專利名稱：：20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3β,12β,20,25-四醇衍生物、其鹽及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇衍生物、其鹽及其用途。本發(fā)明提供的含20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3(3，12P，20，25-四醇衍生物及其鹽的藥物比20(S)和20(R)-原人參二醇具有更強(qiáng)的抗癌活性，同時(shí)還可更明顯的增強(qiáng)其它抗病毒、抗癌藥物的活性和降低這些藥物毒副作用。
背景技術(shù)：
：20(R)-達(dá)瑪烷-3B,12B,20,25-四醇[20(R)—25-0H-PPD]具有較強(qiáng)的抗癌活性，能抑制人腫瘤細(xì)胞(人乳腺癌、人小細(xì)胞肺癌、人胃癌、人結(jié)腸癌、人神經(jīng)膠質(zhì)癌、人黑色素瘤、人宮頸癌、人肝癌、早幼粒白血病、肉瘤§-180、肝癌腹水型、小鼠宮頸癌-14及艾氏腹水癌等)生長與增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡，抑制腫瘤新生血管生成、抑制腫瘤的侵潤和轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)機(jī)體免疫力和降低化療藥物毒副作用等抗腫瘤活性。比目俞在國內(nèi)廣泛用于抗癌藥物的人參皂苷衍生物Rg3對(duì)腫瘤的生長抑制活性高5-15倍。25-OH-PPD還能以劑量依存的方式誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞系H838(p53野生型)和H358(p53缺失型)的凋亡和抑制細(xì)胞增殖，并能使細(xì)胞周期阻滯在Gl期，不同濃度的該化合物均顯示出比其他人參皂苷更強(qiáng)的活性。此外，25-0H-PPD(在50pM和100pM時(shí))有效降低前列腺癌細(xì)胞系LNCaP(p53野生型)和PC3(p53缺失型)的存活率，但不影響成纖維細(xì)胞；該化合物還能誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞的凋亡，抑制細(xì)胞的增殖，并使細(xì)胞周期阻滯在Gl期。在25-OH-PPD處理過的LNCaP和PC3細(xì)胞中，抑癌基因p21、p27和Bax的表達(dá)提高,而原癌基因MDM2、Bcl2、E2F1、cdk2、CDK4和CyclinDl的表達(dá)均降低。25-0H-PPD還能抑制前列腺移植瘤的生長，并增加腫瘤對(duì)放化療的敏感性。對(duì)于20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P,12(3，20，25-四醇的衍生物及其用途目前尚未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供了20(S)或2D(R)-達(dá)瑪烷-3(3，12P,20，25-四醇衍生物、其.鹽及其抗腫瘤用途。.本發(fā)明提供了一種20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3p，12(3，20,25-四醇衍生物及其鹽，具有如下結(jié)構(gòu)特征其中，R,、R2、R3和R4可單取代、可雙取代、可三取代、也可同時(shí)取代RhR2、R3和R,可為烷基、烯烴基、脂肪?；⒎枷沲；?、雜芳香?；?、取代芳香酰基、二元羧酸單?；鵐100C-M2-C0-、無機(jī)酸基或-CO-(CH2)nR;M100C-M2-CO-中的M2為亞垸基、芳香基、取代芳香基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基或烯烴基；Ml為H或堿金屬元素；-CO-(CH2)nR中n=l-20的整數(shù)，R為鹵素或藥學(xué)上可接受的抗腫瘤活性基團(tuán)；所述的鹽為鉀鹽、鈉鹽、銨鹽、鎂鹽或鈣鹽。本發(fā)明提供的20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3(3,12(3，20，25-四醇衍生物及其鹽中，八所述^垸基是具有1-20個(gè)碳原子的烷基；所述的烯烴基是具有2-20個(gè)碳原子的烯烴基；所述的脂肪酰基是具有1-20個(gè)碳原子的脂肪?；?；所述的芳香酰基是具有6個(gè)碳原子的芳香?