專利名稱：含吡啶基二硫化物部分的聚合連接基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物遞送體系。特別是，本發(fā)明涉及包含吡啶基二硫化物部分的基于 活化的聚合物的藥物遞送連接基(linker)，該連接基改善含巰基的生物活性部分的綴合。
背景技術(shù)：
最近幾年，已提出許多方法用于將治療劑遞送至體內(nèi)并改善那些藥物的生物利用 度。一種嘗試是將該藥物作為可溶性運(yùn)送體系的一部分加入。該運(yùn)送體系可包括永久的基 于綴合物(conjugate)的體系或前藥。特別是，聚合物運(yùn)送體系可改善藥物的溶解性和穩(wěn) 定性。例如，水溶性聚環(huán)氧烷與治療部分如蛋白質(zhì)和多肽的綴合是已知的。參見(jiàn)，例如，美 國(guó)專利4，179，337(‘337專利)，其內(nèi)容在此引入作為參考。該'337專利公開了用PEG修 飾的生理活性多肽在體內(nèi)循環(huán)較長(zhǎng)的時(shí)間，且具有降低的免疫原性和抗原性。也已認(rèn)識(shí)到其它改善。例如，基于聚合物的包含芐基消除體系、三烷基鎖定體系 (trialkyl lock system)等的藥物遞送平臺(tái)體系由EnzonPharmaceuticals公開作為可 釋放地遞送蛋白質(zhì)、肽和小分子的手段。還參見(jiàn)Greenwald，等人，J. Med. Chem. Vol.42, No. 18，3657-3667 ；Greenwald,等人，J. Med. Chem. Vol. 47，No. 3，726-734 ；Greenwald,等 人，J. Med. Chem. Vol. 43，No. 3,475-487 上述每一個(gè)的內(nèi)容在此引入作為參考。最近，提出將聚乙二醇(PEG)用于與廣泛的生物活性化合物(包括寡核苷酸、靶向 蛋白質(zhì)、肽等)綴合。對(duì)于綴合，聚合物的羥基末端-基團(tuán)必須首先轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性官能團(tuán)。 該過(guò)程經(jīng)常稱為"活化"且產(chǎn)物稱為"活化的聚環(huán)氧烷"。其它聚合物被類似活化。對(duì)于 該目的，一些官能團(tuán)是現(xiàn)有技術(shù)中已知的。盡管有上述嘗試和進(jìn)步，但對(duì)于含巰基的部分仍在尋找PEG和聚合物綴合技術(shù)的進(jìn)一步改善。本發(fā)明解決了該需求以及其它問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述問(wèn)題并改善藥物遞送技術(shù)，提供了新的支鏈聚合物和以其制備的綴合 物。在本發(fā)明一個(gè)方面，提供式(I)的化合物<formula>formula see original document page 17</formula>
其中R1是基本上非抗原性的水溶性聚合物；A是封端基團(tuán)，或
<formula>formula see original document page 17</formula>
Y1和Y，i獨(dú)立地為S、0或NR2 ；Y2 和 Y，2 獨(dú)立地為 S、0、SO、SO2, NR20 ；Y3和Y’ 3獨(dú)立地為H、離去基團(tuán)、活化基團(tuán)、官能團(tuán)，或<formula>formula see original document page 17</formula>L1^3和L’ η為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；R2_n、R’ R2tl獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、羥 基、硝基、硅烷基醚、磺酰基、巰基、C1^6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基巰基、取代的Ch6烷 基硫基、CV6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、c3_19支鏈烷基、c3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、c2_6取代 的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、CV6 雜烷基、取代的Cp6雜烷基、CV6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2_6烷酰基、 芳基羰基、C2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷?；趸?、芳基羰基氧基、c2_6取代的烷酰 基、取代的芳基羰基、C2_6取代的烷酰基氧基、取代的芳基氧基羰基、c2_6取代的烷?；趸?和取代的芳基羰基氧基；R12和R’ 12獨(dú)立地選自氫、羥基、離去基團(tuán)、官能團(tuán)、藥物、靶向劑、診斷劑、取代的 C1^6烷基硫基、Ch6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_19支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、c2_6 取代的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、(V6雜烷基、取代的(V6雜烷基、Cp6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2_6烷?；?、芳基羰基、c2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷?；趸⒎蓟驶趸?、c2_6取代的烷 ?；?、取代的芳基羰基、C2_6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、c2_6取代的烷?；?基、取代的芳基羰基氧基、馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、取代的砜、氨基、羧基、巰基、酰胼和胼基 甲酸基(carbazate)；(a)、(a，)、(d)和(d，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或1 ；(b)和(b’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或1至10的整數(shù)，更優(yōu)選0或1，且最優(yōu) 選0;(c)和(c’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或1至10的整數(shù)，更優(yōu)選0或1，且最優(yōu) 選1;(e)和(e，)獨(dú)立地為0或1 ；(g)和(g，)獨(dú)立地為0或1，優(yōu)選1 ；條件是(a)和(g)不同時(shí)為0。在本發(fā)明某些優(yōu)選方面，該聚合物藥物遞送體系包括半胱氨酸。在一些優(yōu)選方面，R8_n或R’ 8_n的至少一個(gè)為吸電子基團(tuán)如取代的酰氨基、?；?疊氮基、羧基、烷基氧基羰基、氰基和硝基，優(yōu)選硝基，且更優(yōu)選硝基作為R8或1 ’ 8。在另一優(yōu)選方面，R12或R’ 12選自藥物、靶向劑或診斷劑。在一些特別優(yōu)選的方面，R1包括分子量為約5，000至約60，000的直鏈或支鏈的聚 (乙二醇)殘基，Y1和Y，工為0，Y2和Y，2為NR20, (a)和(a，)為0或1，(b)和(b，)為0 或1，(c)和(C，)為1，且(e)和(e，)為0。在一個(gè)特別方面，R2_7，R，3_7，R9_n和R，9_n選 自氫、甲基和乙基，且每個(gè)更優(yōu)選為氫。在本發(fā)明另一方面，提供制備本文所述的化合物的方法，使用本發(fā)明的化合物進(jìn) 一步用于與生物活性化合物綴合的方法，和使用所得綴合物用于治療的方法。本文所述的含吡啶基二硫化物部分的聚合物運(yùn)送體系的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)為技術(shù)人員能 夠選擇性綴合含巰基的部分。即使摻入具有巰基的氨基酸作為聚合物活化體系的部分，本 發(fā)明的化合物也可提供用于肽合成的起始點(diǎn)。本文所述的聚合物體系的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)允許連 接第二試劑。通過(guò)使用分支部分作為提供二硫鍵的連接基可引入多重取代。本發(fā)明的化合 物的多重取代將進(jìn)一步使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠連接第二藥物以具有治療協(xié)同效應(yīng)，所述第 二藥物靠近可通過(guò)二硫鍵選擇性綴合的靶向基團(tuán)。本文所述的聚合物遞送體系允許將藥物 靶向治療位點(diǎn)。出于本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)“生物活性部分”和“生物活性部分的殘基”應(yīng)理解為是 指生物活性化合物的一部分，其在生物活性化合物經(jīng)歷取代反應(yīng)(其中已連接了運(yùn)送載體 部分)后保留。除非另有所述，出于本發(fā)明的目的術(shù)語(yǔ)“烷基”應(yīng)理解為包括直鏈的，支鏈的，取代的，例如鹵素_，烷氧基_，和硝 基-Cu烷基，C3_8環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基，等；術(shù)語(yǔ)“取代”應(yīng)理解為包括添加一個(gè)或多個(gè)不同原子或以一個(gè)或多個(gè)不同原子替 換官能團(tuán)或化合物中包含的一個(gè)或多個(gè)原子；術(shù)語(yǔ)“取代的烷基”包括羧基烷基，氨基烷基，二烷基氨基，羥基烷基和巰基烷基；
術(shù)語(yǔ)“取代的環(huán)烷基”包括如4-氯環(huán)己基的部分；芳基包括如萘基的部分；取代的 芳基包括如3-溴苯基的部分；芳烷基包括如甲苯甲?；?toluyl)的部分；雜烷基包括如 乙基噻吩的部分；術(shù)語(yǔ)“取代的雜烷基”包括如3-甲氧基_噻吩的部分；烷氧基包括如甲氧基的部 分；且苯氧基包括如3-硝基苯氧基的部分；術(shù)語(yǔ)“鹵素”應(yīng)理解為包括氟，氯，碘和溴；且術(shù)語(yǔ)"足量"和“有效量”出于本發(fā)明的目的應(yīng)理解為獲得治療效果的量，該效果 是本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的。附圖簡(jiǎn)述

圖1圖示實(shí)施例1-5所述的合成方法。圖2圖示實(shí)施例6-8所述的合成方法。圖3圖示實(shí)施例7-12所述的合成方法。圖4圖示實(shí)施例13-15所述的合成方法。發(fā)明詳述A.概述在本發(fā)明一個(gè)方面，提供式(I)的化合物<formula>formula see original document page 19</formula>其中R1是基本上非抗原性的水溶性聚合物；A是封端基團(tuán)，或
<formula>formula see original document page 19</formula>Y1和Y，獨(dú)立地為S、0或NR2 ；Y2 和 Y，2 獨(dú)立地為 S、0、SO、SO2, NR20 ；Y3和Y’ 3獨(dú)立地為H、離去基團(tuán)、活化基團(tuán)、官能團(tuán)，或
