yōu)選至少50%的迷迭香酸(圖l)可以凈皮水解為咖啡酸(圖2)和3，4-二羥基苯基乳酸(圖3)的酶或微生物的量。這可以由技術(shù)人員通過本領(lǐng)域已知的方法容易確定。取決于應(yīng)用，水解酶可以在組合物中以0.01至1000U/g的量范圍存在。當(dāng)在組合物中應(yīng)用^t生物時，其優(yōu)選以lxl(^至lxl0^cfu/g的量范圍存在。本發(fā)明的組合物中所用的微生物可以選自細(xì)菌、酵母或真菌。優(yōu)選的是，微生物是有益菌種微生物。更優(yōu)選的是，其選自約氏乳桿菌(丄""o6"c/〃wyWiw^m/Z)(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(丑/yflfo6"cferZw附/o"g"附)(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(5《y^fo^cter/ww/ac船)(CNCMI-3446)或它們的混合物。本發(fā)明的另一方面提供了包含迷迭香酸或植物提取物與其水解產(chǎn)物組合的組合物，所述植物提取物包含迷迭香酸和/或其衍生物。優(yōu)選的是，水解產(chǎn)物是通過迷迭香酸和/或其衍生物的酶裂解可獲得的。此類水解產(chǎn)物可乳酸等以及它們的混合物。本發(fā)明的組合物特別用于改善或預(yù)防對皮膚的損傷。實際上，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它們特別用于抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)。優(yōu)選的是，基質(zhì)金屬蛋白酶是1型。圖8顯示在組成性MMP1釋放中水解對包含迷迭香酸的提取物的作用。與對照、阿魏酸和包含迷迭香酸(沒有水解)的提取物相比，可以看出至少部分水解的迷迭香酸對組成性MMP1釋放具有相當(dāng)大的作用，這使其特別用于改善和/或預(yù)防對皮膚的損傷。根據(jù)實施方案，本發(fā)明的組合物可以用于美容。在該實施方案中，可以將組合物設(shè)計為口服消耗或局部應(yīng)用。"美容用途"表示非治療性用途，其可以改善美容方面或者安撫人或?qū)櫸锏钠つw、皮毛和/或頭發(fā)。在上下文中，美容用途可以包括預(yù)防對人或?qū)櫸锏钠つw、皮毛和/或頭發(fā)的損傷，和/或改善人或?qū)櫸锏钠つw、皮毛和/或頭發(fā)。此類損傷特別包括皮膚的光化性和老化損傷，例如干燥、無規(guī)則色素沉著(顯著的是雀斑、雀斑樣痣、斑狀黑素減少癥和持久性色素沉著過度)、皺紋(顯著的是細(xì)孩汰面線條和深溝)、星狀假瘢痕、彈性組織變性、無彈性、毛細(xì)血管擴(kuò)張、靜脈湖、粉刺、皮脂增生、軟垂疣和脂溢性角化病。美容用途還可以對頭發(fā)和皮毛具有特別的益處，例如改善的頭發(fā)或皮毛的密度、纖維直徑、顏色、油性、光澤度、皮脂產(chǎn)生，并且可以幫助預(yù)防頭發(fā)和皮毛脫落。當(dāng)用作美容用途時，本發(fā)明的組合物可以采用上述食物組合物的任何形式。優(yōu)選的是，其是飲食添加物的形式，其可以是液體或干燥形式，例如溶液劑、噴霧劑、片劑、膠囊劑、明膠膠嚢劑、錠劑、散劑、凝膠劑、乳劑等。更優(yōu)選的是，其M囊劑形式。可選擇的是，組合物可以采用局部組合物形式，其可以是以下形式水、水-醇或油性溶液劑、溶液型的M劑或者洗液或漿液型的^t劑、具有液體或半液體稠度的牛奶型的乳劑，其通過將油相分散在水相中獲得(OAV)，反之亦然(W/0)，或者具有柔軟、半-固體或固體稠度的乳膏、水凝膠或無水凝膠型的混懸劑或乳劑，或者其它離子和/或非離子型微乳、微嚢或微?；蛘邍芭較:體。這些組合物根據(jù)技術(shù)人員已知的常規(guī)方法制備。在優(yōu)選的實施方案中，這些局部組合物是如此設(shè)計的以便酶和/或微生物與迷迭香酸僅在局部應(yīng)用時相互作用。