；?；所述的雜芳香?；蔷哂羞拎きh(huán)的芳香?；?；所述的取代芳香?；蔷哂?個(gè)碳原子的芳香酰基的苯環(huán)上具有不同取代基的取代芳香?；?，其中的取代基是羥基、甲氧基、氨基或卣素；取代基的位置是苯環(huán)的2，3,4,5,6位的單取代、雙取代或三取代；所述的二元羧酸單?；鵐100C-M2-CO-中的M2為Cl-5個(gè)碳原子的烷基或有C2-5個(gè)碳原子的烯烴基；所述的無機(jī)酸基是磷酸基或磺酸基；所述的-CO-(CH2)nR中，R為氮芥、環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、金剛乙胺、巰基嘌呤、阿昔洛韋、去羥肌苷、司多呋定、拉米呋定。本發(fā)明提供的20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3p，12p，20,25-四醇衍生物及其鹽中，所述的的烷基是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、勞基*^所iS/'的脂肪?；且阴；⒈；⒍□；⑽祯；⒓乎；?、庚酰基、辛酰基、壬?；⒐秕；?、棕櫚?；⒉伙柡椭觉；凰龅姆枷沲；潜郊柞；?、苯乙?；?、苯丙烯酰基(肉桂?；?；所述的取代芳香?；潜郊柞；?、對(duì)甲氧苯甲?；⑷夤瘐；?、阿魏?；凰龅碾s芳香?；?-吡啶甲酰基、3-吡啶甲?；?、4-吡啶甲酰基；所述的二元羧酸單酰基M100C-M2-C0-是丁二酸單?；㈨樁∠┒釂熙；蜞彵蕉姿釂熙；?；所述的-C0-(CH2)nR中，-(CH2)n是乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚i、辛基、壬基、癸基、乙?；?、正丙?；?、'丙?；?、正丁?；１景l(fā)明提供了2力(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12(3，20,25-四醇衍生物及其鹽在制備抗癌藥物、抗病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3(3,12(3,20,25-四醇衍生物及其鹽可以和藥學(xué)上可接受的載體混合制成藥物組合物用于制備抗癌藥物、抗病毒藥物。本發(fā)明提供的含有達(dá)瑪烷-3P,UP,20，25-四醇衍生物及其鹽的藥物可用于治療病毒性疾病和腫瘤。.本發(fā)明提供的含有達(dá)瑪烷-3|3,12(3,20，25-四醇衍生物及其鹽不僅比達(dá)瑪烷-3(3，12P,20，25-四醇具有更強(qiáng)的抗病毒、抗癌活性，同時(shí)還可更明顯的增強(qiáng)其它抗病毒、抗癌藥物的活性和降低這些藥物毒性。具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明給予進(jìn)一步的說明，當(dāng)然，本發(fā)明不僅限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1:制備達(dá)瑪烷-3(3，12(3,20，25-四醇-12(3-單甲醚及達(dá)瑪烷-3卩，12P，20,25-四醇-3(3，12P-雙甲醚0.3g達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇加入15mlDMF溶解，加入0.3g氫化鈉(60%)。氫化鈉全部溶解后加入O.2ml碘甲烷，加熱至7(TC,回流8小時(shí)。反應(yīng)液中加適量水，析出白色固體。過濾析出固體，干燥，經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚丙酮(3:l)洗脫，得到兩個(gè)組分組分l為白色油狀物達(dá)瑪烷-3l3,12p,20,25-四醇-3(3，12p-雙甲醚(69,7%),組分2為白色固體達(dá)瑪烷-3(3，12P，20,25-四醇-12(3-單甲醚(48.6%)。實(shí)施例2:制備達(dá)瑪烷-3P，12(3,20,25-四醇-12p-單乙醚及達(dá)瑪烷-3P，12(3,20,25-四醇-3(3,12P-雙乙醚0.5g達(dá)瑪烷-3(3,12P.，20,25-四醇加入15mlDMF溶解，加入0.5g氫化鈉(60%)。氫化鈉全部溶解后加入0.4ml溴乙烷，加熱至75T，回流10小時(shí)。反應(yīng)液中加適量水，析出白色固體。