<formula>formula see original document page 20</formula>L1^3和L’卜3為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；R2_n、R’ R2tl獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、羥 基、硝基、硅烷基醚、磺?；?、巰基、C1^6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基巰基、取代的Ch6烷 基硫基、CV6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、c3_19支鏈烷基、c3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、c2_6取代 的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、CV6 雜烷基、取代的Cp6雜烷基、CV6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2_6烷?；?芳基羰基、C2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷?；趸?、芳基羰基氧基、c2_6取代的烷酰 基、取代的芳基羰基、C2_6取代的烷?；趸⑷〈姆蓟趸驶?、c2_6取代的烷?；趸?和取代的芳基羰基氧基；R12和R’ 12獨(dú)立地選自氫、羥基、離去基團(tuán)、官能團(tuán)、藥物、靶向劑、診斷劑、取代的 C1^6烷基硫基、Ch6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_19支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、c2_6 取代的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、 (V6雜烷基、取代的CV6雜烷基、Cp6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2_6烷酰 基、芳基羰基、c2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷?；趸?、芳基羰基氧基、c2_6取代的烷 ?；⑷〈姆蓟驶?、C2_6取代的烷酰基氧基、取代的芳基氧基羰基、c2_6取代的烷?；?基、取代的芳基羰基氧基、馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、取代的砜、氨基、羧基、巰基、酰胼和胼基 甲酸基；(a)、(a，)、(d)和(d，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或1 ；(b)和(b’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或1至10的整數(shù)，更優(yōu)選0或1，且最優(yōu) 選0 ；(c)和(c’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或1至10的整數(shù)，更優(yōu)選0或1，且最優(yōu) 選1;(e)和(e，)獨(dú)立地為0或1 ；(g)和(g，)獨(dú)立地為0或1，優(yōu)選1 ；條件是(a)和(g)不同時(shí)為0。在本發(fā)明那些方面，預(yù)期用于取代的取代基(其中相應(yīng)于R2_n、R’ 2_n和R2tl的 部分表明為可取代的)可包括，例如，酰基、氨基、酰氨基、脒、芳烷基、芳基、疊氮基、烷 基巰基、芳基巰基、羰基、羧酸酯(carboxylate)、氰基、酯、醚、甲酰基、鹵素、雜芳基、雜 環(huán)烷基、羥基、亞氨基、硝基、硫代羰基、硫酯、硫代乙酸酯(thioacetate)、硫代甲酸酯 (thioformate)、烷氧基、磷?；?、膦酸酯(phosphonate)、亞膦酸酯(phosphinate)、硅烷 基、巰基、硫酸酯(sulfate)、磺酸酯(sulfonate)、氨磺?；⒒酋０泛突酋；Ｔ诒景l(fā)明一個(gè)方面，該離去基團(tuán)選自0H、鹵素、活化酯、環(huán)酰亞胺硫酮、N-羥基琥 珀酰亞氨基、對(duì)硝基苯氧基、N-羥基鄰苯二甲酰亞氨基、N-羥基苯并三唑基、咪唑、甲苯磺 ?；?、甲磺?；?、三氟乙基磺酰基(tresyl)、硝基苯磺?；?nosyl)、C1^6烷基氧基、C1^6烷?；趸?、芳基羰基氧基、鄰硝基苯氧基、對(duì)硝基苯氧基、五氟苯氧基、1，3，5-三氯苯氧基和 1,3,5-三氟苯氧基。在本發(fā)明另一方面，該生物部分包括含-NH2的部分，含-OH的部分和含-SH的部 分。在另一方面，A可選自H、NH2、OlCO2ICh6烷氧基和CV6烷基。在一些其它優(yōu)選實(shí) 施方案中，A可為甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、H和OH。A更優(yōu)選為甲基或甲氧基。在本發(fā)明某些優(yōu)選方面，該聚合物藥物遞送體系包括半胱氨酸或其它含巰基的氨基酸。
在一些優(yōu)選方面，R8_n或R’ 8_n的至少一個(gè)為吸電子基團(tuán)如取代的酰氨基、?；?疊氮基、羧基、烷基氧基羰基、氰基和硝基，優(yōu)選硝基，且更優(yōu)選硝基作為R8或1 ’ 8。在另一優(yōu)選方面，R12或R’ 12選自藥物、靶向劑、或診斷劑。在一些特別優(yōu)選的方面，R1包括分子量為約5，000至約60，000的直鏈或支鏈的聚 (乙二醇)殘基，Y1和Y，工為0，Y2和Y，2為NR20, (a)和(a，)為0或1，(b)和(b，)為0 或1，(c)和(C，)為1，且(e)和(e，)為0。在一個(gè)特別方面，R2_7、R，3_7、！V11和R，9_n選 自氫、甲基和乙基，且每個(gè)更優(yōu)選為氫。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本文所述的化合物具有下式
Y1Yi
I /r'A廠 /吟 “
(Li)a-Y2-C-^ /R6\ Y'3-s一"HcH-(U3)e^-(L3)e-Kc-W--S-Y3
—Wc.&」g.L r3W」g。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所述的化合物具有下式(II)
Yi
{ ^aI I
ic-j-C-(L2)d一R12
A1——Ri-(Li)a-Y2-C^
R3 UT S_Y3
V R7/c(II)其中A1是封端基團(tuán)，或<formula>formula see original document page 22</formula>Μ貴- ；所有其它變量與以上定義相同。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本文所述的化合物具有下式
<formula>formula see original document page 22</formula>
其中A3是封端基團(tuán)，或
<formula>formula see original document page 22</formula>
(h)和(h’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0至10，且更優(yōu)選0至4;和所有其它變量 與以上定義相同。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所述的化合物可為，例如，
<formula>formula see original document page 22</formula>其中，A2是封端基團(tuán)，或＝<formula>formula see original document page 23</formula>所有其它變量如上定義。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2_n、R’ 2_n和R2tl獨(dú)立地為氫或CH3。在一些特別優(yōu)選 的實(shí)施方案中，R2-n、R’ H1和R2tl均為氫。在其它特別的實(shí)施方案中，Yh2和Y’ H包括O和 NR20,且R2_n、R’ 2_n和R2tl包括氫、CV6烷基、環(huán)烷基、芳基和芳烷基。B.基本上非抗原性的水溶性聚合物本文所述的化合物中使用的聚合物優(yōu)選為水溶性聚合物且基本上為非抗原性的 如聚環(huán)氧烷(PAO’ s)。在本發(fā)明一個(gè)方面，本文所述的化合物包括直鏈、末端支鏈的或多臂的聚環(huán)氧烷。 在本發(fā)明一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，該聚環(huán)氧烷包括聚乙二醇和聚丙二醇。聚環(huán)氧烷具有的平均分子量為約2，000至約100，000道爾頓，優(yōu)選約5，000至約 60，000道爾頓。該聚環(huán)氧烷更優(yōu)選可為約5，000至約25，000或約20，000至約45，000道 爾頓。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所述的化合物包括平均分子量為約12，000至約 20，000道爾頓或約30，000至約45，000道爾頓的聚環(huán)氧烷。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，聚 合部分具有的分子量為約12，000或40，000道爾頓。該聚環(huán)氧烷包括聚乙二醇和聚丙二醇。更優(yōu)選地，該聚環(huán)氧烷包括聚乙二醇 (PEG)。PEG 通常由結(jié)構(gòu)-0- (CH2CH2O) n-表示其中(η)表示聚合物的聚合度，且取決于聚合物的分子量?；蛘弑景l(fā)明的聚乙二 醇(PEG)殘基部分可選自-Y71-(CH2CH2O) n-CH2CH2Y71-,-Y71-(CH2CH2O) n-CH2C ( = Y72) -Y71-,-Y7「C ( = Y72) - (CH2) a71-Y73- (CH2CH2O) [CH2CH2-Y73- (CH2) a7「C ( = Y72) -Y71-,和-Y71-(CR71R72) a72-Y73- (CH2) b71-0_ (CH2CH2O) n_ (CH2) b71_Y73- (CR71R72) a72_Y71_，其中Y71 和 Y73 獨(dú)立地為 0、S、SO、SO2, NR73 或鍵；Y72 為 0、S 或 NR74 ；R71_74獨(dú)立地為可用于&的相同的部分；(a71)、(a72)和(b71)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0_6，且更優(yōu)選1 ；且(η)為約10至約2300的整數(shù)。支鏈的或U-PEG衍生物描述于美國(guó)專利號(hào)5，643，575，5，919，455，6，113，906和 6，566，506，其每一個(gè)的內(nèi)容在此引入作為參考。該聚合物的非限制性實(shí)例相應(yīng)于具有以下 結(jié)構(gòu)的聚合物體系(i)-(vii)<formula>formula see original document page 24</formula><formula>formula see original document page 25</formula>
其中Y61_62 獨(dú)立地為 0、S 或 NR61 ；Y63 為 0、NR62、S、S0 或 SO2(w62)、(w63)和(w64)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(w61)為 0 或 1;mPEG 為甲氧基 PEG其中PEG如上定義且聚合物部分的總分子量為約2，000至約100，000道爾頓；且R61和R62獨(dú)立地選自氫、CV6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_19支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、 CV6取代的烷基、c2_6取代的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜 芳基、取代的雜芳基、C1^6雜烷基、取代的CV6雜烷基、C1^6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、 雜芳基氧基、c2_6烷?；⒎蓟驶?、c2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷?；趸⒎蓟?基氧基、c2_6取代的烷酰基、取代的芳基羰基、c2_6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、 c2_6取代的烷酰基氧基、和取代的芳基羰基氧基。在另一方面，該聚合物包括多臂PEG-OH或“星形-PEG”產(chǎn)物如描述于NOF Corp. Drug Delivery System目錄，Ver. 8，2006年四月中的那些，其內(nèi)容在此引入作為參考。該聚合物可刪猶于美國(guó)專利號(hào)5’ 122, 614或5, 808, 096專利中的活碰術(shù)轉(zhuǎn)化為適當(dāng)活 化的形式。具體地，該P(yáng)EG可為式··