局部應(yīng)用的組合物可以特別組成用于臉、手、腳、主要解剖學(xué)的褶或身體的清潔、保護(hù)、治療或護(hù)理的霜劑(例如日霜、晚霜、卸妝霜、粉底霜、防曬霜)、化妝產(chǎn)品例如液體粉底、卸妝乳、身體的保護(hù)或護(hù)理乳、日曬后乳、護(hù)膚洗劑、凝膠劑或泡沫劑，例如清潔或消毒洗劑、防曬洗劑、人工曬黑洗劑、沐浴組合物、包含殺菌劑的除臭組合物、剃須后的凝膠劑或洗劑、脫毛膏或用于蟲咬的組合物、肥皂、清潔塊、乳膏劑、凝膠劑、乳劑或摩絲、用于頭發(fā)的氣霧劑組合物等。另一方面，本發(fā)明涉及水解酶或微生物在水解迷迭香酸(圖l)中的用途，所述微生物包含或產(chǎn)生水解酶。對于圖4至7，迷迭香酸水解為咖啡酸(圖2)和3，4-二羥基苯基乳酸(圖3)可以取決于所用酶的量、水解進(jìn)行的pH和溫度以及迷迭香酸的存在量。因此，本發(fā)明提供了包含迷迭香酸和/或其衍生物的組合物中的水解酶或微生物在改善所述組合物的生物功效中的用途，所述微生物包含或產(chǎn)生所述水解酶。當(dāng)微生物用于該目的時，其優(yōu)選選自細(xì)菌、酵母或真菌。更優(yōu)選的是，其是有益菌種微生物。最優(yōu)選的是，其選自約氏乳桿菌(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)或它們的混合物。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，給出了制備具有提高的生物功效的包含迷迭香酸和/或其衍生物的組合物的方法。該方法包括第一步，提供迷迭香酸和/或其衍生物。這可以通過多種藥草，例如迷迭香、牛至、甘牛至草、百里香、紫蘇、胡椒薄荷、聚合草、歐芽、蜜蜂花、鼠尾草、海索草、羅勒、熏衣草等或它們的混合物，或者通過天然來源的提取物來提供。優(yōu)選的是，迷迭香酸以0.01mg至10g(以干物質(zhì)計算)的量范圍來提供。第二步，提供了水解酶或微生物，所述微生物包含或產(chǎn)生所述水解酶。當(dāng)酶以本身應(yīng)用時，其優(yōu)選以0.01-1000U/g的量范圍來提供。如果應(yīng)用^L生物時，其優(yōu)選以lxl(^至lxl(^cfu/g的量范圍來提供。微生物可以選自細(xì)菌、酵母或真菌。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，微生物是有益菌種。更優(yōu)選的是，其選自約氏乳桿菌(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)或它們的混合物。然后，該方法的第三步包括將逑迭香酸和/或其衍生物以及水解酶和/或微生物與進(jìn)一步的成分混合，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶，以產(chǎn)生所述組合物，從而迷迭香酸的水解發(fā)生在組合物中或體內(nèi)。因此，將迷迭香酸轉(zhuǎn)化為上述咖啡酸和3，4-二羥基苯基乳酸的過程在食物基質(zhì)本身中、在局部應(yīng)用的產(chǎn)品本身中或者在體內(nèi)消化過程的早期或在局部應(yīng)用上發(fā)生，從而提高包含迷迭香酸和/或其衍生物的所述組合物的生物功效。進(jìn)一步的成分可以包括用于制備食物產(chǎn)品、局部組合物和功能成分的任何成分。這些包括碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、纖維、維生素、益生元、礦物質(zhì)、植物提取物等。產(chǎn)生的組合物可以是任何形式，例如上述的那些組合物。本發(fā)明進(jìn)一步包括改善個體健康的方法，該方法包括施用權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物的步驟。施用可以是局部的或口服的。本發(fā)明的組合物確實可以用作抗氧化劑、抗炎劑和抗高血壓劑。另夕卜，其在預(yù)防或治療心血管和腦血管疾病中、在預(yù)防2型糖尿病中以及在腦退化疾病中具有正向作用。另外，本發(fā)明的組合物可以施用用于治療和/或預(yù)防皮膚損傷，所述損傷是例如由應(yīng)激環(huán)境產(chǎn)生的，例如通過化學(xué)、生物學(xué)或物理學(xué)應(yīng)激，例如暴露于氧化劑或致癌物，暴露于細(xì)菌、病毒、真菌、衍生自周圍細(xì)胞和/或微生物的脂質(zhì)，或暴露于UV-輻射產(chǎn)生的。