過濾析出固體，干燥，經(jīng)硅膠柱色譜，用石油醚乙酸乙酯(4:l)洗脫，得到兩個(gè)組分組分1為白色油狀物達(dá)瑪烷-3P，12(3，20,25-四醇-3(3，12(3-雙乙醚(25.2%),組分2為白色固體達(dá)瑪烷-3P,12P，20,25-四醇-12(3-單乙醚(47.3%)。實(shí)^例3:制備達(dá)瑪烷-3(3，12P，20，2,5-四醇-12(3-正戊醚0.4g達(dá)瑪烷-3P，12P，20，25-四醇加入18mlDMF溶解，加入0.4g氫化鈉(60%)。氫化鈉全部溶解后加入O.3ml溴代正溴烷，加熱至8(TC,回流5小時(shí)。反應(yīng)液中加適量水，析出油狀物，放置過夜。傾出上清液，水洗一次用氯仿提取油狀物，提取液用無水硫酸鎂千燥。減壓除去溶劑，得到淡黃色油狀物達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20,25-四醇-3(3，12P-正戊醚(89.5%)。實(shí)施例4:制備達(dá)瑪烷-3(3，12|3，20，25-四醇-12(3-丙酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3|3，12P，20,25-四醇加入15mlDMF溶解，加入0.5g丙酰氯。冷卻至0°C。在攪拌下滴加0.3ml三乙胺。滴畢移出冰浴，繼續(xù)反應(yīng)5小時(shí)。減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱色譜精制。用氯仿洗脫得達(dá)瑪烷-3P,12P，20，25-四醇-12p-丙酸酯(45.9%)。實(shí)施例5:制備達(dá)瑪烷-3P，12p,20，25-四醇-12p-丁酸酯及達(dá)瑪烷-3卩，12|3,20，25-四醇-3(3-丁酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3|3,12(3，20，25-四醇加入15mlDMF溶解，加入0.5g正丁酸。攪拌下加入DCC和DMAP的DMF溶解下的溶液，滴畢繼續(xù)反應(yīng)24小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱色譜，得到兩個(gè)組分；組分1為白色固體達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇-12P-丁酸酯(15.9%),組分2為白色固體達(dá)瑪烷-3(3,12(3，20，25-四醇-3(3-丁酸酯(33.9%)達(dá)瑪烷-3(3，12p,20,25-四醇-3|3-丁酸酯碳核磁共振譜數(shù)據(jù)13C-NMR(pyridine—^,300MHz):580,4(C-3)，70.8(C-12),73.4(C—20)，69.7(C-25-OH);50.8(C-17),22.9(C-21)，44.1(C-22)，38.6(C-1)，28.1(C-2)，38.1(C-4),56.4(C-5)，18.5(C-6),35.1(C-7),40.1(C-8),50.3(C-9),37.2(C-IO),32.2(C-11),49.3(C-13)，51.8(C—14)，31.5(C-15)，26.7(C-16),16.3(C-18-CH3),16.8(C-19-CH3)，18.7(C-23)45.6(C-24),30.0(C-26-CH3),30.2(C-27-CH3),24.1(C-28-CH3)，15.9(C-29-CH3),17.4(C-30-CH3).實(shí)施例6:制備達(dá)瑪烷-3(3，12P，20，25-四醇-12(3-正辛酸酯及達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇-3P-正辛酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3P，12P，20，25-四醇加入15mlDMF溶解，加入0.5g正辛酸。攪拌下加入DCC和DMAP的DMF溶解下的溶液，滴畢繼續(xù)反應(yīng)24小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱色譜，得到兩個(gè)組分；組分1為白色固體達(dá)瑪烷-3p，12P，20,25-四醇-12P-正辛酸酯(8.8%)，組分2為白色固體達(dá)瑪烷-3P,12P,20,25-四醇-3(3-正辛酸酯(48.8%)。