<formula>formula see original document page 26</formula>
二 :為約4至約455 _數(shù)；且殘基的至多3個(gè)末端部分被甲基或其它低級(jí)燒基
=9]在-些優(yōu)選的實(shí)施方案中，肺4個(gè)PEG臂可轉(zhuǎn)化為合適的活化基團(tuán)，以促進(jìn)與芳 族基團(tuán)的連接。該轉(zhuǎn)化之前的化合物包括
<formula>formula see original document page 26</formula><formula>formula see original document page 27</formula>H0-CH2CH2-(0CH2CH2)u.-0>v^\0^v^0—(CH2CH2OV-CH2CH2-OH HO-CH2CH2-(OCH2CH2)u^u^(CH2CH2O)ul-CH2CH2-OH
ο在此包括的聚合物質(zhì)優(yōu)選在室溫是水溶性的。該聚合物的非限制性實(shí)例包括聚 環(huán)氧烷均聚物如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇，聚氧乙烯化多元醇(polyoxyethylenated polyols)，其共聚物和其嵌段共聚物，條件是保持嵌段共聚物的水溶性。在另一實(shí)施方案中，作為基于PAO的聚合物的替代物，可使用一種或多種有效 地非抗原性物質(zhì)，如葡聚糖、聚乙烯醇、基于碳水化合物的聚合物、羥丙基甲基丙烯酰胺 (HPMA)、聚環(huán)氧烷、和/或其共聚物。還參見(jiàn)共同授讓的美國(guó)專利6，153，655，其內(nèi)容在此 引入作為參考。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解采用與對(duì)在此所述的PAO' s如PEG相同的活化類 型。本領(lǐng)域技術(shù)人員將進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到上述實(shí)例僅是解釋性的，所有具有本文所述性質(zhì)的聚 合物質(zhì)都在考慮范圍內(nèi)。出于本發(fā)明的目的，“基本上或有效地非抗原性的”是指本領(lǐng)域理 解的所有物質(zhì)，其為無(wú)毒的且在哺乳動(dòng)物中不引發(fā)可觀察到的免疫源應(yīng)答。在一些方面，可使用具有末端氨基團(tuán)的聚合物以制備本文所述的化合物。以高 純度制備含末端胺的聚合物的方法描述于美國(guó)專利申請(qǐng)11/508，507和11/537，172，其每 一個(gè)的內(nèi)容在此引入作為參考。例如，具有疊氮基(a zides)的聚合物與基于膦的還原劑 如三苯基膦或堿金屬硼氫化物還原劑如NaBH4反應(yīng)?；蛘?，包括離去基團(tuán)的聚合物與保護(hù) 的胺鹽如甲基-叔丁基亞氨基二碳酸酯的鉀鹽(KNMeBoc)或二-叔丁基亞氨基二碳酸酯 (di-tert-butylimidodicarbonate)的鉀鹽(KNBoc2)反應(yīng)，然后脫保護(hù)該脫保護(hù)的氨基。由 這些方法形成的含末端胺的聚合物的純度大于約95%且優(yōu)選大于99%。在其它方面，具有末端羧基的聚合物可在本文所述的聚合物遞送體系中使用。以 高純度制備具有末端羧酸的聚合物的方法公開于美國(guó)專利申請(qǐng)11/328，662，其內(nèi)容在此引 入作為參考。該方法包括首先制備聚環(huán)氧烷的叔烷基酯，然后轉(zhuǎn)化為其羧酸衍生物。制備 PAO羧酸的方法的第一步驟包括形成中間體如聚環(huán)氧烷羧酸的叔丁基酯。該中間體通過(guò) PAO與鹵代乙酸叔丁基酯在堿如叔丁醇鉀的存在下反應(yīng)而形成。一旦叔丁基酯中間體形成， 該聚環(huán)氧烷的羧酸衍生物就容易以超過(guò)92 %，優(yōu)選超過(guò)97 %，更優(yōu)選超過(guò)99 %且最優(yōu)選超 過(guò)99. 5%的純度而提供。C.雙官能連接基雙官能連接基包括氨基酸、氨基酸衍生物和肽。該氨基酸可為天然存在的和非天 然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸的衍生物和類似物，以及各種本領(lǐng)域已知的非天然存 在的氨基酸(D或L)，疏水或非疏水的，也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。非天然存在的氨基酸的 合適的非限制性實(shí)例包括2-氨基己二酸，3-氨基己二酸，β-丙氨酸，β-氨基丙酸，2-氨 基丁酸，4-氨基丁酸，哌啶酸，6-氨基己酸，2-氨基庚酸，2-氨基異丁酸，3-氨基異丁酸， 2-氨基庚二酸，2,4-氨基丁酸，鎖鏈素，2，2- 二氨基庚二酸，2，3- 二氨基丙酸，N-乙基甘氨 酸，N-乙基天冬酰胺，3-羥基脯氨酸，4-羥基脯氨酸，異鎖鏈素，別異亮氨酸，N-甲基甘氨 酸，肌氨酸，N-甲基-異亮氨酸，6-Ν-甲基-賴氨酸，N-甲基纈氨酸，正纈氨酸，正亮氨酸和 鳥氨酸。一些優(yōu)選的氨基酸殘基選自甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸或肌氨酸，且更優(yōu)選地，甘氨 酸。
或者Lh和L，獨(dú)立地選自- [C ( = 0) ] γ (CR22R23) t [C ( = 0) ] v’ _，
- [C( = 0) ] V (CR22R23) t"0 [C ( = 0) ] v’ _，- [c ( = 0) ] v (CR22R23) t"NR26 [C ( = 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] v0 (CR22R23) t [C ( 二 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] v0 (CR22R23) t0 [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] v0 (CR22R23) tNR26 [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) t [C ( = 0) ] v’ _，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) t0 [C ( = 0) ] v’ _，_ [C ( = 0) ] VNR21 (CR22R23) tNR26 [C ( = 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] v (CR22R23) t0- (CR28R29) t’ [C ( = 0) ] v’ _，- [C ( = 0) ] v (CR22R23) tNR26- (CR28R29) t，[C ( = 0) ] v，_，_ [C ( = 0) ] v (CR22R23) tS- (CR28R29) t’ [C ( = 0) ] v’ _，- [C ( = 0) ] v0 (CR22R23) t0_ (CR28R29) t’ [C ( = 0) ] v’ _，- [C ( = 0) ] v0 (CR22R23) tNR26_ (CR28R29) t’ [C ( 二 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] v0 (CR22R23) tS_ (CR28R29) t’ [C ( = 0) ] v’ _，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) t0- (CR28R29) t’ [C ( 二 0) ] v’ -，- [c ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) tNR26" (CR28R29) t’ [C ( = 0) ] v’ -，- [c ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) ts- (CR28R29) t’ [C ( 二 0) ] v’ _，- [C ( = 0) ] v (CR22R23CR28R29O) tNR26 [C ( = 0) ] v’ _，- [C ( = 0) ] v (CR22R23CR28R29O) t [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] v0 (CR22R23CR28R29O) tNR26 [C ( = 0) ] v’ _，_ [C ( = 0) ] v0 (CR22R23CR28R29O) t [C ( = 0) ] v’ 一，- [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23CR28R29O) tNR26 [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23CR28R29O) t [C ( = 0) ] v’ _，- [c ( = 0) ] v (CR22R23CR28R29O) t (CR24R25) t’ [C ( = 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] v0 (CR22R23CR28R29O) t (CR24R25) t’ [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23CR28R29O) t (CR24R25) t’ [C ( = 0) ] v’ -，- [c ( = 0) ] v(CR22R23CR28R29O) t (CR24R25) t’ 0[C ( = 0) ] v’ -，- [c ( = 0) ] v (CR22R23) t (CR24R25CR28R29O) t’ [C ( = 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] v (CR22R23) t (CR24R25CR28R29O) t’ NR26 [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] v0 (CR22R23CR28R29O) t (CR24R25) t’ 0 [C ( = 0) ] v’ -，- [c ( = 0) ] v0 (CR22R23) t (CR24R25CR28R29O) t’ [C ( = 0) ] v’ -，- [c ( = 0) ] v0 (CR22R23) t (CR24CR25CR28R29O) t’ NR26 [C ( = 0) ] v’ -，- [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23CR28R29O) t (CR24R25) t’ 0 [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) t (CR24R25CR28R29O) t’ [C ( = 0) ] v’ -，_ [C ( = 0) ] vNR21 (CR22R23) t (CR24R25CR28R29O) t’ NR26 [C ( = 0) ] v’ _，<formula>formula see original document page 30</formula>其中R21_29獨(dú)立地選自氫、C1^6烷基、C3_12支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、C3_8取 代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、(V6雜烷基、取代的(V6雜烷基、Cp6烷氧基、苯氧基 和Cp6雜烷氧基；(t)和(t’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)，優(yōu)選0或約1至約12的整數(shù)，更優(yōu)選約1至約 8的整數(shù)，且最優(yōu)選1或2;和(ν)和(V，)獨(dú)立地為0或1。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，Lh和L’ Η獨(dú)立地選自<formula>formula see original document page 31</formula>