這些損傷進(jìn)一步包括光化性角化病、紫癜、cherryangiodema、基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌、皮膚燒傷和/或發(fā)皰、表皮增生、炎癥、免疫抑制和癌癥，例如非-黑素瘤和黑素瘤皮膚癌，曰/定，包括最小紅斑量(MED)、比色法、經(jīng)表皮失水、DNA修復(fù)、測量白介素和蛋白聚糖的產(chǎn)生或者膠原酶活性、屏障功能或細(xì)胞更新。因此本發(fā)明的組合物用于改善和預(yù)防對皮膚的損傷。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的概念也可以用作輔助治療，給目前所用的藥物療法以幫助。由于本發(fā)明的組合物易于與食物一起口服施用，因此可以施用包含高量的目標(biāo)物質(zhì)的特別的臨床食物。通過下述非限制性實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實施例實施例1口服施用的美容劑石更膠嚢劑形式的組合物具有以下配方<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>該組合物可以以每天2至3個膠嚢劑的量施用于個體。實施例2食物配方通過將迷迭香提取物(或迷迭香酸)與約氏乳桿菌(Lal，CNCMI-1225)以1x10s至lx1012cfu細(xì)菌對應(yīng)1g至10g迷迭香提取物(或迷迭香酸)的比例混合而制備。將產(chǎn)生的混合物加入至任何適合的載體中或者與任何適合的載體混合，所述載體例如發(fā)酵牛奶、酸奶酪、新鮮奶酪、凝乳(rennetedmilk)、糖果棒、早餐谷類片或棒、飲料、奶粉、基于大豆的產(chǎn)品、非牛奶發(fā)酵產(chǎn)品或營養(yǎng)添加物，用于臨床營養(yǎng)。實施例3迷迭香酸的酶裂解酶量的影響試驗是在磚酸鹽緩沖液(50mM，pH6.6)中、在40。C下應(yīng)用不同量的酶(0.01U、0.02U和1U酶/mg迷迭香酸)進(jìn)行的。如圖4所示，反應(yīng)速率與酶量成比例，并且當(dāng)氯原酸酯酶以1U/mg底物應(yīng)用時，僅30分鐘反應(yīng)時間后，迷迭香酸完全轉(zhuǎn)化為咖啡酸和3，4-二羥基苯基乳酸(沒有列出數(shù)據(jù))。pH的影響研究了pH對迷迭香酸的酶水解(0.02U/mg)的影響。圖5顯示了在pH值5.0、6.0、7.0和8.0下咖啡酸的產(chǎn)生。在pH8.0下，2小時反應(yīng)時間后，迷迭香酸完全轉(zhuǎn)化，而反應(yīng)速率在pH6.0下非常低，并且在pH5.0下沒有觀察到水解。溫度的影響為了研究溫度對反應(yīng)速率和對產(chǎn)物穩(wěn)定性的影響，試驗是在pH6.6下、在磷酸鹽緩沖液(50mM)中、應(yīng)用0,02U/mg底物的酶并且在30°C、40°C和50。C下進(jìn)行的。如圖6所示，當(dāng)反應(yīng)在40。C或50。C下進(jìn)行時，沒有觀察到顯著的差異，而在30。C下反應(yīng)速率非常低。底物濃度的影響底物濃度對反應(yīng)速率和產(chǎn)量的影響是在40°C、pH6.6下，應(yīng)用0.02單位的酶和lmg、2mg、4mg或6mg的迷迭香酸研究的。圖7顯示了反應(yīng)速率和產(chǎn)量受酶/底物比例的強(qiáng)烈影響。實際上，當(dāng)應(yīng)用lmg底物時，高于90%的迷迭香酸在4小時后被水解，而當(dāng)應(yīng)用6mg底物時，在相同條件下僅觀察到40%水解。實施例4用微生物裂解迷迭香酸1.與約氏乳桿菌(CNCMI-1225)培養(yǎng)將細(xì)菌在37。C、缺氧狀態(tài)下、在MRS培養(yǎng)基中生長16小時。離心后，將細(xì)胞沉淀用10mL磷酸鈉緩沖液(50mM，pH8)洗滌3次。將細(xì)胞(0.60g)懸浮于1mL磷酸鈉緩沖液(50mM，pH8)中并且加入迷迭香酸(5mg/mL)并且將混合物在45。