達(dá)瑪烷-3P，12P，20,25-四醇-3(3-正辛酸酯碳核磁共振譜數(shù)據(jù)"C-麗R(p/ridine-A，300MHz):580.4(C-3)，70.7(C-12),73.4(C-20)，69.7(C-25-0H);50.8CC-17),22.8(C-21),44.1(C-22)，38,7(C-1)，28.2(C-2),38.2(C-4)，56.4(C-5),18.5(C-6)，35.1(C-7)，40.1(C-8)，50.3(C-9),37.2(C-IO),32.2(C-11),49.3(C-13)，51.8(C-14),31.5(C-15),26.7(C-16),16.3(C-18-CH3)，16.8(C-19-CH3),18.7(C-23):45.6(C-24),30.0(C—26—CH3)，30.2(C-27-CH3),24.1(C-28-CH3)，15.9(C-29-CH3)，17.4(C—30-CH3).實(shí)施例7:制備達(dá)瑪烷-3p，12^，20，25-四醇-12(3-棕櫚酸酯及達(dá)瑪烷-3p，12P，20，25-四醇-3P-棕櫚酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3P，12|3，20，25-四醇加入15ml,溶解，加入0.5g棕櫚酸。攪拌下加入DCC和DMAP的DMF溶解下的溶液，滴畢繼續(xù)反應(yīng)24小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱色譜，得到兩個(gè)組分；組分1為白色固體達(dá)瑪烷-3p，12(3,20，25-四醇-12(3-棕櫚酸酯(20.7%),組分2為白色固體達(dá)瑪烷-3P，12P,20,25-四醇-3|3-棕櫚酸酯(66.7%)。達(dá)瑪k-3P，12P，20，25-四醇-3P-棕櫚酸酯碳核磁共振譜數(shù)據(jù)13C-NMR(pyridine-&，300MHz)::580.4(C-3)，70.8(C-12)，73.4(C-20)，69.8(C-25-OH);50.8(C-17)，22.9(C-21),44.1(C-22)，38.7(C-l)，28.2(C-2),38.1(C-4)，56.1(C-5),18.5(C-6),35.1(C-7),40.1(C-8)，50.3(C-9),37.2(C-IO),32.2(C-11),49.3(C-13)，51.8(C-14),31.5(C-15),26.7(C-16)，16.4(C-18-CH3),16.9(C-19-CH3)，18.7(C-23)45.6(C-24)，30.0(C-26-CH3)，30.2(C-27-CH3),24.1(C—28—CH3),15.9(C-29-CH3),17.4(C-30-CH3).達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20，25-四醇-12P-棕櫚酸酯碳核磁共振譜數(shù)據(jù)"C-麗R(pyridine-A,300MHz)::577.9(C-3)，75.5(C-12)，73.7(C-20)，69.7(C-25-OH);實(shí)施例8:制備達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20,25-四醇-3P，12(3-雙肉桂酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3p，12(3，20,25-四醇，0.5g肉桂酰氯，加入15ml吡啶溶解，0.25g二甲氨基吡啶依次加入反映瓶中。反應(yīng)96小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱色譜，得到達(dá)瑪烷-3p，12P，20,25-四醇-3P,12p-雙肉桂酸酯(50.3%)。實(shí)施例9:制備達(dá)瑪烷-3P，12p,20,25-四醇-3p，12(3-雙丁二酸單酯0.3g達(dá)瑪烷-3P，12P,20，25-四醇，0.5g丁二酸酐，加入15ml吡啶溶解，0.25g二甲氨基吡啶依次加入反應(yīng)瓶中。在95-100。C反應(yīng)96小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱層析，得到達(dá)瑪烷-3p，12P，20，25-四醇-3p,12P-雙丁二酸單酯(65.9%)。實(shí)施例10:制備達(dá)瑪烷-3P、12(3,20，25-四醇-3p,12P-雙對(duì)甲氧苯甲酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3p，12(3，20，25-四醇，0.35g對(duì)甲氧苯甲酰氯，加入15ml無水p比p定溶解，在60-7(TC反應(yīng)3小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱色譜，得到達(dá)瑪烷-3(3,12p，20，25-四醇-3(3,12p-雙對(duì)甲氧苯甲酸酯(69.6°/。)