<formula>formula see original document page 31</formula>
-Val-Cit-,-Gly-Phe-Leu-Gly-,-Ala-Leu-Ala-Leu-,-Phe-Lys-,<formula>formula see original document page 32</formula>-Val-Cit-C ( = 0) -CH2OCH2-C ( = 0)-，-Val-Cit-C ( = 0) -CH2SCH2-C ( = 0)-，禾口-NHCH (CH3) -C ( = 0) -NH (CH2) 6_C (CH3) 2_C ( = 0)-其中，Yn_19 獨(dú)立地為 0、S 或 NR48 ；R31_48、R5ch51和A51獨(dú)立地選自氫、Cp6烷基、C3_12支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、C^6取代的 烷基、C3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、CV6雜烷基、取代的CV6雜烷基、Cp6烷 氧基、苯氧基和Cp6雜烷氧基；Ar為芳基或雜芳基部分；Ln_15為獨(dú)立選擇的雙官能間隔基；J和J’獨(dú)立地選自主動(dòng)運(yùn)輸至靶細(xì)胞的部分、疏水部分、雙官能連接部分和其組 合；(cll)、(hll)、(kll)、(zll)、(mil)和(nil)為獨(dú)立選擇的正整數(shù)，優(yōu)選 1 ；(all)、(ell)、(gll)、(jll)、(oil)和(qll)獨(dú)立地為 0 或正整數(shù)，優(yōu)選 1 ；和(bll)、(xll)、(χ，11)、(fll)、(ill)和(pll)獨(dú)立地為 0 或 1。
或者Lh和L，獨(dú)立地選自_ [C ( = 0) ] rNH (CH2) 2CH = N-NHC ( = 0) - (CH2) 2_，_ [C ( = 0) ] rNH (CH2) 2 (CH2CH2O) 2 (CH2) 2NH [C ( = 0) ] r’ -，_ [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2) (CH2CH2O) 2NH [C ( = 0) ] r’ -，_ [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2) SNH (CH2CH2) s’ [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2) sS (CH2CH2) s’ [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2) (CH2CH2O) [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2) s0 (CH2CH2) s’ [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2O) (CH2) NH [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2O) 2 (CH2) [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2O) s (CH2) s’ [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] ,NHCH2CH2NH [C ( = 0) ] r’ -，_ [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2) 20 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2O) [C ( = 0) ] r’ -，_ [C ( = 0) ] rNH (CH2CH2O) 2 [C ( = 0) ] r’ -，
-[C( = 0) JrNH(CH2) 3 [C ( = 0)]r’-，- [C ( = 0) ] r0 (CH2CH2O) 2 (CH2) [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2) 2NH (CH2) 2 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2CH2O) 2NH [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2) 20 (CH2) 2 [C ( = 0) ] r’ -，
- [C ( = 0) ] r0 (CH2) 2S (CH2) 2 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2CH2) NH [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2CH2) 0 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2) 3NH [C ( = 0) ] r’ -，_ [C ( = 0) ] r0 (CH2) 30 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] r0 (CH2) 3 [C ( = 0) ] r’ _，_ [C ( = 0) ] ,CH2NHCH2 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] ,CH2OCH2 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] ,CH2SCH2 [C ( = 0) ] r’ -，- [C ( = 0) ] rS (CH2) 3 [C ( = 0) ] r’ _，-[C( = 0) ] ,(CH2)3 [C ( = 0)]r’_，
—[C(=0)]r0CH2-^^-CH2NH[C(=0)]r.-—[C(=0)]r0CH2-^j)-CH20[C(=0)]r,—
-[C(=0)]rNHCH2—CH2NH[C(=0)]r—和
-[C(=0)]rNHCH2-^^CH20[C(=0)]r.—其中，(r)和(r，)獨(dú)立地為0或1.在另一實(shí)施方案中，Lm和L’ Η包括相應(yīng)于如上所示的那些的結(jié)構(gòu)，但進(jìn)一步被乙烯基、砜的殘基、氨基、羧基、巰基、酰胼、胼基甲酸基(carbazate)等取代。D. R12 禾口 R，12 基團(tuán)1.離去基團(tuán)和官能團(tuán)在一些方面，合適的離去基團(tuán)包括，但不限于鹵素(Br、Cl)、活化碳酸酯 (avtivated carbonate)、羰基咪唑、環(huán)酰亞胺硫酮、異氰酸酯(isocyanate)、N-羥基琥 珀酰亞氨基、對(duì)硝基苯氧基、N-羥基鄰苯二甲酰亞氨基、N-羥基苯并三唑基、咪唑、甲苯 磺酸酯(tosylate)、甲磺酸酯(mesylate)、三氟乙基磺酸酯(tresylate)、硝基苯磺酸酯 (nosylate)、C1-C6烷基氧基、C1-C6烷?；趸?、芳基羰基氧基、鄰硝基苯氧基、N-羥基苯并 三唑基、咪唑、五氟苯氧基、1，3，5-三氯苯氧基和1，3，5-三氟苯氧基或其它本領(lǐng)域技術(shù)人 員熟知的合適的離去基團(tuán)。出于本發(fā)明的目的，離去基團(tuán)是指能與在所需靶(即生物活性部分、診斷劑、靶向 部分、雙官能間隔基、中間體等)上的親核基團(tuán)反應(yīng)的基團(tuán)。因此所述靶包含用于置換的基團(tuán)，例如在蛋白質(zhì)、肽、酶、天然或化學(xué)合成的治療分子(如多柔比星)，和間隔基如單-保護(hù) 的二胺上的OH、NH2或SH基團(tuán)。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，將聚合物運(yùn)送體系連接至生物活性部分的官能團(tuán)包括 可進(jìn)一步綴合至生物活性基團(tuán)的馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、砜的殘基、氨基、羧基、巰基、酰胼、 胼基甲酸基等。在本發(fā)明一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，R12和R’12可選自Η、0Η、甲氧基、叔丁氧基、N-羥 基琥珀酰亞氨基和馬來(lái)酰亞氨基。2.生物活性部分很多種生物活性部分可連接至本文所述的活化的聚合物。所述生物活性部分包括 藥學(xué)活性化合物、酶、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和肽。與本發(fā)明的化合 物綴合的生物活性化合物將包含SH官能部分。 此外，本發(fā)明的活化的聚合物可進(jìn)一步包含 生物活性部分作為R12，其包括含胺、羥基或巰基的化合物。該合適的化合物的非限制性實(shí) 例包括有機(jī)化合物、酶、蛋白質(zhì)、多肽、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體或寡核苷酸等。有機(jī)化合 物包括，但不限于，如喜樹堿和類似物如SN38的部分，伊立替康，和相關(guān)的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑 制劑，紫杉烷和紫杉醇衍生物，包括AZT的核苷，包括柔紅霉素、多柔比星的蒽環(huán)類抗生素 化合物；對(duì)氨基苯胺氮芥(p-aminoaniline mustard)，美法侖，Ara-C (阿糖胞苷)和相關(guān)抗 代謝物化合物，例如，吉西他濱等?；蛘?，生物活性部分可包括心血管劑、抗腫瘤劑、抗感染 藥、抗真菌藥如制霉菌素和兩性霉素B、抗焦慮劑、腸胃病藥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)活化劑、止痛劑、 致育藥(fertility agent)、避孕劑、抗炎劑、留體類藥、抗高尿酸血癥藥(anti-urecemic agents)、血管擴(kuò)張劑和血管收縮劑等。應(yīng)理解其它未具體說(shuō)明但具有合適的含胺、含羥基 或含巰基的基團(tuán)的生物活性物質(zhì)也可被考慮且在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明另一方面，該生物活性化合物適用于醫(yī)藥或診斷用途以治療動(dòng)物，例如， 哺乳動(dòng)物，包括人，用于治療需要該治療的癥狀。適于在本文加入的生物活性部分的類型的僅有的限制為存在可用的至少一個(gè)化 學(xué)反應(yīng)性官能部分，如胺、羥基或巰基，以與載體部分連接，且在以綴合至本文所述的聚合 物遞送體系的形式時(shí)，生物活性沒(méi)有明顯的損失。或者適用于加入本發(fā)明的聚合物運(yùn)送綴 合物化合物中的母體化合物在從連接的化合物水解釋放后可具有活性，或在水解釋放后沒(méi) 有活性，但在經(jīng)歷進(jìn)一步的化學(xué)過(guò)程/反應(yīng)后變得有活性。例如，通過(guò)聚合物運(yùn)送體系遞送 至血流的抗癌藥物可在進(jìn)入癌癥或腫瘤細(xì)胞后才具有活性，在該細(xì)胞中其被癌癥或腫瘤細(xì) 胞化學(xué)物質(zhì)活化，例如，通過(guò)該細(xì)胞獨(dú)特的酶反應(yīng)活化。