C下培養(yǎng)24小時。每隔1/2小時取出等份用于動力學(xué)研究。離心后，將上清液通過HPLC分析。培養(yǎng)4小時后，所有的迷迭香酸轉(zhuǎn)化為咖啡酸和3，4-二羥基苯基乳酸。2.與乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)培養(yǎng)將細(xì)菌在37t:、缺氧狀態(tài)下、在MRS+0.05。/。半胱氨酸培養(yǎng)基中生長16小時。離心后，將細(xì)胞沉淀用10mL磷酸鈉緩沖液(50mM，pH8)洗滌3次。將細(xì)胞(0.60g)懸浮于1mL磷酸鈉緩沖液(50mM，pH8)中并且加入迷迭香酸(5mg/mL)并且將混合物在45。C下培養(yǎng)24小時。每隔1/2小時取出等份用于動力學(xué)研究。離心后，將上清液通過HPLC分析。培養(yǎng)24小時后，大于50%的迷迭香酸轉(zhuǎn)化為咖啡酸和3，4-二羥基苯基乳酸。實施例5試驗條件，MMP-1(基質(zhì)金屬蛋白酶)劑量(ELISA)處理和輻射將成纖維細(xì)胞置于96孔板的培養(yǎng)基中。預(yù)培養(yǎng)24小時后，將培養(yǎng)基用包含試驗產(chǎn)物的培養(yǎng)基(或沒有產(chǎn)物的培養(yǎng)基，用作參考)代替。每個試驗條件進(jìn)行三次(應(yīng)用3個培養(yǎng)孔)。在試驗產(chǎn)物的存在(或不存在)下培養(yǎng)24小時后，將培養(yǎng)基除去并且用緩沖液(EBSS)代替并且將細(xì)胞避開任何光源。在培養(yǎng)結(jié)束后，將EBSS溶液用包含試驗化合物的培養(yǎng)基代替，并且將板在37。C、5。/。C02下放置。處理48小時后，收集培養(yǎng)上清液用于ELISAMMP-1劑量。然后，細(xì)胞層的細(xì)胞生存是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法通過測量活細(xì)胞脫氫酶還原MTT來評價的。膠原酶(MMP-1)的定量MMP-1劑量(人間質(zhì)膠原酶)是通過ELISA，應(yīng)用"BIOTRACK人MMP-1，ELISA系統(tǒng)，AmershamRPN2610"試劑盒，根據(jù)供應(yīng)商的+兌明書來實現(xiàn)的。數(shù)據(jù)處理將計算數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)出并且用PRISM軟件(GraphPadSoftware)處理。組間比較是通過方差分析(ANOVA)，應(yīng)用鄧奈特(Dunnett)多重比較檢驗來進(jìn)行的。下表顯示由成纖維細(xì)胞釋放的組成性MMP-1。*表示與參考具有顯著差異(pO.Ol)。Naturex是可商購獲得的包含迷迭香酸的天然提取物。水解的Naturex是通過用約氏乳桿菌的有益菌種(CNCMI-1225)處理包含迷迭香酸的天然提取物而獲得的。迷迭香酸在培養(yǎng)過程中至少部分轉(zhuǎn)化為咖啡酸和3,4-二羥基苯基乳酸。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>上表中所示的結(jié)果表明與未水解的迷迭香酸相比，至少部分水解的迷迭香酸提供皮膚益處。更特別的是，其顯示了本發(fā)明的組合物對MMP-1的表達(dá)的抑制作用。權(quán)利要求1.組合物，該組合物包含迷迭香酸和/或其衍生物與水解酶和/或微生物組合，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶。2.權(quán)利要求1的組合物，其包含所述酶水解迷迭香酸和/或其衍生物的水解產(chǎn)物。3.權(quán)利要求1或2中任意一項的組合物，其中酶是酯酶。4.前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其中酶能夠?qū)⒚缘闼崴鉃榭Х人岷?，4-二羥基苯基乳酸。5.前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其中微生物選自細(xì)菌、酵母或真菌。