。實(shí)施例11:制備達(dá)瑪烷-3(3,12P，20,25-四醇-3P,12P-雙煙酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3(3,12P，20，25-四醇，0.5g煙酰氯鹽酸鹽，加入15ml吡啶溶解，在60-70'C反應(yīng)3小時(shí)。冷卻至室溫，加水20ml，析出粘稠狀物，放置過夜，傾出水層，用氯仿提取凝固物，無水硫酸鎂干燥，減壓除去溶劑，'殘留物硅膠控色譜，得到達(dá)瑪荒-3P，12p,20,25-四醇-3p,12P-雙煙酸酯(82.8%)。實(shí)施例12:制備達(dá)瑪烷-3P,12p，20,25-四醇-3(3，12(3-雙丁二酸單酯二鈉鹽~0.10g達(dá)瑪烷-3|3，12p，20，25-四醇-3|3，12P-雙丁二酸單酯，加入15ml乙醇溶解，滴加30°/。氫氧化鈉調(diào)PH至7.0.蒸出部分溶劑，加25ml丙酮沉淀，過濾析出固體，達(dá)瑪烷-3p,12P,20,25-四醇-3(3，120-雙丁二酸單酯二鈉鹽(70.9°/。)。實(shí)施例13:制備達(dá)瑪烷-3P，12(3,20,25-四醇-3(3，12(3-鄰苯二甲酸單酯0.3g達(dá)瑪烷-3(3,12(3,20，25-四醇,0.6g鄰苯二甲酸酐，加入15ml無水Pt&定溶解，在90'C反應(yīng)10小時(shí)。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯溶解，過濾，濾液用5%碳酸氫鈉洗三次，再用蒸餾水洗五次，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱層析，得到達(dá)瑪烷-3P，12(3,20，25-四醇-3(3,12P-鄰苯二甲酸單酯.(75.9%)。實(shí)施例14:制備達(dá)瑪烷-3(3,12P,20，25-四醇-3P,12p-雙磷酸酯15ml無水吡^^溶解，用冰水洛冷卻至(TC，滴加0.3ml氧氯化嫌，加完再加0.3g達(dá)瑪烷-3P,1—2P,20,25-四醇溶于吡啶溶液中，反應(yīng)24小時(shí)。加水?dāng)嚢?小時(shí)，調(diào)PH-3，析出白色固體，過濾析出的固體，用無水乙醇溶解，過濾，濾液加水析出白色固體。放置48小時(shí)，傾出上清液，自然過濾，真空干燥后，得到達(dá)瑪烷-3(3,12|3，20,25-四醇-3p，12P-雙磷酸酯。實(shí)施例15:制備達(dá)瑪烷-3p,12p,20，25-四醇-3P，12P-順丁烯二酸單酯0.3g達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20，25-四醇溶于氯仿溶液中，加入0.75g馬來酸酐，加入0.5g二甲氨基吡啶，反應(yīng)48小時(shí)。減壓除去溶劑，再加蒸餾水，調(diào)PFH3,.用乙酸乙酯提取，水洗至中性。提取液用無水硫酸鈉干燥后加活性炭脫色，過濾，蒸出溶劑得粗品。粗品硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，得到達(dá)瑪烷-3P，12(3，20,25-四醇-3P，12p-順丁烯二酸單酯實(shí)施例16:制備達(dá)瑪烷-3P,12(3，20,25-四醇-12l3-單a-氯乙酸酯及達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇雙a-氯乙酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3(3，12P，20,25-四醇溶于無水四氫呋喃溶液中，加入0.3g一氯乙酰氯，滴加0.3g,三乙胺的四氫呋喃溶液，生成白霧，反應(yīng)液析出白色固體。在室溫下反應(yīng)至原料完全。過濾析出白色固體。減壓除去溶劑，得黃色液體。粗品硅膠柱色譜,用氯仿洗脫，得達(dá)瑪烷-3P,12p，20，25-四醇-12P-單a-氣乙酸酯及達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇雙a-氯乙酸酯(50.9%)。實(shí)施例17:制備達(dá)瑪烷-3(3,120,20,25-四醇-20-稀-12(3-a-(金剛烷胺).