本發(fā)明另一方面提供由連接至本文所述的聚合物遞送體系的診斷標(biāo)記物(tag) 的任選制備綴合化合物，其中選擇該標(biāo)記物用于診斷或成像目的。因此，合適的標(biāo)記物通過(guò) 將任何合適的部分(例如，氨基酸殘基)連接至任何本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的放射同位素、射線不透性 標(biāo)記、磁共振標(biāo)記、或其它適合于磁共振成像的非放射性同位素標(biāo)記、熒光型標(biāo)記、顯示可 見(jiàn)顏色和/或能在紫外線、紅外線或電化學(xué)刺激下發(fā)熒光的標(biāo)記而制備，以允許在手術(shù)操 作中成像腫瘤組織，等等。任選地，該診斷標(biāo)記物摻入和/或連接至綴合的治療部分，以用 于監(jiān)測(cè)治療性生物活性物質(zhì)在動(dòng)物或人患者中的分布。在本發(fā)明另一方面，本發(fā)明的加標(biāo)記物的綴合物易于通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法，利 用任何合適的標(biāo)記(包括，例如，放射性同位素標(biāo)記)制備。僅僅作為實(shí)例，這些包括131碘、125碘、"-锝和/或111銦以制備放射免疫-閃爍劑，以選擇性體內(nèi)吸收進(jìn)入腫瘤細(xì)胞。例如，有 許多本領(lǐng)域已知的將肽連接至Tc-99m的方法，包括，僅僅作為實(shí)例，美國(guó)專利5，328，679 ； 5，888，474 ；5, 997，844 ；和5，997，845所示的那些，其在此引入作為參考。3.靴向基團(tuán)在一些方面，本文所述的化合物可與靶向基團(tuán)反應(yīng)或可包含靶向基團(tuán)。該靶向基團(tuán)包括受體配體、抗體或抗體片段、單鏈抗體、靶向肽、靶向碳水化合物分子或凝集素。靶向 基團(tuán)增強(qiáng)本文所述的化合物在靶組織和細(xì)胞群中的結(jié)合或攝取。例如，靶向基團(tuán)的非限制 性實(shí)例括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、FGF2、生長(zhǎng)抑素和和生長(zhǎng)抑素類似物、轉(zhuǎn)鐵蛋白、促黑素、 ApoE和ApoE肽、維勒布蘭德氏因子(von Willebrand' s Factor)和維勒布蘭德氏因子肽、 腺病毒纖維蛋白和腺病毒纖維蛋白肽、PDl和PDl肽、EGF和EGF肽、RGD肽、葉酸(folate) 等。在本發(fā)明另一方面靶向基團(tuán)包括單克隆抗體、單鏈抗體、生物素、細(xì)胞粘附肽、細(xì)胞穿透 肽(CPPs)、熒光化合物、放射性標(biāo)記化合物和適體(aptamers)。在本發(fā)明另一方面靶向劑 可包括選凝素(Selectin)、TAT、穿透素(Penetratin)、Ang9和葉酸。E.聚合物遞送體系的合成通常，制備本發(fā)明的活化的聚合物的方法包括將具有適當(dāng)?shù)碾x去基團(tuán)的聚合物與 在遠(yuǎn)端包含吡啶基二硫化物基的親核物質(zhì)反應(yīng)。本發(fā)明的活化的聚合物遞送體系可進(jìn)一步 與包含SH基的生物活性化合物反應(yīng)以得到聚合綴合物，其中生物活性部分通過(guò)-S-S-鍵結(jié) 合至聚合物。在本發(fā)明一個(gè)方面，制備本文所述的化合物的方法包括將式(III)的聚合化合物A4-R1-M1(III)與式(IV)的化合物<formula>formula see original document page 35</formula>在足以形成式(V)的化合物的條件下反應(yīng)<formula>formula see original document page 36</formula>其中R1是基本上非抗原性的水溶性聚合物；A4為封端基團(tuán)或M1;A5為封端基團(tuán)或
<formula>formula see original document page 36</formula>M1為OH或離去基團(tuán)；M2 為-OH、SH 或-NHR90 ；Yi*Y’工獨(dú)立地為S、0或NR2 ；Y2 和 Y，2 獨(dú)立地為 S、0、SO、SO2, NR20 ；Y3和Y’ 3獨(dú)立地為H、離去基團(tuán)、活化基團(tuán)、官能團(tuán)，或<formula>formula see original document page 36</formula>L1^3和L’ η為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；R2_n，R’ 2_n，R2tl和R9tl獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、 羥基、硝基、硅烷基醚、磺酰基、巰基、C1^6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基巰基、取代的C^6 烷基硫基、C1^6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_19支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、c2_6取 代的烯基、C2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、 C1^6雜烷基、取代的CV6雜烷基、Ch6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2_6烷酰 基、芳基羰基、c2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷酰基氧基、芳基羰基氧基、c2_6取代的烷 ?；?、取代的芳基羰基、C2_6取代的烷酰基氧基、取代的芳基氧基羰基、c2_6取代的烷?；?基和取代的芳基羰基氧基；
R12和R’ 12獨(dú)立地選自氫、羥基、離去基團(tuán)、官能團(tuán)、藥物、靶向劑、診斷劑、取代的 C1^6烷基硫基、Cp6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_19支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、CV6取代的烷基、c2_6 取代的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、 (V6雜烷基、取代的CV6雜烷基、Cp6烷氧基、芳基氧基、C1^6雜烷氧基、雜芳基氧基、c2_6烷酰 基、芳基羰基、c2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷酰基氧基、芳基羰基氧基、c2_6取代的烷 ?；?、取代的芳基羰基、C2_6取代的烷酰基氧基、取代的芳基氧基羰基、c2_6取代的烷?；?基、取代的芳基羰基氧基、馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、取代的砜、氨基、羧基、巰基、酰胼和胼基 甲酸基；(a)，(a，)，(d)和(d，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(b)和(b’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(c)和(C’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(e)和(e，)獨(dú)立地為0或1 ；和(g)和(g，)獨(dú)立地為0或1 ；條件是(a)和(g)不同時(shí)為0。含吡啶基二硫化物的部分與聚合物部分的連接或含分支部分的聚合物體系與式 (IV)的化合物的綴合優(yōu)選在偶合劑的存在下進(jìn)行。合適的偶合劑的非限制性實(shí)例包括1， 3- 二異丙基碳二亞胺(DIPC)，任何合適的二烷基碳二亞胺，2-鹵代-1-烷基-吡啶鐺鹵 化物，(Mukaiyama試劑)，1_ (3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)、丙烷膦酸環(huán)酐 (PPACA)和二氯磷酸苯酯等，其可從例如商業(yè)來(lái)源如Sigma-Aldrich Co.獲得或使用已知 技術(shù)合成。優(yōu)選地，所述反應(yīng)在惰性溶劑如二氯甲烷、氯仿、DMF或其 混合物中進(jìn)行。該反應(yīng) 可優(yōu)選在堿的存在下進(jìn)行，所述堿如二甲基氨基吡啶(DMAP)、二異丙基乙基胺、吡啶、三乙 胺等，以中和任何產(chǎn)生的酸。該反應(yīng)可在約0°C至約22°C (室溫)進(jìn)行。一些由本文所述方法制備的具體實(shí)施方案包括
<formula>formula see original document page 38</formula><formula>formula see original document page 39</formula><formula>formula see original document page 40</formula>其中mPEG 具有式 CH3O (CH2CH2O) n_ ；PEG 具有式-O (CH2CH2O) n_，禾口(η)為約10至約2300的整數(shù)。所得式(V)的化合物可進(jìn)一步與含SH的部分反應(yīng)以得到聚合遞送綴合物，其中生 物部分通過(guò)二硫鍵連接。本發(fā)明的活化的聚合物可易于與生物活性部分在中性或弱酸性條 件如PH 6. 5中綴合。該反應(yīng)可在室溫或_4°C至30°C在適于本發(fā)明的聚合化合物和生物活 性部分的溶劑中進(jìn)行。該反應(yīng)可在水性或有機(jī)溶劑如DCM、氯仿、DMF、DMS0等中進(jìn)行。如果 底物為寡核苷酸或肽，優(yōu)選該反應(yīng)在水性緩沖溶液中進(jìn)行。該生物活性部分選自藥物活性 化合物、酶、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和肽。一些綴合方法描述于實(shí)施 例中。一些可通過(guò)使用本文所述的綴合方法將本發(fā)明的活化的聚合化合物與生物活性
部分反應(yīng)制備的具體實(shí)施方案包括
<formula>formula see original document page 40</formula>
<formula>formula see original document page 41</formula><formula>formula see original document page 42</formula>