6.前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其中微生物是有益菌種。7.權(quán)利要求6的組合物，其中有益菌種微生物選自約氏乳桿菌(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)或它們的混合物。8.前述權(quán)利要求中任意一項的組合物，其配制用作營養(yǎng)、藥物或美容產(chǎn)品o9.前迷權(quán)利要求中任意一項的組合物，其中所述組合物是食物組合物。10.權(quán)利要求9的組合物，其中食物組合物是以下形式完全營養(yǎng)食物、飲料、礦泉水、湯、食物添加物和代替食物、溶液劑、噴霧劑、散劑、片劑、膠嚢劑、營養(yǎng)棒、液體細(xì)菌混懸劑、糖果、基于牛奶或基于發(fā)酵牛奶的產(chǎn)品、酸奶酪、基于牛奶的粉末、腸營養(yǎng)產(chǎn)品、兒童和/或嬰兒用組合物、基于谷類的產(chǎn)品或基于發(fā)酵谷類的產(chǎn)品、基于大豆的產(chǎn)品、水淇淋、巧克力、咖啡、"烹調(diào)"產(chǎn)品例如蛋黃醬、番茄泥或色拉調(diào)味品、寵物食物等。11.權(quán)利要求1至8中任意一項的組合物，其中所述組合物是局部組合物。12.權(quán)利要求ll的組合物，其中組合物是以下形式水、水-醇或油性溶液劑、溶液型的M劑或者洗液或漿液型的分歉劑、具有液體或半液體稠度的牛奶型的乳劑，其通過將油相分散在水相中獲得(o/w)，反之亦然(w/o)，或者具有柔軟、半-固體或固體稠度的乳膏、水凝膠或無水凝膠型的混懸劑或乳劑，或者其它離子和/或非離子型微乳、微囊或微?；蛘邍芭菥G體。13.組合物，該組合物包含迷迭香酸和/或其衍生物與其水解產(chǎn)物組合。14.權(quán)利要求13的組合物，其中水解產(chǎn)物是通過迷迭香酸和/或其衍生物的酶裂解可獲得的。15.權(quán)利要求13或14中任意一項的組合物，其中水解產(chǎn)物選自咖啡酸、3，4-二羥基苯基乳酸和它們的混合物。16.權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物，其用于改善或預(yù)防對皮膚的損傷。17.權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物的美容用途。18.權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物在抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)中的用途。19.權(quán)利要求18的用途，其中基質(zhì)金屬蛋白酶是l型。20.有益菌種微生物在水解迷迭香酸中的用途。21.權(quán)利要求20的用途，其中有益菌種選自約氏乳桿菌(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)或它們的混合物。22.權(quán)利要求20或21中任意一項的用途，其中迷迭香酸被水解為咖啡酸和/或3，4-二羥基苯基乳酸。23所述組合物的生物功效中的用途，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶。24.權(quán)利要求23的用途，其中酶是酯酶。25.權(quán)利要求23或24中任意一項的用途，其中微生物選自細(xì)菌、酵母或真菌。26.權(quán)利要求23至25中任意一項的用途，其中微生物是有益菌種。27.權(quán)利要求26的用途，其中有益菌種選自約氏乳桿菌(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)或它們的混合物。28.權(quán)利要求23至27中任意一項的用途，其中組合物是以下形式的食物組合物完全營養(yǎng)食物、飲料、礦泉水、湯、食物添加物和代替食物、溶液劑、噴霧劑、散劑、片劑、膠嚢劑、營養(yǎng)棒、液體細(xì)菌混懸劑、糖果、基于牛奶或基于發(fā)酵牛奶的產(chǎn)品、酸奶酪、基于牛奶的粉末、腸營養(yǎng)產(chǎn)品、兒童和/或嬰兒用組合物、基于谷類的產(chǎn)品或基于發(fā)酵谷類的產(chǎn)品、基于大豆的產(chǎn)品、冰淇淋、巧克力、咖啡、"烹調(diào)，，產(chǎn)品例如蛋黃醬、番茄泥或色拉調(diào)味品、寵物食物等。