乙酸酯0.3g達(dá)瑪烷-3(3,12P,20,25-四醇-12P-a-氯乙酸酯，0.15g金剛胺，0.03g四丁基溴化銨，加入5ml甲苯，0.5g氫氧化鉀，依次加入，在6(TC反應(yīng)7小時(shí)，放置過夜。反應(yīng)物加20ml甲苯，20ml水，調(diào)PH-2,分出甲苯層，水洗三次。甲苯提取物減壓蒸干，粗品硅膠柱層析，用氯仿洗脫，得達(dá)瑪烷-3(3，12p，20，25-四醇-20-稀-12P-a-乙酸酯(70.4%)。實(shí)施例18:制備達(dá)瑪烷-3P，12(3，20，25-四醇-20-稀-12l3-a-(環(huán)磷酰胺)乙酸酯1.4g環(huán)磷酰胺加入15ml無水四氫呋喃溶解，加入0.12g金屬鈉片使其全部溶解，加0.3g達(dá)瑪烷-3|3，12(3，20，25-四醇-12|3-a-氯乙酸酯,在攪拌下回流反應(yīng)12小時(shí)，過濾析出固體，濾液蒸干溶劑，粗品硅膠柱色譜，用氯仿洗脫，得達(dá)瑪烷-3(3,12P,2'0，25-四醇-20-稀-12(3-a-(環(huán)磷酰胺')乙酸酯(79.9%)實(shí)施例19:制備達(dá)瑪烷-3|3,12(3,20,25-四醇-20-稀-120-a-(5-氟尿嘧啶)乙酸酯0.35g5-氟尿嘧^定加入15ml二甲基甲酰胺溶解，加氫化鈉(60%),待氫化鈉全溶后,加O.3g達(dá)瑪烷-3p，12(3，20，25-四醇-12(3-a-氯乙酸酯二甲基甲酰胺溶液，在60-7(TC反應(yīng)5小時(shí)。冷卻至室溫，加水20ml，用氯仿提取，提取液水洗二次，無水硫酸鎂干燥，減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱層析，得達(dá)瑪烷-3(3,12P，20，25-四醇-20-稀-12(3-a-(環(huán)磷酰胺)乙酸酯(60.9%)。實(shí)施例20達(dá)瑪烷-3(3，12(3，20,25-四醇衍生物抗癌活性測試對(duì)我們合成的達(dá)瑪烷-3P，12P,20,25-四醇衍生物和部分對(duì)照化合物應(yīng)用已有的6種腫瘤細(xì)胞株人白血病細(xì)胞株HL-60,人前列腺癌細(xì)胞株Dul45,人結(jié)腸癌細(xì)胞Colon205,人肺癌細(xì)胞A549，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，人肝癌細(xì)胞HepG2，釆用經(jīng)典的MTT法進(jìn)行抗腫瘤活性測試。主要試劑與主要設(shè)備RMPI1640培養(yǎng)液(購自Gibco);DMEM高糖培養(yǎng)液(購自Gibco);DMEM低糖培養(yǎng)液'(購自Gibco);小牛血清(購自Hyclone);胎牛血清(TBD公司)；四甲基偶氮唑鹽(MTT)美國Sigma(St.Louis,MO);胰蛋白酶(Biosharp);DMS0(沈陽化學(xué)試劑廠)；NaCl(沈陽化學(xué)試劑廠)；KC1(沈陽化學(xué)試劑廠)；KH2P03(沈陽化學(xué)試劑廠)；Na2HP03(沈陽化學(xué)試劑廠)；NaHC03(沈陽化學(xué)試劑廠)；酶標(biāo)儀(奧地利TECAN);96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Costar公司)。實(shí)驗(yàn)方法HL-60細(xì)胞株，Dul45細(xì)胞株，Colon205細(xì)胞株的培養(yǎng)條件均為RMPI1640培養(yǎng)液，10%胎牛血清,MCF-7細(xì)胞株的培養(yǎng)條件為低糖DMEM培養(yǎng)液10%胎牛血清，H印G2細(xì)胞株的培養(yǎng)條件為髙糖麗EM培養(yǎng)液10%胎牛血清，A549細(xì)胞株的培養(yǎng)條件為RMPI1640培養(yǎng)液，10%小牛血清。以上細(xì)胞株均培養(yǎng)于5。/。C02，37。C的培養(yǎng)箱中。天然產(chǎn)物中有粉狀物和膏狀物，其中，粉狀物使用DMS0溶解，膏狀物使用無水乙醇溶解。配成濃度為50咖ol/L的母液，儲(chǔ)存于-20。C。細(xì)胞株使周無血清的RMPI1640培養(yǎng)液將藥物的母液稀釋成1000umol/L，500函1/L，100umol/L，10圃1/L,每孔加入10uL，使得藥物的終濃度為100umol/L,50畫1/L,10畫1/L，1麵1/L。