其中(ζ)為正整數(shù)，優(yōu)選約1至約10 ；-YGRKKRRQRRR-為 TAT 肽；mPEG 具有式 CH3O (CH2CH2O) n_ ；PEG 具有式-O (CH2CH2O) n_，(η)為約10至約2300的整數(shù)；和Rltll選自靶向基團(tuán)、診斷劑和生物活性部分。F.治療方法本發(fā)明另一方面提供治療哺乳動(dòng)物各種醫(yī)學(xué)病癥的方法。該方法包括向需要該治 療的哺乳動(dòng)物給藥有效量的本文所述的生物活性部分綴合的聚合物。該聚合綴合化合物尤 其用于治療類似于用母體化合物治療的那些疾病，例如在哺乳動(dòng)物中的酶替代治療、瘤形 成疾病、減少腫瘤負(fù)荷、防止腫瘤轉(zhuǎn)移和防止腫瘤/贅生物生長(zhǎng)復(fù)發(fā)。給藥的聚合綴合物的量將取決于其中包含的母體分子的量。通常，治療方法中使 用的聚合綴合物的量為在哺乳動(dòng)物中有效獲得所需治療結(jié)果的量。自然地，不同聚合綴合化合物的劑量將根據(jù)母體化合物、聚合物的分子量、體內(nèi)水解速率等而稍有改變。本領(lǐng)域技 術(shù)人員將基于臨床經(jīng)驗(yàn)和治療適應(yīng)癥確定所選的聚合運(yùn)送綴合物的最佳劑量。實(shí)際劑量對(duì) 于技術(shù)人員是明顯的，不用過(guò)多的實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明的化合物可包含在一種或多種合適的藥物組合物中以給藥于哺乳動(dòng)物。該 藥物組合物可為溶液、混懸液、片劑、膠囊等形式，根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法制備。還考慮到該 組合物的給藥可根據(jù)技術(shù)人員的需要通過(guò)口服和/或腸胃外途徑?？墒褂媒M合物的溶液和 /或混懸液，例如，作為載體溶媒以通過(guò)任何本領(lǐng)域已知的方法注射或滲濾組合物，例如，通 過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下注射等。這種給藥也可通過(guò)輸注入體間隙或體腔，以及通過(guò)吸 入和/或鼻內(nèi)途徑。然而，在本發(fā)明優(yōu)選的方面，該聚合綴合物腸胃外給藥于需要的哺乳動(dòng) 物。實(shí)施例提供以下實(shí)施例以進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí) 施例中的黑體數(shù)字相應(yīng)于附圖中所示的那些。整個(gè)實(shí)施例中使用縮寫，例如DCM( 二氯甲 烷)、DIEA (二異丙基乙基胺)、DMAP (4- 二甲基氨基吡啶)、DMF (N，N’ - 二甲基甲酰胺)、 DSC (二琥珀酰亞氨基碳酸酯)、EDC (1- (3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺)、IPA (異丙 醇)、NHS (N-羥基琥珀酰亞胺)、PEG (聚乙二醇)、SCA-SH (單鏈抗體)、SN38 (7-乙基-10-羥 基喜樹堿)>TBDPS (叔丁基-二丙基硅烷(tert-butyl-dipropylsiIyl)))和 TEA (三乙胺)?！惴椒ㄋ蟹磻?yīng)在干燥氮?dú)饣驓鍤獾臍夥罩羞M(jìn)行。使用商業(yè)試劑而沒(méi)有進(jìn)一步 純化。所有PEG化合物在使用前真空干燥或通過(guò)從甲苯共沸蒸餾而干燥。除非另有所述， 使用 Varian Mercury 300NMR 光譜儀，以 300MHz 獲得 1H NMR 譜，以 75. 46MHz 獲得 13C NMR 譜，并使用氘代氯仿作為溶劑?；瘜W(xué)位移(δ )以距四甲基硅烷(TMS)的低場(chǎng)百萬(wàn)分率(ppm) 記錄。HPLC方法.反應(yīng)混合物，和中間體和最終產(chǎn)物的純度通過(guò)BeckmanCoulter System Gold HPLC 儀器監(jiān)測(cè)。其使用 ZORBAX 300SB C8 反相柱(150X4. 6mm)或 Phenomenex Jupiter 300A C 18反相柱(150χ4· 6讓)，并具有比8 二極管陣列UV檢測(cè)器， 使用梯度為10-90%的乙腈在0.05%三氟乙酸(TFA)中的溶液，流速為ImL/分鐘。實(shí)施例1.制備化合物(2)將4Ν HCl在二噁烷(70mL)中的溶液添加至BocCys (Npys)-OH (化合物1，1. 5g， 13.32mmol)中。將該混懸液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后將其倒入700mL乙醚中。使用粗 濾器通過(guò)重力過(guò)濾收集固體并用乙醚(50mL)洗滌三次。將洗滌的固體在真空室溫干燥 過(guò)夜以得到產(chǎn)物=1H NMR(CD3OD) δ 8. 93 (1Η, dd, J=L 5,4. 7Ηζ)，8· 66 (1Η, dd, J = 1. 5， 8. 20Hz)，7. 59 (1H, dd, J = 4. 7,8. 2Hz)，4. 24 (1H, dd, J = 4. 1,9. 4Hz)，3. 58 (1H, dd, J = 4. 1，14. 9Hz) ,3. 36 (1H, dd, J = 9. 4，15. 2Hz). 13C NMR(CD3OD) δ 169. 40，156. 27，154. 64， 144. 13，135. 246，123. 10，52. 77，39. 27。實(shí)施例2.制備化合物(4)將mPEG-SC(化合物 3，Mw. 20kDa，7. 30g，0. 35mmol)和 DIEA (3mL，16. 8mmol)添加 至化合物2(1. 82g，5. 55mmol)在DMF和DCM(25mL_45mL)的混合物中的溶液中。將所得混 懸液在室溫?cái)嚢?小時(shí) 。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)然后用DCM-Et2O在0°C沉淀。通過(guò)過(guò)濾收集固體并溶于SOmLDCM中。添加20mL 0. IN HCl后，將混合物攪拌5分鐘。使用分液漏 斗分離有機(jī)層并用0. IN HCl (20mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機(jī)層用無(wú)水MgSO4干燥，過(guò)濾 并真空蒸發(fā)。殘余物用DCM/Et20在0°C沉淀。過(guò)濾固體并在真空烘箱中在30°C干燥至少2 小時(shí)以得到產(chǎn)物。實(shí)施例3.制備化合物(5)在輕攪拌下將化合物4 (0. 084mmol)添加至SCA_SH(0. 00027mmol)在3mL磷酸鈉 緩沖液(0. 1M，pH 7. 8)中的溶液中。將該溶液在30°C攪拌30分鐘。使用GPC柱(Zorbax GF-450)監(jiān)測(cè)PEG綴合。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)(原料酶已不存在)，該混合物用12mL配制緩沖液 (0. 05M磷酸鈉，0. 85%氯化鈉，ρΗ7· 3)稀釋，并用Centriprep濃縮器(Amicon)滲濾以去 除未反應(yīng)的PEG試劑。按需要在4°C持續(xù)滲濾直到通過(guò)混合等量的濾液和0. 1% PMA(0. IM HCl中的聚甲基丙烯酸)不再檢測(cè)到游離PEG，以得到產(chǎn)物。實(shí)施例4.制備化合物(6)
向C6-硫代-LNA-存活蛋白(100mg，0. 018mmol)在60mL pH 8. 0磷酸鹽緩沖液中 的溶液中添加化合物4(3. 6g，0. 18mmol)，且將溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)進(jìn)展通過(guò)離子 交換HPLC檢測(cè)。將反應(yīng)混合物通過(guò)0.2微米濾器過(guò)濾并裝載在Potos陰離子交換柱上。產(chǎn) 物使用在PH 7. 0的緩沖液體系20mM Tris. HCl 2M NaCl梯度洗脫。實(shí)施例5.制備化合物(7)在氮?dú)庀聦⒒衔?(8mg，0. 0014mmol,寡聚物等價(jià)物(oligo eq))與 HS-RGD2(lllmg,0. 0496mmol)在 3mL 緩沖液(5M 尿素，IOOmM KH2PO4)中混合。該反應(yīng)進(jìn)行 2 小時(shí)。粗產(chǎn)物在Source 15S樹脂上純化。柱用緩沖液A(5M尿素，IOOmM KH2PO4, 25% CH3CN, PH 6.5)平衡。產(chǎn)物用緩沖液B(2MKBr)洗脫。收集的產(chǎn)物在HiPr印脫鹽柱上脫鹽，凍干。實(shí)施例6.制備化合物(9a)將2CIK8 臂-PEG-SC (化合物 8a，7. 30g, 0. 35mmol)和 DIEA (3mL, 16. 8mmol)添加至化 合物2(1.82g，5. 55mmol)在DMF(25mL)和DCM(45mL)中的溶液中。所得混懸液在室溫?cái)嚢?5小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)然后用DCM-乙醚(4 l,v/v)在0°C沉淀。將固體過(guò)濾并 溶于80mL DCM中。添加20mL 0. IN HCl后，將混合物攪拌5分鐘，然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗，且 分離有機(jī)層并再次用0. IN HCl (20mL)和鹽水(20mL)洗滌。有機(jī)層用無(wú)水MgSO4干燥，過(guò)濾 并真空濃縮。殘余物用DCM-Et2O在0°C沉淀。過(guò)濾固體并在真空烘箱中在30°C干燥以得 到產(chǎn)物:13C NMR δ 170. 90，156. 66，155. 68，153. 86，142. 41，133. 85，121. 24,72. 96-69. 30， 64. 08,53. 01,41. 82。實(shí)施例7.制備化合物(Ila)向LNA-存活蛋白(化合物10，1. 7μπιο1)在PBS緩沖液(5mL，pH 7.8)中的溶液中 添加化合物9a(Mw 20kDa, 17 μ mol)并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋至50mL 并裝載在Poros HQ,強(qiáng)陰離子交換柱(IOmmX 1. 5mm,柱床體積 16mL)上，該柱預(yù)先用20mM Tris-HCl緩沖液，pH 7.4(緩沖液A)平衡。該柱用3_4倍柱體積的緩沖液A洗滌以去除 過(guò)量的PEG連接基。然后該產(chǎn)物以流速IOmL/分鐘用梯度為0至100%的IM NaCl在20mM Tris-HCl緩沖液(pH 7. 4，緩沖液B)中的溶液洗脫10分鐘，然后以100%緩沖液B洗脫10 分鐘。洗脫的產(chǎn)物用HiPr印脫鹽柱(50mL)脫鹽并凍干得到產(chǎn)物。實(shí)施例8.制備化合物(13a)
在輕攪拌下將化合物lla(0. 084mmol)添加至RGD-K-NH2 (化合物12， 0. 00027mmol)在3mL磷酸鈉緩沖液(0. ΙΜ,ρΗ 7. 8)中的溶液中。將該溶液在30°C攪拌30 分鐘。使用GPC柱(Zorbax GF-450)監(jiān)測(cè)PEG綴合。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)(原料酶已不存在)， 該混合物用12mL制劑緩沖液(0. 05M磷酸鈉，0. 85%氯化鈉，pH 7. 3)稀釋并用Centripr印 濃縮器(Amicon)滲濾以去除未反應(yīng)的PEG試劑。按需要在4°C持續(xù)滲濾直到通過(guò)混合等量 的濾液和0. 1% PMA(0. IM HCl中的聚甲基丙烯酸)不再檢測(cè)到游離PEG，以得到產(chǎn)物。實(shí)施例9.制備化合物(14a)將20K8 臂-PEG-SC (化合物 8a, 7. 30g, 0. 35mmol)和化合物 2 (1. 82g, 5. 55mmol) 進(jìn)行與實(shí)施例6所述的相同的反應(yīng)條件以得到產(chǎn)物13C NMR δ 170. 90,156. 66,155. 68, 153. 86，142. 41，133. 85，121. 24,72. 96-69. 30,64. 08,53. 01,41. 82。實(shí)施例10.制備化合物(14b)將2CIK4 臂-PEG-SC (化合物 8b，6. Og, 0. 29mmol)和化合物 2 (765mg, 2. 33mmol)進(jìn)行 與實(shí)施例6所述的相同的反應(yīng)條件以得到產(chǎn)物=13C NMR δ 170. 76，156. 53，155. 57，153. 85， 142. 37，133. 79，121. 23,72. 44-69. 30,63. 99,52. 95,45. 36,41. 82。實(shí)施例11.制備化合物(15a)向C6-硫代-LNA-存活蛋白(化合物 10，120mg，0. 021mmol)在 60mL pH6. 5 磷酸鹽 緩沖液中的溶液中添加化合物14a(2. 3mg,0. 107mmol)且將溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng) 進(jìn)程通過(guò)陰離子交換HPLC檢查。將反應(yīng)混合物通過(guò)0. 2微米濾器過(guò)濾并裝載在Poros陰 離子交換柱上。產(chǎn)物使用在PH 7. 0的緩沖液體系20mM Tris. HCl 2M NaCl梯度洗脫。脫 鹽后的產(chǎn)量為從UV計(jì)算的SOmg寡聚物等價(jià)物。實(shí)施例12.