29.權(quán)利要求23至27中任意一項的用途，其中組合物是以下形式的局部組合物水、7K-醇或油性溶液劑、溶液型的分敉劑或者洗液或漿液型的M劑、具有液體或半液體稠度的牛奶型的乳劑，其通過將油相*在水相中獲得(OAV)，反之亦然(W/0)，或者具有柔軟、半-固體或固體稠度的乳膏、水凝膠或無水凝膠型的混懸劑或乳劑，或者其它離子和/或非離子型微乳、微囊或微粒或者嚢泡*體。30.制備具有提高的生物功效的組合物的方法，該方法包括以下步驟a.提供包含迷迭香酸和/或其衍生物的植物提取物，b.提供水解酶或微生物，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶，和c.將所述迷迭香酸和/或其衍生物以及水解酶或微生物與進(jìn)一步的成分混合，所述微生物包含或產(chǎn)生所述酶，以產(chǎn)生所述組合物，從而迷迭香酸的水解發(fā)生在組合物中或體內(nèi)。31.權(quán)利要求30的方法，其中迷迭香酸和/或其衍生物由多種藥草，例如迷迭香、牛至、甘牛至草、百里香、紫蘇、胡椒薄荷、聚合草、歐芽、蜜蜂花、鼠尾草、海索草、羅勒、熏衣草、通過天然來源的提取物或它們的混合物來提供。32.權(quán)利要求30和31中任意一項的方法，其中酶是酯酶。33.權(quán)利要求30至32中任意一項的方法，其中微生物選自細(xì)菌、酵母或真菌。34.權(quán)利要求30至33中任意一項的方法，其中微生物是有益菌種。35.權(quán)利要求34的方法，其中有益菌種微生物選自約氏乳桿菌(CNCM1-1225)、長雙歧桿菌(ATCCBAA-999)、乳雙歧桿菌(CNCMI-3446)或它們的混合物。36.權(quán)利要求30至35中任意一項的方法，其中迷迭香酸被水解為咖啡酸和/或3，4-二羥基苯基乳酸。37.權(quán)利要求30至36中任意一項的方法，其中進(jìn)一步的成分選自碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、維生素、益生元、礦物質(zhì)、植物提取物、纖維、賦形劑、矯味劑。38.權(quán)利要求30至37中任意一項的方法，其中組合物是食物組合物的形式例如完全營養(yǎng)食物、飲料、礦泉水、湯、食物添加物和代替食物、溶液劑、噴霧劑、散劑、片劑、膠嚢劑、營養(yǎng)棒、液體細(xì)菌混懸劑、糖果、基于牛奶或基于發(fā)酵牛奶的產(chǎn)品、酸奶酪、基于牛奶的粉末、腸營養(yǎng)產(chǎn)品、兒童和/或嬰兒用組合物、基于谷類的產(chǎn)品或基于發(fā)酵谷類的產(chǎn)品、基于大豆的產(chǎn)品、冰淇淋、巧克力、咖啡、"烹調(diào)"產(chǎn)品例如蛋黃醬、番茄泥或色拉調(diào)味品、寵物食物等，或者局部組合物的形式例如水、水-醇或油性溶液劑、溶液型的分散劑或者洗液或漿液型的*劑、具有液體或半液體稠度的牛奶型的乳劑，其通過將油相分散在水相中獲得(OAV)，反之亦然(W/O),或者具有柔軟、半-固體或固體稠度的乳膏、水凝膠或無水凝膠型的混懸劑或乳劑，或者其它離子和/或非離子型微乳、微嚢或微?；蛘邍芭蒌涹w。39.改善個體健康的方法，該方法包括施用權(quán)利要求1至15中任意一項的組合物的步驟。全文摘要本發(fā)明涉及包含迷迭香酸和/或其衍生物的組合物，并且涉及這些組合物中的水解酶或微生物的用途，所述微生物包含或產(chǎn)生水解酶。本發(fā)明還涉及改善所述迷迭香提取物的生物學(xué)作用的方法。文檔編號A61K35/74GK101563078SQ200780040651公開日2009年10月21日申請日期2007年11月6日優(yōu)先權(quán)日2006年11月6日發(fā)明者I·卡斯蒂埃爾,N·帕日,R·貝爾-賴?yán)?T·拉布,V·克雷斯派申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司;歐萊雅公司