表l實(shí)驗(yàn)化合物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7成活率的影響(％)(M±SE)Oumo!/Llumol/L10腿ol/L50umol/L100umol/LPD100.00±2.62雨.99±1.2797.20±1,1494.56±1.3582.18±0.81衍生物l100.。6±1.07卯.71±0.4885.79±1.2037.05±0.2114.49±0.17衍生物2100.00±1.0876.65±1.1061.62±0.7917.35±0.1$15.75±0.27衍生物3100綠1.8998.18±2.0256.66±1.3718.32±0.2518.04±0.89四醇100.00±1.2191.67±1.6583.52±1.3831.22±0.2724.70±0.17Rg3100.00^=1.0889.31±1.4992.40±1.3189.92±0.8089.89±1.87紫杉醇跳00±4.6253.16±1.5056.07土1.18i37.71±0.2927.50±0.65PPD100.00±4.7162.95±1.3850.13±2.5024.98±0.5223.49±0.81100.00±4.6265.05±2.3752.05±1.1133.72±0.5820.52±0.93表2對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞成活率的影響(％)(M±SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3對(duì)人前列腺細(xì)胞Dul45細(xì)胞成活率的影響(％)(M±SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞Colon205細(xì)胞成活率的影響(％)(M±SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表5第一系列天然產(chǎn)物對(duì)人肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞成活率的影響(％)(M±SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表6對(duì)人白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞成活率的影響(％)(M士SE)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過本專利方法制備得到的衍生物1-3的體外抗腫瘤活性與達(dá)瑪烷-3P，12p,20，25-四醇相比顯著增強(qiáng)。1權(quán)利要求1、一種20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇衍生物，其特征在于具有如下結(jié)構(gòu)id="icf0001"file="S2008100110311C00011.gif"wi="101"he="47"top="50"left="58"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R1、R2、R3和R4為烷基、烯烴基、脂肪?；⒎枷沲；㈦s芳香?；⑷〈枷沲；?、二元羧酸單酰基M1OOC-M2-CO-、無機(jī)酸基或-CO-(CH2)nR。2、按照權(quán)利要求1所述的20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12P,20,25-四醇衍生物，其特征在于所述的M100C-M2-C0-中的M2為亞烷基、芳香基、取代芳香基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基或烯烴基；Ml為H或堿金屬元素；-CO-(CH2)nR中n=l-20的整數(shù)，R為鹵素或藥學(xué)上可接受的抗腫瘤活性基團(tuán)。3、按照權(quán)利要求1所述20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12(3,20，25四醇衍生物，其特征在于所述的烷基是具有l(wèi)-20個(gè)碳原子的烷基；所述的烯烴基是具有2-20個(gè)碳原子的烯烴基；所述的脂肪?；蔷哂?-20個(gè)碳原子的脂肪?；凰龅姆枷沲；蔷哂?個(gè)碳原子的芳香酰基；所述的雜芳香?；蔷哂羞拎きh(huán)的芳香?；?；所述的取代芳香?；蔷哂?