制備化合物(17a)將化合物15a(80mg寡聚物等價(jià)物，0. 0142mmol)溶于20ml緩沖液(5M尿素，IOOmM KH2PO4)。將溶液在氮?dú)庀略?°C冷卻，然后添加肽C-TAT(329mg，0. 198mmol)。觀察到深黃 色。在氮?dú)庀略?°C持續(xù)攪拌反應(yīng)1.5小時(shí)，然后通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜法使用Source 15S 樹脂純化。將柱(IOmmxlOmm)用3倍柱體積的緩沖液A (5M尿素，IOOmM KH2PO4, 25% CH3CN, PH 6. 5)平衡，然后將樣品裝載在柱上。將產(chǎn)物用緩沖液B(2M KBr)洗脫。將收集的產(chǎn)物凍 干并用50mM pH 7. 4PBS緩沖液在HiPr印脫鹽柱上脫鹽。然后將脫鹽的溶液濃縮至約Img/ ml (寡聚物等價(jià)物)溶液。產(chǎn)物產(chǎn)量21. 75mg。實(shí)施例13.制備化合物(19a)向8臂2°k-SCPEG (化合物8a，1當(dāng)量)在DMF中的溶液中添加化合物18 (16當(dāng)量)。 然后，添加DIEA(32當(dāng)量)且將所得混懸液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用DCM/Et20 在0°C沉淀。將固體過(guò)濾然后溶于水。粗固體使用C18反相色譜法純化。收集產(chǎn)物峰并凍 干成固體。實(shí)施例14.制備化合物(20a)將化合物19a添加至2%胼在DMF中的溶液中，并將溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反 應(yīng)混合物裝載在反相柱上并純化。收集產(chǎn)物峰并凍干。實(shí)施例15.制備化合物(21a)將化合物20a (1當(dāng)量)溶于20ml緩沖液(5M尿素 ，IOOmM KH2PO4)中。將該溶液 在0°c在氮?dú)庀吕鋮s然后添加寡聚物-SH(8當(dāng)量)。在氮?dú)庀略?°C持續(xù)攪拌該反應(yīng)1. 5小時(shí)，然后通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜法使用Source 15S樹脂純化。將柱(IOmmxIOmm)用3倍柱體積的緩沖液A (5M尿素，IOOmMKH2PO4, 25% CH3CN，pH 6.5)平衡，然后將樣品裝載在柱上。將 產(chǎn)物用緩沖液B (2M KBr)洗脫。將收集的產(chǎn)物凍干并用50mM pH 7. 4PBS緩沖液在HiPr印 脫鹽柱上脫鹽。然后將脫鹽的溶液濃縮至約lmg/ml(寡聚物等價(jià)物)溶液。
權(quán)利要求
式(I)的化合物其中R1是基本上非抗原性的水溶性聚合物；A是封端基團(tuán)，或Y1和Y’1獨(dú)立地為S、O或NR2；Y2和Y’2獨(dú)立地為S、O、SO、SO2、NR20；Y3和Y’3獨(dú)立地為H、離去基團(tuán)、活化基團(tuán)、官能團(tuán)，或L1-3和L’1-3為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；R2-11、R’2-7和R20獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、硅烷基醚、磺?；?、巰基、C1-6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基巰基、取代的C1-6烷基硫基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-19支鏈烷基、C3-8環(huán)烷基、C1-6取代的烷基、C2-6取代的烯基、C2-6取代的炔基、C3-8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C1-6雜烷基、取代的C1-6雜烷基、C1-6烷氧基、芳基氧基、C1-6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2-6烷?；?、芳基羰基、C2-6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2-6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2-6取代的烷?；⑷〈姆蓟驶?、C2-6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2-6取代的烷?；趸腿〈姆蓟驶趸?；R12和R’12獨(dú)立地選自氫、羥基、離去基團(tuán)、官能團(tuán)、藥物、靶向劑、診斷劑、取代的C1-6烷基硫基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-19支鏈烷基、C3-8環(huán)烷基、C1-6取代的烷基、C2-6取代的烯基、C2-6取代的炔基、C3-8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C1-6雜烷基、取代的C1-6雜烷基、C1-6烷氧基、芳基氧基、C1-6雜烷氧基、雜芳基氧基、C2-6烷?；?、芳基羰基、C2-6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2-6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2-6取代的烷?；?、取代的芳基羰基、C2-6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2-6取代的烷?；趸?、取代的芳基羰基氧基、馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、取代的砜、氨基、羧基、巰基、酰肼和肼基甲酸基；(a)、(a’)、(d)和(d’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(b)和(b’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(c)和(c’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(e)和(e’)獨(dú)立地為0或1；和(g)和(g’)獨(dú)立地為0或1；條件是(a)和(g)不同時(shí)為0。FPA00001105858400011.tif,FPA00001105858400012.tif,FPA00001105858400013.tif
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R8_n和R’8吣獨(dú)立地選自氫、取代的酰氨基、酰基、 疊氮基、羧基、烷基氧基羰基、氰基和硝基。
3.權(quán)利要求1所述的化合物，其中R12和R，12獨(dú)立地選自H.NH^OH.CO^.C^e烷氧基、 (V6烷基、馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、砜的殘基、巰基、酰胼和胼基甲酸基。
4.權(quán)利要求1所述的化合物，其中該離去基團(tuán)選自0H、鹵素、活化酯、環(huán)酰亞胺硫酮、 N-羥基琥珀酰亞氨基、對(duì)硝基苯氧基、N-羥基鄰苯二甲酰亞氨基、N-羥基苯并三唑基、咪 唑、甲苯磺酰基、甲磺?；?、三氟乙基磺?；?、硝基苯磺?；?、(V6烷基氧基、Cm烷?；趸?、 芳基羰基氧基、鄰硝基苯氧基、對(duì)硝基苯氧基、五氟苯氧基、1，3，5-三氯苯氧基和1，3，5-三 氟苯氧基。
5.權(quán)利要求1所述的化合物，其中Li_3和L’獨(dú)立地選自-[C(=0)v(CR22R23)t[C( = 0)]v’-，-[C(=0)v(CR22R23)t-0[C( = 0)]v’-，-[C(=0)v(CR22R23)t-NR26[C( = 0)]v’-，-[C(=0)v0(CR22R23)t[C( = 0)]v’-，-[C(=0)v0(CR22R23)t0[C( = 0)]v’-，-[C(=0)v0(CR22R23)tNR26[C( = 0)]v’-，-[C(=0)vNR21 (CR22R23)t[C( = 0)]v’-，-[C(=0)vNR21 (CR22R23)t0[C( = 0)]v’-，-[C(=0)vNR21 (CR22R23)tNR26[C( = 0)]v’_9-[C(=0)v(CR22R23)t0-(CR28R29)t’ [C( = 0)]v’-，-[C(=0)v(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t’ [C(==0)]v’-，-[C(=0)v(CR22R23)tS-(CR28R29)t’ [C( = 0)]v’-，-[C(=0)v0(CR22R23)t0-(CR28R29)t’ [C(=0)]v’-，-[C(=0)v0(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t’ [C(= 0)]v’--[C(=0)v0 (cr22r23) ts- (cr28r29) t. [c(=0)]v’-，-[C(=0)vNR21(CR22R23)t0-(CR28R29)t’ [C(= 0)]v’--[C(=0)vNR21(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t’ [C( = 0)]-[C(=0)vnr21 (cr22r23) ts- (cr28r29) t’ [c (= 0)]v’-<formula>formula see original document page 4</formula>和其中R21_29獨(dú)立地選自氫，(V6烷基、c3_12支鏈烷基、c3_8環(huán)烷基、(V6取代的烷基、c3_8取代的 環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、Cm雜烷基、取代的(V6雜烷基、(V6烷氧基、苯氧基和(V6 雜烷氧基；(t)和(t’)獨(dú)立地為o或正整數(shù)；和(v)和(V，)獨(dú)立地為0或1。
6.權(quán)利要求1所述的化合物，其中Li_3和L’ 獨(dú)立地選自[C=0)rNH(CH2)2CH = N-NHC ( = 0)-(CH2)2-，[C=0)rNH (CH2) 2 (CH2CH20) 2 (CH2) 2NH [C ( = 0)][C=0)rNH (CH2CH2) (CH2CH20) 2NH [C ( = 0) ] r’ -，[C=0)rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s’ [C( = 0)]r,-[C=0)rNH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s’ [C( = 0)]r’-，[C=0)rNH(CH2CH2) (CH2CH20) [C( = 0)]r’-，[C=0)rNH (CH2CH2) s0 (CH2CH2) s’ [C ( = 0) ] r’ -，[C=0)rNH(CH2CH20) (CH2)NH[C( = 0)]r’-，[C=0)rNH (CH2CH20) 2 (CH2) [C ( = 0) ] r’ -，[C=0)rNH (CH2CH20) s (CH2) s’ [C ( = 0) ] r’ -，[C=0)rNHCH2CH2NH[C( = 0)]r’-，[C=0)rNH(CH2CH2)20[C( = 0)]r’-，[C=0)rNH(CH2CH20) [C( = 0)]r’-，[C=0)rNH(CH2CH20)2[C( = 0)]r’-，[C=0)rNH(CH2)3[C( = 0)]r’-，[C=0)ro (CH2CH2O) 2 (CH2) [C ( = 0) ] r’ -，[C=0)r0(CH2)2NH(CH2)2[C( = 0)]r’-，[C=0)ro (ch2ch2o) 2nh[c( = o)]r’-，[C=0)r0(CH2)20(CH2)2[C( = 0)]r’-，[C=0)r0(CH2)2S(CH2)2[C( = 0)]r’-，[C=0)ro (ch2ch2)nh[c( = o)]r’-，[C=0)ro (ch2ch2)o[c( = o)]r’-，[C=0)r0(CH2)3NH[C( 二 0)]r’-，[C=0)r0(CH2) 30[C( = 0)]r’-，[C=0)r0(CH2)3[C( = 0)]r’-，[C=0)rCH2NHCH2 [C ( = 0)]r’-，[C=0)rCH20CH2 [C ( = 0)]r’-，[C=0)rCH2SCH2 [C ( = 0)]r’-，[C=0)rS(CH2)3[C( = 0)]r’_，[C=0)r(CH2)3[C( = 0)]r_， <formula>formula see original document page 5</formula>和其中(r)和(r’ )獨(dú)立地為0或I，條件是兩者不同時(shí)為0。
7.權(quán)利要求I所述的化合物，其中L 3和L'1 3獨(dú)立地選自氨基酸、氨基酸衍生物和肽。
8.權(quán)利要求I所述的化合物，其中Li-3和L'1 3獨(dú)立地選自<formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 7</formula><formula>formula see original document page 7</formula>和 -NHCH(CH3)-C( = 0) -NH(CH2) 6-C (CH3) 2-C( = 0)-其中，Yn_19獨(dú)立地為0、S或NR48 ；R31-48>R50-51和A51獨(dú)立地選自氫、(V6烷基、C3_12支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、C^取代的烷基、 c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、(V6雜烷基、取代的Cm雜烷基、C^e烷氧基、 苯氧基和Cm雜烷氧基； Ar為芳基或雜芳基部分； Ln-15為獨(dú)立選擇的雙官能間隔基；J和J’獨(dú)立地選自主動(dòng)運(yùn)輸至靶細(xì)胞的部分、疏水部分、雙官能連接部分和其組合； (ell)、(hll)、(kll)、(zll)、(mil)和(nil)為獨(dú)立選擇的正整數(shù)； (all)、(ell)、(gll)、(jll)、(oil)和(qll)獨(dú)立地為 0 或正整數(shù)；和 (bll)、(xll)、(x，11)、(fll)、(ill)和(pll)獨(dú)立地為 0 或 1。
9.權(quán)利要求1所述的化合物，其中A選自H、NH2、OH、C02H、(V6烷氧基和C^烷基。
10.權(quán)利要求1所述的化合物，其具有下式
11.權(quán)利要求1所述的化合物，其具有下式(II)<formula>formula see original document page 8</formula>其中K是封端基團(tuán)，或<formula>formula see original document page 8</formula>；和所有其它變量與權(quán)利要求1中的定義相同。
12.權(quán)利要求1所述的化合物其中k和L’工為賴氨酸。
13.權(quán)利要求1所述的化合物，其中禮包括直鏈的、末端支鏈的或多臂的聚環(huán)氧烷。
14.權(quán)利要求13所述的化合物，其中該聚環(huán)氧烷選自聚乙二醇和聚丙二醇。
15.權(quán)利要求13所述的化合物，其中該聚環(huán)氧烷選自 -Y7「(CH2CH20)n_CH2CH2-Y7「， -Y7「(CH2CH20)n_CH2C( = Y72)-Y7「，-Y7「C( = Y72)-(CH2)a71-Y73-(CH2CH20)n_CH2CH2-Y73-(敞^ = Y72)_Y71_，和 -Y71- (CR71R72) a72-Y73- (CH2) b71-0- (CH2CH20) n- (CH2) b71-Y73- (CR71R72) a72_Y71_， 其中y71 和 y73 獨(dú)立地為 0、s、so、so2、nr73 或鍵； Y72 為 0、s 或 NR74 ；r71、R71、R73和R74獨(dú)立地選自可用于R2的相同的部分； (a71)、(a72)和(b71)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；且 (n)為約10至約2300的整數(shù)。
16.權(quán)利要求13所述的化合物，其中該聚環(huán)氧烷為式-0-(CH2CH20)n-的聚乙二醇，其中 (n)為約10至約2300的整數(shù)。
17.權(quán)利要求1所述的化合物，其中禮具有的平均分子量為約200至約250，000道爾頓。
18.權(quán)利要求1所述的化合物，其中禮具有的平均分子量為約1，000至約200，000道爾頓。
19.權(quán)利要求1所述的化合物，其中禮具有的平均分子量為約2，000至約100，000道爾頓。
20.權(quán)利要求1所述的化合物，其中隊(duì)具有的平均分子量為約2，000至約60，000道爾頓。
21.權(quán)利要求1所述的化合物，其中隊(duì)具有的平均分子量為約5，000至約25，000道爾 頓或約20，000至約45，000道爾頓。
22.權(quán)利要求1所述的化合物，其選自<formula>formula see original document page 9</formula>，和<formula>formula see original document page 9</formula>其中mPEG為CH30-(CH2CH20)n-，其中(n)為約10至約2300的整數(shù)；和 Z和Z’獨(dú)立地為封端基團(tuán)或<formula>formula see original document page 10</formula>條件是至少一個(gè)z不為封端基團(tuán)。
23.權(quán)利要求1所述的化合物其中R2_7和R’2_7獨(dú)立地選自氫、甲基、乙基和異丙基。
24.權(quán)利要求1所述的化合物，其具有下式<formula>formula see original document page 10</formula>其中，A2是封端基團(tuán)，或<formula>formula see original document page 10</formula>和所有其它變量與權(quán)利要求1中的定義相同。
25.權(quán)利要求1所述的化合物，其具有下式<formula>formula see original document page 10</formula>其中A3是封端基團(tuán)，或其中，(h)和(h’ )獨(dú)立地為0或正整數(shù)；和 所有其它變量與權(quán)利要求1中的定義相同。
26.權(quán)利要求1所述的化合物，其選自<formula>formula see original document page 11</formula><formula>formula see original document page 12</formula><formula>formula see original document page 13</formula>其中mPEG 具有式 CH30(CH2CH20)n-； PEG 具有式-0 (CH2CH20) n-，禾口 (n)為約10至約2300的整數(shù)。
27.制備包含吡啶基二硫化物部分的聚合化合物的方法，包括 將式(III)的聚合化合物 A^RrMidll) 與式(VI)的化合物<formula>formula see original document page 14</formula>在足以形成式(V)的化合物的條件下反應(yīng)其中R是基本上非抗原性的水溶性聚合物； A4為封端基團(tuán)或M1; A5為封端基團(tuán)或<formula>formula see original document page 14</formula>Mi為OH或離去基團(tuán)； M2 為-OH、SH 或-NHR9Q ；和r ！獨(dú)立地為s、o或nr2 ； y2 和 r 2 獨(dú)立地為 s、o、so、so2、nr20 ； Y3和Y’ 3獨(dú)立地為H、離去基團(tuán)、活化基團(tuán)、官能團(tuán)，或Li-3和L’ 為獨(dú)立選擇的雙官能連接基；R2-11'R,2-11'R20和^獨(dú)立地選自氫、氨基、取代的氨基、疊氮基、羧基、氰基、鹵素、羥基、<formula>formula see original document page 14</formula>硝基、硅烷基醚、磺酰基、巰基、(V6烷基巰基、芳基巰基、取代的芳基巰基、取代的Cm烷基硫 基、(V6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_19支鏈烷基、C3_8環(huán)烷基、Cm取代的烷基、C2_6取代的烯 基、C2_6取代的炔基、C3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、C^e雜烷 基、取代的Cm雜烷基、(V6烷氧基、芳基氧基、C^e雜烷氧基、雜芳基氧基、C2_6烷?；?、芳基 羰基、C2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、C2_6烷?；趸?、芳基羰基氧基、C2_6取代的烷酰基、取 代的芳基羰基、C2_6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、C2_6取代的烷酰基氧基和取代 的芳基羰基氧基；r12和R’12獨(dú)立地選自氫、羥基、離去基團(tuán)、官能團(tuán)、藥物、靶向劑、診斷劑、取代的(V6烷 基硫基、CV6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、c3_19支鏈烷基、c3_8環(huán)烷基、(V6取代的烷基、c2_6取代 的烯基、c2_6取代的炔基、c3_8取代的環(huán)烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、(V6 雜烷基、取代的Cm雜烷基、(V6烷氧基、芳基氧基、C^e雜烷氧基、雜芳基氧基、C2_6烷?；?、 芳基羰基、C2_6烷氧基羰基、芳基氧基羰基、c2_6烷?；趸?、芳基羰基氧基、c2_6取代的烷酰 基、取代的芳基羰基、C2_6取代的烷?；趸?、取代的芳基氧基羰基、c2_6取代的烷?；趸?、 取代的芳基羰基氧基、馬來(lái)酰亞氨基、乙烯基、取代的砜、氨基、羧基、巰基、酰胼和胼基甲酸 基；(a)、(a’)、(d)和(d，)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(b)和(b’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(c)和(c’)獨(dú)立地為0或正整數(shù)；(e)和(e，)獨(dú)立地為0或1 ；和(g)和(g，)獨(dú)立地為0或1 ；條件是(a)和(g)不同時(shí)為0。
28.權(quán)利要求27所述的方法，還包括將式(V)的化合物與含巰基的部分在足以形成聚 合綴合物的條件下反應(yīng)。
29.權(quán)利要求28所述的方法，其中該含巰基的部分為生物活性部分，其選自藥物活性 化合物、酶、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和肽。
30.通過(guò)權(quán)利要求28的方法制備的聚合綴合物。
31.治療哺乳動(dòng)物的方法，包括向有此需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求30的化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供含吡啶基二硫化物部分的聚合連接基。還公開了制備該聚合連接基的方法和使用該連接基制備綴合物的方法。
文檔編號(hào)A61K39/44GK101835482SQ200780101178
公開日2010年9月15日 申請(qǐng)日期2007年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月20日
發(fā)明者夏靖, 普拉桑納·雷迪, 趙洪 申請(qǐng)人:安佐制藥股份有限公司