個(gè)碳原子的芳香?；谋江h(huán)上具有不同取代基的取代芳香酰基；所述的二元羧酸單酰基M100C-M2-C0-中的M2為C1-5'個(gè)碳原子的烷基或有C2-5個(gè)碳原子的烯烴基；所述的無機(jī)酸基是磷酸基或磺酸基；所述的-C0-(CH2)nR中，R為氮芥、環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、金剛乙胺、巰基嘌呤、阿昔洛韋、去羥肌苷、司多呋定、拉米呋定。4、按照權(quán)利要求3所述的20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3e,12P,20，25四醇衍生物，其特征在于所述的取代芳香?；械娜〈鶠榱u基、甲氧基、氨基或鹵素；取代基的位置是苯環(huán)的2，3,4,5，6位的單取代、雙取代或三取代。5、按照權(quán)利要求1或3所述20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3(3，12P,20,25-四醇衍生物，其4爭征在于'所述的烷基是甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基*ail^脂肪酰基是乙?；?、丙?；?、丁?；⑽祯；?、己?；?、庚?；?、辛?；?、壬?；?、癸酰基、棕櫚酰基、不飽和脂肪酰基；所述的芳香?；潜郊柞；?、苯乙?；?、苯丙烯?；?；所述的取代芳香?；潜郊柞；?duì)甲氧苯甲?；⑷夤瘐；?、阿魏?；?"^"'所述的雜芳香?；?-吡啶甲酰基、3-吡啶甲?；?-吡啶甲?；?；所述的二元羧酸單酰基M100C-M2-C0-是丁二酸單酰基、順丁烯二酸單?；蜞彵蕉姿釂熙；?；所述的-C0-(CH2)nR中，-(CH2)n是乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、乙?；⒄；?、丙酰基、正丁酰基。6、一種20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3(3,12(3，20，25-四醇衍生物的鹽，其特征在于其為20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P,12p,20，25-四醇衍生物的鉀鹽、鈉鹽、銨鹽、鎂鹽或鈣鹽。7、20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12P，20，25-四醇衍生物及其鹽的藥物組合物，其特征在于該組合物是以20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12P,20,25-四醇衍生物及其鹽為主要成分，并含有藥學(xué)上可接受的載體。8、20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3P，12P，20,25-四醇衍生物及其鹽在制備抗癌藥物、抗病毒藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，提供了20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇衍生物、其鹽及其抗腫瘤用途。20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇衍生物及其鹽的結(jié)構(gòu)如下所示。20(S)或20(R)-達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇衍生物及其鹽可以和藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合制成藥物組合物，并用于制備抗病毒、抗腫瘤藥物。本發(fā)明提供的含有達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇衍生物及其鹽不僅比達(dá)瑪烷-3β，12β，20，25-四醇具有更強(qiáng)的抗病毒、抗癌活性，同時(shí)還可更明顯的增強(qiáng)其它抗病毒、抗癌藥物的活性和降低這些藥物毒性。文檔編號(hào)A61P31/12GK101250212SQ20081001103公開日2008年8月27日申請(qǐng)日期2008年4月15日優(yōu)先權(quán)日2008年4月15日發(fā)明者娜劉,寧李,趙余慶申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)